miR-19a在食管鳞癌组织及细胞中的功能机制研究

目的探讨miR-19a在食管鳞癌组织及细胞中的功能机制。方法收集30对新鲜食管鳞癌患者癌组织及其癌旁正常组织,根据病理分化程度及是否有淋巴结转移分别分为高-中分化组和中-低分化组,淋巴结转移组和未转移组,实时荧光定量(qRT-PCR)检测miR-19a的表达。在细胞水平上,干扰和过表达miR-19a后,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、细胞划痕、transwell试验检测miR-19a对食管鳞癌细胞系Eca109的增殖、迁移和侵袭的影响;流式细胞术检测转染miR-19a后对食管鳞癌细胞系Eca109周期和凋亡的影响。结果组织水平上,miR-19a在食管鳞癌组织中表达量(11.07±12.08),明显高于与其对应的癌旁组织(1.36±1.03),差异具有统计学意义。miR-19a在中-低分化组(6.92±3.61)和转移组(6.50±4.21)中的表达量也明显高于与其对应的高-中分化组(2.92±2.84)和未转移组(2.55±2.06),差异具有统计学意义。细胞水平上,在食管鳞癌Eca109细胞中,转染miR-19a Mimics促进了食管鳞癌细胞系Eca109的增殖、迁移和侵袭,流式细胞术结果显示转染miR-19a Mimics后促进食管鳞癌细胞进入S期,抑制细胞凋亡,而转染miR-19a Inhibitor抑制了食管鳞癌细胞系Eca109的增殖、迁移和侵袭,并将细胞阻滞在G2期,促进了细胞凋亡。结论miR-19a在食管鳞癌组织中高表达,并与分化程度和转移相关,促进了食管鳞癌细胞恶性表型的改变,有可能作为食管鳞癌临床诊治及精准诊疗的候选分子靶点。

彩色多普勒超声与miR-19a和miR-210在颈动脉狭窄中的应用价值

目的:分析彩色多普勒超声与微小核糖核酸(miRNA)-19a(miR-19a和miR-210)在颈动脉狭窄中的应用价值。方法:选取2020年10月至2022年10月在沧州市人民医院诊治的102例颈动脉狭窄患者纳入病例组,另选取同期在医院体检需行彩色多普勒超声检查的102名健康体检者纳入健康对照组。病例组均在入院1周内行彩色多普勒超声检查和数字减影血管造影(DSA)检查,两组均行血清指标检测。比较两组miR-19a、miR-210,以及病例组不同狭窄程度miR-19a、miR-210,分析彩色多普勒超声与miR-19a、miR-210及其联合对颈动脉狭窄的诊断价值。结果:病例组102例患者经彩色多普查超声颈总动脉检测,正常15例,轻度狭窄15例,中度狭窄21例,重度狭窄33例,完全闭塞18例。病例组miR-19a明显高于健康对照组,miR-210明显较低于对照组,差异有统计学意义(t=10.755、-5.903,P<0.05)。病例组不同狭窄程度miR-19a比较:轻度狭窄<中度狭窄<重度狭窄<完全闭塞,miR-210比较:轻度狭窄>中度狭窄>重度狭窄>完全闭塞,差异均有统计学意义(F=160.399、147.462,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,彩色多普勒超声、miR-19a及miR-210联合诊断颈动脉狭窄的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.892、0.842、0.729和0.978,联合诊断的灵敏度为97.1%,特异度为95.1%。结论:彩色多普勒超声与miR-19a、miR-210联合对颈动脉狭窄具有较高的诊断价值。

miR-19a和miR-19b在非小细胞肺癌中的表达

目的通过检测非小细胞肺癌患者癌组织和血清中miR-19a、miR-19b的表达水平,探讨其与临床病理参数的关系和作为肿瘤分子标志物的可能性。方法采用实时荧光定量PCR技术检测正常人和非小细胞肺癌患者血清,以及非小细胞肺癌组织和癌旁组织中miR-19a、miR-19b的表达,分析miR-19a、miR-19b的表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系。采用ROC曲线分析miR-19a、miR-19b对非小细胞肺癌的诊断价值。结果 miR-19a、miR-19b在癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.05);miR-19a、miR-19b在NSCLC血清中的浓度显著高于对照组。miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1,特异度94.0;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4,特异度94.0。结论非小细胞肺癌患者癌组织和血清miR-19a、miR-19b高表达,miR-19a、miR-19b有望作为NSCLC诊断及预后评价的检测指标。

miR-19a-3p靶向细胞黏附分子2阻断AKT通路抑制肾癌细胞786-O的增殖和迁移

目的:探讨肾癌组织高表达的miR-19a-3p靶向调控细胞黏附分子2(cell adhesion molecule 2,CADM2)并通过AKT信号通路影响肾癌细胞增殖和迁移的机制。方法:收集2012年4月至2017年11月苏州大学附属第一医院肾内科收治的42例资料完整的肾癌患者手术切除的肾癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测肾癌组织和786-O等4种肾癌细胞系中mi R-19a-3p的表达水平,CCK-8、Transwell和免疫荧光法检测miR-19a-3p敲减对肾癌786-O细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-19a-3p与CADM2的靶向关系。采用Wb检测miR-19a-3p通过CADM2对AKT信号通路的调控作用。结果:miR-19a-3p在肾癌组织及细胞系中均高表达(均P<0.01)。敲减miR-19a-3p可显著抑制786-O细胞增殖、迁移和上皮间质转化,且miR-19a-3p靶向作用CADM2并下调其表达水平(P<0.05或P<0.01)。敲减miR-19a-3p通过靶向上调CADM2并阻断AKT信号通路进而显著抑制786-O细胞增殖、迁移和上皮间质转化(均P<0.05或P<0.01),从而缓解肾癌发生发展。结论:肾癌组织中miR-19a-3p高表达,敲减miR-19a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,其机制可能是通过miR-19a-3p/CADM2/AKT分子轴起作用。

川续断总皂苷调节miR-19a对大鼠骨关节炎软骨细胞SOX9/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨川续断总皂苷调节miR-19a对大鼠骨关节炎软骨细胞SOX9/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:120只SD大鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、地塞米松组(30 mg·kg-1)、川续断总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg-1),每组20只。除正常对照组外,其余各组制备大鼠膝关节骨性关节炎模型,地塞米松组、川续断总皂苷各剂量组于造模成功第1天开始给予相应剂量药物灌胃(灌胃体积1.0 ml/100g),持续给药4周,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。给药结束后,进行大鼠关节炎症积分评分,测定机械痛阈(PWT)及热刺激潜伏期(PWTL),实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及Western-Blot法测定膝关节软骨细胞miR-19a基因及SOX9、NF-κB基因和蛋白水平。结果:与正常对照组比较,模型组PWTL、PWT评分、miR-19a mRNA表达水平显著降低,关节炎症积分、SOX9、NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、川续断总皂苷各剂量组PWTL、PWT评分、miR-19a mRNA表达水平显著升高,关节炎症积分、SOX9、NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且川续断总皂苷组给药剂量与各指标变化呈正相关(P<0.05);川续断总皂苷组低、中剂量组与地塞米松组比较,各指标差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组关节软骨结构完整,未见炎症细胞浸润;模型组软骨层明显增厚,软骨细胞疏松紊乱,大量炎症细胞浸润及软骨成纤维细胞增生;地塞米松组及川续断总皂苷高剂量组关节软骨结构较为完整,纤维组织增生、炎症细胞浸润及软骨细胞坏死均减少;川续断总皂苷低、中剂量组具有少量炎症细胞浸润,但软骨结构疏松紊乱,剂量依赖效应明显。结论:川续断总皂苷能明显减轻骨关节炎软骨损伤,减轻骨关节炎软骨炎症反应;其机制与川续断总皂苷可上调miR-19a的表达进而激活SOX9 mRNA和蛋白表达,抑制NF-κB mRNA和蛋白表达有关。

miR-19a对溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨miR-19a对溃疡性结肠炎的作用机制。方法通过生物信息学分析预测miR-19a可能的靶基因,通过免疫组化及Western blotting技术检测靶基因在溃疡性结肠炎小鼠中表达的变化,并进一步通过绿色荧光蛋白报告载体实验对靶基因进行鉴定。结果生物信息学分析预测miR-19a可能的靶基因是TNF-α,免疫组化及Western blotting显示溃疡性结肠炎小鼠肠道组织TNF-α表达增加,miR-19a可抑制TNF-α-3'UTR-WT报告基因活性,而变异型TNF-α-3'UTR-mut报告基因活性不能被抑制。结论 miR-19a的靶基因为TNF-α,其结合位点为TNF-α3'UTR,miR-19a可能在肠道通过直接调控TNF-α而发挥作用。

外周血miR-19a和miR-19b的检测在胃癌诊断中的临床意义

目的:探讨血清miR-19a和miR-19b诊断胃癌的价值及其与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)技术检测61例正常人和61例胃癌患者血清中miR-19a和miR-19b的表达量,分析其表达与胃癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断胃癌的价值。结果:胃癌患者血清miR-19a和miR-19b相对表达水平均高于正常对照组(P<0.05),其表达水平与临床分期及淋巴结有无转移显著相关(P<0.05),而与性别、年龄及吸烟史无相关性(P>0.05);miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1%,特异度94.0%;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4%,特异度94.0%。结论:血清中miR-19a和miR-19b可作为一种非损伤性诊断方法,辅助胃癌诊断。

非小细胞肺癌中miR-19a和miR-19b的表达及临床意义

目的:分析miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:非小细胞肺癌手术标本61例及其癌旁正常组织,提取总RNA,采用实时定量PCR方法检测miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌及其癌旁正常组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果:miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌组织中的表达高于对应的癌旁正常肺组织,其表达与临床分期、病理类型及淋巴结有无转移相关(P<0.05)。而在不同年龄、性别和吸烟史患者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-19a、miR-19b高表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分型及有无淋巴结转移密切相关,miR-19a、miR-19b有可能成为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物之一。

miR-19a对慢性压迫性损伤大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制

目的观察miR-19a对慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经病理性疼痛的作用,并探讨其潜在机制。方法 75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组,行假手术;CCI组,坐骨神经结扎法构建CCI大鼠模型;CCI+inhibitor组,CCI大鼠鞘内注射miR-19a inhibitor。于术前当天(0 d)和术后3、7、14、21 d观察机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热刺激反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)的变化。采用RT-qPCR检测腰椎脊髓中促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA及JAK2和STAT3表达的变化,Western blot检测SOCS3蛋白水平的表达,荧光素酶报告基因技术验证miR-19a的靶基因。结果与假手术组比较,CCI组大鼠脊髓的miR-19a表达显著上升(P<0.05),MWT显著降低,TWL显著缩短(P<0.05)。与CCI组比较,CCI+inhibitor组MWT显著升高,TWL显著延长(P<0.05)。RT-qPCR检测结果表明,CCI可显著促进促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1βm RNA的表达;而与CCI组比较,CCI+inhibitor组IL-6、TNF-α、IL-1βm RNA表达水平均显著降低(P<0.05)。另一方面,与假手术组比较,CCI组大鼠术后脊髓中JAK2和STAT3 m RNA水平明显增加;与CCI组比较,CCI+inhibitor组术后脊髓中JAK2和STAT3的表达显著降低(P<0.01)。荧光素酶报告基因检测结果表明JAK2/STAT3上游的负调控因子SOCS3是miR-19a的靶基因。Western blot检测结果表明CCI组大鼠脊髓中SOCS3水平较假手术组升高,且SOCS3水平在CCI术后第7天达到最高,而后呈下降趋势;与CCI组比较,CCI+inhibitor组SOCS3表达明显上升(P<0.05)。结论 miR-19a inhibitor能缓解CCI大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏,该作用与SOCS3介导的JAK2/STAT3通路有关。

血清中miR-19a和miR-19b定量检测非侵入性诊断非小细胞肺癌的意义

目的探讨miR-19a、miR-19b诊断非小细胞肺癌的价值及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测50例正常人和61例非小细胞肺癌患者血清中miR-19a、miR-19b的表达量,分析miR-19a、miR-19b的表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断非小细胞肺癌的价值。结果非小细胞肺癌患者miR-19a、miR-19b相对表达水平高于正常对照组(P<0.05),其表达与临床分期、病理类型及淋巴结有无转移显著相关(P<0.05),而与性别、年龄及吸烟史无相关性(P>0.05);miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1%,特异度94.0%;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4%,特异度94.0%。结论血清中miR-19a、miR-19b测定的诊断性能较高,作为非小细胞肺癌的一种非损伤性诊断方法具有良好的应用前景。

被α-synuclein激活的小胶质细胞通过外泌体转运miR-19a-3p抑制神经细胞自噬

【目的】研究被过表达α-synuclein的SH-SY5Y细胞外泌体刺激后的小胶质细胞重新分泌的外泌体(SNCA-HM Exo)的miRNAs成分变化,及其对神经细胞自噬的影响。【方法】收集小胶质细胞外泌体进行miRNAs芯片分析和PCR检测,筛选出差异表达的miRNAs,对其靶基因进行KEGG及GO分析,筛选出与PI3K/Akt/信号通路相关的miRNAs。将SH-SY5Y细胞分为四组,分别为Con-HM Exo组,Con-HM Exo+miR-19a mimic组,SNCA-HM Exo组以及SNCA-HM Exo+miR-19a-3p inhibitor组,采用Western Blot进行验证试验。【结果】芯片分析和PCR共筛选出15个差异表达的miRNAs。KEGG及GO分析发现,其靶基因富集分值最高的是PI3K/Akt信号通路,其中miR-19a-3p调控PI3K/Akt信号通路的靶基因包括PTEN等。验证试验发现,miR-19a模拟物组及SNCA-HM Exo组与对照组比较PTEN、LC3Ⅱ/Ⅰ下降,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、P62升高(P<0.05),而miR-19a抑制剂可逆转这一作用(P<0.05)。【结论】SNCA-HM Exo可通过miR-19a-3p调控PTEN,激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而抑制神经细胞自噬。

miR-19a-3p通过靶向PIK3CB参与调控雌激素受体阳性乳腺癌化疗耐药的相关研究

目的:研究miR-19a-3p在雌激素受体(ER)阳性乳腺癌化疗耐药中的作用及可能的调控机制。方法:用10μmol/L顺铂处理ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感细胞株,MTT法检测细胞活性;RNA测序分析ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感细胞株中表达差异的microRNA;实时荧光定量PCR验证miR-19a-3p在ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感株中的表达差异;合成miR-19a-3p类似物和抑制物,分别转染ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感株,检测耐药细胞株对顺铂耐药的药物作用浓度是否发生改变;通过Starbase v2.0调取TCGA数据分析预测miR-19a-3p的靶标基因及相互调控关系;实时荧光定量PCR进一步验证miR-19a-3p与靶标基因在ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感株中的表达。结果:顺铂处理后不影响ER阳性乳腺癌耐药细胞株的细胞活性;小RNA测序发现miR-19a-3p在ER阳性乳腺癌耐药细胞株中低表达,qPCR进一步确认miR-19a-3p在ER阳性乳腺癌耐药细胞株中的表达量相比于敏感株较低;miR-19a-3p过表达促进ER阳性乳腺癌耐药株的顺铂耐药作用浓度下调,而miR-19a-3p表达被抑制后会上调ER乳腺癌敏感细胞株的顺铂敏感作用浓度;通过Starbase v2.0预测表明miR-19a-3p负调控PIK3CB,qPCR及Western印迹证实miR-19a-3p过表达抑制PIK3CB的表达。结论:miR-19a-3p通过抑制PIK3CB的表达,负调控ER阳性乳腺癌化疗耐药,增强ER阳性乳腺癌细胞对顺铂化疗的敏感性。

miR-19a在肝癌组织中高表达对肝癌HepG2细胞上皮-间质样转化的影响

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-19a在肝癌组织中的表达及miR-19a对肝癌HepG2细胞上皮-间质样转化(EMT)转化的影响。方法应用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantificational real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR)方法检测了25例肝癌及其相应癌旁组织中miR-19a的表达。筛选miR-19a低表达的肝癌细胞并将miR-19a模拟物(mimic)或其阴性对照(miR-negative control,miR-NC)转染至HepG2细胞后,应用qRT-PCR检测HepG2细胞中miR-19a的表达水平,MTT和Transwell小室法分别检测细胞的增殖能力和迁移能力。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测转染miR-19a-mimic后,HepG2细胞中E-cad、N-cad和Vimentin mRNA及其蛋白的表达水平。结果肝癌组织中miR-19a的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)。miR-19a-mimic转染后,HepG2细胞中miR-19a的表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01),细胞的增殖能力及迁移能力均明显高于阴性对照组(P<0.01)。miR-19a-mimic转染后,HepG2细胞中E-cad mRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.01),N-cad和Vimentin mRNA及蛋白的表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。结论 miR-19a在肝癌组织中呈高表达状态,促进肝癌HepG2细胞的增殖及迁移能力,诱导肝癌HepG2细胞的EMT。

舒尼替尼耐药肾癌细胞中circTMBIM6表达变化及其与miR-19a-3p/PPARα轴的调控关系

目的观察舒尼替尼耐药的肾癌细胞中circTMBIM6表达变化,并探讨其与miR-19a-3p/PPARα轴的关系。方法取舒尼替尼耐药的肾癌细胞A498、Caci-1、780-O,采用qRT-PCR法检测细胞中TMBIM6表达。采用Star⁃base、Targetscan数据库,分别预测miR-19a-3p与circTMBIM6 mRNA的3'非翻译区(3'UTR)和PPARαmRNA的3'UTR是否存在互补结合。构建包含结合位点的野生型和突变型circTMBIM6 mRNA 3'UTR双荧光报告质粒。将circTMBIM6-WT、circTMBIM6-MUT与miR-19a-3p mimics或miR-NC阴性对照共转染至786-O细胞。同时将PPARα-WT,PPARα-MUT与miR-19a-3p mimics或miR-NC阴性对照共转染至786-O细胞,构建野生型和突变型的PPARαmRNA 3'UTR双荧光报告质粒,检测miR-19a-3p对circTMBIM63'UTR和PPARαmRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性的影响。si-circTMBIM6和si-NC+miR-NC阴性对照共转染至A498、Caci-1、780-O细胞,将3种肾癌细胞分为抑表达组、对照组,分别转染si-circTMBIM6和si-NC+miR-NC,采用qPCR法检测三种细胞中miR-19a-3p表达。将三种细胞分为miR-19a-3p过表达组、miR-19a-3p抑表达组和对照组,分别转染miR-19a-3p mimics、miR-19a-3p inhibitor及si-NC+miR-NC阴性对照,采用qRT-PCR法和Westernblotting法检测PPARαmRNA和蛋白表达。将三种肾癌细胞分成阴性对照组、miR-19a-3p抑制组、circTMBIM6抑制组,分别转染si-NC+miR-NC阴性对照、si-NC+miR-19a-3p inhibitor和si-circTMBIM,采用RT-PCR法和Westernblotting法分别检测PPARαmRNA和蛋白表达,进一步验证circTMBIM6通过miR-19a-3p调控PPARα的表达。采用CCK-8实验检测各组细胞增殖抑制率,观察肾癌细胞舒尼替尼耐药中circTMBIM6与miR-19a-3p/PPARα轴的调控作用。结果与正常肾癌细胞相比,舒尼替尼耐药的肾癌细胞circTMBIM6表达均升高(P均<0.01)。生物信息学分析预测显示,miR-19a-3p分别与circTMBIM6的3'UTR以及PPARαmRNA的3'UTR具有潜在互补结合位点。双荧光素酶报告基因活性检测显示,在circTMBIM6野生型3'UTR中,miR-19a-3p mimics组荧光素酶活性低于miR-NC组(P<0.05),但在circTMBIM6突变型3'UTR中,两组荧光素酶活性无明显变化。在三种肾癌细胞A498、Caci-1、780-O中,si-circTMBIM6组miR-19a-3p表达均高于si-NC+miR-NC组(P均<0.05)。三种细胞中,miR-19a-3p抑制组PPARαmRNA和蛋白表达较阴性对照组升高;circTM⁃BIM6抑制组PPARαmRNA和蛋白表达较阴性对照组降低(P均<0.05)。CCK-8实验显示,circTMBIM6抑制组细胞增殖抑制率低于阴性对照组,miR-19a-3p抑制组细胞增殖抑制率高于阴性对照组(P均<0.05)。结论舒尼替尼耐药的肾癌细胞中circTMBIM6表达升高;circTMBIM6通过海绵吸收miR-19a-3p调控PPARα表达,降低RCC对舒尼替尼的敏感性,导致耐药的发生。

冠心病患者miR-19a表达及与预后关系的研究

目的探究冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血清miR-19a的表达及与预后的关系。方法随机选取2014年1月~2016年6月于西安医学院第二附属医院心内科治疗接受冠状动脉(冠脉)造影患者125例,分为对照组、稳定性冠心病组及急性冠脉综合征组,Real-time PCR测定血清miR-19a表达并记录Gensini评分,定期随访,记录主要心脏不良事件发生情况,研究miR-19a表达水平与Gensini评分及患者主要心脏不良事件发生的关系。结果冠心病组血清miR-19a表达水平升高(P=0.013),急性冠脉综合征组miR-19a表达水平较稳定性冠心病组更高(P=0.026);miR-19a高表达组时,冠心病及急性冠脉综合征组患者Gensini评分更高(P=0.033,0.025),主要心脏不良事件总体发生率及死亡率更高(P=0.041,0.038),急性冠脉综合征组患者发生血管重建率高(P=0.029);miR-19a表达水平与冠心病患者主要心脏不良事件的发生率正相关(r=0.643,P=0.009)。结论冠心病患者血清miR-19a表达明显升高,miR-19a高表达意味着更严重的冠脉狭窄,其表达水平与冠心病患者主要心脏不良事件的发生率正相关。

血清miR-19a与MMP-9表达水平与骨肉瘤临床病理及预后的关系探讨

目的探讨血清miR-19a与基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平与骨肉瘤临床病理及预后的关系。方法选择2016年1月~2017年6月间我院收治的骨肉瘤患者81例作为研究对象,设为骨肉瘤组,同期选取在我院体检的健康人群35例作为对照组。比较两组受试者的血清miR-19a与MMP-9表达水平变化情况,分析骨肉瘤患者血清miR-19a与MMP-9表达水平与临床病理参数的关系,术后随访12个月,比较复发者和未复发者血清miR-19a与MMP-9表达水平变化情况。结果骨肉瘤组患者的血清miR-19a与MMP-9表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-19a与MMP-9表达水平与骨肉瘤患者的年龄、性别、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05);但TNM分期Ⅱb/Ⅲ者高于Ⅱa分期者,远处转移者高于未转移者,术后随访12个月,复发组的血清miR-19a与MMP-9表达水平均高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨肉瘤患者血清miR-19a与MMP-9表达水平明显升高,其可能参与了骨肉瘤的发生发展,术后对其检测在骨肉瘤患者的预后判断中具有一定价值。

miR-19a靶向TP53INP1介导肠癌5-Fu耐药的机制

目的初步探讨miR-19a通过靶向TP53INP1介导结肠癌HCT8细胞对5-Fu的耐药机制。方法利用qRT-PCR检测5-Fu耐药细胞株HCT8/Fu及敏感细胞株HCT8中miR-19a的表达差异;MTT法检测miR-19a对细胞5-Fu药物敏感性的影响;双荧光素酶报告基因系统对miR-19a与TP53INP1的靶基因关系进行鉴定;Western blot检测miR-19a对TP53INP1表达的影响。结果 HCT8/Fu中miR-19a的表达量是HCT8细胞的7.12倍,显著高于敏感HCT8细胞株的表达量(P<0.05);HCT8转染miR-19a mimics后,细胞的半数抑制浓度明显高于转染阴性对照的细胞(P<0.05);TP53INP1是miR-19a的靶基因,能显著降低野生型TP53INP1 3'-UTR荧光素酶活性(P<0.01);转染miR-19a mimics显著降低TP53INP1的表达(P<0.05)。结论 miR-19a可能通过靶向TP53INP1介导肠癌细胞对5-Fu的耐药。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖诱导的人视网膜上皮细胞增殖与凋亡

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖(HG)诱导的人视网膜上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡与氧化应激情况。方法:运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测5、15、45、135mmol/L HG刺激的ARPE-19的细胞存活率。将ARPE-19细胞分为NC组、45mmol/L HG组、si-NC+45mmol/L HG组、si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、miR-NC+45mmol/L HG组、miR-19a-3p mimics+45mmol/L HG组、si-con+45mmol/L HG组、si-TSHZ3+45mmol/LHG组、pcDNA+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、pcDNA-TSHZ3+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组。运用CCK-8检测细胞存活率,qRT-PCR检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-19a-3p和TSHZ3 mRNA表达,Western Blot检测TSHZ3、活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)蛋白质的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平。双荧光素酶活性检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-19a-3p、miR-19a-3p和TSHZ3之间的靶向结合。结果:15、45、135mmol/L HG抑制ARPE-19细胞的存活率,后续选择细胞存活率约50%的HG浓度45mmol/L。45mmol/L HG提高ARPE-19细胞中lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3 mRNA、TSHZ3蛋白表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平,降低miR-19a-3p表达水平、细胞存活率(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3低表达或miR-19a-3p高表达提高HG诱导的ARPE-19细胞的存活率,降低凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p靶向TSHZ3,lncRNA KCNQ1OT13通过miR-19a-3p调控TSHZ3的表达。lncRNA KCNQ1OT1低表达对HG诱导的ARPE-19细胞存活率、凋亡以及氧化应激的影响被TSHZ3过表达所逆转。结论:lncRNA KCNQ1OT13低表达通过miR-19a-3p/TSHZ3,促进HG诱导的ARPE-19,并抑制其凋亡和氧化应激。

miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-19a和miR-19b在骨肉瘤组织及配对瘤旁组织中的表达及其与临床病理特征的相关性。方法:收集32对骨肉瘤和配对的瘤旁组织,运用实时荧光定量PCR(qPCR)检测骨肉瘤组织及其瘤旁组织中miR-19a和miR-19b的表达,分析其与骨肉瘤临床病理特征的相关性及其临床意义。结果:qPCR结果显示骨肉瘤组织中miR-19a和miR-19b的平均表达量较瘤旁组织中均明显上调(P均<0.05)。二者的表达水平呈正相关(r=0.685,P=0.000)。miR-19a和miR-19b的表达与骨肉瘤病理分级之间存在正相关(r=0.478,P=0.027);miR-19a的表达与临床分期呈正相关(r=0.365,P=0.031)且与预后相关。Cox回归多因素分析发现miR-19a可作为骨肉瘤患者预后的影响因子(P=0.037)。结论:miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中表达上调,在骨肉瘤的发生发展中可能发挥重要的作用,其中miR-19a可能作为骨肉瘤独立的预后标志物。

miR-19a通过抑制c-MET的表达逆转HCC827细胞吉非替尼耐药

目的明确miR-19a在调控HCC827细胞吉非替尼耐药中的作用及机制,探索miR-19a作为非小细胞肺癌(NSCLC)患者吉非替尼耐药新靶点的理论依据。方法收集非小细胞肺癌患者15例在吉非替尼耐药前后的外周血,通过Real-time PCR检测其中miR-19a的表达;在吉非替尼敏感的HCC827细胞中降低miR-19a表达,并加入吉非替尼,通过CCK8法检测其对细胞活力的影响;在构建成功的HCC827吉非替尼耐药细胞株(HCC827GR)中过表达miR-19a,并加入吉非替尼,通过CCK8法检测其对细胞活力的影响;在HCC827及HCC827GR细胞中分别降低或过表达miR-19a,通过Western blot检测c-MET蛋白表达水平;在HCC827细胞中同时降低miR-19a和c-MET表达,并加入不同浓度吉非替尼,通过CCK8法检测各组细胞活力。结果在吉非替尼耐药的NSCLC患者外周血中,miR-19a呈明显低表达状态;在HCC827细胞中降低miR-19a表达,吉非替尼对细胞活力的抑制效果明显下降(P<0.01);在HCC827GR细胞中过表达miR-19a,吉非替尼对细胞活力的抑制效果明显增强(P<0.01);在HCC827细胞中降低miR-19a表达,能明显促进c-MET蛋白的表达;相反,在HCC827GR细胞中过表达miR-19a,则明显抑制c-MET蛋白的表达;在HCC827细胞中同时降低miR-19a和c-MET表达,并加入不同浓度的吉非替尼,低表达c-MET能够抵消miR-19a对细胞活力的影响。结论 miR-19a在非小细胞肺癌细胞HCC827吉非替尼耐药中发挥着重要作用,其机制可能是通过抑制c-MET蛋白水平的表达。