miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期患者中的表达水平及与病情的相关性

目的分析miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期(PE)患者血清中的表达,并探讨其临床意义。方法选取2019年3月至2021年3月在南京市妇幼保健院治疗的PE患者103例,分为轻度PE组(57例)和重度PE组(46例),另选取同期正常孕妇50例作为对照组。检测各组孕妇血清miR-21、miR-26a及miR-200a表达水平,分析其与年龄、孕周、BMI、血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局的相关性,并分析血清miR-21、miR-26a及miR-200a对PE的诊断价值。结果重度PE组BMI、舒张压、收缩压以及24h尿蛋白高于轻度PE组及对照组,且差异具有统计学意义(F值分别为4.116、141.063、143.118和342.736,P<0.05)。对照组、轻度PE组及重度PE组孕妇血清中miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平依次升高。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平与血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局发生率呈正相关(r值介于0.446~0.832之间,P<0.001)。经受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析发现,血清miR-21、miR-26a及miR-200a联合诊断PE的曲线下面积(AUC)为0.967,敏感度为98.10%,特异性为92.30%。结论PE患者血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达高于正常孕妇,且与患者的临床指标及不良妊娠结局相关,检测血清miR-21、miR-26a、miR-200a水平对早期诊断PE及评估患者预后具有十分重要的意义。

血清miR-200a-3p与miR-30a-5p表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值

目的分析血清中微小核糖核酸200a-3p(miR-200a-3p)和微小核糖核酸30a-5p(miR-30a-5p)表达在心力衰竭(HF)诊断以及HF患者预后评估中的价值。方法前瞻性选取内蒙古医科大学附属医院2018年4月~2020年4月期间收治的HF患者131例为研究对象(HF组),同时期健康体检志愿者131例为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平;采用Spearman相关分析血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p水平与HF患者病情严重程度的相关性;采用ROC曲线分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p对HF的诊断价值;采用Logistic回归分析HF患者预后的影响因素;采用Kaplan-Meier生存分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者预后的关系。结果与对照组相比,HF组血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);轻度HF、中度HF和重度HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者病情严重程度呈正相关(r_(s)=0.442,r_(s)=0.564,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-200a-3p和miR-30a-5p联合诊断HF较miR-200a-3p和miR-30a-5p单一指标诊断效果更好(P<0.05);Logistic回归分析结果发现,NT-proBNP、LVEF、LVEDD、miR-200a-3p和miR-30a-5p是HF患者预后的影响因素(Waldχ^(2)=4.321~128.193,P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p高表达患者3年生存率低于miR-200a-3p和miR-30a-5p低表达患者(均P<0.05)。结论HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,二者与HF的发生及患者预后相关。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

探寻miR-200a-3p作为结直肠癌的诊断及预后生物标志物的潜在价值

目的:阐明miR-200a-3p及下游靶基因程序性细胞死亡4(programmed cell death 4,PDCD4)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)诊断及预后的潜在价值。方法:从2017年1月至2019年9月在长沙市第一医院接受根治性切除术或姑息性切除术的CRC患者中收集包含120对CRC组织和相应的癌旁正常组织的队列。另1个队列包括50例诊断为CRC的患者;2019年1月至2020年1月从这些患者手术前后收集术前和术后血清样本。RT-qPCR检测CRC组织和细胞系中miR-200a-3p的表达。将靶向miR-200a-3p(si-miR-200a-3p)和siRNAs阴性对照(si-NC),以及miR-200a-3p过表达(miR-200a-3p-OE)和PDCD4过表达(PDCD4)质粒转染CRC细胞。通过CCK-8测定、集落形成和Transwell细胞侵袭测定来确定miR-200a-3p对CRC细胞生长的影响。雌性BALB/c裸鼠随机分为3组:载体组(Vector组)、miR-200a-3p过表达组(miR-200a-3p-OE组)和miR-200a-3p过表达+PDCD4过表达组(miR-200a-3p-OE+PDCD4组)。构建小鼠远处转移模型,监测肺转移的荧光强度,计数肺转移结节的数量。结果:miR-200a-3p在CRC组织和细胞系中上调。miR-200a-3p高表达与肿瘤大小、肿瘤转移和TNM分期显著相关。miR-200a-3p表达可以作为总生存率(overall survival,OS)(HR=2.077,95%CI=1.079~3.998,P=0.029)和无病生存率(disease free survival,DFS)(HR=2.927,95%CI=1.179~7.270,P=0.021)的独立预后生物标志物。功能研究发现miR-200a-3p结合PDCD4的3'-UTR区,并降低PDCD4在CRC细胞中的表达。PDCD4过表达抑制miR-200a-3p过表达对CRC细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭的促进作用。与体外结果一致,在转移的小鼠尾静脉注射模型中,miR-200a-3p-OE+PDCD4组SW480细胞的肺定植、肺转移灶较miR-200a-3p-OE组明显减少(P<0.05)。结论:miR-200a-3p在CRC细胞、组织和血清中表达显著增加,并可以作为诊断和预后的生物标志物。miR-200a-3p过表达通过抑制PDCD4表达促进CRC进展。

结核性脑膜炎患者脑脊液中miR-200a,miR-4652-3p水平表达对疾病严重程度和预后预测价值研究

目的分析结核性脑膜炎(tuberculous meningItis,TBM)患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p表达及其对疾病严重程度和预后的预测价值。方法选择2018年1月~2022年12月于青岛市胸科医院就诊的187例结核性脑膜炎患者,按照病情程度分为Ⅰ期(n=62)、Ⅱ期(n=76)和Ⅲ期(n=49),根据预后情况分为预后良好组(n=131)和预后不良组(n=56)。qRT-PCR法检测脑脊液miR-200a和miR-4652-3水平表达。Spearman法分析miR-200a和miR-4652-3p与临床资料间相关性;ROC曲线分析脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平对结核性脑膜炎患者疾病严重程度及预后的预测价值。多因素Logistic回归分析预后不良影响因素。结果Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a(1.05±0.14,0.91±0.14,0.76±0.13)和miR-4652-3p(0.92±0.11,0.78±0.11,0.65±0.10)表达水平依次降低,差异具有统计学意义(F=61.079,87.203,均P<0.001)。预后良好组患者脑脊液miR-200a(0.95±0.14)和miR-4652-3p(0.82±0.11)表达水平显著高于预后不良组患者(0.84±0.13,0.73±0.10),差异具有统计学意义(t=5.025,5.262,均P<0.05);预后良好患者脑脊液腺苷脱氨酶和TNF-α,IL-23,LTB4,CRP,mRS评分显著低于预后不良患者,差异具有统计学意义(t=5.649,7.721,11.150,9.455,11.314,14.407,均P<0.05)。结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平呈正相关(r=0.405,P<0.001);miR-200a,miR-4652-3p与LTB4,TNF-α,CRP,mRS评分,IL-23,腺苷脱氨酶呈负相关(r=-0.472,-0.466,-0.461,-0.435,-0.422,-0.419;-0.459,-0.531,-0.471,-0.417,-0.513,-0.408,均P<0.05)。miR-200a,miR-4652-3p预测患者疾病严重程度的AUC(95%CI)分别为0.881(0.825~0.923)和0.878(0.822~0.921),二者联合预测的AUC(95%CI)为0.945(0.902~0.973),高于单项检测,差异具有统计学意义(Z=3.008,2.960,all P=0.003)。脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平评估患者预后不良的AUC(95%CI)为0.749(0.681~0.809)和0.756(0.688~0.816),二者联合评估患者预后不良的AUC(95%CI))为0.839(0.778~0.889),高于二者单独检测,差异有统计学意义(Z=2.994,2.697,P=0.003,0.007)。腺苷脱氨酶[OR(95%CI):1.106(1.033~1.185)]、miR-200a[OR(95%CI):0.529(0.369~0.744)]、miR-4652-3p[OR(95%CI):0.471(0.310~0.715)]、CRP[OR(95%CI):4.423(1.459~13.412)]、TNF-α[OR(95%CI):1.196(1.061~1.348)]、IL-23[OR(95%CI):4.809(1.086~3.013)]和LTB4[OR(95%CI):1.327(1.064~1.655)]为结核性脑膜炎患者预后不良的影响因素(均P<0.05)。结论结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p表达下调,与疾病严重程度及预后密切相关,二者联合能较好地预测结核性脑膜炎严重程度及预后,具有一定临床价值。

miR-200a抑制YAP1基因表达对肺癌细胞增殖的影响

目的:研究微小RNA-200a(miR-200a)对肺癌细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。方法:采用Real-time PCR检测15例非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织、人肺癌细胞株(A549、NCI-H520、SK-MES-1)及人正常肺支气管上皮细胞株16HBE中miR-200a的表达水平。用CCK-8法检测miR-200a对A549肺癌细胞增殖活性的影响。通过生物信息学方法预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-200a对靶基因YAP1的调控作用。CCK-8法检测下调靶基因YAP1对A549肺癌细胞株增殖活性的影响。结果:miR-200a在非小细胞肺癌组织和肺癌细胞系中表达明显降低(P<0.01)。上调miR-200a表达后明显抑制A549肺癌细胞的增殖活力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-200a可以直接作用于靶基因YAP1的3'-UTR区域抑制荧光素酶活性(P<0.01),Real-time PCR和Western blot检测显示上调miR-200a的表达能够明显下调A549肺癌细胞YAP1 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01)。CCK-8法显示下调YAP1的表达能够明显抑制A549肺癌细胞的增殖活性(P<0.01)。结论:miR-200a通过靶向作用于YAP1基因来抑制肺癌细胞的增殖,从而在肺癌中发挥抑癌基因的功能。

胃癌组织中miR-200a、miR-200b和miR-429的表达及临床意义

0 引言 胃癌是消化系统常见恶性肿瘤之一，2006年中国肿瘤发病和死亡资料分析显示，无论城市还是农村，胃癌的发病率和死亡率均居恶性肿瘤第二位，已成为我国今后恶性肿瘤防控的重点[1]。目前，胃癌的病因尚不明确，加之滞后的临床表现和诊断，以手术为主、放化疗为辅的综合治疗手段亦未能显著提高患者的5年生存率[2]。所以，探寻胃癌新特异性的分子标志物，为其早期诊断开辟新途径具有重要意义。

miR-200a对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因mRNA表达的影响

旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响。以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a。采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于HEK 293细胞株中进行病毒的包装、扩繁。TCI50法测定病毒滴度。qRT-PCR检测miR-200a及16个乳脂合成相关基因mRNA表达水平。序列分析结果显示,pri-miR-200a包括pre-miR-200a86bp和侧翼序列共297bp。酶切结果证实pAd-pri-miR-200a构建成功。Ad-pri-miR-200a滴度达8×109 PFU.mL-1。实时定量结果表明,Ad-pri-miR-200a(MOI为200)感染奶山羊乳腺上皮细胞72h,miR-200a的表达量较对照高出2.4倍。同时miR-200a的过表达引起10个基因mRNA表达量下调,6个基因mRNA表达量上调。其中脂肪酸从头合成相关基因FASN、脂滴生成相关基因TIP47及脂肪酸运输相关基因FABP4降幅较大,分别下降了0.47、0.89及0.65倍。而TAG生成相关基因DGAT1和脂解相关基因HSL较对照分别增加了0.52和1.49倍。本研究获得的重组腺病毒Ad-pri-miR-200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,同时miR-200a过表达影响乳脂合成相关基因mRNA表达水平。

miR-200a靶向雌孕激素受体抑制子宫内膜癌细胞生长的作用研究

目的:探讨miR-200a对子宫内膜癌细胞雌孕激素受体的靶向作用及生长的影响。方法:选取两种人子宫内膜癌细胞株KLE和Ishikawa,q PCR法检测miR-200a、ESR1和PGR含量,Western blot法检测ER和PR表达。分别在Ishikawa、KLE细胞株中敲除、过表达miR-200a,检测miR-200a对Ishikawa细胞中ESR1和PGR mRNA含量,以及ER和PR表达水平的影响。采用MTT、流式细胞仪、细胞划痕实验和Transwell实验检测miR-200a对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:Ishikawa细胞中miR-200a、ESR1和PGR含量及ER和PR表达水平均高于KLE细胞(P<0.01)。敲除miR-200a后,可降低Ishikawa细胞中ESR1和PGR含量及ER和PR表达水平(P<0.01)。敲除miR-200a后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强,细胞凋亡水平下降,过表达miR-200a则呈相反效应(P<0.01)。给予他莫昔芬和RU-486后,上述效应均被一定程度逆转(P<0.01)。结论:miR-200a可靶向作用于子宫内膜癌细胞雌孕激素受体,进而抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,有效促进细胞的凋亡。

miR-200a在妊娠期糖尿病中的表达及意义

目的探讨miR-200a在妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血及胎盘中的表达及临床意义。方法收集35例GDM患者及35例同期分娩的正常产妇的外周血及胎盘组织,qRT-PCR检测miR-200a在GDM患者外周血及胎盘中的表达,分析miR-200a表达与患者临床参数的关系及新生儿预后的关系。结果 miR-200a在35例GDM患者外周血及胎盘中的表达均高于同时期分娩的正常产妇(P<0.05),而miR-200a在GDM患者外周血及胎盘中的表达差异无统计学意义(P>0.05),并且miR-200a高表达与GDM产妇分娩的新生儿病理性黄疸发生密切相关。结论 miR-200a可能可作为GDM孕妇胎儿预后的血清学标记物。

miR-200a对非小细胞肺癌迁移、侵袭的调控作用及机制研究

目的:研究miR-200a对非小细胞肺癌迁移、侵袭的调控作用及机制。方法:培养肺癌A549细胞并分组,阴性对照(NC)过表达组转染NC的模拟物,miR-200a过表达组转染miR-200a的模拟物,NC抑制组转染NC的抑制物,miR-200a抑制组转染miR-200a的抑制物。采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用transwell检测细胞的侵袭能力,采用Western blotting检测迁移基因N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)、侵袭基因基质金属蛋白酶(MMP)2及MMP9、β-catenin的表达量。结果:与NC过表达组比较,miR-200a过表达组的迁移和侵袭能力明显减弱,N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、β-catenin的表达量明显减少;与NC抑制组比较,miR-200a抑制组的迁移和侵袭能力明显增强,N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、β-catenin的表达量明显增加。结论:miR-200a能够抑制非小细胞肺癌的迁移、侵袭且这一抑制作用与靶向抑制β-catenin有关。

半滑舌鳎miR-200a和miR-200b前体克隆及其免疫应答分析

为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)miR-200a和miR-200b在免疫应答中的作用,采用PCR方法克隆了半滑舌鳎miR-200家族的miR-200a和miR-200b的前体序列,长度分别为82和88 bp;用The mfold Web Server和Clustalx1.83软件对其前体序列进行了二级结构和同源性分析,miR-200a和miR-200b都具有典型的颈环结构,与其他物种具有较高的同源性。qRT-PCR分析结果显示,miR-200a和miR-200b在健康半滑舌鳎13种组织(肝脏、肠、脾脏、头肾、后肾、鳃、血液、脑、皮肤、肌肉、胃、心脏和卵巢)中均有表达,miR-200a在头肾中表达量最高,在血液中表达量最低,miR-200b在肝脏中表达量最高,在肌肉中表达量最低;miR-200a和miR-200b在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染半滑舌鳎后不同时间点的4种免疫相关组织(肝脏、肠、脾脏和头肾)中的表达呈现出先上调后下降的规律,但表达达到峰值的时间点有所不同。miR-200a在肝脏和脾中的表达峰值出现在鳗弧菌感染后6h,在肠和头肾中则是鳗弧菌感染后12h,miR-200b在肠、脾和头肾中均在鳗弧菌感染后12h达到表达高峰;miR-200a和miR-200b在脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)、葡聚糖(WGP)、聚肌胞苷酸(poly I:C)4种病原模拟物刺激后的半滑舌鳎肝脏细胞系中呈现出上调表达趋势,其中Poly I:C刺激半滑舌鳎肝脏细胞系后miR-200a上调表达趋势明显,6h的表达量为0h的9倍,在WGP刺激半滑舌鳎肝脏细胞后miR-200b上调表达趋势明显,2h的表达量为0的9倍。研究结果为揭示miRNA在半滑舌鳎免疫应答中的作用提供了科学依据。

miR-200a与肿瘤关系

miR-200a是miR-200家族的主要成员之一,在多数的肿瘤中表达下调,主要通过调控上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程,对肿瘤的发生和侵袭转移起着关键的作用,其表达与肿瘤患者的预后也有着明显的关系。近年来许多研究致力于miR-200a在肿瘤领域的研究,它的发现为肿瘤发病机制的研究及诊疗、预后提供了新的思路。

miR-200a在儿童急性B淋巴细胞白血病中表达及意义

目的探讨miR-200a在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义。方法收集B细胞ALL患儿45例,以非血液病患儿18例为对照组,采集骨髓标本,qRT-PCR检测各组miR-200a的表达,并分析B细胞ALL患儿中miR-200a的表达与临床指标间的相关性。结果 miR-200a在B淋巴细胞ALL患儿组中的表达为(3.9±1.4)×10-4,低于对照组(25.7±10.3)×10-4,差异有统计学意义(P<0.05)。在≥10岁B淋巴细胞ALL患儿中miR-200a的表达低于<10岁患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。不同治疗阶段和危险度分组miR-200a表达的差异有统计学意义(P<0.05);以治疗第12周以及低危组的表达较高。结论 miR-200a低表达与儿童B细胞ALL的发生发展以及预后密切相关,可作为儿童B细胞ALL预后判断的潜在指标和治疗靶点。

结直肠癌miR-200a与miR-92a表达水平及其与临床病理特征的关系

目的研究miR-200a、miR-92a在结直肠癌中的表达水平及其与患者临床病理特征的关系。方法选取2011年2月~2012年8月在新疆医科大学附属肿瘤医院接受手术治疗的结直肠癌患者60例,采集结直肠癌组织与癌旁组织标本各60例。采用原位分子杂交技术检测上述标本中miR-200a表达阳性率,采用实时荧光定量PCR法检测上述标本中miR-92a表达情况。分析miR-200a及miR-92a表达情况与结直肠癌患者的临床病理特征相关性。随访5年,根据生存状态分为存活组与死亡组,比较两组患者miR-200a、miR-92a表达情况差异。结果结直肠癌组织中miR-200a表达阳性率及miR-92a相对表达明显高于癌旁组织(均P<0.05)。中高分化、TNMⅠ~Ⅱ期结直肠癌患者miR-200a表达阳性率明显低于低分化、TNMⅢ~Ⅳ期的结直肠癌患者,分别为40.00%(18/45)比73.33%(11/15)、58.06%(18/31)比86.21%(25/29),差异均有统计学意义(均P<0.05)。而TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移结直肠癌患者miR-92a相对表达量均明显低于TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移患者(均P<0.05)。随访5年,生存组21例,死亡组39例。存活组miR-200a表达阳性率及miR-92a相对表达量均明显低于死亡组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论结直肠癌组织的miR-200a、miR-92a高表达,与病情严重程度及预后密切相关。

hsa-miR-200a对HEC-1B人子宫内膜腺癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的探讨hsa-miR-200a对人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法应用荧光实时定量PCR(FQ-PCR)法检测hsa-miR-200a在人子宫内膜腺癌细胞HEC-1B中的表达水平;人工合成hsa-miR-200a模拟物、抑制剂,分别转染HEC-1B细胞;采用MTT法、流式细胞仪检测上调及抑制hsa-miR-200a的表达对HEC-1B细胞增殖活性与凋亡的影响;运用生物信息学分析hsa-miR-200a指向的与增殖和凋亡相关的靶基因;Western blot、FQ-PCR检测转染前后靶蛋白及其mRNA的表达水平。结果子宫内膜腺癌细胞HEC-1B表达hsa-miR-200a;FQ-PCR检测hsa-miR-200a模拟物、抑制剂转染HEC-1B细胞成功;MTT法检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞增殖抑制明显;流式细胞仪检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞凋亡增加;生物信息学分析结果表明hsa-miR-200a调控的靶基因是SON、Pdcd4、磷酸酶-张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN);靶蛋白PTEN在转染模拟物组表达下调,抑制剂组中表达上调,且转染前后靶基因mRNA水平无显著变化,而蛋白SON、Pdcd4的表达量没有显著变化。结论 HEC-1B细胞中hsa-miR-200a表达与PTEN蛋白表达呈负相关,表明hsa-miR-200a可能通过调节PTEN蛋白表达水平从而影响HEC-1B细胞的增殖与凋亡。

miR-200a对肾小管上皮细胞转分化的调控作用

目的:探讨miR-200a对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法:体外培养肾小管上皮细胞(HK-2),TGF-β_1(终浓度为10 ng/m L)作用12、24、48 h,采用qPCR检测miR-200a的表达,qPCR和Western Blot检测上皮转分化相关蛋白E-cadherin和ɑ-SMA的mRNA和蛋白表达;用agomir和antagomir分别转染细胞,其中转染agomir后用TGF-β_1诱导肾小管上皮细胞,qPCR、Western Blot和细胞免疫荧光检测E-cadherin和ɑ-SMA的mRNA和蛋白表达情况。结果:在TGF-β_1诱导下miR-200a的表达随着时间逐渐降低(P<0.05),E-cadherin表达呈降低趋势(P<0.05),ɑ-SMA表达逐步上调(P<0.05);agomir使miR-200a表达明显升高(P<0.05),antagomir使miR-200a表达降低(P<0.05);与转染NC-miRNA相比,agomir在mRNA和蛋白水平上调E-cadherin的表达(P<0.05),下调ɑ-SMA的表达(P<0.05);antagomir则抑制E-cadherin的表达(P<0.05),增加ɑ-SMA的表达(P<0.05),细胞免疫荧光表达情况与蛋白水平相符。结论:miR-200a能减弱TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化。

宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达及其意义

目的探讨宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达水平及其对宫颈癌的辅助诊断价值。方法收集55例宫颈癌患者、32例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者、39例子宫肌瘤患者及47例健康对照者血清样本,分别测定hsa-miR-200a-3p的表达水平及糖链抗原125(CA125)和人鳞状细胞癌相关抗原(SCCAg)水平。分析血清hsa-miR-200a-3p的表达水平与临床病理特征、CA125和SCCAg之间的关系。用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价3项指标单独及联合检测对宫颈癌的辅助诊断价值。结果宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量均高于子宫肌瘤患者和健康对照者,差异有统计学意义(P<0.001)。CIN患者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量均高于子宫肌瘤患者和健康对照者,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫肌瘤患者和健康对照者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达水平在年龄大小、是否绝经、肿瘤最大直径、FIGO分期间差异均无统计学意义(P>0.05),宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p相对表达量与CA125(r2=0.012,P=0.421)、SCCAg(r2=0.004,P=0.647)无相关性。ROC曲线分析血清has-miR-200a-3p检测对宫颈癌患者的辅助诊断价值,宫颈癌区分于子宫肌瘤时,ROC曲线下面积(AUC)为0.753;宫颈癌患者区分于健康对照者时,AUC为0.771。结论宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p相对表达量高于子宫肌瘤组和健康对照组,有可能成为宫颈癌辅助诊断的重要生物学指标。血清hsa-miR-200a-3p的表达水平或可用于CIN的辅助诊断。

肺癌患者血清miR-200a的表达水平及意义

目的分析肺癌患者血清miR-200a的表达水平及意义。方法选取肺癌患者50例为研究对象,取其癌组织与癌旁组织,并选择人肺癌细胞系A549与永生化支气管上皮细胞株16HBE,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌细胞及组织中miR-200a表达水平,应用脂质体转染法将miR-200a mimics与阴性对照序列(miR-NC)分别转染A549,以CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,以Transwell实验检测细胞迁移能力,应用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,并分析肺癌患者miR-200a表达水平与临床病理参数的关系。结果肺癌患者癌组织中miR-200a表达水平低于癌旁组织(P<0.05),A549细胞系中miR-200a表达水平也低于HBE细胞系,差异有统计学意义(P<0.05);CCK-8实验显示,miR-200a mimics第3 d、4 d、5 d的OD值低于miR-NC,平板克隆形成实验发现miR-200a mimics克隆形成率低于miR-NC,Transwell实验显示miR-200a mimics穿膜细胞数少于miR-NC,流式细胞技术检测显示,miR-200a mimics凋亡率高于miR-NC(P<0.01);有淋巴结转移、临床分期Ⅲ期者miR-200a表达水平低于无淋巴结转移、临床分期Ⅱa~Ⅱb期者(P<0.05)。结论肺癌患者中miR-200a呈低表达,与淋巴结转移有一定关联,且体外实验也发现miR-200a可抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移并促进其凋亡,可将其作为肺癌治疗的潜在靶点。

Th22细胞及miR-200a在肝纤维化小鼠模型中的表达

目的研究辅助性T细胞22(Th22)及微小RNA-200a(miR-200a)在四氯化碳(CCl 4)诱导肝纤维化小鼠模型中的表达及相互关系。方法纳入雄性BALB/c小鼠40只,根据随机数字表法分为模型组(n=20)和对照组(n=20)。对照组腹腔内注射橄榄油,模型组腹腔内注射CCl 4溶液建立肝纤维化模型。HE和Masson染色观察小鼠肝脏病理改变,免疫组织化学染色检测肝脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,流式细胞术检测小鼠脾脏Th22细胞数变化,RT-PCR检测肝脏组织IL-22和miR-200a mRNA的表达。结果(1)肝组织病理切片HE染色和Masson染色显示:CCl 4腹腔注射法成功建立肝纤维化小鼠模型。(2)模型组α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05)。(3)模型组小鼠脾脏Th22细胞亚群比例明显高于对照组(P<0.05)。(4)模型组的肝组织IL-22 mRNA的表达量明显高于对照组,模型组的肝组织miR-200a mRNA的表达量低于对照组(均P<0.05)。结论CCl 4致肝纤维化模型小鼠Th22细胞呈现高表达,miR-200a mRNA呈现低表达,Th22细胞及miR-200a可能参与了肝纤维化的发生发展过程。