桔小实蝇BdorOBP2对甲基丁香酚及其结构类似物的结合分析

本文研究了桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白BdorOBP2对甲基丁香酚(ME)及其结构类似物的结合特性,以期为基于蛋白结构的新型引诱剂的分子设计提供靶标蛋白。本研究扩增获得气味结合蛋白BdorOBP2基因并进行序列分析。三维结构预测显示,BdorOBP2具有6个α螺旋,同时含有6个保守的半胱氨酸残基。荧光定量结果表明BdorOBP2在雌雄虫触角中的表达水平最高,同时在足、翅等组织中表现出性别差异表达特性,推测BdorOBP2具有识别性信息素和寄主挥发物的双重作用。在对BdorOBP2蛋白表达和纯化的基础上,采用荧光竞争结合试验分析了BdorOBP2与甲基丁香酚及其类似物的结合能力,结果显示BdorOBP2蛋白对丁香酚、异丁香酚、甲基丁香酚、异丁香酚甲醚等4种化合物的结合能力相当。BdorOBP2在感受寄主挥发物及性信息素过程中挥发重要作用,为基于靶标蛋白的新型行为调控剂的分子设计提供了重要参考。

基于HS-GC-Orbitrap联用定性与定量测定活血止痛膏挥发性成分

目的建立活血止痛膏中挥发性成分定性、定量检测方法。方法采用顶空进样-气相色谱-静电场轨道阱质谱(HS-GC-Orbitrap)技术进行分析。样品除去背膜,以乙腈为溶剂,顶空进样;以高纯氦气为载气,TG-5SILMS色谱柱,程序升温,恒压模式,电子轰击源(EI源),全扫描监测模式测定。结果可定性活血止痛膏中5味药的12个主要成分,同时定量测定樟脑、异龙脑、龙脑、薄荷脑、水杨酸甲酯和丁香酚等6个成分。结论研究建立的方法提升了活血止痛膏质量控制水平,操作简便。

云南麻栗坡县坚叶樟群落叶精油成分鉴定与化学型分析

采用GC-MS对云南麻栗坡县的坚叶樟(Cinnamomum chartophyllum)自然群落中的20株植株叶精油化学成分进行了检测。总计鉴别出70种成分,其中单萜类化合物35种(占总精油种类的50%),倍半萜类化合物33种(占47.1%)以及苯丙烯类化合物2种(占2.8%)。基于精油主成分进一步将20株单株划分为8种化学类型,即芳樟醇型、1,8-桉叶油素型、橙花叔醇型、β-石竹烯型、甲基丁香酚型、喇叭茶醇型、混杂型Ⅰ和混杂型Ⅱ等。1,8-桉叶油素型为本群落特征性化学型,9株单株(45%)叶精油皆以1,8-桉叶油素为主成分,含量介于26.95%~56.75%之间。此外,本次调查还发现了1株优良单株,甲基丁香酚含量占叶精油相对含量的87.01%。研究结果可为今后樟属植物保护和育种提供参考数据。

活血止痛膏体外经皮渗透成分的确定与研究

目的:建立透皮接收液中丁香酚、丹皮酚及水杨酸甲酯的含量测定方法并对活血止痛膏体外经皮渗透成分进行确定与研究。方法:采用Franz扩散池法考察活血止痛膏体外透皮成分及规律;利用UPLC及气相色谱法确定透皮成分,测定透皮接收液中丁香酚、丹皮酚及水杨酸甲酯的透过量;以24 h透过成分的累积透过量、测定成分经皮渗透量平行性及皮肤组织微观结构为指标,比较四种不同的透皮接收液,对接收液进行优选。结果与结论:活血止痛膏中可经皮渗透成分为丹皮酚、丁香酚及水杨酸甲酯;丁香酚、丹皮酚及水杨酸甲酯的累积透过量均较乙醇-0.9%NaCl注射液3∶7、聚乙二醇-0.9%NaCl注射液2∶8作为接收液高,有效成分经皮渗透量平行性及实验皮肤组织微观结构较乙醇-丙二醇-0.9%NaCl注射液(2∶2∶6)作为接收液好,因此选定乙醇-聚乙二醇-0.9%NaCl注射液(2∶2∶6)作为透皮接收液。

细辛炮制品HPLC指纹图谱定性与有效成分定量分析研究

目的：研究不同炮制方法所得细辛炮制品的HPLC指纹图谱及有效成分甲基丁香酚与细辛脂素含量,为细辛炮制品的质量评价与炮制机理提供依据。方法：采用HPLC法,Agilent Tc-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;流速：1.0 m L/min;柱温：30℃;检测波长：285 nm;流动相：乙腈-0.2%冰醋酸梯度洗脱,对细辛10种炮制品进行指纹图谱研究,并测定了甲基丁香酚与细辛脂素的含量。结果：建立了10种细辛炮制品的指纹图谱,以细辛脂素峰为参照峰,共标定了22个共有峰,利用化学对照品指认了其中2个色谱峰;除了姜制、蜜制和炒制外,其他炮制品成分差异变化不大,但含量差异较大。甲基丁香酚的保留率大小顺序为：酒制〉醋制〉甘草制〉碱醋制〉炒焦〉米泔水制〉蜜制〉姜制〉盐制〉碱制,其中酒制能使甲基丁香酚增加10%-20%,醋制时甲基丁香酚的保留率达95%以上;细辛脂素的保留率大小顺序为：米泔水制〉甘草制〉碱醋制〉蜜制〉盐制〉酒制〉姜制〉醋制〉碱制〉炒焦,除碱制与炒焦外,其他炮制方法均能增加细辛脂素的含量,特别是米泔水制、甘草制与碱醋制可使细辛脂素增加35%以上。结论：此方法准确可靠,可用于评价细辛炮制品的质量。

不同温度和光照强度甲基丁香酚对桔小实蝇雄虫的诱捕率

本文研究了不同温度和光照条件下甲基丁香酚诱捕器对桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)雄虫的诱捕率,结果表明,温度和光照强度明显影响桔小实蝇雄虫对甲基丁香酚的趋向。18～40℃温度范围内桔小实蝇对甲基丁香酚趋向活动活跃,其中以25～32℃最为活跃。桔小实蝇被甲基丁香酚诱捕器捕获的比率与温度之间的关系符合Peal-Read模型。500～2000lux光照强度时桔小实蝇对甲基丁香酚的趋向反应最活跃。当温度低于14℃或高于40℃、光照强度低于150lux或高于3000lux时桔小实蝇对甲基丁香酚趋向能力显著下降。

高度和地点对性引诱剂诱集桔小实蝇雄虫效果的影响

观察研究了番石榴园桔小实蝇性引诱剂诱捕器悬挂高度和生态环境类型对诱集效果的影响.结果表明,诱捕器的悬挂高度一般应在1m以上,如果树较高,则应悬挂到不低于果树平均高度的0.5～1m;诱捕器的设置位置明显影响诱集结果,若要进行种群动态监测,诱捕器应设置在当地有代表性的果园区,且最好在果园内、果园外都设点进行诱捕.

新香料植物细毛樟的研究

细毛樟是一种新香料植物,根据叶油主要成分可分为9个化学型:金合欢醇型、香叶醇型、芳樟醇型、甲基丁子香酚型、樟脑型、龙脑型、柠檬醛型、1,8-桉叶油素型和榄香素型。其中金合欢醇型含量为54％～71％,香叶醇型为86％～98％,芳樟醇型为84％～98％,甲基丁子香酚型为69％～89％。经栽培和分析,金合欢醇型有性后代50％以上、香叶醇型56％以上、芳樟醇型57％以上、甲基丁子香酚型71％以上的植株,可保持母本的特性。无性后代很少变异。

云南六库桔小实蝇成虫种群数量变动及其影响因子分析

应用诱蝇谜引诱剂诱捕法于2003-2005年调查了云南六库桔小实蝇成虫种群动态,系统分析了气候因子及寄主植物对该种群变动的影响。研究结果表明:云南六库桔小实蝇种群发生呈季节性,仅出现于3-12月,成虫消长基本为单峰型,高峰出现在7月。六库桔小实蝇种群数量与气温、降雨量和月雨日数等气象因子有密切关系。决定系数和通径分析结果显示,月降雨量是影响六库桔小实蝇种群动态的主要决策因素;月平均气温和月平均最低气温是影响种群数量变动的主要限制因素,其中,月平均最低温度是间接影响种群数量变动的重要指标。主成分分析筛选出低温条件主成分,其累积方差贡献率达77.65%。逐步回归分析也证实,影响六库桔小实蝇种群月变动的主要气象因子是月平均气温和月平均最低气温。综合分析认为,低温是导致六库桔小实蝇季节性发生的关键因素。

几种杀虫剂对桔小实蝇引诱剂诱杀效果的影响

使用桔小实蝇引诱剂(甲基丁香酚Methyl eugenol,简称Me),按体积比10∶1分别与四种杀虫剂混合,进行了桔小实蝇诱杀效果试验。试验结果表明:四种杀虫剂中,敌敌畏的诱杀效果最佳;马拉硫磷诱杀效果明显优于氯氰菊酯和功夫两种杀虫剂。试验提出了与桔小实蝇引诱剂混合的杀虫剂选择以及换药时间。

甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜水通道蛋白5的影响

目的:观察甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜水通道蛋白(aquaporin,AQP)5表达的影响,并探讨其意义。方法:Wistar大鼠126只随机分为正常对照组,变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型对照组,布地奈德阳性对照组,甲基丁香酚80 mg/kg组、40 mg/kg组、20 mg/kg组及10 mg/kg组,每组18只,除正常对照组外,其余组大鼠经卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏建立变应性鼻炎模型,造模成功后分别给予蓖麻油、布地奈德及对应剂量甲基丁香酚干预,于给药1、2、4周后应用免疫组织化学方法观察鼻黏膜AQP5的分布,Western blotting比较各组鼻黏膜中AQP5的表达,Real-time PCR比较AQP5 mRNA的表达。结果:AQP5主要位于鼻黏膜腺上皮及导管上皮细胞的胞膜和胞质。AR模型对照组大鼠鼻黏膜的AQP5及AQP5 mRNA均较正常对照组表达减少(P<0.05)。各给药组大鼠鼻黏膜AQP5及AQP5 mRNA均较AR模型对照组有不同程度增高。药物干预1、2、4周,布地奈德阳性对照组AQP5的表达与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05),与AR模型对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05);布地奈德阳性对照组的AQP5 mRNA分别与正常对照组及AR模型对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。干预2周后,甲基丁香酚各剂量组AQP5的表达即与布地奈德阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预1周,20 mg/kg组的AQP5 mRNA与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:甲基丁香酚可能通过上调AQP5的表达减轻鼻黏膜腺体水肿程度、减少腺体分泌,从而缓解变应性鼻炎鼻痒、喷嚏及流涕等症状。

3种实蝇对甲基丁香酚和诱蝇酮的触角电位反应

采用电生理方法,在测定不同时段和不同日龄的橘小实蝇对甲基丁香酚(ME)触角电位(EAG)反应的基础上,对橘小实蝇、瓜实蝇和南亚实蝇对ME和诱蝇酮(CUE)的EAG反应进行了测定。结果显示,橘小实蝇雌雄虫对ME的EAG反应存在时段差异,且在12:00-17:00时段差异较小;橘小实蝇雌雄虫从1日龄开始就对ME产生较强的EAG反应,但交配后迅速减弱。橘小实蝇、瓜实蝇、南亚实蝇对ME的EAG反应都强于CUE,且瓜实蝇和南亚实蝇雌虫对CUE的EAG反应高于雄虫。

GC-MS同时测定石菖蒲挥发油中β-细辛醚、ɑ-细辛醚和甲基丁香酚的含量

目的：建立石菖蒲挥发油β-细辛醚、ɑ-细辛醚和甲基丁香酚的GC-MS测定方法。方法：采用气相色谱-质谱联用法选择离子模式（SIM）检测,DB-1701毛细管色谱柱（60m×0.25mm×0.25μm）,进样量1μL,分流比为5：1,载气为高纯氦气;电子轰击电离方式,能量70e V,倍增电压1070V;选择m/z208为β-细辛醚和ɑ-细辛醚的检测离子,m/z178为甲基丁香酚的检测离子。结果：β-细辛醚、ɑ-细辛醚和甲基丁香酚分别在525-5250ng/m L,60-600ng/m L,50-500ng/m L呈良好的线性关系。平均回收率分别为105.5%,103.6%,101.8%。结论：所建立的方法灵敏度高,重现性好,可同时对β-细辛醚、ɑ-细辛醚和甲基丁香酚的含量进行测定。

甲基丁香酚挥发物对桔小实蝇成虫的引诱作用

[目的]研究甲基丁香酚对桔小实蝇成虫的引诱效果。[方法]利用Y型嗅觉仪测试了不同生理状态下(性成熟与性未成熟)桔小实蝇两性成虫在不同时间内(5、10、15、20、30、40、50和60 min)对不同剂量甲基丁香酚(0.001、0.010、0.1000、1.000和10.000 mg)挥发物的反应。[结果]甲基丁香酚对桔小实蝇对性成熟雄虫有显著引诱作用,但对性成熟雌虫及雄虫、性未成熟雄虫均无引诱作用。测试剂量为0.001 g时性成熟雄虫在10 min时即对甲基丁香酚产生显著反应;在测试剂量达到0.01 g以上时,性成熟雄虫均在5min时即产生显著反应。[结论]甲基丁香酚仅对性成熟雄虫有引诱作用,对性未成熟雄虫、未成熟雌虫、成熟雌虫无引诱作用。

烤羊腿挥发性香成分分析

同时蒸馏萃取/气-质联机从烤羊腿中分析鉴定出33种香成分。含量较高成分依次为:糠醛、5-甲基糠醛、丁香酚、己醛、糠醇、糠硫醇、2,5,6-三甲基-1,3-氧硫杂环己烷、3-甲基丁醛、2-乙酰基-5-甲基-呋喃、壬醛、1-羟基-2-丙酮、2,5-二甲基苯酚、乙基麦芽酚。总结归纳所鉴定香成分,发现烤羊腿的香气主要由具有肉香香气成分、油脂香香气成分、烤香香气成分、烟熏香香气成分、酸败气、奶酪香气成分和茴香香气成分构成。

4种引进的引诱剂制剂对桔小实蝇引诱效果评价

在果园试验评价了从美国引进的4种引诱剂与1种国产引诱剂对桔小实蝇的诱集效果,结果表明国产甲基丁香酚液体制剂(CME)诱捕实蝇成虫数量最大,为493.2头/诱捕器,雌虫率为9.0%,且持效期长达60 d;美国甲基丁香酚固体制剂(MEU)的诱捕实蝇成虫数量次之,为250.2头/诱捕器,雌虫率为0.4%,持效期39 d;醋酸铵+腐胺复合固体制剂(2C)、蛋白颗粒剂(PB)和醋酸铵+腐胺+三甲胺复合固体制剂(3C)3种美国产食物引诱剂中以2C诱捕实蝇成虫效果最好,诱虫数为152.8头/诱捕器,雌虫率为96.6%,持效期36 d;PB的诱虫数为49.0头/诱捕器,雌虫率为56.3%,持效期39 d;3C诱虫数为8.4头/诱捕器,雌虫率为92.8%,持效期18 d。

细辛苯丙素类化合物生物合成相关酶基因的挖掘及其表达分析

为了探明细辛苯丙素类化合物生物合成相关酶基因的表达水平,本研究基于实验室已构建好的细辛转录组数据库,根据基因功能注释筛选出与苯丙素类化合物生物合成相关酶基因,并推导其蛋白序列,进行生物信息学分析,同时对相关酶基因进行基因的表达分析。本文从细辛转录组数据库中筛选出了6个酶基因,分别为pal、c4h、comt、4cl、ccr、cad。基因编码蛋白特性分析结果表明:6个酶基因所编码的蛋白属于不同的超家族。基因表达分析结果表明:6个酶基因表达量呈现相同的变化规律。对于叶、叶柄、根、根茎,6个酶基因在花期的表达量较花前期的高;同时,6个酶基因在地下部分的表达量比地上部分的高。以上结果显示6个酶基因在细辛叶、叶柄、根、根茎的表达量差异明显,但具有一定的规律性。研究的成功开展为我们进一步了解苯丙素类化合物生物合成相关酶的功能和特性打下了基础,为今后细辛活性成分的生物合成及代谢调控提供理论依据。

对甲基丁香酚无趋性的橘小实蝇遗传性别品系雄虫的筛选

为了弱化橘小实蝇雄性不育技术与性诱灭雄技术间的冲突,本试验尝试从橘小实蝇遗传性别品系中筛选出对ME无趋性的雄虫。研究结果表明,剔除掉每世代对ME有趋性的雄虫后,繁育出的雄虫中对ME无趋性雄虫的比例增加,但只能增加至占总体雄虫的30%左右。室内与田间测试均显示,自F2后,筛选出的雄虫对ME的趋性明显低于对照,交配竞争能力与不经筛选的雄虫相当。

红河石榴园橘小实蝇种群动态规律

为了有效防治橘小实蝇BactroceradorsalisHendel的危害,在红河州的青龙、南庄和临安石榴园作橘小实蝇田间种群动态定期调查,甲基丁香酚诱集,结果显示,橘小实蝇种群从11月起虫口密度锐减至最低水平,到7月开始回升,而后快速增长,2002年8月青龙最多达40.6头,高峰期延续到9月中旬的37.8头;2003年最高峰出现在9月上旬平均为28.7头然后开始下降。临安果园2003年在8月上旬出现高峰平均为29.8头,9月上旬再次出现高峰,平均为34头,然后下降;而南庄果园虫口数量波动不大。

甲基丁香酚和蛋白饵剂对海南杨桃园橘小实蝇诱控效果研究

于2010年6～9月采用甲基丁香酚诱杀雄成虫和蛋白饵剂诱杀雄、雌两性成虫的方法,开展了海南杨桃园橘小实蝇种群动态与诱控效果的研究。结果表明:橘小实蝇成虫发生高峰在7月中下旬,与杨桃1造果成熟期相吻合;橘小实蝇的种群密度与杨桃果实被害率明显呈正相关。表明采用诱杀两性成虫与及时处理落果等农业措施相结合的技术防治杨桃园橘小实蝇的效果显著,在不套袋和不施用农药的情况下2造杨桃保果率达81.3%。