miR-10a在胰腺癌侵袭转移中的作用

目的探讨microRNA-10a(miR-10a)在胰腺癌侵袭转移中的作用。方法选取2014年1月至2016年12月在赣南医学院第一附属医院切除的胰腺癌组织标本68例,同时选取癌旁组织作为对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本miR-10a表达;同时选取胰腺癌细胞株Capan-1细胞,以脂质体转染法将miR-10a重组正、反义真核表达质粒载体转染Capan-1细胞,采用RT-PCR检测转染细胞miR-10a表达,Transwell和Matrigel试验观察转染细胞的迁移和侵袭能力,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力。结果胰腺癌组织miR-10a相对表达量为(0.213±0.024),明显高于癌旁组织(P<0.01);中低分化胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.212±0.011),明显高于高分化胰腺癌(P<0.01);有淋巴结转移胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.217±0.017),明显高于无淋巴结转移胰腺癌(P<0.05);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.230±0.015),明显高于Ⅰ~Ⅱ期胰腺癌(P<0.01)。转染48 h后,正义组miR-10a相对表达量为(0.021±0.010),明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组miR-10a相对表达量为(0.003±0.001),明显低于空载组和空白对照组(P<0.05)。正义组24 h和48 h光密度(OD)值分别为(0.602±0.018)和(0.753±0.041),明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组24 h和48 h OD值分别为(0.451±0.023)和(0.591±0.038),明显低于空载组和空白对照组(P<0.05)。正义组迁移和侵袭细胞数分别为(85.22±12.10)个和(140.24±30.54)个,明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组迁移和侵袭细胞数分别为(12.52±3.22)个和(20.41±8.66)个,明显低于空载组和空白对照组(P<0.05)。结论 miR-10a过表达可对胰腺癌有生长促进、增强侵袭和迁移的作用,值得进一步研究。

miR-10a在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨子宫内膜癌组织中miR-10a的表达及意义。方法收集40例子宫内膜癌、20例子宫内膜不典型增生及30例正常子宫内膜组织,采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量逆转录聚合酶链反应[poly(A)-RT-q PCR]检测miR-10a在不同子宫内膜组织中的表达,并将检测结果和临床及病理资料进行统计学分析。结果 miR-10a在子宫内膜癌组织中的表达高于不典型增生和正常子宫内膜组织,3组间差异有统计学意义(P<0.01);miR-10a在Ⅲ+Ⅳ期子宫内膜癌患者中的表达量高于Ⅰ+Ⅱ期;病理分级为3级的患者中的表达量高于1+2级;肌层浸润深度≥1/2的患者中的表达量高于肌层浸润深度<1/2者;有淋巴结转移的患者中的表达量高于无转移者,差异均有统计学意义(P<0.05);不同年龄、病理类型及雌激素受体、孕激素受体是否阳性的子宫内膜癌患者中其表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-10a在子宫内膜癌组织中高表达,可能作为癌基因调控了子宫内膜癌的发生及发展。

miR-10a-5p敲低通过靶向THBS2抑制胃癌细胞的生长和转移

背景在胃癌(gastric cancer,GC)的发病和进展中,已经发现许多miRNAs可发挥抑癌或促癌的作用.但miRNAs数量众多,在GC中仍有众多miRNAs的作用并不明确,因此,继续筛选具有影响GC细胞生长和转移的miRNAs仍十分必要.目的探究miR-10a-5p对GC细胞生长和转移的影响及其机制.方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中miR-10a-5p表达;miR-10a-5p-inhibitor转染入MGC-803和AGS细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.采用Western-blot和RT-qPCR检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中THBS2表达;采用TargetScan在线软件筛选miR-10a-5p的潜在靶基因THBS2,并进一步验证.NC+pcDNA-Con,miR-10a-5pinhibitor+pcDNA-Con和miR-10a-5p-inhibitor+pcDNATHBS2共转染入MGC-803细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.结果miR-10a-5p在GC组织,MGC-803和AGS细胞中表达异常上调;miR-10a-5p敲低显著降低了MGC-803和AGS细胞的增殖,集落形成和侵袭.THBS2 mRNA和蛋白水平在GC组织、MGC-803和AGS细胞中表达均异常下调;THBS2是miR-10a-5p的靶基因;过表达THBS2能逆转miR-10a-5p敲低对MGC-803细胞增殖,集落形成,迁移和侵袭的抑制作用.结论miR-10a-5p敲低通过靶基因THBS2来抑制GC细胞的生长和转移.

miR-10a对类风湿性关节炎滑膜细胞侵袭、迁移能力的影响及机制

目的:以类风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞为研究对象,明确mi R-10a对滑膜细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:首先用q RT-PCR对筛选得到的异常表达mi RNA进行验证,进而利用生物信息学分析结合报告基因、Western印迹方法,明确mi R-10a的靶基因,最后采用Transwell、划痕实验考察mi R-10a对RA成纤维细胞样滑膜细胞(FLS细胞)侵袭能力的影响。结果:mi R-10a在RA患者滑膜组织及细胞中低表达;TAK1和BTRC是mi R-10a的靶基因;mi R-10a可促进IL-6、IL-8等炎症因子的表达;mi R-10a可促进FLS细胞的侵袭、迁移。结论:mi R-10a可通过调节NF-κB的活性影响RA FLS细胞的侵袭、迁移。

针刺调控miR-10a改善VD大鼠认知并减轻神经炎症的研究

[目的]探讨针刺通过调控Micro RNA 10a(miR-10a)改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能并减轻神经炎症的效应及机制。[方法]采用双侧颈总动脉夹闭法制作VD大鼠模型,并分为假手术组、VD组、针刺组和各miR干预组,针刺组予以“三焦针法”进行治疗;各miR干预组给予相应的miR-10a空白溶剂或抑制剂。采用莫里斯(Morris)水迷宫评价大鼠的认知能力;实时荧光定量(RT-qPCR)法测定miR-10a表达;蛋白质印迹(Western blot)法检测核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κBp65的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定肿瘤坏死因子(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)水平。[结果]与假手术组相比,模型组在水迷宫隐蔽平台实验中的逃避潜伏期显著延长(P<0.01);在空间探索实验中穿越原平台位置的次数减少、首次穿越原平台所需时间延长(P<0.01);而针刺组对上述指标具有改善作用,与模型组相比差异显著(P<0.01)。此外,与假手术组相比,模型组海马miR-10a表达下降,NF-κB t-p65和p-p65蛋白及TNF-α、IL-6水平上升(P<0.05或P<0.01);针刺治疗后上述指标出现相反变化,与模型组相比差异显著(P<0.05或P<0.01)。转染miR-10a抑制剂后发现,抑制剂组海马组织中NF-κB t-p65和p-p65蛋白及TNF-α、IL-6水平较模型组上升(P<0.05或P<0.01);针刺治疗能提高miR-10a抑制剂空白溶剂组大鼠的认知功能,降低其NF-κB及TNF-α、IL-6水平,但在抑制剂组中却未发现上述作用。双荧光素酶报告基因实验发现miR-10a可直接作用于NF-κB并抑制其表达。[结论]针刺能改善VD大鼠的认知功能,其机制部分与调节miR-10a表达,进而抑制缺血脑组织炎症损伤有关。

LncRNA SNHG7调控miR-10a-5p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA SNHG7(LncRNA SNHG7)是否通过调控微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)的表达而参与高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的过程。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,随机分为8组:对照组、高糖组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-SNHG7组、高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-10a-5p组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG7、miR-10a-5p的表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证SNHG7与miR-10a-5p的靶向结合关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组比较,高糖组SNHG7的表达水平显著降低(P<0.05),miR-10a-5p的表达水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,高糖组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与高糖+pcDNA组比较,高糖+pcDNA-SNHG7组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与高糖+anti-miR-NC组比较,高糖+anti-miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实SNHG7可靶向调控miR-10a-5p的表达及活性;与高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组比较,高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:SNHG7过表达可能通过靶向调控miR-10a-5p的表达从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

子宫内膜癌组织中miR-10a及let-7i的表达及临床意义

目的探讨miR-10a及let-7i在子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法选取子宫内膜癌组织40例、子宫内膜不典型增生组织20例及正常子宫内膜组织30例,采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量逆转录聚合酶链反应[poly(A)-RT-qPCR]测定miR-10a及let-7i在三种子宫内膜组织中的表达,并将结果与临床及病理资料进行分析。结果miR-10a在子宫内膜癌组织中高表达(高于正常及不典型增生的子宫内膜组织,P<0.01);在病理分级为3级的患者中高表达(高于1+2级者);在Ⅲ+Ⅳ期患者中高表达(高于Ⅰ+Ⅱ期者);在有淋巴结转移的患者中高表达,在深肌层浸润(浸润深度≥1/2)的患者中高表达;差异显著(P<0.05)。在不同年龄、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)是否阳性的子宫内膜癌患者中其表达量差异无统计学意义(P>0.05)。let-7i在子宫内膜癌组织低表达(低于正常和不典型增生的子宫内膜组织,P<0.01)。结论在子宫内膜癌组织中miR-10a表达上调,let-7i表达下调,miR-10a可能参与并促进了子宫内膜癌的侵袭和转移。

miR-10a-5p靶向ITSN1对宫颈癌细胞增殖和顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨miR-10a-5p对宫颈癌细胞增殖及对化疗药物顺铂敏感性的影响及机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23对宫颈癌及配对癌旁组织miR-10a-5p的相对表达水平。利用空载体病毒(阴性对照组)或miR-10a-5p过表达慢病毒(miR-10a-5p过表达组)感染人宫颈癌细胞株Caski,同时设置不作处理的空白对照组。使用CCK-8法检测各组细胞增殖及对顺铂敏感性的影响,检测指标为吸光度和细胞生长抑制率。qRT-PCR和Western blot检测三组细胞中ITSN1的mRNA和蛋白水平。使用荧光素酶报告基因验证miR-10a-5p的潜在靶点。结果与宫颈癌癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-10a-5p表达显著降低(P<0.05)。与空白对照组及阴性对照组相比,miR-10a-5p过表达组细胞吸光度显著减小,细胞增殖能力显著降低(P<0.05),对顺铂的化疗敏感性显著增强(P<0.05),空白对照组和阴性对照组间细胞增殖能力和对顺铂的化疗敏感性差异无统计学意义(P>0.05)。miR-10a-5p可与ITSN1靶向结合,降低ITSN1表达水平。结论miR-10a-5p可能通过靶向ITSN1抑制Caski细胞增殖,并增强Caski细胞对顺铂的药物敏感性。

二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a及其靶基因HOXA1的表达改变

目的检测二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a表达水平,探讨其与靶基因HOXA1癌基因的关系。方法以正常支气管上皮细胞为对照组,二羟环氧苯并芘恶性转化细胞为实验组,用茎环结构逆转录引物逆转录,定量PCR检测两组细胞miR-10a表达水平。运用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、定量PCR和流式细胞术间接法检测2组细胞HOXA1 mRNA和蛋白表达水平。结果二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a表达水平是对照组的0.01倍,RT-PCR HOXA1 mRNA是对照组的(3.12±0.23)倍,定量PCR HOXA1 mRNA是对照组的8.75倍,HOXA1蛋白表达是对照组的3.48倍。结论二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a可能反向调控靶基因HOXA1的表达。

miR-10a通过BDNF信号通路对精神分裂症大鼠海马神经元细胞的作用研究

目的:探究miR-10a对精神分裂症(SZ)大鼠海马神经元细胞的作用及其可能的机制。方法:30只大鼠随机分为空白对照组、生理盐水组和SZ组,每组10只。应用MK-801建立SZ大鼠模型。Morris水迷宫实验检测学习记忆能力;旷场实验检测大鼠自主行为与紧张度;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测miR-10a、脑源性神经营养因子(BDNF)通路相关基因的表达;荧光素酶报告基因实验验证miR-10a与BDNF之间的靶向结合作用;CCK-8检测海马神经元细胞活力;流式细胞术检测海马神经元细胞周期及凋亡情况。结果:与生理盐水组相比,SZ组大鼠逃跑潜伏期、移动距离、移动速度和垂直次数均显著增加(P<0.05);与空白对照组相比,SZ组大鼠海马BDNF通路被抑制,miR-10a表达显著升高(P<0.05);BDNF为miR-10a的靶基因;与NC组相比,miR-10a mimic和K252a显著抑制SZ大鼠海马神经元细胞BDNF通路和细胞活力(P<0.05),阻滞细胞周期进程,促进细胞凋亡,miR-10a inhibitor则作用相反;与miR-10a inhibitor组相比,miR-10a inhibitor+K252a处理显著抑制BDNF通路活化和细胞活力(P<0.05),阻滞细胞周期进程,促进细胞凋亡。结论:miR-10a通过BDNF信号通路抑制SZ大鼠海马神经元细胞增殖,促进细胞凋亡。

miR-10a在非酒精性脂肪性肝病大鼠中的表达及作用机制

目的研究miR-10a在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠中的表达,并探讨其可能的调节机制。方法采用饲喂高脂饲料的方法构建NAFLD模型,将实验大鼠随机分为4组:空白组(A组)、模型组(B组)、Ad-ctrl组(C组)、Ad-Si-miR-10a组(D组),每组各10只。C组尾静脉注射空载质粒的腺病毒,D组尾静脉注射沉默miR-10a质粒的腺病毒。大鼠饲喂10周后,收集肝脏组织,称重,计算肝脏指数;ELISA法检测肝脏组织中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;油红O染色观察肝脏组织病理变化;Real-time PCR法检测肝脏组织中miR-10a、HDAC3 mRNA的表达水平;Western blot法检测肝脏组织中组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)蛋白的表达水平。结果与A组相比,B、C组的体质量、TG、TC、LDL-C、miR-10a水平显著升高,HDAC3 mRNA水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与B、C组相比,D组的体质量、肝脏指数、TG、TC、LDL-C、miR-10a水平显著降低(P<0.05),肝脏组织脂滴沉积有所改善,HDAC3 mRNA、HDAC3蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论抑制miR-10a的表达可上调HDAC3水平,从而改善高脂饮食诱导的大鼠肝脏组织脂滴沉积。

miR-10a-5p通过靶向RORA促进胃癌细胞侵袭、迁移

目的探讨miR-10a-5p是否通过靶向维甲酸受体相关孤儿受体A(RAR-related orphan receptor A,RORA)对胃癌细胞侵袭、迁移产生影响及其作用机制。方法qRT-PCR检测人正常胃黏膜细胞GES-1与三株胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BGC-823中miR-10a-5p的表达水平。以miR-10a-5p高表达的胃癌细胞株SGC-7901作为后续实验研究胃癌细胞株,分为control组(只转染Lipofectamine 2000)、NC组(转染Lipofectamine 2000和NC序列,即转染无关序列)和miR-10a-5p inhibitor组(转染Lipofectamine 2000和miR-10a-5p inhibitor),qRT-PCR检测转染后各组细胞株中miR-10a-5p的表达水平。生物信息学网站Target Scan预测miR-10a-5p与RORA的靶向结合位点。qRT-PCR、Western blot实验分析miR-10a-5p与RORA的靶向调控关系。集落克隆和Transwell实验分别检测下调miR-10a-5p对SGC-7901细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。为探究RORA基因对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,实验分为control组(只转染Lipofectamine 2000)、RORA NC转染组(转染Lipofectamine 2000及NC序列)、RORA过表达组(转染Lipofectamine 2000及RORA过表达序列),Transwell实验检测上调RORA对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响。Western blot法检测侵袭、迁移相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail的相对表达水平。结果miR-10a-5p在胃癌细胞株中相对于正常胃黏膜细胞中高表达(P<0.05)。生物信息学软件Target Scan预测结果显示,RORA 3′UTR上存在潜在与miR-10a-5p靶向结合的位点(P<0.05),miR-10a-5p能够负向调控RORA基因表达。下调miR-10a-5p后SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移显著被抑制(P<0.05)。过表达RORA能抑制SGC-7901细胞侵袭、迁移能力(P<0.05)。过表达RORA后N-cadherin、Snail蛋白表达降低,E-cadherin表达增加(P<0.05)。结论miR-10a-5p通过靶向RORA促进胃癌细胞侵袭、迁移,侵袭、迁移机制可能与上皮间质转化有关。

猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建及其与miR-10a-5p的靶向验证

为了鉴定miR-10a-5p与猪E2F3基因的靶向关系,试验从生物信息miRNA Base数据库查询miR-10a-5p的相关信息,并运用MEGA 6.0软件分析其保守性,通过Target Scan生物信息学网站预测其潜在的靶基因及结合位点,然后PCR扩增E2F3基因3′非编码区(3′UTR)片段,构建E2F3的野生型(E2F3-3′UTR-wt)和突变型(E2F3-3′UTR-mut)双荧光素酶报告基因质粒,并分别与miR-10a-5p mimics、mimics NC共转染至293T细胞中,检测双荧光素酶活性变化。结果表明:miR-10a-5p在7个物种间具有高度保守性,成熟序列均为UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGU;Target Scan生物信息学网站预测到miR-10a-5p具有包括E2F3基因在内的共241个潜在的靶基因;E2F3基因片段经PCR扩增获得大小约1 288 bp的清晰条带,测序结果与预期一致;转染miR-10a-5p mimics能显著降低猪E2F3基因野生型质粒双荧光素酶活性(P<0.05)。说明猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建成功,且其与miR-10a-5p之间存在靶向关系。

Pre-miR-10a重组腺病毒载体对K562细胞增殖的抑制作用

目的:观察在K562细胞高表达miR-10a对细胞增殖及凋亡的影响。方法:用pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体感染K562细胞,采用RT-PCR检测感染后K562细胞中miR-10a和bcr/abl融合基因的表达水平,Western blot法检测BCR/ABL融合蛋白表达水平,MTT、流式细胞术(FCM)分别检测感染后K562细胞的增殖及凋亡。结果:与对照组相比,K562细胞在转染pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体后,其miR-10a表达水平明显升高、bcr/abl融合基因水平显著降低;BCR/ABL融合蛋白表达明显下调、K562细胞增殖活力被抑制、细胞凋亡增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体能明显抑制K562细胞的增殖、促进细胞凋亡。

骨髓间充质干细胞外泌体miR-10a-5p下调紫外线抵抗相关基因(UVRAG)的表达调控系统性红斑狼疮

目的:探讨BMMSCs移植对SLE外周血单个核细胞增殖和凋亡的调控机制,为SLE的靶向治疗提供理论支持。方法:超速离心分离BMMSCs来源外泌体。CCK-8检测SLE外周血单个核细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。qRT-PCR检测外周血单个核细胞和外泌体中miRNA水平。双荧光素酶报告基因验证miR-10a-5p与紫外线抵抗相关基因(UVRAG)靶向关系。Western blot检测外泌体表面标记物和外周血单个核细胞中UVRAG的表达水平。结果:成功分离BMMSCs来源外泌体,并发现其抑制SLE外周血单个核细胞增殖,促进其凋亡。qRT-PCR检测结果表明BMMSCs来源外泌体可显著上调SLE外周血单个核细胞中miR-10a-5p表达水平。双荧光素酶报告基因检测以及Western blot检测结果表明miR-10a-5p靶向下调UVRAG表达水平。结论:BMMSCs来源外泌体miR-10a-5p通过靶向下调UVRAG水平,抑制SLE外周血单个核细胞增殖并促进细胞凋亡。

hsa-miR-10a-5p在重症社区获得性肺炎中的应用研究

目的探究hsa-miR-10a-5p在重症社区获得性肺炎(SCAP)中的作用,评估hsa-miR-10a-5p作为SCAP标志物的潜能。方法利用microRNA测序(27个SCAP血样和10个健康对照血样)和生物信息学方法探究hsa-miR-10a-5p指示社区获得性肺炎严重性的能力。结合mRNA测序(41个SCAP血样和10个健康对照血样)和靶基因预测及基因功能富集分析来探究hsa-miR-10a-5p在SCAP中的作用。结果hsa-miR-10a-5p水平在SCAP中显著下调,且死亡组下调更多。hsa-miR-10a-5p水平与急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分呈负相关,且microRNA水平预测SCAP预后的受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.776。SCAP发生时,hsa-miR-10a-5p预测靶向的基因能调控与肺炎发展密切相关的生物学过程和通路。结论hsa-miR-10a-5p能提示社区获得性肺炎严重性,且能预测预后。hsa-miR-10a-5p可作为SCAP的潜在标志物。

外周血miR-10a和miR-29a水平对早期脓毒症急诊患者预后有预测作用

目的:探讨外周血miR-10a、miR-29a水平对早期脓毒症急诊患者预后的预测作用。方法:收集早期脓毒症急诊患者94例为观察组,选取同期82例健康体检者为对照组。其中观察组根据病情严重程度分为轻、中、重度3组。比较2组外周血miR-10a和miR-29a的表达水平,以及观察组不同预后患者治疗前miR-10a和miR-29a的表达水平。分析外周血miR-10a、miR-29a表达水平及miR-10a联合miR-29a检测对早期脓毒症急诊患者预后的预测价值。结果:观察组外周血miR-10a和miR-29a表达水平高于对照组(P均<0.05);观察组病情严重程度不同患者外周血miR-10a和miR-29a表达水平中,与轻度组比较,中度组和重度组患者表达水平升高,而重度组患者又显著高于中度组(P均<0.05);治疗1个月后,预后不良者18例,预后良好者治疗前外周血miR-10a和miR-29a的表达水平低于预后不良者(P均<0.05);miR-10a、miR-29a表达水平的最佳截断点分别为2.74和1.39,miR-10a、miR-29a两者联合检测的灵敏度、特异度和曲线下面积(AUC)均高于单独检测,分别为83.33%、85.53%和0.895。结论:早期脓毒症急诊患者外周血miR-10a、miR-29a表达水平均升高,可反应患者病情严重程度,两者联合检测预测早期脓毒症急诊患者的预后效能较高。

Hsa-miR-10a-5p靶基因预测及生物信息学分析

利用生物信息学对miR-10a-5p的靶基因进行预测及相关分析,为miR-10a-5p靶基因的实验验证及其调控机制提供理论基础。通过 miRBase获取并分析人、大鼠,小鼠等物种的miR-10a-5p的碱基序列特征;使用在线数据库 Targetscan7.1,miRDB,mirDIP和DIANA TOOLS等预测miR-10a-5p的靶基因,并用Venny 2.1绘制韦恩图取交集。用在线工具DAVID对交集靶基因进行GO功能注释和KEGG pathway分析。结果表明 miR-10a-5p成熟序列在各物种间高度保守。获得的79个靶基因在分子功能上主要涉及染色质结合,转录活性激活等,并显著富集于肝脏发育,脂肪组织发育等生物学过程,涉及cAMP信号通路,TNF信号通路及AMPK信号通路。miR-10a-5p通过调控靶基因参与了生命活动和疾病过程中多个方面,尤其生长发育和癌症过程,为进一步研究提供了生物学基础。

帕利哌酮调控miR-10a/BDNF通路对卒中后抑郁大鼠的影响

目的:探讨帕利哌酮对卒中后抑郁(PSD)大鼠抑郁行为的改善作用及对微小核糖核酸-10a(miR-10a)/脑源性神经营养因子(BDNF)通路的影响。方法:取SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、帕利哌酮组(1.00 mg/kg)、ad-miR-10a组(尾静脉注射miR-10a过表达腺病毒,每只100μL)、ad-NC组(尾静脉注射不含miR-10a过表达腺病毒质粒空载体溶液,每只100μL)、帕利哌酮+ad-miR-10a组,每组10只。采用大脑中动脉线栓栓塞法+慢性轻度不可预见性应激法建立大鼠PSD模型。各组连续给药4周后,检测大鼠神经功能缺损、肢体运动功能、抑郁样行为。取海马组织,尼氏染色及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测神经元形态及凋亡状况;免疫组化法检测BDNF阳性表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测miR-10a表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测酪氨酸受体激酶B(TrkB)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3(Caspase-3)、核糖体蛋白S6激酶α(RPS6KA1)蛋白表达水平。结果:PSD大鼠出现神经功能缺损、肢体运动功能障碍及抑郁样行为,海马组织中神经元损伤及凋亡加重,miR-10a表达升高,BDNF及其介导的抗神经元凋亡相关蛋白表达降低(P<0.05)。帕利哌酮可缓解PSD大鼠抑郁样行为,抑制神经元凋亡及损伤,并下调海马组织中miR-10a表达,促进BDNF及其介导的抗凋亡相关蛋白表达(P<0.05)。上调miR-10a可逆转帕利哌酮的上述作用。结论:帕利哌酮可通过下调miR-10a表达,激活BDNF通路,抑制PSD大鼠海马神经元细胞损伤凋亡,发挥抗抑郁作用。

LncRNA KCNQ1OT1调控miR-10a-5p加重缺氧复氧H9c2细胞损伤的机制

目的探讨长非编码RNA KCNQ1重叠转录本1(KCNQ1OT1)调控缺氧复氧(H/R)心肌细胞(H9c2)增殖、凋亡的作用机制。方法成功建立H/R H9c2细胞模型;采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)、细胞计数试剂盒(CCK8)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素和碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)凋亡检测试剂盒、蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中KCNQ1OT1、miR-10a-5p的表达、细胞活性、细胞凋亡率及P65、PHB、Bcl-2、Bax的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光素酶活性。结果与H9c2组比较,H/R H9c2组细胞KCNQ1OT1表达显著升高,miR-10a-5p表达显著降低(P<0.05);过表达KCNQ1OT1或抑制miR-10a-5p具有相同的加重H/R对H9c2细胞的活性抑制、凋亡促进及P65、Bcl-2下调,PHB、Bax上调作用。miR-10a-5p明显抑制野生型KCNQ1OT1细胞的荧光活性,并负向调控KCNQ1OT1的表达。过表达miR-10a-5p部分逆转KCNQ1OT1对H/R H9c2细胞的活性抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA KCNQ1OT1抑制H/R H9c2细胞增殖,促进凋亡,其机制与靶向miR-10a-5p有关。