改良BU/CY预处理方案行同胞相合异基因外周造血干细胞移植治疗骨髓增生异常综合征

目的探讨改良BU/CY预处理方案行同胞相合异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效。方法收集2009年1月至2010年12月,哈尔滨血液病肿瘤研究所5例MDS进行allo-PBSCT患者。预处理方案为改良BU/CY;预防移植物抗宿主病(GVHD)采用环孢素A/甲氨蝶呤/吗替麦考酚酯(CSA/MTX/MMF)。结果 5例患者均获得移植,中性粒细胞(ANC)≥0.5×109/L的中位时间移植后12.4d(9～14d),血小板(PLT)≥20×109/L中位时间移植后13.25d(10～23d),2例出现Ⅱ度急性移植物抗宿主病(aGHVD),2例出现局限型慢性移植物抗宿主病(cGVHD),3例发生Ⅱ度口腔溃疡,发热4例,其中1例败血症,1例合并肺部感染;2例发生巨细胞病毒(CMV)血症,出血性膀胱炎(HC)2例,1例出现纯红再生性障碍性贫血;中位随访时间12.8个月(8～22个月),1例骨髓增生异常综合征-环形铁粒幼性难治性贫血(MDS-RAS)移植后7个月复发后合并肺部感染死亡,无病存活4例。结论改良BU/CY方案用于MDS移植预处理疗效较好,不良反应可以耐受,安全性好。

Cy-VP16-fTBI预处理的干细胞移植治疗恶性血液病的长期疗效

目的Cy-VP16-fTBI预处理方案的造血干细胞移植治疗血液系统恶性疾病的长期疗效观察。方法造血干细胞移植治疗16例恶性血液病患者，其中异基因外周血干细胞移植8例，异基因骨髓移植5例，自体外周血干细胞移植3例。所有患者均予环磷酰胺（Cy）＋依托泊苷（VP16）＋标准分次全身放疗（fTBI）预处理方案。结果所有患者均成功植活，白细胞、血小板植入中位时间分别为第15（10-22）天和第20（10-65）天。Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病（aGVHD）3例（19%），慢性GVHD（cGVHD）7例（43%）。11例（68.75%）患者长期生存，中位生存期75（34-82）个月。6年总体生存率（OS）68.75%，其中第一次完全缓解或慢性粒细胞白血病慢性期患者6年OS为78.75%。6年复发率14.29%，移植满2 a后无患者复发。结论Cy-VP16-fTBI预处理方案的造血干细胞移植安全、有效，其长期疗效明显优于常规化疗。aGVHD发生率较低，但cGVHD在异基因外周血干细胞移植中发生率较高；其他毒副作用较少。

改良BU/CY预处理方案的异基因造血干细胞移植治疗难治复发恶性血液病疗效分析

目的探讨改良BU/CY预处理方案的异基因造血干细胞移植治疗难治性复发恶性血液病的效果。方法对4例难治性复发恶性血液病患者实施改良BU/CY预处理治疗。结果死亡率25.0%。结论改良BU/CY预处理方案治疗难治性复发恶性血液病效果显著。

Construction of HA-1-DC Nucleic-acid Vaccine and Induction of Specific Cytotoxic T Lymphocytes

An HA-1-DC nucleic-acid vaccine was constructed to induce anti-leukemia effect after hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). DCs were generated from HSCT donors in vitro, and its immunologic activity was assayed by using flow cytometry and mixed lymphocytes reaction. HA-1 gene was electroporated into the cultured DCs to construct a DC nucleic-acid vaccine. After transfection for 48 h, the expression of HA-1 protein could be detected by using Western blot. The DCs were cultured with syngenic lymphocytes to induce specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs). The cytoxicity of the CTLs was detected by LDH assay. The results showed that The DCs derived from peripheral blood monocytes (PBMCs) expressed the phenotype of DCs, and were effective in stimulating proliferation of the allogenic lymphocytes. After electroporating for 48-h, HA-1 protein was detected by using Western blot. The cytotoxity of inducing CTLs was higher than the control group. It was suggested that minor histocompatibility antigen HA-1 could be considered as a target of immunotherapy against leukemia after HSCT.

标准BU／CY和改良BU／CY预处理对异基因造血干细胞移植早期肝损伤影响的研究

目的考察标准BU／CY和改良BU／CY两种预处理方案对异基因造血干细胞移植患者早期肝损伤的影响。方法造血干细胞移植患者48例，按预处理方法分为标准BU／CY组（26例）和改良BU／CY组（22例）；选取同期20例志愿者作为正常对照组。记录移植前后的肝功能指标[谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBIL）]变化情况，检测预处理及移植前后外周血内皮细胞及血浆中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6等细胞因子的水平。结果标准BU／CY组ALT水平于移植-3天开始逐渐升高，＋3天达高峰，且明显高于改良BU／CY组（P〈0．05）；标准BU／CY组AST水平于预移植-3天开始逐渐升高，0天达高峰，明显高于改良BU／CY组（P〈0．05）。各预处理组TBIL水平在预处理期间及移植后呈逐渐上升趋势。2组患者预处理后内皮细胞升高（P〈0．05）。组间比较，TNF-α和IL-6差异较为明显（P〈0．05）。结论两种预处理方案均可造成不同程度的肝功能损伤，其中标准BU／CY方案损伤较改良BU／CY方案严重。标准BU／CY组内皮细胞损伤较为严重，其与肝功能损伤呈正相关，提示内皮细胞损伤是肝损伤的第一步和始动因素。

人脐带间充质干细胞经体内定植并向心肌样细胞分化的研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)移植到大鼠心肌后能否存活并向心肌样细胞分化,为心肌细胞的移植探索新的细胞来源。方法从人脐带华尔通氏胶分离、培养MSCs,检测人脐带来源的MSCs的细胞表面标记。用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记人脐带间充质干细胞,标记细胞移植到梗塞大鼠心肌,观察移植后2周细胞能否存活,移植细胞能否向心肌样细胞分化,表达心肌细胞标记物troponinI及troponinT。结果人脐带间充质干细胞移植到心肌梗塞模型大鼠心肌后细胞能存活,并表达心肌细胞标记物troponinI及troponinT。结论人脐带间充质干细胞移植至体内能存活并分化为心肌样细胞,人脐带间充质干细胞可能作为心肌细胞移植的来源。

银屑病骨髓间充质干细胞分泌白介素-6和血管内皮生长因子的检测

目的:研究银屑病患者骨髓间充质干细胞(MSCs)细胞因子分泌水平及其与病情活动的相关性,进一步探讨银屑病的发病机制。方法:采用密度梯度离心分离和贴壁培养法对24例银屑病患者和20例正常对照骨髓MSCs进行分离培养,采用ELISA方法测定MSCs培养上清中白介素(IL)-6和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:银屑病患者骨髓MSCs培养上清液IL-6浓度较正常人明显增高(P<0.01),VEGF浓度较正常人明显降低(P<0.01)。患者IL-6及VEGF水平与银屑病皮损面积及严重度指数(PASI)评分无相关性(P>0.05)。结论:银屑病患者骨髓MSCs细胞因子分泌异常,银屑病患者骨髓造血微环境有异常,进而对银屑病造血干细胞发育可能产生影响。

父母供子女单倍型造血干细胞移植治疗恶性血液病

背景:单倍型造血干细胞移植是治疗恶性血液病的一种有效方法,合适的供者及快速查找到合适的供者有助于提高移植的成功率。目的:比较父母供子女单倍型造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床疗效。方法:对郑州大学第一附属医院92例恶性血液病患者行父母为供者的单倍型造血干细胞移植治疗,分为父供子移植、父供女移植、母供子移植、母供女移植4组,对比4组患者移植物抗宿主病的发生率、复发率、2年无病生存率及总生存率等。结果与结论:92例患者均完全植入并获得造血重建,4组急性移植物抗宿主病发生率、慢性移植物抗宿主病发生率和复发率差异无显著性意义(P>0.05)。但4组Ⅲ、Ⅳ度急性移植物抗宿主病发生率、2年无病生存率、2年总生存率差异有显著性意义(P<0.05)。其中父供子移植组、母供女移植组的Ⅲ、Ⅳ度急性移植物抗宿主病发生率低于父供女移植组和母供子移植组;同时父供子移植组和母供女移植组的2年无病生存率、2年总生存率高于父供女移植组和母供子移植组。可见父母供子女单倍型造血干细胞移植是安全可行的,供受者性别相同比供受者性别不同的疗效好。

黄芪甲苷对无血清及缺氧诱导MSCs凋亡的影响

目的观察黄芪甲苷预处理对无血清及缺氧诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用密度梯度离心法分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测第3代MSCs表面抗原。分别以40,80,160μg.mL-1的黄芪甲苷预处理MSCs 24 h,再进行无血清及缺氧培养24 h,细胞核荧光染色观察细胞凋亡情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位。结果密度梯度离心法可有效分离大鼠MSCs;细胞表面抗原CD29、CD44表达阳性,CD31、CD34表达阴性;Hoechst33342染色显示经黄芪甲苷预处理可减少细胞凋亡的形态学改变,Annexin V/PI双染法证实,80,160μg.mL-1黄芪甲苷预处理MSCs细胞凋亡率较缺血缺氧组降低,差异有统计学意义(P<0.05);JC-1荧光探针检测证实80,160μg.mL-1黄芪甲苷预处理MSCs线粒体膜电位比缺血缺氧组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷可抑制无血清及缺氧诱导的MSCs凋亡,其作用可能是通过抑制线粒体膜电位降低实现的。

骨髓间质干细胞移植对实验性肺纤维化的治疗作用

目的:研究骨髓间质干细胞(BMSCs)对博来霉素A5(BLMA5)所致大鼠肺纤维化的治疗作用,并探讨其治疗机制。方法:雌性SD大鼠70只随机分为A组21只为生理盐水对照组;B组21只为BLMA5模型组;C组21只为气管内注入BLMA5后立即移植BMSCs;D组7只为气管内注入BLMA514d后移植BMSCs。C、D组分别于BLMA5造模后立即、14d后通过尾静脉注入4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记的BMSCs。A、B、C组大鼠分别于第7、14、28天、D组第28天时各处死大鼠7只行HE及Masson染色;荧光显微镜下检测标记细胞、肺组织内羟脯氨酸(HYP)含量,分析肺内胶原沉积情况;免疫组化观察MMP-2、TGF-β1表达。结果:①C组第7、14、28天及D组第28天肺组织均见到标记的BMSCs。②HE及Masson染色切片,与A组比较B组第7天肺泡炎最明显,第28天肺纤维化最重(P<0.01);C、D组均轻于B组,C组轻于D组(均P<0.05)。③B组注BLMA5第7天,HYP含量及TGF-β1表达均开始升高,第28天最高,各组间比较均有变化(P<0.05)。④B组MMP-2的表达在第7天时最多,与A、C组比较有明显差异(P<0.01),第28天时下降到较低水平,各组比较无差异。结论:骨髓间质干细胞可定植于受损的肺组织,并能有效阻止BLMA5诱导的早期大鼠肺纤维化形成,其机制可能与降低TGF-β1、MMP-2的表达有关,早期治疗效果优于晚期。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养纯化及生物学特性的鉴定

【目的】探讨大鼠骨髓间充质干细胞（rat bonemarrow—derived mesenchymal stem cells，rBMSCs）体外分离、培养和纯化方法，鉴定其生物学特性，为BMSCs应用奠定技术基础。【方法】采用密度梯度离心法结合贴壁分离法分离培养纯化SD大鼠BMSCs，观察其形态，测定细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞表面标记，成骨诱导试剂盒检测rBMSCs向成骨细胞分化的潜能。【结果】显微镜下rBMSCs呈梭形、多角形成纤维细胞样形态，大小均一，漩涡状生长。生长曲线分析rBMSCs贴壁2d基本无增殖，处于潜伏期，对数增殖期为3～7d，d8后进入平台期，细胞出现接触抑制现象。rBMSCs表面标志显示第3代rBMSCs纯度可达97％以上，CD44、CD90呈阳性表达，CD34呈阴性表达；向成骨诱导rBMSCs10d后细胞表现成骨细胞特性，碱性磷酸酶活性明显升高。【结论】本实验建立了一种理想的体外分离扩增纯化rBMSCs的培齐体系。实验结果表明所分离培养的rBMSCs纯度高、生物学特征稳定，适用于对BMSCs进一步的应用研究。

冲击波干预成人骨髓间充质干细胞后IGF-Ⅰ和TGF-β1的表达及意义

[目的]在体外成功分离培养骨髓间充质干细胞(hMSCs)和测得理想冲击波(ESW)干预能量的基础上,观察体外冲击波干预后成骨活性因子IGFⅠ和TGFβ1表达,探讨其促进成骨作用。[方法]将5kV、100频次的体外冲击波作用于第1代骨髓间充质干细胞,采用免疫细胞化学法隔代观察(P1P11)胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达,计数阳性率;并进行统计学分析,设定P<0.05为有统计学差异。[结果]ESW干预后的第3代细胞IGFⅠ染色,胞浆及胞核中出现大量黄色棕黄色颗粒,对照组无明显着色;第7代干预组IGFⅠ呈强阳性(87.9%);TGFβ1出现较晚,第9代细胞TGFβ1阳性率为72.2%,随后开始下降;与对照组差异显著(P<0.01)。[结论]ESW干预能够提高hMSCs增殖活性,IGFⅠ和TGFβ1等的不同时期和不同程度表达是体外冲击波促进hMSCs成骨活动的适时信号和有力证据。

同胞异基因外周血干细胞移植治疗白血病研究

本研究观察异基因外周血干细胞移植 (PBSCT)治疗白血病的疗效与副作用。所选供者均为HLA A、B、DR位点与患者完全相同的同胞兄弟姐妹。供者经 2 5 0 μg/kgrhG CSF动员 5天后 ,单采外周血干细胞 1- 2次。 4例白血病病人经过改良Bu/Cy预处理方案 ,输入单个核细胞 6.78× 10 8/kg± 1.96× 10 8/kg( 5× 10 8/kg - 8.67×10 8/kg) ,其中CD3 4 +为 15 .0 2× 10 6 /kg± 8.93× 10 6 /kg ( 5 .3× 10 6 /kg - 2 4 .2 3× 10 6 /kg) ,用MTX +CsA +MMF预防急性移植物抗宿主病 (aGVHD)。结果表明 :移植前 2天到移植后 2天白细胞降至最低 ,移植后 11- 17天中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L ,移植后 11到 5 5天血小板 >5 0× 10 9/L。 4例中 2例出现aGVHD ,2例出现cGVHD ,2例出现感染。移植后 2 8天复查骨髓显示造血恢复 ,STR位点的DNA检查显示供者细胞生长。结论 :采用改良Bu/Cy方案和用MTX +CsA +MMF预防aGVHD方案进行PBSCT治疗白血病是一种安全、可靠的治疗方法。

骨髓间充质干细胞的生物学特性及其向心肌样细胞的分化

【目的】体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),分析其生物学特性;5-氮胞苷(5-Azacytidine,5-aza)定向诱导其向心肌细胞分化。【方法】采用体外密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓单个核细胞,流式细胞仪检测细胞表面标志;用含有5-aza(10μmol/L)的培养液培养第二代MSCs24h,诱导其向心肌细胞分化;诱导4周后采用免疫荧光技术检测心肌细胞特异性标志物Connexin 43和TroponinⅠ的表达。【结果】体外分离培养的细胞形态主要为纺锤形和长梭形,细胞表面抗原CD29、CD44表达为阳性,CD34、CD45表达为阴性;经5-aza诱导后细胞表达心肌细胞特异蛋白Connexin 43和TroponinⅠ。【结论】MSCs是存在于骨髓中的多能干细胞,体外经5-aza诱导可以定向分化为心肌样细胞。MSCs为心血管疾病的治疗提供了种子细胞。

PPARγ在神经干细胞的表达

【目的】探讨神经干细胞(NSCs)增殖和分化过程中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况及意义。【方法】体外分离培养神经干细胞,诱导其分化,先用免疫荧光法查看PPARγ在NSCs中的定位,然后分别取未分化的及诱导分化后d1、d5、d9的NSCs,应用RT-PCR和Western Blot法检测各相应时间点NSCs内PPARγ的mRNA及蛋白表达。【结果】成功培养大量未分化呈巢状悬浮生长的神经干细胞团,并诱导其分化为神经元和神经胶质细胞。PPARγ蛋白存在于NSCs细胞核内,并在NSCs未分化阶段高水平表达,NSCs诱导分化后则表达量随时间延长而逐渐下降。【结论】在NSCs的增殖阶段,PPARγ的表达较高,而在分化过程中,表达量逐渐减少,提示PPARγ可能对NSCs的增殖和分化起重要作用。

小鼠Sca-1阳性心脏干细胞的分离提取和表型鉴定

【目的】探索可靠的小鼠心脏干细胞（ cardiac stem cells ，CSCs）分离方法，并对体外培养的 CSCs进行表型鉴定。【方法】选用 SPF 级3-4周龄 ICR 小鼠，无菌条件下处理心脏组织，胶原酶 A 消化，40μm 筛网过滤，制备单细胞悬液，利用免疫磁珠分选法结合抗干细胞抗原‐1（stem cell antigen‐1，Sca‐1）的磁珠抗体来分离 Sca‐1阳性干细胞，并进一步行免疫荧光、流式细胞及基因表达等鉴定。【结果】利用磁珠分选法结合特异的抗 Sca‐1的磁珠抗体，成功地从小鼠心脏组织中分离出 Sca‐1阳性细胞群。这些细胞具有小、圆、亮等特征，能在体外培养扩增，传代后仍绝大部分表达 Sca‐1抗原，但基本不表达内皮系或造血细胞系的特异抗原 c‐kit 、Flk‐1、CD31、CD34、CD45等。这些 Sca‐1阳性细胞表达多能干细胞特征的 Nanog 、TERT 基因，心脏胚层特异的 ISL‐1、TBX5基因及心肌特异性转录因子 GATA4、Nkx2．5、MEF2C ，但不表达成熟心肌的标志基因α‐M HC 。【结论】利用磁珠分选法结合抗特异干细胞表面标志物 Sca‐1的磁珠抗体能在短期内获得高纯度的Sca‐1阳性 CSCs ；小鼠 Sca‐1阳性 CSCs 能在体外培养增殖，有助于 CSCs 相关的组织工程或分子机制的实验研究。

不同微环境对人骨髓间充质干细胞体外增殖和分化的影响

目的评价不同微环境对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)体外增殖和分化的影响。方法采用全骨髓贴壁分离法培养hBMSC,传至第3代后分别在4种微环境下培养:10%FBS组、10%CS组、1 g/L植物源重组人血清白蛋白(OsrHSA)组、单纯DMEM组。采用CCK-8比色法测定细胞一周增殖率。以不加成骨诱导液为对照组,实验组添加成骨诱导液后第1周和第2周行碱性磷酸酶染色,第3周和第4周行茜素红染色,评估不同时段各组细胞成骨分化程度。结果采用单纯DMEM组培养hBMSC,细胞增殖率基本不变,后期下降;10%FBS组、10%CS组和1 g/L OsrHSA组均能显著提高hBMSC增殖率(P<0.05),以10%FBS组效果最好。碱性磷酸酶染色和茜素红染色显示,单纯DMEM组和对照组均未发现钙沉积阳性细胞;10%FBS组、10%CS组和1 g/L OsrHSA组在各阶段均出现阳性染色,随着诱导时间延长颜色明显加深;10%CS组和1 g/L OsrHSA组各时间段阳性染色程度明显较10%FBS组弱,10%CS组其次,1 g/L OsrHSA组最差。结论细胞外基质微环境对hBMSC生长分化至关重要,含血清的微环境能更好地促进hBMSC增殖及维持hBMSC分化特性。

牵张应力对小儿体外骨髓间充质干细胞内钙离子的影响

目的观察牵张应力对小儿体外骨髓间充质干细胞(HMSCs)内钙离子的影响。方法分离并培养小儿骨髓间充质干细胞,利用体外装置对第3～6代细胞加载牵张应力,在细胞受力前加入钙离子拮抗剂(维拉帕米,20μmol/L)预处理30 min,用fluo-4/AM荧光标记,检测不同时间刺激后细胞内游离钙离子的荧光值。结果应力干预MSCs后,受力1 min组细胞内钙离子浓度即升高,荧光强度是对照组的164.63%,干预3 min组、5 min组升高更明显,干预10 min组钙离子升高幅度有下降趋势:应力干预前加入钙离子拮抗剂维拉帕米进行预处理,各组细胞内钙离子升高程度减轻。结论MSCs受牵张应力刺激后,细胞内钙离子浓度发生明显变化,维拉帕米起部分阻断作用。

层粘连蛋白与脑微血管内皮细胞对正常及缺氧条件下培养的神经干细胞分化的影响

【目的】探讨层粘连蛋白（LN）与脑微血管内皮细胞（CMECs）对正常及缺氧条件下培养的神经干细胞（NSCs）分化的影响。【方法】原代分离培养CMECs和NSCs，实验分为常氧组（NSCs＋NSCs完全培养基）、缺氧组（缺氧NSCs＋NSCs完全培养基）、常氧合培养组（NSCs＋NSCs完全培养基＋LN＋CMECs）、缺氧舍培养组（缺氧NSCs＋NSCs完全培养基＋LN＋CMECs），分别于6h、1d、3d、7d等时间点用免疫细胞化学方法比较NSCs的分化情况。【结果】①NSCs缺氧培养6h后较正常NSCs神经元、星型胶质细胞分化率差异无显著性（P〉0．05）；②6h开始，常氧合培养组较常氧组NSCs神经元分化比率增加，星型胶质细胞分化比率下降，差异具有显著性（P〈0．05）；③1d开始，缺氧舍培养组较缺氧组NSCs神经元分化比率增加，3d开始，星型胶质细胞分化比率下降，差异具有显著性（P〈O．05）；④3d开始，缺氧合培养组较常氧合培养组NSCS星型胶质细胞分化比率下降，7d开始，缺氧合培养组较常氧合培养组NSCs神经元分化比率增加，差异具有显著性（P〈0．05）。【结论】①短时间缺氧培养对NSCs细胞分化类型无明显改变；②LN及RCMECs可使正常及缺氧损伤的NSCs神经元分化比率提高。

人造血干/祖细胞多态性的研究:Ⅲ.骨髓CD34^+造血干/祖细胞功能亚群的分析

CD 34^+造血干/祖细胞(HSC/HPC)是十分异质性的,由多个不同功能亚群所构成,在分化方向与重建造血等方面差异显著。本文对正常人骨髓CD 34^+ HSC/HPC各亚群进行了较全面的分析。首先以阳性选择策略,采用Isolex^(TM) 50免疫磁球分选术富集骨髓CD 34^+HSC/HPC,其纯度>90%,随之采用免疫荧光抗体双标记二维流式细胞仪对其测定,发现高纯度的CD 34^+HSC/HPC可分为八个不同亚群:1.CD 34^+/CD 71^-(23.4%—56.6%)与CD 34^+/CD 71^+(33.4%—66.6%);2.CD34^+/CD 45^-(80.8%—82.5%)与CD34^+/CD 45^+(8.1%—11.2%);3.CD 34^+/CD 33^-(20.4%—80.6%)与CD 34^+/CD 33^+(14.6%—64.8%);4.CD 34^+/DR^-(6.3%—11.0%)与CD 34^+/DR^+(82.8%—85.5%)。用免疫胶体金——免疫桥酶联组化双染色对上述亚群进一步分析的结果与流式细胞仪的高度一致。