金属硫蛋白在食管鳞癌中的表达及其与增殖凋亡的关系

目的:探讨金属硫蛋白在食管鳞癌中的表达及其与癌细胞增殖、凋亡的关系。方法:采用免疫组化法检测92例食管鳞癌组织中的金属硫蛋白(MT)、增殖细胞核相关抗原(Ki-67抗原)的表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:92例食管鳞癌标本中65例MT呈阳性表达,阳性率为70.6%,明显高于正常食管粘膜上皮组织(3/20,P<0.01);MT表达与食管鳞癌患者年龄、性别、浸润深度及病变长度无关,而与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关,MT与Ki-67抗原表达强度呈正相关,Pearson列联系数=0.227(P<0.05)。随MT表达强度的增加,癌组织凋亡指数逐渐降低。结论:MT表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,MT能促进癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,可作为食管鳞癌治疗的新靶点。

柽柳、星星草金属硫蛋白基因双价植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

将在柽柳(Tamarix and rossowii)和星星草(Puccinellia tenuiflora)cDNA文库中克隆到的金属硫蛋白基因PCR扩增后,连接到载体pROKII上,构建了分别由2×CaMV35S启动子调控的柽柳金属硫蛋白基因和星星草金属硫蛋白基因双价植物表达载体pRCXM,经PCR检测及酶切鉴定证实pRCXM构建成功。通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草(Nicotiana tobacum Longjiang911),获得了抗卡那霉素的转基因植株。经初步检测结果显示,外源基因已整合进烟草基因组。重金属抗性结果证明:转基因烟草可以在CdCl2的浓度为300μmol/L的培养基中生长,而对照烟草只能在CdCl2的浓度为100μmol/L的培养基中生长。

利用蛋白质指纹图谱技术检测硒诱导金属硫蛋白实现大鼠肝纤维化防护作用

【目的】探索硒诱导金属硫蛋白及其对大鼠肝纤维化防护作用的蛋白质指纹图谱改变。【方法】利用表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术测定硒对金属硫蛋白的诱导,寻找大鼠肝纤维化的异常蛋白表达标志并评估硒代金属硫蛋白的防护作用。【结果】IMAC-Cu蛋白质芯片6279 Da和6650Da处特征性MT蛋白质表达增强证实硒对MT的高诱导作用;肝组织点样的WCX2芯片5 140Da综合峰的两峰与正常组相对应处比较明显倒置,血清点样的H4芯片7 105 Da左右的蛋白质出现高表达,4 820Da左右的蛋白质表达受抑,三种图谱变化是大鼠酒精性肝纤维化的相关信号蛋白;硒诱导MT增高后上述异常表达均有改善,说明有机硒对肝纤维化有防护作用。【结论】组织和血清的蛋白质指纹图谱可以作为肝纤维化疗效监测和评价的一类标志物,为今后进行更多的药物或方法筛选奠定了一种可以尝试的试验模式。

转金属硫蛋白基因平菇对受辐照、衰老和铅中毒小鼠抗氧化能力的影响

研究了转金属硫蛋白基因平菇对不同模型小鼠抗氧化能力的影响。结果表明:在小鼠饲料中掺入1%和3.16%的转金属硫蛋白基因平菇干粉(前者相当于50～60kg体重的人每日摄食鲜菇1kg),可明显增强受辐照小鼠血清SOD活性,降低其血清MDA含量;明显增强铅中毒小鼠血清SOD活性和抗活性氧能力;对衰老小鼠血清SOD活性的降低、MDA含量的升高无明显改善作用。结论:转金属硫蛋白基因平菇可提高受辐照和铅中毒小鼠的抗氧化能力,对增强D-半乳糖致衰老模型小鼠抗氧化能力无明显效果。

金属硫蛋白1E基因多态性与2型糖尿病的关系

目的探讨金属硫蛋白(MT)1E基因多态性与2型糖尿病(T2DM)的关系。方法采用PCR-RFLP法检测149例T2DM患者和244例正常对照者的MT1E基因上的一个SNP-rs 708274,应用SPSS统计学软件处理数据,进行统计学分析。结果病例组和对照组等位基因T和G比较差异有显著性(2χ=4.072,P<0.05);TT,TG,GG三种基因型频数分布在病例组和对照组中存在差异(χ2=8.252,P<0.05)。结论在中国北方汉族人群中MT1E rs 708274位点基因多态性可能与T2DM相关。

航天对MT工程菌株的影响研究

为了探讨航天与常规诱变技术对MT工程菌株的影响,进行了HNO2.UV、γ-射线、LiCl及γ-射线+LiCl分别与航天共诱变对MT工程菌株活性的影响试验,并且就航天对MT工程菌株的致死作用及质粒的稳定性进行了研究。结果表明:MT工程菌株经航天处理后,活菌数降低,死亡率为34.59%,航天对MT工程菌株具有一定的致死作用;MT工程菌株经UV、γ-射线、LiCl及γ-射线+LiCl分别与航天共诱变处理后的生长活性没有改变,MT工程菌株经HNO2与航天共诱变处理后的生长速率减慢;在航天处理的作用下,MT工程菌株的质粒不易丢失,能够维持很好的稳定性,丢失率仅为8.26%,而置于地面的MT工程菌株的质粒易丢失,丢失率为83.51%。

吗啡依赖和戒断小鼠海马MT1、MT2基因表达的变化

【目的】探讨吗啡依赖和戒断小鼠海马金属硫蛋白(metallothionein,MT)MT1、MT2 mRNA表达的变化。【方法】剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型,腹腔注射盐酸纳络酮诱发戒断症状。根据小鼠戒断反应中出现的跳跃次数、体重下降等指标评定戒断反应的强度。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察实验小鼠海马MT1、MT2 mRNA的变化情况。【结果】吗啡依赖组MT1、MT2 mRNA表达水平高于对照组和吗啡戒断组(P<0.05),吗啡戒断组MT1、MT2 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05)。【结论】吗啡依赖小鼠海马MT1、MT2 mRNA表达增加,纳络酮戒断能够抑制吗啡依赖引起的MT1、MT2表达增加,表明海马MT的表达变化参与了吗啡依赖和戒断过程。

镉、锌制剂联合应用抑制肝细胞癌生长和转移的实验研究

目的研究氯化镉(Cadmium Chloride)和硫酸锌(Zinc Sulfate)对肝细胞癌生长和转移的抑制作用。方法建立人肝细胞癌异位种植转移模型。将荷瘤裸60只鼠随机分成五组,每组12只。种植1周后开始,分别自腹腔一次性注射生理盐水(对照组)、氯化镉(Cd组三个剂量:1.0 mg,2.0 mg,3.0 mgCd/kg)、氯化镉(3.0 mgCd/kg)与硫酸锌联合应用(Zn+Cd)。种植后第8周末处死动物,测量种植处肿瘤重量、体积、观察癌细胞转移及腹水出现情况、透射电镜观察肝细胞超微结构,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测肝脏及肝癌组织金属硫蛋白(Metallothionein,MT)。结果各组均成瘤,Zn+Cd组、Cd组(3.0 mg,2.0 mg,1.0 mgCd/kg)与对照组相比,裸鼠肿瘤生长差异有显著性意义(P<0.05);腹膜转移率分别为8.3%、9.1%、18.1%、36.4%、100%(P<0.05);透射电镜观察,Cd组与Zn+Cd组相比,线粒体、粗面内质网明显减少,溶酶体、脂滴增多;IHC检测,Zn+Cd组荷瘤裸鼠肝脏组织的MT染色明显加深,肝癌组织MT染色无明显改变。结论镉对肝细胞癌生长和转移有较强的抑制作用;应用镉剂治疗前预用锌,对正常肝组织有保护作用。