补阳还五汤调节MEK/ERK通路对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响研究

目的研究补阳还五汤对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响,以及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号相关激酶(ERK)通路的调节作用。方法36只大鼠随机分为正常对照组(6只)及造模组(30只),造模组采用高糖高脂饲料喂养法联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病坐骨神经病变大鼠模型,造模完成后,造模组大鼠随机分为模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组及阳性对照组,每组6只。补阳还五汤低、中、高剂量组大鼠分别按照7.5、15.0、30.0 g/kg(以生药含量计)给予补阳还五汤灌胃,1次/d,连续给药12周。阳性对照组大鼠按照0.1 mg/kg腹腔注射给予PD98059,2次/周,连续12周。测定大鼠热缩足潜伏期及后足伸姿推力,使用肌电图仪测定运动神经传导速度(MNCV)及感觉神经传导速度(SNCV),使用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、总抗氧化能力(T-AOC)及坐骨神经谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,采用苏木精-伊红(HE)染色法检查坐骨神经病理学变化,采用缺口末端标记法(TUNEL)测定坐骨神经细胞凋亡率,采用免疫印迹法测定大鼠坐骨神经p-MEK、p-ERK水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显降低(P<0.05),后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显升高,且补阳还五汤低剂量组<补阳还五汤中剂量组<补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率及IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显降低,且补阳还五汤低剂量组>补阳还五汤中剂量组>补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤能够显著抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激损伤及炎症因子水平,修复坐骨神经病理性损伤,改善大鼠坐骨神经功能,抑制坐骨神经细胞凋亡,进而促进糖尿病大鼠坐骨神经损伤的恢复,其机制可能与调节MEK/ERK通路有关。

基于MEK/ERK通路研究桂枝茯苓丸改善慢性阻塞性肺疾病小鼠气道重塑的作用与机制

目的:研究桂枝茯苓丸通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路改善慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠气道重塑的作用与机制。方法:采用烟熏的方法建立COPD小鼠模型,将32只造模成功小鼠随机分为模型组、桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组,每组8只。另取8只未烟熏的小鼠为空白组。各组予相应药物灌胃14 d。采用小动物肺功能仪测定小鼠每分钟通气量(MV)、呼气峰值流速(PEF)和吸气峰值流速(PIF),HE染色评估肺组织炎症,Masson染色观察气道重塑改变,Western blotting检测COL1A1、COL3A1、MEK1、p-MEK1、ERK(1/2)和p-ERK(1/2)蛋白相对表达量。结果:模型组小鼠MV、PIF和PEF水平均低于空白组(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织出现明显炎症和气道重塑,且肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均高于空白组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PEF、PIF水平均高于模型组(P<0.05),肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠的肺组织炎症和气道重塑改善。桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PIF、PEF水平高于桂枝茯苓丸组和PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠MV、PIF和PEF水平与PD98059组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。结论:桂枝茯苓丸能显著改善COPD小鼠气道重塑过程,抑制MEK/ERK通路可能是其作用机制之一。

毛蕊异黄酮通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用机制

目的探讨毛蕊异黄酮(Calycosin)通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法将肺癌A549细胞分为空白对照组和毛蕊异黄酮20、40、80μmol/L 3个浓度组。MTT法检测细胞存活率;Western Blot检测肺癌A549细胞RAS、p-RAF、p-MEK和p-ERK蛋白的表达;细胞集落试验和划痕试验观察肺癌A549细胞的增殖和迁移。结果当毛蕊异黄酮浓度在80μmol/L以下时,毛蕊异黄酮无明显细胞毒性。毛蕊异黄酮可抑制RAS、p-RAF、p-MEK和p-ERK蛋白表达,且抑制效果呈剂量依赖性;毛蕊异黄酮对肺癌A549细胞增殖和迁移的抑制作用呈剂量依赖性。结论毛蕊异黄酮能够通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌A549细胞增殖和迁移。

MEK1/2抑制剂U0126对射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H作用的研究

目的研究MEK1/2抑制剂U0126对肝癌射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H的增殖、迁移和侵袭的影响。方法运用肝癌细胞系HepG2体外制作射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H,通过细胞增殖、划痕、侵袭实验,观察实验组(加入10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L的U0126)和对照组(不加入U0126)细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果实验组(加入10、20、30μmol/L的U0126)的吸光度值分别为:(0.6929±0.08257)、(0.5084±0.06012)、(0.4549±0.07660),对照组吸光度值为:(1.1245±0.07971);组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的迁移面积分别为:(5640.2±285.4)mm^(2)、(5082.4±237.7)mm^(2)、(4821.7±246.3)mm^(2),对照组的迁移面积为:(6053.8±269.2)mm^(2),组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的每高倍视野细胞计数分别为:(164.2±18.89)个、(138.4±18.06)个、(129.4±18.54)个,对照组的每高倍视野细胞计数为:(226.6±16.81)个,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论U0126可抑制射频消融术后残留肝癌细胞HepG2-H的增殖、迁移和侵袭。

中医药靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路治疗肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种高度恶性肿瘤,具有特殊的多元难治性分子生物学机制。肝细胞癌的病理表现与病变细胞的分化程度有关,因此抑制肝癌细胞的分化、增殖是治疗该病的重要手段。中医药可以通过调控体内蛋白激酶(RaF)、丝原活化蛋白激酶(MEK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)及精准干预RaF/MEK/ERK通路来影响肝癌的发生进展,从而发挥治疗HCC的作用。该文主要针对RaF/MEK/ERK信号通路调控HCC发生发展的机制,以及中药单体及复方靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路进行综述。

基于Raf/MEK/ERK信号通路探讨内异康复片对hEM15A细胞的影响

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)内膜间质细胞hEM15A的影响。方法制备内异康复片含药血清,将hEM15A细胞分为空白对照组,阴性对照组,5%、10%、20%含药血清组。采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western blo法检测RKIP及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达。再将hEM15A细胞分为阴性对照组、10%含药血清组、si-RKIP-1组、si-RKIP-1+10%含药血清组,观察上述检测指标的变化。结果与阴性对照组比较,各浓度含药血清组hEM15A细胞活性降低(P<0.05),凋亡率、RKIP蛋白表达升高(P<0.05);10%及20%含药血清组hEM15A细胞迁移数、p-MEK及p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,si-RKIP-1组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-ERK1/2、p-MEK蛋白表达升高(P<0.05);与10%含药血清组比较,si-RKIP-1+10%含药血清组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05)。结论内异康复片可能通过调节RKIP及其介导的Raf/MEK/ERK信号通路抑制hEM15A细胞活性和迁移,促进ESC凋亡,发挥改善EMT的作用。

盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响

目的研究盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响。方法选取苏州大学附属第二医院2020年8月—2022年8月收治的68例宫颈癌患者为研究对象,采用随机数字表法分为试验组(n=34)和对照组(n=34)。对照组接受常规化疗治疗,试验组在此基础上联合安罗替尼抗血管生成治疗。对比两组患者临床疗效,治疗前后血管新生能力[血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤微血管密度(MVD)],治疗后MEK/ERK通路分子水平。结果与对照组总有效率58.82%(20/34)相比,试验组88.23%(30/34)更高(χ^(2)=7.555,P<0.05);治疗后,两组患者VEGF、MVD水平均降低,且相比于对照组,试验组更低[对照组分别为(63.98±5.14)ng·g^(-1)、(13.02±1.65)个·mm^(-2),试验组分别为(48.06±5.35)ng·g^(-1)、(6.68±1.62)个·mm^(-2)](t=12.512、15.987,均P<0.05);与对照组患者相比,试验组患者MEK1、MEK2以及ERK1/2水平更低[对照组分别为(2.06±0.19)ng·mL^(-1)、(2.28±0.14)ng·mL^(-1)、(1.48±0.12)ng·mL^(-1),试验组分别为(1.23±0.21)ng·mL^(-1)、(1.06±0.15)ng·mL^(-1)、(0.84±0.11)ng·mL^(-1)](t=17.089、34.670、22.924,均P<0.05)。结论盐酸安罗替尼联合化疗能够有效抑制宫颈癌患者癌组织血管新生能力以及MEK/ERK通路分子水平,临床疗效较高。

赤凤迎源针刺法对面神经损伤模型大鼠Ras/MEK/ERK信号通路的影响

目的探讨赤凤迎源针刺法对面神经超微结构、丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及血清KRas蛋白表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、常规针刺组、赤凤迎源针刺组,每组8只。除空白对照组大鼠正常饲养外,其他各组大鼠用面神经颊支压榨法诱导面神经损伤模型。造模成功后,予以干预2周。干预结束后,行电镜检查观察大鼠的面神经超微结构;通过HE染色观察面神经组织形态组织学变化;ELISA法检测血清KRas的表达水平;Western blot检测面神经组织MEK、ERK蛋白的表达水平。结果造模后,与空白对照组比较,另外3组大鼠动物行为学评分均明显升高(P<0.01)。针刺2周后,常规针刺组及赤凤迎源针刺组大鼠评分明显低于模型组(P<0.01),且赤凤迎源针刺组评分低于常规针刺组(P<0.01)。针刺2周后,与模型组对比,常规针刺组及赤凤迎源针刺组面神经轴突纤维排列较紧密,内质网较多,KRas蛋白表达明显升高(P<0.05),面神经MEK蛋白、ERK蛋白表达升高(P<0.05),且赤凤迎源针刺组均高于常规针刺组(P<0.05)。结论赤凤迎源针刺法可改善面神经损伤模型大鼠动物行为学,上调KRas、MEK及ERK表达水平,可能与激活Ras/MEK/ERK信号通路有关,从而修复面神经损伤。

雷公藤红素通过FAK/MEK/ERK信号通路对肝癌细胞耐药性的影响

目的探究雷公藤红素(CSL)对肝癌细胞耐药性的影响。方法采用仑伐替尼(Len)构建耐药人肝癌细胞Huh7/Len,分为对照组,CSL低、中、高浓度组(1、2.5、5μmol/L),CSL高浓度+Zn27[黏着斑激酶(FAK)激活剂]组(5μmol/L CSL+2 nmol/L Zn27),每组设置6个复孔。检测细胞增殖(以吸光度计)和克隆能力、凋亡率、侵袭数、迁移数,以及细胞中活性氧(ROS)水平和磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,CSL低、中、高浓度组细胞的吸光度、克隆数、侵袭数、迁移数和p-FAK、p-MEK、p-ERK、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低,细胞凋亡率、ROS水平和Bax、caspase-3蛋白相对表达量均显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与CSL高浓度组比较,CSL高浓度+Zn27组细胞中上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论CSL能增强氧化应激,促进细胞凋亡,抑制肝癌细胞恶性进展和化疗耐药性,其机制可能与抑制FAK/MEK/ERK信号通路有关。

连翘脂素调节Ras/Raf/MEK/ERK信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究连翘脂素(PG)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化的影响及机制。方法 培养HCT116结直肠癌细胞,采用10~200μmol/L的连翘脂素处理细胞,检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度。将细胞分为对照组(Control组),连翘脂素低、中、高浓度组(PG-L组、PG-M组、PG-H组),连翘脂素高浓度+转染慢病毒阴性对照组(PG-H+NC组),连翘脂素高浓度+Ras慢病毒组(PG-H+Ras组)。平板克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞术以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测上皮间质转化(EMT)标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及信号通路相关蛋白p-Raf、p-MEK、p-ERK表达;建立荷瘤小鼠模型评价连翘脂素对结直肠癌肿瘤生长的影响。结果 10~200μmol/L的连翘脂素处理HCT116结直肠癌细胞,可以显著抑制细胞存活率,经计算IC50值为(140.4±2.147)μmol/L,选择10、50、100μmol/L连翘脂素进行后续实验;与Control组比较,PG-L组、PG-M组、PG-H组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著降低,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PG-H+NC组比较,PG-H+Ras组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著升高,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著降低(P<0.05);连翘脂素可以显著抑制结直肠癌移植瘤的生长。结论 连翘脂素可以抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化,其作用机制可能与抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路激活有关。

高三尖杉酯碱对白血病细胞凋亡、增殖的影响及对Ras/Raf/MEK通路的抑制作用

目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)对白血病细胞凋亡、增殖的影响及对Ras/Raf/MEK通路的抑制作用。方法取对数生长期K562、Kasum-1细胞进行研究,分别用0、10、20、50 ng/ml的HHT处理。采用MTT检测相对细胞活力,计算24、48、72 h时细胞IC50,采用克隆形成实验检测检测细胞克隆数量,采用流式细胞仪检测细胞凋亡水平,采用蛋白质印迹法检测Ras/Raf/MEK通路蛋白和凋亡相关蛋白相对水平。结果24、48、72 h时HHT对K562细胞IC50分别为80.69、65.28、50.76 ng/ml,HHT对Kasum-1细胞IC50分别为85.16、70.11、51.14 ng/ml。培养24、48、72 h时,10、20、50 ng/ml HHT细胞存活率均低于0 ng/ml,20、50 ng/ml HHT细胞存活率均低于10 ng/ml,50 ng/ml HHT细胞存活率均低于20 ng/ml HHT,差异有统计学意义(P<0.05)。10、20、50 ng/ml HHT细胞克隆数均低于0 ng/ml,20、50 ng/ml HHT细胞克隆数均低于10 ng/ml HHT,50 ng/ml HHT细胞克隆数均低于20 ng/ml HHT,差异有统计学意义(P<0.05)。10、20、50 ng/ml HHT细胞凋亡率均高于0 ng/ml HHT,20、50 ng/ml HHT细胞凋亡率均高于10 ng/ml HHT,50 ng/ml HHT细胞凋亡率均高于20 ng/ml HHT,差异有统计学意义(P<0.05)。10、20、50 ng/ml HHT RAS、p-cRAF、p-MEK蛋白表达量均低于0 ng/ml HHT,20、50 ng/ml HHT RAS、p-cRAF、p-MEK蛋白表达量均低于10 ng/ml HHT,50 ng/ml HHT RAS、p-cRAF、p-MEK蛋白表达量均低于20 ng/ml HHT,差异有统计学意义(P<0.05)。10、20、50 ng/ml HHT Survivan蛋白表达量均低于0 ng/ml HHT,Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达量均高于0 ng/ml HHT;20、50 ng/ml HHT Survivan蛋白表达量均低于10 ng/ml HHT,Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达量均高于10 ng/ml HHT、50 ng/ml HHT Survivan蛋白表达量均低于20 ng/ml HHT,Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达量均高于20 ng/ml HHT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HHT可抑制Ras/Raf/MEK通路活性,抑制白血病细胞增殖和促进白血病细胞凋亡。

脑胶质瘤患者MEK及ERK m RNA水平与病理特征及预后的关系

目的 探讨脑胶质瘤(BG)患者丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)、细胞外信号调节激酶(ERK)m RNA水平与病理及预后的关系。方法 选取2018-03—2019-03长沙市第四医院和中南大学湘雅医院的92例BG患者经手术切除的脑胶质瘤组织标本为研究对象(研究组),所有患者随访3 a,根据预后情况分为死亡组(n=35)及生存组(n=57),另取同期行颅内减压术切除治疗的60例脑损伤患者的正常脑组织标本为对照组,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MEK、ERK mRNA水平,比较不同临床病理特征BG患者组织MEK、ERK mRNA水平,采用ROC曲线分析组织MEK、ERK mRNA水平对BG患者预后的预测价值。结果 研究组MEK、ERK mRNA水平高于对照组(P<0.05)。MEK、ERK mRNA水平与BG患者WHO分级、肿瘤直径、瘤周脑水肿有关(P<0.05),WHO分级Ⅲ~Ⅳ级、肿瘤直径≥3 cm、瘤周脑水肿严重的BG患者组织MEK、ERK mRNA水平更高(P<0.05)。死亡组MEK、ERK mRNA水平高于生存组(P<0.05)。由ROC曲线可知,组织MEK、ERK mRNA水平联合预测BG患者预后的AUC为0.856,高于两者单独预测的0.779、0.763(P<0.05)。结论 BG患者组织MEK、ERK m RNA水平呈高表达,不同临床病理特征患者MEK、ERK mRNA水平存在差异,两者有望成为BG患者预后的预测指标。

基于Raf-MEK-ERK信号通路探究梓醇对蛛网膜下腔出血大鼠脑组织损伤的影响

[目的]通过考察梓醇对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑组织丝/苏氨酸蛋白激酶(Raf)-丝裂原活化蛋白激酶(MEK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响,探讨其抗SAH脑损伤的作用机制。[方法]将大鼠随机分为假手术组、SAH组、梓醇组、梓醇+U0126组(梓醇+Raf-MEK-ERK信号通路抑制剂U0126)。采用血管内穿孔法构建大鼠SAH模型,评估大鼠神经功能和SAH分级,伊文思蓝(EB)检测血脑屏障通透性,苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理变化,免疫荧光染色检测神经元细胞凋亡及微管连接蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p-ERK阳性细胞表达,蛋白免疫印迹(Western blot)检测脑组织Raf、MEK、磷酸化(p)-MEK、ERK1/2、p-ERK1/2、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、自噬基因Beclin-1、LC3-Ⅱ表达。[结果]与假手术组相比,SAH组神经元细胞排列松散,数目减少,SAH分级、脑组织含水量、EB渗出量、原位末端标(TUNEL)阳性细胞数显著增加,凋亡率、LC3-Ⅱ、p-ERK阳性表达、Bax、Beclin-1、LC3-Ⅱ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2表达显著升高,神经功能评分减少,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与SAH组相比,梓醇组神经元损伤明显减轻,细胞死亡较少,SAH分级、脑组织含水量、EB渗出量、TUNEL阳性细胞数显著减少,凋亡率、Bax显著降低,神经功能评分、Bcl-2表达升高,LC3-Ⅱ、p-ERK阳性表达及Beclin-1、LC3-Ⅱ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2表达进一步升高(P<0.05);Raf-MEK-ERK通路抑制剂U0126可逆转梓醇对脑组织损伤的改善作用(P<0.05)。[结论]梓醇可能通过激活Raf-MEK-ERK信号通路,促进神经细胞自噬,改善SAH大鼠脑损伤。

大豆皂苷Bb对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡及MEK/ERK通路的影响

目的探讨大豆皂苷Bb经丝裂原细胞外信号调节激酶/细胞外信号调节激酶(MEK/ERK)信号通路对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡的影响。方法培养人牙槽骨成骨细胞,Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)培养的细胞作为对照组(A组),以含400μg/mL雌二醇、400μg/mL和800μg/mL大豆皂苷Bb的DMEM培养的细胞分别作为雌二醇组(B组),大豆皂苷Bb低、高剂量组(C_(1)组和C2组)。采用MTT法测定细胞活力和计数细胞菌落数,采用流式细胞术测定细胞凋亡水平,采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法及蛋白印迹法测定细胞中MEK,ERK mRNA和蛋白表达水平。结果与A组比较,B组、C_(1)组、C2组光密度(OD)、细胞存活率、菌落数、MEK及ERK mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;与B组比较,C_(1)组上述指标均明显降低(P<0.05),而C2组无明显差异(P>0.05)。与A组比较,B组、C_(1)组、C2组细胞凋亡率均明显降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;与B组比较,C_(1)组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),C2组细胞凋亡率无明显差异(P>0.05)。结论大豆皂苷Bb能促进牙槽骨成骨细胞增殖,抑制凋亡。其作用机制可能与大豆皂苷Bb促进牙槽骨成骨细胞MEK,ERK mRNA和蛋白表达,以及激活MEK/ERK信号通路传导有关。

Development and Commercial Application of Methyl-ethyl-ketone Production Technology

A synthetic technology for the production of methyl-ethyl-ketone (MEK) is introduced, which makes use of butylene catalytic hydration to produce secondary butanol (SBA) and this is followed by dehydrogenation of SBA. By optimizing the operating conditions of a commercial unit, the running results showed that the recom-mended process was successful and that the catalysts had high activity, good selectivity, and long lifespan, which ensured long-term running in commercial units.

木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖侵袭和上皮间质转化的机制研究

目的:探究木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的机制。方法:将肝癌细胞HepG2分为Control组、OAL组、OAM组、OAH组、PD98059组和ML-099组。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力;蛋白质印迹法检测细胞中MEK.p-MEK、ERK.p-ERK蛋白及EMT相关蛋白表达。结果:OAL组、OAM组和OAH组细胞增殖和侵袭能力(82.34±2.43)、(61.04±1.61)、(32.44±1.04)均明显低于Control(110.42±3.86)组,细胞凋亡率(6.81±0.62)、(11.74±0.94)、(18.36±1.05)明显高于Control组(5.01±0.53)(F侵袭=1068,F凋亡=323.1,P<0.0001);细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.42±0.04)、(0.58±0.05)、(0.97±0.09)高于Control组(0.23±0.03)(F=181.1,P<0.0001);上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.63±0.06)、(0.51±0.05)、(0.38±0.03)、Vimentin蛋白(1.23±0.11)、(0.98±0.09)、(0.51±0.05)及p-MEK/MEK(0.72±0.07)、(0.51±0.05)、(0.32±0.03)和p-ERK/ERK(0.92±0.09)、(0.68±0.06)、(0.41±0.04)比值低于Control组(F_(N-cadherin)=39.04,F_(Vimentin)=111.0,F_(p-MEK/MEK)=107.8,F_(p-ERK/ERK)=82.68,P<0.0001)。PD98059组细胞增殖和侵袭能力(30.86±1.01)均明显低于Control组(t=48.84,P<0.0001),细胞凋亡能力(17.95±0.98)明显高于Control组(t=28.45,P<0.0001),细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.92±0.09)明显高于Control组(t=17.82,P<0.0001),上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.37±0.04)(t=9.585)、Vimentin蛋白(0.41±0.04)(t=19.99)及p-MEK/MEK(0.30±0.03)(t=16.78)、p-ERK/ERK(0.39±0.04)(t=14.65)比值均明显低于Control组(P<0.0001)。ML-099组细胞增殖和侵袭能力(100.86±2.68)均明显高于OAH组(t=12.54,P<0.0001),细胞凋亡能力(5.15±0.86)明显低于OAH组(t=23.84,P<0.0001);和OAH组相比,ML-099组细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.25±0.03)明显减少(t=18.59,P<0.0001),上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.69±0.07)(t=0.971,P<0.0001)、Vimentin蛋白(1.50±0.12)(t=18.65,P<0.0001)及p-MEK/MEK(0.94±0.09)(t=16.01,P<0.0001)、p-ERK/ERK(1.05±0.10)(t=2.367,P=0.0395)比值均明显升高。结论:木蝴蝶苷A可抑制肝癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,诱导肝癌细胞凋亡,其机制和抑制MEK/ERK信号通路有关。

祛风宣痹方对哮喘大鼠气道炎症及MEK/ERK信号通路的影响

目的观察祛风宣痹方对哮喘大鼠气道炎症及MEK/ERK信号通路的影响,探讨其改善哮喘的作用机制。方法将18只SD大鼠随机分为对照组、哮喘组和祛风宣痹方组,每组6只,采用卵清蛋白诱导哮喘模型,祛风宣痹方组予祛风宣痹方灌胃,对照组和哮喘组予等量生理盐水,连续14 d。HE染色观察大鼠肺组织病理变化,ELISA检测血清IgE、白细胞介素(IL)-6和肺泡灌洗液IL-6含量,Western blot检测肺组织MEK/ERK信号通路相关蛋白表达。将巨噬细胞RAW264.7分为对照组、脂多糖(LPS)组、祛风宣痹方组和U0126组,以LPS诱导细胞炎症反应,同时祛风宣痹方组和U0126组分别予祛风宣痹方或MEK通路抑制剂U0126干预,ELISA检测细胞培养液IL-6含量,Western blot检测细胞MEK/ERK信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,哮喘组大鼠气道壁增厚,支气管周围炎症细胞增多,血清IgE、IL-6和肺泡灌洗液IL-6含量显著增加(P<0.01),肺组织p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05);与哮喘组比较,祛风宣痹方组大鼠气道炎症细胞浸润减少,血清IgE、IL-6和肺泡灌洗液IL-6含量显著减少(P<0.01),肺组织p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P<0.05)。细胞实验结果显示,与对照组比较,LPS组细胞培养液IL-6含量显著增加(P<0.01),细胞p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.01);与LPS组比较,祛风宣痹方组细胞培养液IL-6含量显著减少(P<0.05),p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论祛风宣痹方能够缓解哮喘气道炎症,抑制MEK/ERK信号通路可能是其作用机制之一。

多西环素通过MEK/ERK信号通路促进MC3T3-E1细胞株体外成骨分化

目的:研究在体外条件下多西环素(doxycycline,DOX)对前成骨细胞株MC3T3-E1成骨分化的影响及可能机制。方法:在成骨诱导剂体外诱导MC3T3-E1细胞株成骨分化条件下,茜素红染色检测成骨细胞分化;实时定量PCR检测DOX对MC3T3-E1细胞相关成骨基因OCN、Runx2的影响;用DOX、MEK抑制剂(U0126)单独或联合处理MC3T3-E1细胞后,Western blot检测N-cadherin、p-MEK及p-ERK等蛋白的表达。结果:在MC3T3-E1细胞株体外成骨诱导分化中,加入DOX可以增强茜素红染色阳性率。DOX上调MC3T3-E1细胞相关成骨基因OCN、Runx2的表达。DOX处理MC3T3-E1细胞后,其N-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05),p-MEK和p-ERK蛋白的表达增加(P<0.05)。而MEK拮抗剂(U0126)则显著上调N-cadherin蛋白表达水平,同时降低p-MEK、p-ERK水平。用U0126联合DOX处理MC3T3-E1细胞后,DOX对N-cadherin、p-MEK和p-ERK蛋白水平的影响可被U0126拮抗。在MC3T3-E1细胞株体外成骨诱导分化中,同时存在DOX和U0126时,茜素红染色阳性率低于单独DOX组。结论:DOX可以促进MC3T3-E1细胞株的体外成骨分化;而DOX的这一效应可能是通过MEK-ERK信号通路参与完成的。

桑寄生总黄酮通过MEK/ERK通路对子痫前期大鼠肾脏的保护作用及对血管内皮功能的影响

目的探讨桑寄生总黄酮对子痫前期(Preeclampsia,PE)大鼠肾脏的保护作用及对血管内皮功能的影响,以及对丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(Mitogen extracellular signal regulated kinase,MEK)/细胞外信号调节激酶(Extracellular signal regulated kinase,ERK)信号通路的调节作用。方法将60只健康清洁级成熟期受孕雌性大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、桑寄生总黄酮低剂量组、桑寄生总黄酮中剂量组和桑寄生总黄酮高剂量组,每组各12只。从受孕第1天开始桑寄生总黄酮各剂量组分别给予90 mg/kg、180 mg/kg和360 mg/kg桑寄生总黄酮溶液灌胃,1次/d,连续21 d。从受孕第10天开始,除正常组外,其余组大鼠皮下注射左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)125 mg/(kg·d),直至妊娠第19天。检测各组大鼠血压和24 h尿蛋白水平,放射免疫法测定血清前列腺环素(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、血栓烷(Thromboxane B2,TXB2)和血浆内皮素-1(En⁃dothelin-1,ET-1)水平,采用ELISA法检测白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,HE染色观察肾组织病理损伤,蛋白印迹法检测p-MEK1/2/MEK1/2和p-ERK1/2/ERK1/2比值。结果正常组大鼠肾小管和肾小球结构完整,未见空泡化;模型组大鼠可见肾小管上皮细胞出现空泡化,可见上皮细胞脱落;桑寄生总黄酮低、中和高剂量组大鼠肾组织病理改变较模型组减轻。与正常组比较,模型组大鼠血压和24 h尿蛋白水平、TXB2和ET-1水平以及IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高,VEGF水平以及p-MEK1/2/MEK1/2和p-ERK1/2/ERK1/2比值降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,桑寄生总黄酮低、中和高剂量组大鼠血压和24 h尿蛋白水平、TXB2和ET-1水平以及IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低,VEGF水平以及p-MEK1/2/MEK1/2和p-ERK1/2/ERK1/2比值升高,差异有统计学意义(P<0.05),其中以桑寄生总黄酮高剂量组各指标变化最明显,其次为中剂量组和低剂量组。结论桑寄生总黄酮可改善子痫前期大鼠肾组织病理损伤,降低炎症反应,减轻血管内皮损伤,其可能是通过调控MEK/ERK信号通路发挥作用。

miRNA-24靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用

目的探讨miRNA-24(miR-24)靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用。方法体外培养乳腺癌(BC)细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞以及非肿瘤性人乳房上皮细胞系H184B5F5/M10细胞,采用qPCR方法检测各细胞中miR-24的表达水平。将MCF-7细胞分为正常组、miRNA阴性对照组(miR-24-NC组)和miR-24抑制剂组,采用CCK8、伤口愈合试验和TUNEL检测细胞活力、迁移和凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和MEK/ERK通路相关蛋白的表达水平。结果miR-24在MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达水平显著高于H184B5F5/M10细胞(P<0.05)。与miR-24-NC组相比,miR-24抑制剂组抑制了细胞的活力和迁移(P<0.05),促进了细胞的凋亡(P<0.05);其凋亡蛋白Bcl-2显著降低(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9显著升高(P<0.05);同时降低了MEK/ERK信号通路的表达(P<0.05)。结论乳腺癌细胞中miR-24表达升高,并且通过调控MEK/ERK信号通路促进乳腺癌的转移。