姜黄素-生物素偶联物的合成及抗肿瘤活性研究

为进一步开发安全有效的抗口腔癌药物,利用酰基化法及羧氨缩合法制备一系列姜黄素类衍生物,采用药物拼合原理,使姜黄素连接具有一定抗肿瘤活性及靶向性的生物素,合成一系列姜黄素-生物素偶联物(目标化合物2、4、5),其结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR和HR-MS(ESI)确证。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测目标化合物对人口腔表皮样癌细胞(KB细胞)增殖的抑制作用。结果显示:化合物2在作用24 h及48 h时对KB细胞的IC_(50)分别是40.82μmol/L和26.23μmol/L,提示其抗肿瘤活性优于姜黄素。化合物4在作用24 h及48 h时对KB细胞的IC_(50)分别是39.83μmol/L和51.24μmol/L,提示在作用24 h时,其抗肿瘤活性优于原药姜黄素。

臭氧水对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性

目的:探讨不同浓度臭氧水(OW)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)的细胞毒性。方法:体外培养HGFs,按干预臭氧水浓度分为5组:1、2、4、6 mg/L和空白对照组,在作用的不同时点(1、5、10、20 min)采用倒置相差显微镜观察各组细胞的形态变化,MTT法测定细胞的相对增殖率,采用SPSS软件进行统计分析。结果:浓度为1和2 mg/L的OW在20 min内对HGFs的细胞毒性为1级,4 mg/L作用1 min,细胞毒性为1级,作用5~20 min,细胞毒性为2级;6 mg/L作用1~20 min,细胞毒性为2~3级。结论:臭氧水的细胞毒性与其浓度和作用时间有关,低浓度臭氧水(≤2 mg/L)可应用于临床治疗和消毒中,在保证作用效果的情况下,应尽量减小臭氧水的作用时间和浓度。

石草鞋化学成分及对人乳腺癌高转移细胞增殖的影响

目的:通过对石草鞋化学成分的分离及活性研究,揭示石草鞋抑制人乳腺癌高转移细胞增殖作用的物质基础。方法:对石草鞋90%乙醇提取物采用硅胶、葡聚糖凝胶LH-20(Sephadex LH-20)进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构;采用噻唑蓝(MTT)法测试化合物对人乳腺癌高转移细胞增殖的影响。结果:从石草鞋中分离得到12个化合物,分别鉴定为isoagatholal、monoeerin、对羟基肉桂酸甲酯、secologanoside、邻苯二甲酸二正丁酯、对羟基肉桂酸乙酯、isobonein、columbianetin acetate、gentioside、crototropone、3-羟基对甲氧基苯甲醛、2-desoxy-4-epi-pulchellin。monoeerin的半数抑制浓度(IC50)值为12.35μg/mL,crototropone的IC50值为9.51μg/m L。结论:所有化合物均为首次从石草鞋中分离得到,isoagatholal、monoeerin、isobonein、gentioside、crototropone为首次从该属植物中分离得到;monoeerin、crototropone可抑制人乳腺癌高转移细胞增殖。

藤茶提取物的抗肿瘤作用研究

目的观察藤茶提取物(FL0810)体内外抗肿瘤的作用。方法采用S180腹水瘤模型观察FL0810体内抗肿瘤作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究FL0810对肿瘤细胞体外增殖的影响。结果 FL0810能延长S180腹水瘤小鼠生存时间,与模型对照组相比有显著差异(P<0.05);FL0810对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、人前列腺癌细胞DU145均有较强的体外增殖抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性,抑制率随着药物浓度增加而增加;72 h半数抑制浓度(IC50)为别为208.71,226.14,150μg/mL。结论藤茶提取物在体内对S180的生长有一定的抑制作用,在体外对人乳腺癌和人前列腺癌有明显的抑制作用。

氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖作用的影响

目的:探讨氯吡格雷(Clopidogrel)对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响.方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1,将含不同浓度氯吡格雷(0.01、0.1、0.5和1mmol/L)的培养液与GES-1细胞共同培养24、48及72h,采用MTT比色法计算细胞生长抑制率.以药物不同浓度对GES-1细胞生长抑制率作图,得到剂量反应曲线.依据Bliss法,利用SPSS15.0软件求出氯吡格雷的半数抑制浓度IC50和安全浓度IC90(存活率≥90%的药物浓度).倒置相差显微镜观察各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后细胞形态学变化,用流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后对细胞凋亡的影响.结果:氯吡格雷对GES-1细胞的损伤呈浓度依赖性(F=11.546,P=0.002),无时间依赖性(F=13.455,P=0.003).氯吡格雷作用24h、48h和72h的IC50分别为0.36、0.51和0.35mmol/L,IC90分别为0.08、0.16和0.08mmol/L.光镜下可见药物作用后贴壁细胞数量减少,细胞变圆,悬浮,部分细胞核浓缩,细胞损害随药物浓度增加而增大.流式细胞术显示:空白对照组及0.01、0.1、0.5、1mmol/L氯吡格雷组凋亡率为4.7%、5.3%、14.7%、51.0%、60.5%.随着氯吡格雷药物浓度增加,GES-1细胞的凋亡率亦随之增加.结论:氯吡格雷可抑制人胃黏膜上皮细胞的增殖,具有剂量依赖性,诱导细胞发生凋亡.

甲醛、三氯乙烯、三氯化铝的细胞联合毒作用

目的 研究甲醛、三氯乙烯和三氯化铝的联合毒作用类型。方法 噻唑蓝法 (MTT)测定 3种物质各自的半数生长抑制浓度 (IC50 )及混合物 (甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 )的IC50 ,根据Finney数学模型和Logistic回归方法判断联合作用类型。结果 甲醛、三氯乙烯、三氯化铝及其混合物质的IC50 分别为 0 . 0 2 2 6 ,0 . 36 8,0 . 5 89和0 . 12 4mg/ml,据Finney法求得Q值为 1 .0 8,Logisitc回归模型参数 β4差异无统计学意义。结论 甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 (6∶11∶33)混合染毒 ,对中国仓鼠肺细胞的联合毒性表现为相加作用。

葛根对中国仓鼠肺细胞的毒性作用

目的:观察葛根对中国仓鼠肺细胞(CHL)形态学、细胞增殖活性及细胞相对存活率的影响。方法:以葛根为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的葛根在不同作用时间对CHL相对存活率的影响。结果:不同浓度的葛根(12.50、50.00、100.00、200.00和400.00 mg.L-1)作用一定时间后,CHL存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现细胞脱落,呈现出时间-剂量效应关系。接触受试物48 h后,细胞生长半数抑制浓度(IC50)为282.00 mg.L-1。结论:葛根可以抑制CHL生长,降低线粒体代谢活性。

灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2及裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用.方法:运用MTT法研究灵芝孢子粉水溶性成份在体外对HepG2细胞的抑制作用,并利用裸小鼠的移植瘤模型研究灵芝孢子粉在体内对HepG2细胞的生长抑制作用.HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变.结果:TMTT实验结果表明灵芝孢子粉对HepG2细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72h达到最低,为2.14g/L.体内抑瘤实验结果显示灵芝孢子粉为2000mg/kg时,对裸小鼠移植瘤的抑制率为57.0%.镜下观察灵芝孢子粉治疗组肿瘤坏死组织较多,细胞异型性较小.结论:高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用.

吉祥草及其果实不同提取部位的体外抗肿瘤活性筛选

目的探讨吉祥草及其果实的乙醇提取物及其不同溶剂萃取部位对肿瘤细胞的体外抑制作用,筛选抗肿瘤活性部位。方法以人肾透明细胞腺癌786-O细胞、人结肠癌HT-29细胞及人肺腺癌A549细胞为供试细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法对吉祥草及其果实的不同提取部位进行体外抗肿瘤活性筛选。结果吉祥草乙醇提取部位、正丁醇分离部位及其果实乙酸乙酯分离部位、正丁醇分离部位对肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用,其中吉祥草正丁醇分离部位对786-O、HT-29、A549的细胞毒性较强,其半数抑制浓度(IC5)0分别为:92.78,96.04,63.24 mg.L-1,果实正丁醇分离部位对786-O、HT-29、A549细胞有一定的增殖抑制作用,其IC50分别为:179.03,189.67,329.95 mg.L-1。结论吉祥草正丁醇分离部位是吉祥草主要的抗肿瘤活性部位。

土槿皮乙酸对BEL-7402细胞凋亡、线粒体膜电位及COX-2蛋白表达的影响

目的:探讨土槿皮乙酸(PAB)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖和凋亡的影响及其影响机制.方法:体外培养肝癌BEL-7402细胞,用不同浓度PAB作用不同时间后,MTT比色法检测PAB对细胞增殖的影响;流式细胞仪分析PAB对细胞周期和凋亡的影响;吖啶橙染色荧光显微镜下观察PAB引起的肝癌细胞株BEL-7402形态学变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化;Westernblot方法检测PAB对COX-2表达的影响.结果:PAB作用细胞24,48,72h,细胞增殖受到抑制,且表现为剂量依赖性和时间依赖性;PAB使肝癌细胞细胞周期阻滞于G2/M期;与对照组相比,2.0,4.0μmol/LPAB作用24h后,细胞凋亡率明显增加,差异显著(19.06%±3.87%,31.19%±1.46%vs0.10%±0.08%,P<0.05);吖啶橙染色发现1.0μmol/LPAB作用24h,细胞内即有凋亡小体出现;与对照组相比,0.5μmol/LPAB作用24h即可降低BEL-7402线粒体膜电位(P<0.05);不同浓度PAB作用24h后,随PAB浓度增加COX-2蛋白表达递减.结论:PAB通过降低BEL-7402线粒体膜电位、减少COX-2的表达抑制细胞生长,诱导细胞凋亡.

人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定.

大肠癌细胞的联合用药体外药敏试验

目的 :在实体瘤中尝试体外抗癌药联合药敏试验的可行性。方法 :用甲基噻唑基四唑 (MTT)法测定 5 7例大肠癌病人的大肠癌细胞对四种抗癌药以及三个联合化疗方案的体外敏感性。 结果 :合并用药后抗癌药对肿瘤的抑制率大于单药 ,其中有两个联合方案与单药比较抑制率存在显著差异。三个联合方案中都存在拮抗、相加、协同作用。结论 :体外联合药敏试验切实可行 。

黄芪总皂苷对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的研究黄芪总皂苷(ASTs)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 (1)常规方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、模型组及黄芪总皂苷4个剂量组(20,40,80,100 mg.L-1),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察黄芪总皂苷不同浓度对H2O2损伤心肌细胞存活率的影响;(2)乳鼠心肌细胞培养后分为正常对照组、模型组、黄芪总皂苷(100 mg.L-1)预处理组,细胞免疫组化法和免疫印迹法(Western-blotting)分别检测Bcl-2、Bax、Hsp-70、Caspase-3的表达。结果 (1)各黄芪总皂苷各组与模型组比较,细胞存活率明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且与黄芪总皂苷呈剂量依赖性;(2)与正常对照组比较,模型组Bcl-2、Hsp-70有少量表达,Bax、Caspase-3表达明显增多,黄芪总皂苷(100 mg.L-1)组与模型组比较,明显促进Bcl-2、Hsp-70的表达,降低Bax、Caspase-3的表达。结论黄芪总皂苷对心肌细胞具有良好的抗氧化保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能是通过上调Bcl-2、Hsp-70及下调Bax、Caspase-3的表达来实现。

槲皮素对人肝癌HepG2细胞的作用与机制

目的:探讨槲皮素(Qu)对人肝癌HepG2细胞的作用及其对人肝癌HepG2细胞化疗效果的影响。方法:体外培养传代人肝癌细胞系HepG2细胞,以甲基噻唑基四唑(MTT)法和荧光染色法检测不同浓度Qu及联合阿霉素(ADM)对HepG2细胞抑制率和细胞凋亡率的影响,并进行比较。结果:Qu能抑制人肝癌HepG2细胞生长,诱发细胞凋亡,能提高抗HepG2细胞化疗效果。结论:Qn具有抗肝癌HepG2细胞和化疗增敏作用。

纤蛇纹石石棉及代用纤维粉尘的光谱研究与噻唑蓝(MTT)比色法分析

以纤蛇纹石石棉、陶瓷纤维、玻璃纤维、岩棉、硅灰石为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测染毒72h后V79细胞的存活率,并通过吉姆萨染色观察细胞形态学上的变化。不同浓度ρ/(μg.ml-1)的矿物粉尘(100,200,400,600,800,1000)作用72h后,V79存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现大量细胞衰亡,呈现出剂量效应关系,且细胞毒性大小为玻璃纤维>纤蛇纹石石棉>陶瓷纤维>硅灰石>岩棉;形态学观察发现染毒细胞出现空泡、肿胀、裸核、黑褐色颗粒以及胞浆胞核模糊、形态变化等现象,且不同的粉尘对V79细胞的影响不同。总体而言,岩棉是五种粉尘中毒性最低的石棉代用纤维。

全冠修复材料对人牙龈成纤维细胞的毒性

目的:观察镍铬合金、金合金、铸造陶瓷对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFC)的毒性。方法:制备镍铬合金、金合金、铸造陶瓷的细胞培养基浸提液,采用四唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT法)测定材料对HGFC生长的影响;在材料周围接种HGFC,观察细胞的生长情况。采用Stata9.1软件对实验结果进行析因分析。结果:金合金的细胞相对增殖率为1.016、1.014、0.824、0.796,镍铬合金的细胞相对增殖率为1.028、1.079、0.903、0.809,铸造陶瓷的细胞相对增殖率为1.018、1.030、0.924、0.818。金合金和镍铬合金对细胞相对增殖率的影响有统计学差异(P=0.021),但金合金与铸造陶瓷、镍铬合金与铸造陶瓷之间无统计学差异(P>0.05)。金合金、镍铬合金和铸造陶瓷的细胞毒性级别(cytotoxical grade,CG)为0-1级。倒置显微镜观察3种材料周围均有细胞生长,镍铬合金周围有细胞坏死带产生。结论:镍铬合金与HGFC直接接触引起的细胞损伤比析出的金属离子对细胞损伤大。金合金和铸造陶瓷具有良好的生物相容性。

噻唑蓝比色法检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌的研究

目的探讨噻唑蓝(MTT)法用于口腔常见细菌(变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌)活菌计数的可行性及具体应用过程中的实验条件。方法本实验以菌落形成单位(CFU)法为标准对照。实验通过改变比色的波长、反应时间、试剂剂量、细菌菌龄等实验条件,获得MTT法测量常见口腔细菌的一系列参数,对变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌进行活菌计数,并与CFU法所测的细菌数量相比较。结果 MTT法在测量变异链球菌时,最佳的检测波长为510nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～1.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量血链球菌时,最佳的检测波长为545nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～2.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量伴放线菌嗜血菌时,最佳的检测波长为557nm,最佳的测定细菌范围是1.0×106～5.0×107CFU·mL-1。MTT法与菌落形成单位法的测量结果是一致的,并且对于不同菌龄的变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌均适用。结论 MTT法可以用于检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌等口腔常见细菌的活菌数量,并且具有快速、方便等优点。

miRNA对肿瘤细胞活性影响的探讨

目的试探讨m iRNA对肿瘤细胞活性的影响。方法利用脂质体介导法将5种m iRNA的反义寡核苷酸(AMR)转染至不同的肿瘤细胞,以不相关序列为对照,37℃35%CO2孵箱培养72 h后,用MTT法检测细胞活性。结果不同的m iRNA对肿瘤细胞活性的影响是不同的,既便同一种m iRNA对不同肿瘤细胞活性的影响也有可能是不相同的。结论不同的m icroRNA对肿瘤细胞活性的影响是不同的,同一种m icroRNA对不同肿瘤细胞活性的影响也有可能是不相同的。

rhEGF促进人结膜上皮细胞增殖的实验研究

目的:探讨rhEGF（recombinant human epidermal growth factor）促进培养人结膜上皮细胞增殖的作用及最佳有效浓度,为提高眼表重建术后成功率寻找有效的治疗手段。方法:在传代人结膜上皮细胞中分别加入1μg/ml～100μg/ml浓度的rhEGF,于加药后第24、48、72、96h分别采用MTT法得出光吸收值以测定活性细胞数。结果:24h EGF各浓度组与对照组光吸收值无明显差异。48h50μg/ml、20μg/ml、10μg/mlEGF组光吸收值明显高于对照组,72h除 100μg/mlEGF组外,其余EGF各组均明显高于对照组。96h EGF各浓度组均明显高于对照组,100μg/ml组与其余EGF浓度组有显著性差异。结论:EGF对结膜上皮的增殖有明显促进作用,浓度为 10～50μg/ml可以获得较好的效果。眼科学报2001;17:118～121。

携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡

目的:评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法:CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效,流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果:CNHK500-hTRAIL能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖;感染72h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22ng/L;在MOI=0.1时,CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞,并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL;而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论:携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。