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Identifying Intraspecific Variation in Venom Yield of Chinese Cobra(Naja atra) from Ten Populations in China's Mainland 被引量:2
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作者 Jianfang GAO Yin YIN +4 位作者 Yanfu QU Jin WANG Longhui LIN Hongliang LU Xiang JI 《Asian Herpetological Research》 SCIE CSCD 2019年第1期32-40,共9页
Detailed information on venom yield is helpful in preparing antivenoms and treating snakebites, but such information is lacking for many species of venomous snakes. The Chinese cobra(Naja atra) is a large sized, venom... Detailed information on venom yield is helpful in preparing antivenoms and treating snakebites, but such information is lacking for many species of venomous snakes. The Chinese cobra(Naja atra) is a large sized, venomous snake commonly found in southeastern China, where it causes a heavy burden of snakebites. To examine the effects of various factors(morphology, sex, age, season, and geographical origin) on the venom yield in this snake, we collected venom samples of 446 individuals(426 adults and 20 neonates) from 10 populations of N. atra over an eightyear period. We used two variables, lyophilized venom mass(venom yield) and solid content of venom(% solids), to quantify the venom yield. We used linear regression analysis to check if venom yield was related to morphological factors, one-way ANOVA and one-way ANCOVA to detect the sexual, ontogenetic, and geographic variation in venom yield, and repeated-measures ANOVA to examine seasonal shifts in venom yield. Our results indicate that venom yield of N. atra is positively related to the morphological traits examined, with male snakes expelling more venom than females. Venom yield in N. atra was age-related, with elder snakes always expelling more venom than younger ones. Geographic variation in venom yield was also observed, while seasonal variation was not. The solid content of venom was lower in males than in females, but this was not related to morphology, season, age, or geography. Our findings suggest that venom yield in N. atra is influenced by multiple factors, as well as by the interactions among these factors. 展开更多
关键词 naja atra venom YIELD INTRASPECIFIC variation SNAKEBITE
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Therapeutic Potential of Naja Naja Atra Venom in A Rat Model of Diabetic Nephropathy 被引量:9
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作者 DAI Gui Li HE Jing Kang +3 位作者 XIE Yan HAN Rong QIN Zheng Hong ZHU Lu Jia 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2012年第6期630-638,共9页
Objective To study the protective effects of naja naja atra venom (NNAV) in a rat model of diabetic nephropathy (DN). Methods The rat diabetes model was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ... Objective To study the protective effects of naja naja atra venom (NNAV) in a rat model of diabetic nephropathy (DN). Methods The rat diabetes model was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ). Thirty-two model rats were randomly divided into one DN group (n=8) and three treatment groups (n=8 each) that received NNAV at doses of 30, 90, or 270 I^g/(ks.day) via oral gavage, another eight rats as normal controls. After 12 weeks, all rats were sacrificed and the changes in serum and urine biological index levels were determined by colorimetric assay. Microalbumin (mALB), N-acetyl-13- glucosaminidase (NAG) and cystatin C (CysC) concentrations were measured by ELISA. Renal tissues were sliced for pathological and immunohistochemical observations. Results Comparied with the DN group, serum glucose was decreased by 31.04%, total cholesterol 21.96%, triglyceride 23.78%, serum creatinine 19.83%, blood urea nitrogen 31.28%, urinary protein excretion 45.42%, mALB 10.42%, NAG 20.65%, CysC 19.57%, whereas albumin increased by 5.55%, high-density lipoprotein-cholesterol 59.09%, creatinine clearance 19.05% in the treatment group by NNAV administration at dose of 90 μg/(kg-day). NNAV also reduced the levels of malondialdehyde in serum (22.56%) and kidney tissue (9.79%), and increased superoxide dismutase concentration in serum (15%) and decreased it in renal tissue (8.85%). In addition, under light microscopy kidney structure was improved and glomerular hypertrophy decreased by 8.29%. As shown by immunohistochemistry, NNAV inhibited transforming growth factorl by 6.70% and nuclear actor-KB by 5.15%. 展开更多
关键词 Diabetic nephropathy naja naja atra venom Renal function
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浙江眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒镇痛多肽的分离纯化及其性质的研究 被引量:8
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作者 王春晓 李新宇 +1 位作者 王起振 刘岩峰 《药物生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期159-164,共6页
研究浙江眼镜蛇 (Najanajaatra)蛇毒的镇痛活性组分 ,为寻找镇痛效果好 ,而无成瘾性的新型镇痛药奠定基础。采用CM Sephadex离子交换色谱和SephadexG 5 0凝胶过滤色谱对浙江产眼镜蛇蛇毒中的镇痛活性组分进行分离纯化。采用PAGE IEF及H... 研究浙江眼镜蛇 (Najanajaatra)蛇毒的镇痛活性组分 ,为寻找镇痛效果好 ,而无成瘾性的新型镇痛药奠定基础。采用CM Sephadex离子交换色谱和SephadexG 5 0凝胶过滤色谱对浙江产眼镜蛇蛇毒中的镇痛活性组分进行分离纯化。采用PAGE IEF及HPLC等实验方法对产物纯度进行鉴定。采用SDS PAGE法和HPLC法测定产物的分子质量 ,用IEF法测定产物的等电点 ,用小鼠热板法与醋酸扭体法考察产物的镇痛活性。结果表明眼镜蛇毒经 3次柱色谱后 ,产物AAP经鉴定为单一组分。AAP经SDS PAGE法和HPLC法测定的分子质量分别是 7 2 8Mr 和 7 2 5Mr,等电点是 9 5 8。AAP的痛阈提高百分率和扭体抑制率分别为 91 3% ,77 2 %。眼镜蛇毒经 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 镇痛多肽 理化性质 药理作用
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中华眼镜蛇(Naja naja atra)毒细胞毒素对动物急性及长期毒性研究 被引量:3
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作者 薛玲 刘广芬 +1 位作者 王晴川 李克华 《福建医学院学报》 1996年第2期109-113,共5页
目的探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化的细胞毒素(ChineseCobroVenom-Cytotoxin,CV-CTX)对动物急性及长期毒性的作用。方法急性毒性:小鼠50只,尾静脉一次注入不同剂量的CV-CTX注射液,观察7... 目的探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化的细胞毒素(ChineseCobroVenom-Cytotoxin,CV-CTX)对动物急性及长期毒性的作用。方法急性毒性:小鼠50只,尾静脉一次注入不同剂量的CV-CTX注射液,观察7d内死亡率。犬5只,戊巴比妥钠静脉麻醉后,分别静脉恒速注入不同剂量的CV-CTX,观察5h内血压、心电图及呼吸的变化。长期毒性:大鼠160只分别腹腔注射生理盐水20ml、CV-CTX250,500,1000μg/kg·d-1,连续40d。结果(1)小鼠急性LD50及其95%可信限为1158.7(1070~1254.6)μg/kg,中毒症状呈匍伏、毛松、懒动直到心跳停止,解剖未见重要脏器(心、肺、肝、脾、肾)明显变化。(2)犬静脉恒速注入100μg/kg间隔1h,共5次,呼吸、血压、心电图未见明显变化,一次超过500μg/kg,可使心律不齐而停搏,呼吸停止。(3)大鼠长期毒性实验,3个剂量组,连续用药40d,无一死亡,肝、肾功能及血液生化均无明显影响。病理检查高剂量组部分动物肝脏中度浊肿及水样变性和散在点状坏死,肺有散在性出血;中剂量组肝脏轻度浊肿,偶伴有水样变性,个别动物有小点状坏死,肺有点状出? 展开更多
关键词 中华眼镜蛇 蛇毒 细胞毒素 LD50 长期毒性试验
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眼镜蛇(Naja naja atra)神经毒素与心脏毒素分离纯化研究进展 被引量:2
5
作者 常梅艳 韩丽萍 蒋琳兰 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第6期595-599,共5页
眼镜蛇神经毒素与心脏毒素分别具有显著的镇痛活性和抗肿瘤活性。这两种毒素同源性高,等电点,分子质量以及蛋白结构都很相似,给分离纯化造成一定难度。获得单一成分的神经毒素和心脏毒素是理化性质分析、药理活性研究和临床应用的前提,... 眼镜蛇神经毒素与心脏毒素分别具有显著的镇痛活性和抗肿瘤活性。这两种毒素同源性高,等电点,分子质量以及蛋白结构都很相似,给分离纯化造成一定难度。获得单一成分的神经毒素和心脏毒素是理化性质分析、药理活性研究和临床应用的前提,文章综述了多年来舟山眼镜蛇蛇毒中神经毒素与心脏毒素的分离纯化研究进展。 展开更多
关键词 舟山眼镜蛇 蛇毒 神经毒素 心脏毒素 分离纯化
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应用仿生亲和层析从广东产舟山眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒中分离纯化镇痛多肽
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作者 常梅艳 韩丽萍 +2 位作者 梁映霞 蒋琳兰 赵树进 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第4期325-329,共5页
研究眼镜蛇毒镇痛组分的分离纯化方法,为寻找镇痛效果好,而无成瘾性的新型镇痛药物,在合成出可用于亲和吸附眼镜蛇毒心脏毒素层析介质的基础上,结合阳离子交换UND SphereTMS,凝胶过滤Sehpadex G-50,疏水层析Phenyl SepharoseTM CL-4B,... 研究眼镜蛇毒镇痛组分的分离纯化方法,为寻找镇痛效果好,而无成瘾性的新型镇痛药物,在合成出可用于亲和吸附眼镜蛇毒心脏毒素层析介质的基础上,结合阳离子交换UND SphereTMS,凝胶过滤Sehpadex G-50,疏水层析Phenyl SepharoseTM CL-4B,从广东产舟山眼镜蛇毒中分离出镇痛多肽。此外,将凝胶过滤Sehpadex G-50应用于仿生亲和层析之前检测分离效果。得出在一步仿生亲和层析后,用疏水层析的方法分离效果更佳,仿生亲和层析适于第一步分离。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 镇痛多肽 亲和层析 分离纯化
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舟山眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及其体外抗肿瘤活性 被引量:21
7
作者 许云禄 杨丽娟 刘广芬 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2003年第3期127-130,共4页
目的从眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素 F(CTX F)并鉴定其活性。方法应用凝胶过滤、离子交换柱色谱及疏水柱色谱等方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX F ,以SRB法观察CTX F对体外培养癌细胞的杀伤作用。结果眼镜蛇毒粗毒经凝胶过滤获得 4个蛋... 目的从眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素 F(CTX F)并鉴定其活性。方法应用凝胶过滤、离子交换柱色谱及疏水柱色谱等方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX F ,以SRB法观察CTX F对体外培养癌细胞的杀伤作用。结果眼镜蛇毒粗毒经凝胶过滤获得 4个蛋白峰 ,将CTX所在第Ⅳ峰用阳离子交换柱色谱获A、B、C、D、E、F和G等7个组分 ,其中E、F和G具CTX活性 ,将F组分再经凝胶过滤和疏水色谱进一步纯化得不含磷酯酶A2 (PLA2 )的CTX纯品 ,暂定名为CTX F ,它对多种癌细胞株有杀伤作用。结论应用凝胶过滤、离子交换和疏水色谱等方法可从眼镜蛇毒中获得不含PLA2 的CTX 。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 细胞毒素 凝胶过滤 离子交换色谱 疏水色谱 抗肿瘤
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分离纯化眼镜蛇蛇毒因子的一种经济方法 被引量:6
8
作者 任先达 黄守坚 +1 位作者 吴楚坤 孙家钧 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期271-275,共5页
将较大批量的眼镜蛇粗毒依次通过SephadexG75,DEAE-celluloseDE52和Bio-GelP200柱层析可高效地分离纯化眼镜蛇蛇毒因子(CVF),50g粗毒可制备电泳纯CVF960mg,产率大大高于既... 将较大批量的眼镜蛇粗毒依次通过SephadexG75,DEAE-celluloseDE52和Bio-GelP200柱层析可高效地分离纯化眼镜蛇蛇毒因子(CVF),50g粗毒可制备电泳纯CVF960mg,产率大大高于既往文献报道,整个制备过程仅需时数日。通过SDS聚内烯酰胺凝胶电泳测得其分子量为226000,其溶血活性从抗补体活性均与文献报道相近。所以,本实为一种经济,高效的实验室大量制备CVF的方法。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒液类 中华眼镜蛇 补体 色谱法
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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶分离纯化及对血管内皮细胞的抑制作用 被引量:7
9
作者 陈洲 黄剑钧 +2 位作者 薛玲 许云禄 林丽珊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1024-1028,共5页
目的从眼镜蛇毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-a-mino acid oxidase of Naja atra venom,NAV-LAAO),观察其对血管内皮细胞是否有抑制作用。方法应用阳离子交换层析和亲和层析方法分离纯化NAV-LAAO;采用MTT法、Western blot测定caspase及... 目的从眼镜蛇毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-a-mino acid oxidase of Naja atra venom,NAV-LAAO),观察其对血管内皮细胞是否有抑制作用。方法应用阳离子交换层析和亲和层析方法分离纯化NAV-LAAO;采用MTT法、Western blot测定caspase及细胞小管形成实验观察NAV-LAAO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长和血管生成的影响。结果眼镜蛇毒粗毒经两步层析法得到的LAAO,分子量约为58 ku。NAV-LAAO抑制HUVEC细胞的生长和细胞小管形成,其抑制细胞生长的IC50为21.42 mg.L-1。与对照组相比,LAAO组caspase-3、caspase-8升高。结论应用两步层析法从眼镜蛇毒中分离出的NAV-LAAO具有剂量依赖性的抑制HUVEC细胞的生长和影响细胞小管形成的作用。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 L氨-基酸氧化酶 分离纯化 血管内皮细胞 内皮/细胞小管形成 亲和层析
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中华眼镜蛇毒对荷人鼻咽癌裸鼠血浆MDA和SOD的影响 被引量:7
10
作者 杨惠玲 马志楷 +1 位作者 余清声 郑芹 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第4期249-250,253,共3页
目的:为了探讨中华眼镜蛇毒(NNAV)对荷人鼻咽癌(NPC)裸鼠血浆丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。方法:采用比色法检测经腹腔注射低、中或高浓度NNAV(1μg/ml、5μg/ml、10μg/m... 目的:为了探讨中华眼镜蛇毒(NNAV)对荷人鼻咽癌(NPC)裸鼠血浆丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。方法:采用比色法检测经腹腔注射低、中或高浓度NNAV(1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)的荷人NPC裸鼠血浆MDA和SOD活性。结果:荷瘤鼠血浆MDA(842nmol/ml)比正常裸鼠(392nmol/ml)明显升高,而荷瘤鼠血浆总SOD(T-SOD)、锰SOD(Mn-SOD)和铜锌SOD(CuZn-SOD)活性(5219Nu/ml,2031Nu/ml,3188Nu/ml)比正常裸鼠(12564Nu/ml,75.11Nu/ml,50.53Nu/ml)低;低、中和高浓度NNAV均可使荷瘤鼠血浆MDA降低或至正常范围(562nmol/ml,5.17nmol/ml,4.58nmol/ml),并可使荷瘤鼠T-SOD、Mn-SOD和CuZn-SOD有不同程度的升高,其中以高浓度组为佳(10888Nu/ml,7227Nu/ml,3661Nu/ml,)。结论:结果提示NNAV的抑瘤作用可能与其降低荷瘤鼠自由基水平和提高SOD活性有关。 展开更多
关键词 中华眼镜蛇毒 鼻咽癌 丙二醛 超氧化物歧化酶
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广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达 被引量:4
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作者 宋慧 张学荣 +2 位作者 周元聪 江涛 舒雨雁 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期265-270,共6页
目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL... 目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达NGF蛋白。超声破菌后,将上清液经Ni^(2+)-NTA柱纯化,收集并冻干NGF融合蛋白,用蛋白印迹法分析其NGF抗原活性,并通过促PC12细胞生长法观察其生物活性。结果经蛋白印迹分析可知在38 ku处的条带具有NGF抗原活性。加入天然蛇毒NGF,生长轴突的PC12细胞为(83±3)%,重组品为(21±3)%,表明经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF。结论在大肠杆菌中可以表达出有活性的蛇毒NGF蛋白。 展开更多
关键词 眼镜蛇 蛇毒 神经生长因子 蛋白表达
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眼镜蛇毒中一个弱纤维蛋白原水解活性金属蛋白酶的纯化和性质研究(英文) 被引量:9
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作者 孙黔云 李敏 杨付梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期835-843,共9页
通过蛋白层析从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的纤维蛋白原水解酶atrase A. Atrase A是一个分子量为64.6 kD,等电点为pH9.6和中性糖含量为4.16 %的碱性单链糖蛋白.它具有弱的纤维蛋白原α链水解活性.该活性能被金属螯合剂EDTA,EGTA,1 ... 通过蛋白层析从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的纤维蛋白原水解酶atrase A. Atrase A是一个分子量为64.6 kD,等电点为pH9.6和中性糖含量为4.16 %的碱性单链糖蛋白.它具有弱的纤维蛋白原α链水解活性.该活性能被金属螯合剂EDTA,EGTA,1 ,10-phenanthroline和还原剂DTT完全抑制,而PMSF只能部分抑制该活性,大豆胰蛋白酶抑制剂对其没有影响,表明atrase A属于金属蛋白酶.Atrase A具有水肿活性和金黄色葡萄球菌抑制活性.它对A549和K562细胞没有细胞毒性,但能使贴壁生长的A549细胞解离悬浮. Atrase A没有纤维蛋白、azocasein 、BAEE水解活性,对ADP、胶原诱导的血小板聚集没有明确的抑制作用.经小鼠皮下注射后没有发现其有出血毒活性. 展开更多
关键词 金属蛋白酶 纤维蛋白原水解酶 蛇毒 中华眼镜蛇
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舟山眼镜蛇毒心脏毒素-13的纯化、活性及尼群地平对其作用的影响 被引量:6
13
作者 许云禄 刘广芬 王晴川 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期432-436,共5页
目的 从舟山眼镜蛇 (Najaatra)毒分离纯化心脏毒素并观察其心脏毒性作用和探讨作用机制。方法 用离子交换和凝胶过滤法从蛇毒中分离纯化心脏毒素 ,观察其对整体动物 ,离体器官和组织的作用及作用影响因素。结果 从舟山眼镜蛇毒中分离... 目的 从舟山眼镜蛇 (Najaatra)毒分离纯化心脏毒素并观察其心脏毒性作用和探讨作用机制。方法 用离子交换和凝胶过滤法从蛇毒中分离纯化心脏毒素 ,观察其对整体动物 ,离体器官和组织的作用及作用影响因素。结果 从舟山眼镜蛇毒中分离出 4个有心脏毒性组分 ,纯化其中 1个定名为心脏毒素 13(Cardiotoxin 13,CTX 13) ,它含有 6 0个氨基酸 ,分子质量 7 76 9ku。小鼠ivLD50 为 0 75 6mg·kg-1。对大鼠离体心脏CTX 13可使冠脉阻力增高 ,心脏收缩幅度减小 ,停于收缩期。尼群地平 (Nit)能取消CTX 13升高冠脉阻力作用 ,同时使CTX 13的负性肌力作用逆转为正性肌力作用。CTX 13可诱发猪离体冠脉环呈剂量依赖性收缩 ,其EC50 为 2 6 0mg·L-1,Nit 0 0 5 μmol·L-1使其量效曲线平行右移 ,EC50 提高到 36 0mg·L-1。但对于大鼠离体乳头肌Nit 0 83μmol·L-1对CTX 13所致心脏毒性无明显对抗作用。在整体实验中Ni0 3mg·kg-1可使大鼠ivCTX 13的最小致死量 (MLD)从 (44 4 7± 2 8 5 ) μg·kg-1提高到(5 41 2± 2 3 2 ) μg·kg-1。结论 CTX 13的心脏毒性作用除其直接心脏毒作用外 。 展开更多
关键词 舟山眼镜蛇毒 心脏毒素 尼群地平 分离 纯化
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中华眼镜蛇蛇毒神经生长因子生物活性和理化性质测定 被引量:5
14
作者 董跃伟 徐天瑞 +1 位作者 熊郁良 徐康森 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2000年第2期59-62,共4页
目的:控制中华眼镜蛇蛇毒神经生长因子产品质量,研究其理化性质及生物学活性的定性和定量。方法:通过离子交换色谱、凝胶过滤及FPLC色谱分高纯化得到中华眼镜蛇蛇毒神经生长因子,按国家新药审批有关要求对其进行了SDS-PAGE电泳,N... 目的:控制中华眼镜蛇蛇毒神经生长因子产品质量,研究其理化性质及生物学活性的定性和定量。方法:通过离子交换色谱、凝胶过滤及FPLC色谱分高纯化得到中华眼镜蛇蛇毒神经生长因子,按国家新药审批有关要求对其进行了SDS-PAGE电泳,N端蛋白质序列规定,HPLC色谱分析,UV光谱图谱扫描,并利用PC12细胞培养法和鸡胚背根神经节培养法检测其生物活性。结果:电泳为一条带,亚基分子量为13500,N端蛋白质序列测定后确证为神经生长因子(NGF),HPLC为单峰,相对百分含量为95%以上,279.6nm处呈现出蛋白质样特征吸收峰。生物活性测定为,PC12细胞培养法灵敏度可达1ng/ml,鸡胚背根神经节培养法需30ng/ml的浓度梯度才能在神经节上有所反应。结论:此实验样品为具有较高生物活性的高纯度NGF多肽。 展开更多
关键词 中华眼镜蛇毒 神经生长因子 鉴定 理化性质测定
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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶对人膀胱癌ECV304细胞增殖和细胞周期的影响及机制 被引量:4
15
作者 齐元麟 张明芳 +3 位作者 赵蓉 张旭 吴玲珊 林建银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1660-1665,共6页
目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期... 目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期的影响;实时定量PCR和Western blot分析细胞周期相关基因mRNA和蛋白质表达。结果 NA-LAAO对ECV304细胞有强烈抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系。NA-LAAO处理6、12、24 h对ECV304的IC50分别为(1.54±0.23)、(1.09±0.15)和(0.48±0.14)mg.L-1;细胞生长曲线显示,0.156 mg.L-1的NA-LAAO作用4 d可明显抑制ECV304细胞增殖;0.313 mg.L-1从d 2起就有明显效果;0.625 mg.L-1处理后细胞多数死亡;流式细胞术分析提示NA-LAAO可使ECV304细胞阻滞在G1期,并呈量效关系;实时定量PCR结果显示,NA-LAAO可下调Cyclin A2、B1、D1、E1、CDK2、CDK6、Survivin、Skp2,上调p21、p16、p27的表达,Western blot结果显示NA-LAAO可下调Cyclin A、CDK2、CDK6,上调p21,与实时PCR结果一致。结论 NA-LAAO可通过调节细胞周期相关分子,使ECV304细胞阻滞在G1期,抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 L-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞周期 膀胱癌
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中华眼镜蛇毒腺cDNA表达文库的建立和分析 被引量:5
16
作者 万榕 宋军 +1 位作者 林旭 林建银 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2004年第13期1208-1211,共4页
目的 :为研究开发眼镜蛇毒药用基因工程产品 ,筛选克隆及表达相关药用功能基因 ,构建中华眼镜蛇毒腺cDNA表达文库 .方法 :一步法提取总RNA ,Oligo(dT)纤维素层析柱纯化mRNA ,逆转录PCR合成双链cDNA ,分级分离除去小片段后 ,收集大于 5 0... 目的 :为研究开发眼镜蛇毒药用基因工程产品 ,筛选克隆及表达相关药用功能基因 ,构建中华眼镜蛇毒腺cDNA表达文库 .方法 :一步法提取总RNA ,Oligo(dT)纤维素层析柱纯化mRNA ,逆转录PCR合成双链cDNA ,分级分离除去小片段后 ,收集大于 5 0 0bp的cDNA片段 ,取 1 0ngcDNA与质粒载体pSPORT1连接、转化 .结果 :获得克隆总数为 2× 1 0 5的眼镜蛇毒腺cDNA表达文库 ,重组率 97% .利用PCR技术从该文库扩增了心脏毒素 3(CTX 3)和磷脂酶A2 (PLA2 )基因的cD NA .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 2 4个中华眼镜蛇毒腺EST序列 .结论 :所建立的毒腺cDNA表达文库质量较高 ,可用于进一步筛选。 展开更多
关键词 中华眼镜蛇 毒腺 CDNA表达文库 PCR
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中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞株的影响 被引量:2
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作者 李红良 任先达 +2 位作者 罗英儒 叶春玲 张海伟 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2001年第6期1-5,共5页
目的 :了解中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞的影响。方法 :采用体外细胞培养的方法 ,观察蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用 ,对细胞生长及分裂数的影响。结果 :蛇毒灌胃后的兔血清能够明显抑... 目的 :了解中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞的影响。方法 :采用体外细胞培养的方法 ,观察蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用 ,对细胞生长及分裂数的影响。结果 :蛇毒灌胃后的兔血清能够明显抑制肺腺癌细胞的生长 ,且其抑制效应随剂量的增加而增加 ,但该血清对正常人胚肺成纤维细胞的生长却没有明显影响。结论 :中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对肺腺癌细胞的生长有明显的抑制作用 ,且有高度的选择性。 展开更多
关键词 抗癌活性 细胞分裂数 肺腺癌 中华眼镜蛇毒 兔血清 灌胃 癌细胞 治疗
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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究 被引量:4
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作者 齐元麟 张明芳 +1 位作者 赵蓉 林建银 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2012年第2期121-125,共5页
目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用We... 目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果:NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24h的IC50分别为(2.48±0.41)、(1.74±0.27)和(0.83±0.19)mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论:NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。 展开更多
关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 L-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞凋亡
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眼镜蛇科和蝮亚科混合蛇毒中各蛇毒含量的检测 被引量:4
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作者 杨丽娟 王晴川 刘广芬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期118-119,共2页
关键词 蛇毒 舟山眼镜蛇 短尾蝮蛇 混合蛇毒 含量检测
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徐长卿提取液对眼镜蛇蛇毒引起的炎症及毒性的影响 被引量:9
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作者 林丽珊 刘广芬 +1 位作者 王晴川 李克华 《福建医科大学学报》 2003年第2期188-190,共3页
目的 探讨徐长卿提取液对眼镜蛇毒的解毒作用。 方法  (1)采用眼镜蛇蛇毒对大鼠足跖肿胀的致炎模型 ,观察徐长卿提取液灌胃给药后 ,对大鼠足跖肿胀度的影响 ;(2 )观察徐长卿提取液对大鼠腹股沟植入含眼镜蛇毒棉球形成的肉芽肿的影响 ... 目的 探讨徐长卿提取液对眼镜蛇毒的解毒作用。 方法  (1)采用眼镜蛇蛇毒对大鼠足跖肿胀的致炎模型 ,观察徐长卿提取液灌胃给药后 ,对大鼠足跖肿胀度的影响 ;(2 )观察徐长卿提取液对大鼠腹股沟植入含眼镜蛇毒棉球形成的肉芽肿的影响 ;(3)观察徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒中毒小鼠的解毒作用。 结果 以 5 ,10 ,15 g/kg徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒引起的大鼠足跖肿胀及棉球肉芽肿均有显著的抑制作用。眼镜蛇毒所致的大鼠足跖肿胀的抑制率用药后 1h分别是 2 5 .1% ,2 9.7% ,36 .6 % ,用药后 3h分别是 2 8.9% ,37.3% ,4 0 .7% ;徐长卿提取液灌胃(1/d× 7)对腹股沟棉球肉芽肿的抑制率分别为 2 8.9% ,39.8% ,2 9.6 % ;徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒中毒小鼠有明显的减毒作用 (P<0 .0 5 )。 结论 徐长卿对眼镜蛇毒引起的炎症及毒性有明显的对抗作用。 展开更多
关键词 徐长卿 眼镜蛇毒液类 炎症 毒性试验
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