miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

微波消融术治疗对非小细胞肺癌患者miR-152、肿瘤标志物及肺功能的影响

目的:探讨微波消融术对比3D胸腔镜手术治疗对非小细胞肺癌患者miR-152、肿瘤标志物及肺功能的影响。方法:选取82例非小细胞肺癌患者为研究对象,根据接受的治疗方式不同分为对照组及观察组,每组各41例。对照组采用3D胸腔镜手术治疗;观察组采用微波消融术治疗。比较两组患者围术期指标、治疗疗效、肺功能[第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)及用力肺活量(FVC)]、肿瘤标志物[糖类抗原(CA153)、糖类抗原(CA125)及细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]、炎症[白细胞介素2(IL-2)及IL-10]、miR-152水平及不良反应发生情况。结果:观察组手术时间、术中出血量、住院时间及住院费用均低于对照组(P<0.05)。治疗后1个月,两组患者FEV1%及FVC水平均降低(P<0.05),但观察组高于对照组(P<0.05);治疗后3个月,两组患者FEV1%及FVC均高于治疗后1个月水平(P<0.05),但两组无统计学差异(P>0.05)。治疗后,两组患者CA153、CA125、CYFRA21-1水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);两组患者IL-2及miR-152水平均高于治疗前(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05),两组患者IL-10水平比治疗前降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。两组患者不良反应总发生率无统计学差异(P>0.05)。结论:采用微波消融术治疗非小细胞肺癌疗效确切,相较于3D胸腔镜手术治疗,更利于降低患者炎症及肿瘤标志物水平,安全性较好,值得临床推广应用。

孕妇外周血miR-152 miR-210与子痫前期病情程度及妊娠结局的相关性研究

目的:探究孕妇外周血微小RNA-152(miR-152)、miR-210与子痫前期(PE)病情程度及妊娠结局的相关性。方法:选取2018年7月至2022年5月我院200例PE患者,根据病情严重程度分为轻度组(轻度PE患者,n=114)和重度组(重度PE患者,n=86),另选同期、同年龄段健康孕妇作为对照组(n=100)。比较三组血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]、24h尿蛋白定量(24h Upro)、钙离子(Ca^(+))、外周血miR-152、miR-210水平,分析外周血miR-152、miR-210水平与PE病情程度、血压、24h Upro及Ca^(+)相关性。PE患者随访至妊娠结束,比较不同妊娠结局PE患者临床资料、外周血miR-152、miR-210水平,通过Lasso回归和Logistic回归分析预测因素与不良妊娠结局的关联性,通过受试者工作特征曲线(ROC)、临床决策曲线(DCA)评价外周血miR-152、miR-210对预测PE患者发生不良妊娠结局的价值及临床效用。结果:重度组、轻度组、对照组SBP、DBP、24h Upro、外周血miR-152、miR-210水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);外周血miR-152、miR-210水平与PE病情程度、血压、24h Upro呈正相关(P<0.05),与Ca^(+)水平呈负相关(P<0.05);发生不良妊娠结局年龄、流产史、病情程度、SBP、DBP、24h Upro、Ca^(+)、外周血miR-152、miR-210水平与未发生不良妊娠结局患者比较,差异有统计学意义(P<0.05);Lasso回归选出5个预测变量为病情程度、SBP、24h Upro、外周血miR-152、miR-210水平;Logistic回归显示,外周血miR-152、miR-210水平是PE患者发生不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05);ROC、DCA结果显示,外周血miR-152、miR-210联合预测PE患者发生不良妊娠结局具有良好的预测价值和临床效用。结论:外周血miR-152、miR-210在PE患者中表达上调,且与病情程度、妊娠结局显著相关,其联合预测患者发生不良妊娠结局具有一定参考价值和临床效用。

丹皮酚通过调控动脉粥样硬化中的miR-152-3p/ASPH轴抑制氧化低密度脂蛋白诱发的小鼠血管内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激

目的揭示丹皮酚通过调控miR-152-3p/ASPH轴在ox-LDL诱导的血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)进展中的作用。方法首先,用不同浓度的氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)(0、25、50、100μg·mL^(-1))处理小鼠VECs,选取100μg·mL^(-1)ox-LDL进行实验。然后,用不同浓度的丹皮酚(30、60、120μmol·L^(-1))或辛伐他汀(30μmol·L^(-1))处理VECs。接着,使用细胞计数试剂盒-8和流式细胞术分别用于测定细胞活力和凋亡。此外,使用酶联免疫吸附法分析了IL-1β和IL-6的水平,并使用相关试剂盒检测了活性氧、乳酸脱氢酶和丙二醛的含量。此外,通过qRT-PCR或Western blot检测miR-152-3p和天冬氨酰(天冬酰胺)β-羟化酶(aspartate-β-hydroxylase,ASPH)的表达。miR-152-3p和ASPH之间的相互作用由starBase预测,然后通过双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀实验证实。结果100μg·mL^(-1)ox-LDL显著抑制VECs活力,并促进细胞凋亡、炎症反应和氧化损伤。而丹皮酚的处理以剂量依赖性的方式增加细胞活力,抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡。丹皮酚以剂量依赖性的方式降低ox-LDL诱导的IL-1β和IL-6的水平,以及以剂量依赖性的方式减弱ox-LDL对ROS、MDA和LDH含量的促进作用。另外,ox-LDL对miR-152-3p表达的抑制作用和对ASPH表达的促进作用也被丹皮酚逆转,且120μmol·L^(-1)丹皮酚效果最好。120μmol·L^(-1)丹皮酚能够上调miR-152-3p或下调ASPH,进一步促进丹皮酚对VECs生长的保护作用,miR-152-3p靶向负调控ASPH表达。结论丹皮酚通过调节miR-152-3p/ASPH轴减弱ox-LDL对小鼠VECs生长的影响,为AS的治疗提供理论基础。

MiR-152-3p调控DNA甲基转移酶1对结肠癌增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探究miR-152-3p、DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferases,DNMT1)在结肠癌细胞中的调控机制。方法:qRT-PCR检测miR-152-3p和DNMT1的表达;细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕愈合实验以及Transwell实验检测各处理组癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;双荧光素酶实验检测miR-152-3p与DNMT1的靶向关系;Western blot实验检测DNMT1蛋白表达;流式细胞术实验检测细胞凋亡率。结果:结肠癌细胞中miR-152-3p显著低表达,DNMT1显著高表达;过表达miR-152-3p会抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭;miR-152-3p能靶向抑制DNMT1的表达,从而抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭;过表达miR-152-3p可以靶向DNMT1并促进细胞凋亡。结论:miR-152-3p通过靶向下调DNMT1的表达,从而抑制结肠癌细胞的发生发展。

miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血大鼠神经元铁死亡

目的:探讨miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血(ICH)大鼠神经元铁死亡的机制。方法:使用大鼠神经元细胞为研究对象,采用氧合血红蛋白(oxyHb)刺激神经元细胞构建ICH体外细胞模型,分别将miR-152-3p inhibitor和(或)PIK3CA抑制剂分别处理细胞,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,RT-qPCR、Western blot检测相关基因和蛋白表达情况;并用细胞免疫荧光观察Nrf2蛋白的入核率;用双荧光素酶靶标实验验证miR-152-3p与PIK3CA的关系。结果:将miR-152-3p inhibitor转染的细胞构建ICH细胞模型后,细胞凋亡率明显降低(P<0.01);SLC7A11、GPx4、PIK3CA、Nrf2蛋白表达水平以及p-AKT/AKT比率显著升高而GSK-3β蛋白表达水平显著降低(P<0.01);同时,Nrf2蛋白入核量也显著升高(P<0.01);而此作用在使用PIK3CA抑制剂干预后,miR-152-3p inhibitor的改善效果消失;荧光素酶靶标实验证实,miR-152-3p可靶向调控PIK3CA。结论:miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进ICH大鼠神经元铁死亡。

宫腔镜息肉电切术后miR-152及VEGF水平与复发的相关性

目的探讨宫腔镜息肉电切术后miR-152及血管内皮生长因子(VEGF)水平与复发的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2022年12月到本院行宫腔镜息肉电切术的130例患者作为纳入对象,根据术后1年内息肉是否复发,分为复发组(n=26)及未复发组(n=104)。记录并比较两组患者基线资料、miR-152、VEGF、性激素及炎症反应程度,采用Spearman法进行相关性分析,并采用Logistic多因素分析影响复发的相关因素。结果复发组miR-152水平低于未复发组,VEGF及白细胞介素-6(IL-6)水平高于未复发组(P<0.05)。miR-152与复发情况呈负相关(r=-0.381,P<0.05),VEGF与复发情况呈正相关(r=0.388,P<0.05)。复发组促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平均高于未复发组(P<0.05)。Logistic分析结果得出,miR-152水平偏小,息肉直径、VEGF、IL-6及E2水平偏高为影响患者术后复发的相关因素。结论miR-152及VEGF水平与宫腔镜息肉电切术后复发具有密切关系,并且发现息肉直径、IL-6及E2水平偏高同样将增加患者术后复发风险。

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制。方法采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键调控因子β-catenin及TCF4蛋白的表达;在转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics基础上给予Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl处理后,Western blot法检测MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,Transwell小室实验检测MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力;MTT实验检测激活Wnt/β-catenin信号通路对MCF-7/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响。结果TCF43′UTR区域存在能够与miR-7-5p及miR-152-3p互补的结合位点;转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后可使TCF4野生型(TCF4-WT)报告基因载体的荧光素酶活性较NC组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后各组紫杉醇耐药MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),且两者共同转染后MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平较miR-7-5p组或miR-152-3p组进一步降低(P<0.05)。Western blot结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和vimentin蛋白表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。Transwell小室结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05)。MTT结果显示,不同浓度紫杉醇作用下,miR-7-5p+LiCl组细胞增殖活力较miR-7-5p组明显升高;同时miR-152-3p+LiCl组和miR-7-5p/152-3p+LiCl组细胞的增殖活力较NC组均明显升高(P<0.05)。结论TCF4是miR-7-5p和miR-152-3p的共同靶标。miR-7-5p和miR-152-3p可共同抑制MCF-7/TAX细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化。

miR-152在IL-6诱导宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭中的作用及其机制

目的:探讨miR-152在IL-6诱导宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭中的作用及其机制。方法:以0、0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后,分别采用CCK-8法、Transwell法检测细胞的增殖和侵袭能力,RT-PCR检测细胞中miR-152的表达,Western blot检测WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-152和WNT1的靶向关系。脂质体介导转染miR-152模拟物后,RT-PCR检测miR-152的表达,CCK-8、Transwell和Western blot检测miR-152对IL-6处理的Hela细胞增殖、侵袭和WNT/β-catenin信号通路的影响。结果:与对照(0 ng/ml)相比,0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后增殖和侵袭能力增强以及WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9蛋白的表达水平均明显升高,而miR-152表达明显降低(P<0.05),且呈IL-6浓度依赖性。双荧光素酶报告基因实验证实WNT1是miR-152的靶基因。成功上调miR-152表达可逆转IL-6对Hela细胞增殖和侵袭的促进及对WNT/β-catenin信号通路的调控作用。结论:miR-152参与IL-6诱导的宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与靶向调控WNT/β-catenin信号通路有关。

前列腺癌患者血清miR-146a与miR-152的表达水平及临床意义

目的:分析前列腺癌患者血清miR-146a与miR-152的表达水平及临床意义。方法:以2009年1月至2013年4月在我院泌尿外科诊治的前列腺癌、良性前列腺增生患者及健康体检志愿者各46例为研究对象,分析各组患者血清miR-146a与miR-152的表达水平及与临床病理参数之间的关系。结果:miR-146a在前列腺癌患者血清中的表达水平显著高于良性前列腺增生及正常组血清,且前列腺良性增生组血清中miR-146a的表达量亦较正常组高,差异均具有统计学意义(P<0.05);miR-152在前列腺癌患者较良性前列腺增生及正常组血清显著偏低(P<0.05),但在良性前列腺增生和正常组之间无统计学差异(P>0.05);血清miR-146a在不同病理分期、临床分期、有无骨转移及血清t PSA有关(P<0.05),与年龄无关(P>0.05);而miR-152与不同病理分期、临床分期、有无骨转移有关(P<0.05),与血清t PSA水平无相关性(P>0.05),与年龄无显著相关性(P>0.05)。结论:miR-146a与miR-152在前列腺癌患者血清中的表达水平发生了显著改变,为用于前列腺癌的早期诊断及病程的判断提供了相关实验依据。

姜黄素通过调控miR-152对甲状腺癌细胞TPC-1增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨姜黄素对甲状腺癌细胞TPC-1增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:将体外培养的TPC-1细胞,分为NC组(细胞常规培养)、低剂量组(25μmol/L姜黄素作用细胞24 h)、高剂量组(50μmol/L姜黄素作用细胞24 h)、antimiR-152组(转染miR-152抑制剂)、anti-miR-NC组(转染抑制剂阴性对照)、高剂量+anti-miR-NC组(50μmol/L姜黄素作用于转染抑制剂阴性对照的细胞24 h)和高剂量+anti-miR-152组(50μmol/L姜黄素作用于转染miR-152抑制剂的细胞24 h),细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blotting检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-caspases-3)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-152表达。结果:与NC组比较,低剂量组和高剂量组TPC-1细胞OD值、迁移和侵袭数及CyclinD1、MMP2和MMP9的蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、p21、Cleaved-caspase-3和Bax的蛋白及miR-152表达升高(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-152组TPC-1细胞OD值、迁移和侵袭数及CyclinD1、MMP2和MMP9的蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率及p21、Cleaved-caspase-3和Bax的蛋白表达降低(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-152组TPC-1细胞OD值、迁移和侵袭数及CyclinD1、MMP2和MMP9的蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率及p21、Cleaved-caspase-3和Bax的蛋白表达降低(P<0.05)。结论:姜黄素可上调miR-152表达抑制甲状腺癌细胞TPC-1增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。

miR-152靶向Mirk/Dyrk1B调控人卵巢癌干细胞紫杉醇敏感性的研究

目的探讨miR-152对人卵巢癌干细胞球紫杉醇敏感性的影响及可能的机制。方法分离培养人卵巢癌干细胞球,构建miR-152的差异表达体系,用CCK-8法检测紫杉醇作用下卵巢癌干细胞存活率;用荧光素酶报告基因系统鉴定miR-152与Mirk/Dyrk1B的靶向调控关系;蛋白印迹检测改变miR-152表达水平对Mirk/Dyrk1B及耐药相关蛋白的影响。结果过表达miR-152或降低Mirk/Dyrk1B表达水平可增强人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。miR-152能够特异性结合Mirk/Dyrk1B 3’-UTR区域。miR-152与Mirk/Dyrk1B差异表达影响人卵巢癌干细胞球耐药相关蛋白的表达水平。结论 miR-152可能通过靶向调节Mirk/Dyrk1B影响人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。

miR-152-3p靶向IGF1基因对高糖诱导的ARPE-19细胞活性和凋亡的影响

目的:探究microRNA-152-3p(miR-152-3p)靶向胰岛素样生长因子1(IGF1)基因对高糖诱导的视网膜色素上皮ARPE-19细胞活性和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:高糖诱导ARPE-19细胞并转染miR-152-3p mimics,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中miR-152-3p水平,蛋白印迹(Western blot)法检测细胞中IGF1和VEGF表达水平,双荧光素酶报告基因检测IGF1和miR-152-3p靶向结合关系。结果:高糖能够降低ARPE-19细胞活性,提高细胞凋亡率,抑制细胞中miR-152-3p的表达,提高IGF1和VEGF的表达;而过表达miR-152-3p能够回调高糖诱导的细胞活性抑制及凋亡增加,抑制IGF1和VEGF的表达。双荧光素酶报告基因实验验证了IGF1是miR-152-3p的靶基因。结论:miR-152-3p可通过靶向IGF1基因调节VEGF的表达抑制高糖诱导的ARPE-19细胞活性抑制和凋亡增加。

miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及分子机制研究

目的:探究miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及其分子机制。方法:采用顺铂处理体外培养的A549细胞,检测细胞内miR-152-3p、SOS1表达水平的变化;采用荧光素酶活性检测法分析miR-152-3p与SOS1的调控关系。A549细胞转染miR-152-3p慢病毒过表达载体、SOS1慢病毒过表达载体或慢病毒空载体,采用顺铂处理转染的细胞,比较miR-152-3p过表达或SOS1过表达对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及迁移的影响。结果:与正常培养的A549细胞相比,顺铂处理的A549细胞内miR-152-3p表达水平显著降低,而SOS1表达水平显著升高(P<0.05);生物信息学分析显示SOS1是miR-152-3p的一个潜在靶基因,而荧光素酶活性检测法分析显示miR-152-3p具有负调控SOS1的作用。与转染空载体的A549细胞相比,miR-152-3p过表达显著抑制A549细胞增殖及迁移、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-152-3p过表达的A549细胞内SOS1表达水平显著低于转染空载体的细胞(P<0.05);与单独转染miR-152-3p过表达载体的细胞相比,同时转染miR-152-3p过表达载体和SOS1慢病毒过表达载体的A549细胞增殖、迁移增强,且细胞凋亡受到显著抑制(P<0.05)。结论:miR-152-3p通过抑制SOS1表达增强A549细胞对顺铂的敏感性,继而抑制A549细胞增殖、迁移,阻滞细胞周期以及促进A549细胞凋亡。

SLE患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和靶基因dnmt1的表达及其临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和其靶基因dnmt1的表达水平在发病机制中的作用以及与SLE实验室相关指标、临床疾病活动度的之间的关系。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)方法检测74例SLE患者和44例健康者的PBMCs中miR-148b、miR-152、dnmt1的表达水平,统计学分析其与SLE疾病活动度及SLE相关检验指标的关系。结果 miR-148b、miR-152在SLE患者PBMCs中的表达水平显著高于健康对照(P<0.05),dnmt1在SLE患者PBMCs中的表达水平显著低于健康对照(P<0.05)。除miR-148b在低活动组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)外,miR-148b、miR-152和dnmt1在其他各组中的表达差异均有统计学意义。miR-152与ESR正相关(r=0.443,P=0.027);dnmt1与ANA抗体(r=-0.576,P=0.001)及SLEDAI评分均为负相关(r=-0.408,P=0.038)。结论 miR-148b、miR-152和dnmt1在SLE的发病机制中扮演着重要角色,可能作为疾病活动的参考指标,有助于指导疾病治疗和预后评估,并为SLE的治疗带来更多靶点。

miR-152通过靶向下调AGTR1抑制人肝癌细胞上皮间质转化及肾素-血管紧张素系统

目的探讨微小RNA-152(miR-152)靶向血管紧张素Ⅱ1型受体(AGTR1)对肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)及肾素-血管紧张素系统(RAS)的影响。方法将培养的HCCLM3细胞分为未转染组(未处理)、阴性对照组(转染阴性对照序列)和miR-152组(转染miR-152模拟物)。采用实时荧光定量PCR检测miR-152和血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、AGTR1 mRNA表达,Transwell^(TM)小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot法检测细胞波形蛋白(vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和AGTR1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-152和AGTR1的靶向关系。结果与未转染组或阴性对照组相比,miR-152组细胞miR-152表达水平和E-cadherin蛋白表达水平明显升高,而ACE、AngⅡ、AGTR1 mRNA表达水平和侵袭细胞数、迁移细胞数以及vimentin、N-cadherin、AGTR1蛋白表达水平均明显降低;双荧光素酶报告基因实验检测结果证实miR-152可与AGTR1靶向结合。结论miR-152可能通过靶向下调AGTR1表达抑制肝癌HCCLM3细胞的EMT及RAS。

LncRNA KIF9-AS1靶向miR-152-3p调控肺癌细胞的顺铂敏感性

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)驱动蛋白家族成员9反义RNA1(KIF9-AS1)对肺癌细胞的顺铂(DDP)敏感性的影响和作用机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(western blot)检测检测A549、A549/DDP中KIF9-AS1、miR-152-3p和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达水平。将KIF9-AS1小干扰RNA、miR-152-3p模拟物分别转染A549/DDP细胞,流式细胞术、Western blot分别检测下调KIF9-AS1或上调miR-152-3p对A549/DDP细胞凋亡和MRP1、细胞周期素D1(CyclinD1)和裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力和A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)值。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定KIF9-AS1对miR-152-3p的靶向调控作用。结果与A549细胞比较,A549/DDP细胞中KIF9-AS1、MRP1蛋白表达显著升高,miR-152-3p表达显著降低(P<0.05)。下调KIF9-AS1表达或上调miR-152-3p表达后,A549/DDP细胞活力、CyclinD1蛋白表达显著降低,凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MRP1蛋白表达和IC50显著降低(P<0.05)。KIF9-AS1靶向负调控miR-152-3p表达。下调miR-152-3p表达可逆转下调KIF9-AS1对A549/DDP细胞活力、凋亡率、CyclinD1、Cleaved-caspase-3和MRP1蛋白表达以及IC50的影响(P<0.05)。结论下调KIF9-AS1表达可显著抑制A549/DDP细胞的增殖,促进细胞凋亡,增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制与靶向调控miR-152-3p表达有关。

miR-152在非小细胞肺癌患者血清中的表达及临床意义

目的 通过检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中microRNA-152（miR-152）的水平,探讨其与NSCLC的关系。方法 采用Real time-PCR法检测61例NSCLC患者和80例健康对照者血清miR-152的表达水平,并分析其与临床病理指标间的关系。结果 NSCLC组血清miR-152的表达水平显著降低（P〈0.01）。且其表达量与患者吸烟史和TNM分期有关,有吸烟史的NSCLC晚期的患者表达更低（P〈0.05）,而在不同年龄、性别、组织学类型、肿瘤分化间差异无统计学意义（P〉0.05）。根据miR-152的表达水平绘制ROC曲线,曲线下面积为0.820（95%CI=0.752~0.889）,临界值取0.48时,灵敏度和特异度分别为63.80%和90.20%。结论 NSCLC患者血清中miR-152表达低,且与肿瘤分化程度相关,miR-152可能作为NSCLC诊断的特异肿瘤标志物。

miR-152对HLA-G的作用靶点预测与验证

目的:预测miR-152分子对HLA-G的作用靶点并进行实验验证。方法:采用PITA软件分析miR-152与HLA-G的相互作用位点,构建含有该作用位点的HLA-G 3'UTR真核表达质粒pMIR-UTR。转染实验分为3组:pMIR-UTR与pre-miR-152共转染JEG-3滋养细胞(实验组),仅转染pMIR-UTR质粒(空白对照),共转染pMIR-UTR与pre-miR-control分子(阴性对照),所有细胞均转染pMIR-β-gal质粒以标准化实验背景,转染48h后进行荧光素酶检测。结果:JEG-3细胞中HLA-G的3'UTR存在与miR-152的种子序列完全互补的结构。荧光素酶报告系统结果显示:与空白对照组和阴性对照组相比,转染premiR-152的实验组其荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。结论:miR-152可以通过作用于HLA-G的3'UTR区从而抑制HLA-G的表达。

miR-152-3p对血管平滑肌细胞的作用及其机制研究

目的:研究miR-152-3p对血管平滑肌细胞(VSMCs)的作用及机制。方法:使用ox-LDL刺激血管平滑肌细胞,用ApoE基因敲除小鼠建立动脉粥样硬化动物模型。使用qRT-PCR检测miR-152-3p和转化生长因子-B2(TGFB2 Mrna)表达水平。分别使用CCK-8实验、transwell实验和TUNEL实验检测VSMCs增殖、迁移和凋亡。通过生物信息分析预测miR-152-3p的下游靶点。MiR-152-3p和TGFB2之间的相互作用通过双荧光素酶实验、qRT-PCR和Western blot进行验证。结果:在动脉粥样硬化小鼠主动脉平滑肌细胞和受到ox-LDL处理的VSMCs中miR-152-3p表达水平显著下调,并表现出浓度和时间依赖特性。过表达miR-152-3p显著抑制了VSMCs的增殖和迁移,诱导了细胞凋亡。从机制上来看,miR-152-3p通过靶向作用于TGFB2发挥作用。结论:miR-152-3p通过靶向抑制TGFB2抑制VSMCs的异常增殖和迁移。