miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌组织中的相关性及与其预后的关系

目的探讨miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌中的相关性及与其预后的关系。方法纳入85例食管鳞状细胞癌的石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织、相应的正常食管黏膜组织。实时荧光定量PCR检测miR-223-3p与ECT2 mRNA水平,Pearson相关系数分析miR-223-3p与ECT2 mRNA表达水平的相关性。Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险模型分析miR-223-3p、ECT2表达对食管鳞状细胞癌预后的影响。结果ECT2高表达食管鳞状细胞癌患者46例,ECT2低表达食管鳞状细胞癌患者39例。ECT2 mRNA表达水平食管鳞状细胞癌组织高于正常食管黏膜组织,miR-223-3p表达水平食管鳞状细胞癌组织低于正常食管黏膜组织。ECT2表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。miR-223-3p表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。此外,食管鳞状细胞癌中miR-223-3p与ECT2 mRNA表达存在相关性(ρ=-0.5223,P<0.0001),miR-223-3p与ECT2蛋白表达存在相关性(χ^(2)=21.56,P<0.0001)。Kaplan-Meier生存分析显示:TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对食管鳞状细胞癌患者的总生存期有影响。Cox比例风险模型发现TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对总生存期有影响。结论miR-223-3p与ECT2的表达水平在食管鳞状细胞癌中存在相关性。TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平可作为ESCC的独立预后因素。

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用及潜在机制。方法 通过盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导脓毒症动物模型。通过酸枣仁皂苷A治疗实验动物,苏木精和伊红染色分析组织病理学变化。相应试剂盒分析肾损伤指标(血清BUN、SCr和NGAL水平)和血清炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的水平。生信分析miR-223-3p在脓毒症患者中的表达及其与炎症反应因子的相关性,预测miR-223-3p与SGK1的结合位点。双荧光素酶实验验证miR-223-3p与SGK1的结合关系。构建脂多糖(LPS)诱导的HK2细胞的体外模型。荧光实时定量PCR(qPCR)检测miR-223-3p在患者血清或LPS处理的HK-2细胞中的表达。脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹检测中BCL2相关的X(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和裂解的半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清或细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的水平。qPCR和蛋白质免疫印迹法检测不同处理组HK-2细胞中SGK1的表达,蛋白质免疫印迹检测不同处理组HK-2细胞中NLRP3的表达。结果 酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠急性肾小管坏死评分,减轻肾损伤。血清血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平降低,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平亦下降。酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠肾脏组织中miR-223-3p的表达水平。生信分析和临床样本分析显示,miR-223-3p在脓毒症患者中高表达。细胞实验结果显示,miR-223-3p在LPS处理的HK-2细胞中呈高表达。miR-223-3p促进LPS诱导的HK-2细胞凋亡和炎症反应,这种促进作用是由miR-223-3p通过负调控SGK1/NLRP3介导的。结论 酸枣仁皂苷A可能通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中发挥保护作用,可能为脓毒症治疗提供新的治疗靶点。

环状RNA SAMD8调控miR-223-3p/RHOB表达抑制胰腺导管腺癌进程的分子机制

目的探讨环状RNA SAMD8(circ-SAMD8)在胰腺导管腺癌(PDAC)进展中的潜在机制。方法基于Microarray数据(GSE79634)分析PDAC组织中circRNAs的表达谱。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证circ-SAMD8(hsa_circ_0006148)在PDAC组织和细胞(CFPAC-1和PANC-1)中的表达。采用生物信息学分析预测circ-SAMD8的靶微小RNA(miRNA)及其下游mRNA,并采用双荧光素酶报告基因实验进行鉴定。采用MTT法和集落形成法检测PDAC细胞的增殖能力。采用免疫印迹法(Western blot)检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达水平。采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果circ-SAMD8在PDAC组织和细胞中的表达水平低于癌旁组织和正常细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达circ-SAMD8能有效促进PDAC细胞凋亡,抑制PDAC细胞增殖。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p是circ-SAMD8的一个潜在相互作用分子,miR-223-3p的下游mRNA靶点是RHOB。miR-223-3p在PDAC组织和细胞中异常过表达,并伴有RHOB低表达。在转染miR-223-3p模拟物或sh-circ-SAMD8的PDAC细胞中,RHOB表达显著降低,增殖能力增强,凋亡率降低。结论circ-SAMD8通过海绵化miR-223-3p,调控下游RHOB的表达,有效抑制PDAC的发生发展。

未足月胎膜早破孕妇血清中miR-223-3p的表达水平及临床意义

目的 探讨miRNA-223-3p(miR-223-3p)在未足月胎膜早破(PPROM)孕妇血清中的表达水平及临床意义。方法 选取2023年4~9月徐州医科大学附属徐州妇幼保健院行剖宫产术分娩的孕妇91例,其中PPROM孕妇60例及同期足月正常孕妇31例(正常组)作为观察对象。根据胎膜病理结果将观察组分为:未足月胎膜早破(PPROM)未合并HCA组(PPROM组,n=37);PPROM合并HCA组(PPROM+HCA组,n=23)。收集入院治疗前孕妇血清样本,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测血清中miR-223-3p的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子水平。结果 PPROM+HCA组血清中miR-223-3p的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组孕妇血清中miR-223-3p的表达水平与IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平呈正相关(r=0.553、0.505、0438、0.656,P <0.05)。结论 miR-223-3p在PPROM+HCA孕妇血清中表达上调,与PPROM的炎症严重程度有关。

miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制

目的探讨miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制。方法选取108例初诊为老年结肠癌患者,经手术切除的结肠癌组织标本作为研究标本,癌旁组织标本(距结肠癌组织边缘至少5 cm)作为对照标本。购置人结肠癌细胞(SW480)和人结肠癌细胞(SW620)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定结肠癌组织、癌旁组织、SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达水平,通过敲低或增加SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达观察miR-223-3p对细胞增殖、运动、侵袭、凋亡及凋亡蛋白的影响。结果结肠癌组织中miR-223-3p表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001);SW620细胞中miR-223-3p表达水平显著高于SW480细胞(P<0.05);SW480细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著高于未转染组(P<0.001);SW620细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著低于未转染组(P<0.001);转染24、48、72 h后SW480细胞转染组细胞计数显著多于未转染组(P<0.001);转染48 h和72 h后SW620细胞转染组细胞计数显著少于未转染组(P<0.001);转染24 h后SW480细胞转染组迁移率显著高于未转染组,SW620细胞转染组显著低于未转染组(P<0.001);转染48 h后SW480细胞转染组穿过基底膜细胞数量显著多于未转染组,SW620细胞转染组显著少于未转染组(P<0.001);转染48 h后SW480细胞转染组细胞凋亡率显著低于未转染组,SW620细胞转染组显著高于未转染组(P<0.001);SW480细胞转染组B细胞瘤淋巴(Bcl)-2蛋白表达水平显著高于未转染组,SW620细胞转染组显著低于未转染组,Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平显著高于未转染组(P<0.001)。结论miR-223-3p参与老年结肠癌发生发展,可通过促进Bcl-2蛋白表达抑制细胞凋亡,促进细胞增殖、迁移及侵袭能力发挥原癌基因作用。

STAT1诱导的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4促进人胶质母细胞瘤相关巨噬细胞向M2型极化

目的本研究旨在探讨STAT1激活的LINC00987对人胶质母细胞瘤(GBM)相关巨噬细胞向M2型极化的影响。方法通过GEO数据库分析筛选出GBM中表达失调的lncRNAs。RT-qPCR检测LINC00987、miR-223-3p、卷曲蛋白4基因(FZD4)的表达。将人单核细胞白血病细胞系THP-1分别诱导成M0、M1、M2型巨噬细胞,并将GBM细胞与THP-1细胞共培养,流式细胞测量术检测CD14^(+)/CD206^(+)巨噬细胞的占比,ELISA检测M2型巨噬细胞相关因子(VEGF、TGF-β1)的表达。结果相对于癌旁组织和人正常神经胶质细胞系HEB,GBM组织和细胞中的LINC00987、FZD4表达上调而miR-223-3p表达下调(P<0.05)。在GBM细胞中,STAT1能够激活LINC00987并影响miR-223-3p/FZD4轴。过表达LINC00987能够促进GBM相关巨噬细胞向M2型极化(P<0.05)。敲减LINC00987则能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被miR-223-3p抑制剂部分挽救(P<0.05)。敲减FZD4能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被过表达LINC00987部分挽救(P<0.05)。结论STAT1激活的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4轴诱导GBM相关巨噬细胞向M2型极化。

转甲状腺素蛋白介导STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞新生血管生成的影响

目的分析转甲状腺素蛋白(TTR)介导信号转导和转录激活因子4(STAT4)/miR-223-3p/F-box WD重复蛋白7(FBXW7)通路对高糖(HG)诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)新生血管生成的影响。方法将hRECs分为对照组、HG组、HG+TTR组、HG+NC mimic组、HG+miR-223-3p mimic组和HG+TTR+miR-223-3p mimic组。生物信息学分析STAT4与miR-223-3p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。ELISA检测细胞中TTR水平,RT-PCR检测miR-223-3p水平,CCK-8法检测细胞增殖,血管生成实验分析血管生成率,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、TTR、STAT4和FBXW7蛋白表达。结果与对照组相比,HG组hRECs中TTR水平升高(P<0.05)。培养24 h时,与HG组相比,HG+TTR组细胞活力明显下降(P<0.05)。与HG组血管生成率(38.12±4.91)%相比,HG+TTR组hRECs血管生成率[(19.46±2.12)%]明显较小(P<0.05)。与HG+NC mimic组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达上调,细胞活力增加(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达下调,细胞活力下降(均为P<0.05)。与HG+NC mimic组血管生成率(40.11±4.10)%相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(61.52±6.25)%]增多(P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(42.24±4.33)%]减少(P<0.05),且与HG+NC mimic组比较差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学分析结果显示,STAT4与miR-223-3p启动子区域相互作用。与HG组相比,HG+TTR组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均升高,FBXW7和VEGF蛋白表达均降低(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、VEGF、STAT4和FBXW7蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论TTR可能通过调节STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路抑制HG诱导的hRECs的血管生成。

解毒复正汤通过干扰miR-223-3p并靶向调控TGFBR3影响肺癌侵袭转移的实验研究

目的探讨解毒复正汤(JieduFuzhengdecoction,JDFZ)通过影响微小核糖核酸-223-3p(Mircro ribonucleic acid-223-3p,miR-223-3p)靶向调控转化生长因子β受体3(Transforming growth factorβReceptor3,TGFBR3)的表达及其对肺癌细胞迁移的影响。方法利用RT-qPCR技术检测肺腺癌患者癌组织及癌旁组织、肺腺癌患者及健康人外周血清中miR-223-3p表达水平的差异;并检测不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)以及人肺上皮细胞BEAS-2B中miR-223-3p的本底表达量,从组织、血浆及细胞3个维度验证miR-223-3p的差异性。利用生物信息学网站重叠分析,初步预测到miR-223-3p与TGFBR33’UTR具有潜在的结合位点序列。接着运用双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与TGFBR3的靶向关系。体外培养肺癌A549细胞,采用脂质体法分别将miR-223-3p-过表达序列(miR-223-3p-mimics)及携带TGFBR3全基因的重组载体(Over-expression-TGFBR3,OE-TGFBR3)分别转染至肺癌细胞,以转入无关序列的模拟剂(Negative control-mimics,NC)作为对照组,收集各组稳转细胞,Transwell小室检测转染处理后及JDFZ作用后的细胞迁移能力;收集各组细胞蛋白,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测细胞中EMT相关蛋白的表达。结果肺癌组织中miR-223-3p的表达量显著低于癌旁组织;肺癌患者血浆miR-223-3p表达水平明显低于健康正常人。不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)中的miR-223-3p表达量亦低于正常人肺上皮细胞BEAS-2B。利用生物信息学网站及荧光素酶报告基因实验证实了miR-223-3p与TGFBR3的靶向调控关系。与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组的细胞迁移能力均下降(P<0.05),上调TGFBR3和加入解毒复正汤均能有效增强miR-223-3p对A549细胞迁移的负向调节作用;Westenblot结果发现,与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组E-Cadherin的表达水平上调,NCadherin及Vimentin的表达水平下升(P<0.05),两组均在不同程度上抑制EMT的发生;上调TGFBR3和加入解毒复正汤作用能有效增加miR-223-3p对细胞迁移相关蛋白的负向调节作用(P<0.05)。结论解毒复正汤对肺癌A549细胞的侵袭迁移有抑制作用,其机制可能是通过调节miR-223-3p并靶向调控TGFBR3及其下游EMT相关指标的表达来实现的。

Circ-CDYL通过miR-223-3p/PHF19轴调节多发性骨髓瘤对硼替佐米的敏感性

目的 探讨环状RNA Circ-CDYL调节多发性骨髓瘤(MM)对硼替佐米(BTZ)的敏感性,以及对miR-223-3p/PHD锌指蛋白19(PHF19)轴的影响。方法 收集盐城市第三人民医院118例MM患者血清标本,其中60例患者未接受任何化疗(BTZ敏感组),58例患者接受BTZ治疗并产生化疗耐药性(BTZ耐药组),比较两组Circ-CDYL及miR-223-3p、PHF19的表达情况。将MM1.R细胞根据细胞转染情况分为C组、sh-Circ-C组、sh-Circ-CDYL组、sh-Circ-CDYL+anti-miR-223-3p组和sh-Circ-CDYL+pcDNA-PHF19组,对5组细胞进行相应转染。采用荧光定量PCR(RT-qPCR)测定Circ-CDYL、miR-223-3p和PHF19 mRNA水平,CCK-8法测定MM1.R细胞活性。采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,采用免疫印迹法(Western blotting)检测凋亡蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(C-caspase 3)]及PHF19蛋白的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验检测Circ-CDYL与miR-223-3p/PHF19的靶向关系。结果 Circ-CDYL和PHF19在BTZ耐药组患者血清标本和MM1.R细胞中均呈高表达(P<0.05),miR-223-3p呈低表达(P<0.05)。下调Circ-CDYL表达下调Circ-CDYL表达可明显降低MM1.R细胞对BTZ的半数抑制浓度(IC_(50)),抑制增殖活力,使凋亡蛋白PCNA、Ki67表达水平均下调,细胞凋亡率、C-caspase 3蛋白表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-223-3p或过表达PHF19可部分逆转敲低Circ-CDYL后的MM1.R细胞对BTZ敏感性(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p可抑制Circ-CDYL、PHF19的表达,Circ-CDYL、PHF19是miR-223-3p的靶基因。结论 敲低Circ-CDYL可通过miR-223-3p/PHF19轴而提高MM1.R细胞对BTZ的敏感性。

脱氢姜酮通过调控miR-223-3p抑制喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及血管形成

目的探讨脱氢姜酮(DZG)对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及血管形成的影响及其相关机制。方法分别以不同浓度的DZG(0,75,150,300μmol/L)处理Hep-2细胞24 h,MTT法、Transwell、Western blot法、实时荧光定量PCR(RT-PCR)分别检测Hep-2细胞的存活率、迁移能力、迁移蛋白波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和血管形成蛋白血管内皮生长因子(VEGF)以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)相对表达水平和miR-223-3p mRNA相对表达量。将Hep-2细胞分别分为:①空白对照组(control组)、模拟物阴性对照组(miR-NC)、miR-223-3p组(转染miR-223-3p);②空白对照组(si-control组)、阴性对照组(si-NC)及miR-223-3p小干涉RNA组(si-miR-223-3p)。MTT法检测细胞增殖抑制能力,Transwell检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin蛋白相对表达量。结果0,75,150,300μmol/L的DZG培养Hep-2细胞,MTT结果显示,24 h细胞存活率随DZG浓度增加而下降(P<0.05);Transwell结果显示,细胞迁移能力随DZG浓度增加而下降(P<0.05);Western blot结果显示,VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin蛋白相对表达量随DZG浓度增加而降低(P<0.05);RT-PCR结果显示,miR-223-3p mRNA相对表达量随DZG浓度增加而增加(P<0.05)。将Hep-2细胞进行转染后,RT-PCR结果表明,miR-223-3p组Hep-2细胞miR-223-3p相对表达量较miR-NC组和control组明显升高,si-miR-223-3p组Hep-2细胞miR-223-3p相对表达量较si-NC组和si-control组明显降低(P<0.05)。MTT法结果显示,miR-223-3p组细胞存活率较miR-NC组明显降低(P<0.05)。不加DZG单独使用正常培养基培养验证miR-223-3p对Hep-2细胞存活率时发现,miR-223-3p组细胞存活率较miR-NC组和control组细胞明显下降,si-miR-223-3p组细胞存活率较si-NC组和si-control组明显升高(P<0.05);Transwell结果显示,miR-223-3p组细胞迁移率较miR-NC组和control组明显降低,si-miR-223-3p组细胞迁移率较si-NC组和si-control组明显升高(P<0.05)。Western blot结果显示,miR-223-3p组VGEF、MMP-2、Vimentin和N-cadherin蛋白相对表达量较miR-NC组和control组明显降低,si-miR-223-3p组VGEF、MMP-2、Vimentin和N-cadherin蛋白相对表达量较si-NC组和si-control组明显升高(P<0.05)。结论DZG可通过调控miR-223-3p抑制喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及血管形成,其机制可能与下调迁移及血管形成相关蛋白VGEF、MMP-2、Vimentin和N-cadherin相关。

miR-223-3p调控NLRP3炎症小体对自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响

目的探讨miR-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达水平对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。方法首先构建双荧光素酶报告质粒载体,并验证miR-223-3p对NLRP3基因表达的调控作用。然后将48只健康Lewis雌性大鼠随机分为正常对照(NC)组、EAU组和miR-223-3p慢病毒组,每组16只。EAU组和miR-223-3p慢病毒组大鼠首先用光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)乳糜液诱导EAU模型,同时miR-223-3p慢病毒组每只大鼠双眼玻璃体内注射8μL携带miR-223-3p的慢病毒,造模12 d后麻醉处死大鼠,分离各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织。实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中miR-223-3p、NLRP3、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)的基因表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)以及NLRP3的蛋白表达水平;流式细胞仪检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中M1、M2型巨噬细胞水平。结果双荧光素酶表达报告系统检测证实NLRP3是miR-223-3p调控的靶基因。与NC组相比,造模12 d后,EAU组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中miR-223-3p的表达水平均降低(均为P<0.05),而NLRP3和iNOS的mRNA表达水平均升高(均为P<0.05),M1型巨噬细胞相关因子iNOS mRNA和TNF-α蛋白表达水平均升高(均为P<0.05),而M2型巨噬细胞相关因子Arg-1 mRNA和IL-10蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与EAU组相比,造模12 d后,miR-223-3p慢病毒组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中NLRP3 mRNA和蛋白表达水平均降低,iNOS mRNA和TNF-α蛋白表达水平均降低,而Arg-1 mRNA和IL-10蛋白表达水平均升高(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与NC组相比,造模12 d后,EAU组大鼠M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低,M1/M2巨噬细胞比例升高(均为P<0.05);与EAU组相比,造模12 d后,miR-223-3p慢病毒组大鼠M1型巨噬细胞极化水平降低,而M2型巨噬细胞极化水平升高,M1/M2巨噬细胞比例逐渐恢复平衡(均为P<0.05)。结论EAU大鼠体内巨噬细胞极化失衡,提高miR-223-3p水平可抑制NLRP3炎症小体的表达,进而抑制炎症相关信号通路,降低M1型巨噬细胞极化水平以及提高M2型巨噬细胞极化水平,从而发挥对葡萄膜炎大鼠巨噬细胞极化平衡的调控作用。

石斛提取物通过调控miR-223-3p/CARM1轴改善糖尿病视网膜病变进程

目的探讨石斛提取物通过miR-223-3p/辅激活蛋白关联精氨酸甲基转移酶(CARM)1轴对糖尿病视网膜病变(DR)的影响。方法高糖诱导人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19建立DR体外模型细胞,随后使用石斛提取物进行干预处理,观察干预后DR细胞的活性及miR-223-3p/CARM1表达。另构建过表达、抑制miR-223-3p或CARM1相关序列,转染至DR细胞中,检测其生物学行为变化。使用双荧光素报告酶实验验证miR-223-3p与CARM1的关系,拯救实验验证石斛提取物是否通过调控miR-223-3p/CARM1轴影响DR。结果高糖诱导后,ARPE-19细胞活性明显降低,凋亡率明显升高(P<0.05);在石斛提取物干预后,细胞活性显著升高,凋亡被明显抑制(P<0.05);细胞中miR-223-3p表达明显升高,CARM1蛋白表达明显降低(P<0.05)。生物学行为检测结果显示,升高miR-223-3p与抑制CARM1均可明显激活DR细胞的活性,并明显抑制凋亡(P<0.05)。双荧光素报告酶实验显示,升高miR-223-3p后CARM1-WT的荧光活性被明显抑制,且DR细胞中CARM1蛋白表达显著降低,抑制miR-223-3p反之(P<0.05)。拯救实验显示,抑制miR-223-3p后对DR细胞产生的影响被抑制CARM1或石斛提取物完全逆转,而抑制CARM1可以与石斛提取物共同使用进一步提升DR细胞的活性。结论石斛提取物通过调控miR-223-3p/CARM1轴激活DR细胞的活性,抑制凋亡,改善DR的病情发展。

模拟失重下微血管内皮细胞通过外泌体转运miR-223-3p抑制成骨细胞分化的研究

目的探究模拟失重下微血管内皮细胞通过外泌体转运miR-223-3p对成骨细胞分化的影响,为失重性骨质丢失的防治寻求干预靶点。方法利用2D回转器对小鼠微血管内皮细胞进行模拟失重处理,采用低温超高速离心法提取细胞培养上清中的外泌体,对外泌体进行鉴定及摄取实验;向MC3T3-E1细胞中转染mimic-223-3p、inhibitor-223-3p及相应的阴性对照进行功能验证;向外泌体中电转mimic-223-3p、inhibitor-223-3p及相应的阴性对照后与MC3T3-E1细胞共培养。采用qRT-PCR检测miR-223-3p及碱性磷酸酶(ALP)、Runx2、Ocn的mRNA表达变化;采用Western blotting检测Runx2、Ocn的蛋白表达变化;采用ALP活性检测和ALP染色方法检测成骨细胞分化能力的变化。结果模拟失重下微血管内皮细胞可分泌外泌体,外泌体与MC3T3-E1细胞共培养后,可被成骨细胞摄入并导致细胞中miR-223-3p表达升高(P<0.05);MC3T3-E1细胞分别转染mimic-223-3p、inhibitor-223-3p后,过表达miR-223-3p能够显著抑制成骨细胞分化(P<0.05,P<0.01),抑制miR-223-3p能够显著促进成骨细胞分化(P<0.05,P<0.01);Con Exos电转mimic-223-3p后与MC3T3-E1细胞共培养,可显著抑制成骨细胞分化(P<0.05,P<0.01);Clino Exos电转inhibitor-223-3p后与MC3T3-E1细胞共培养,可显著缓解模拟失重下微血管内皮细胞源外泌体对成骨细胞分化的抑制(P<0.05,P<0.01)。结论模拟失重下微血管内皮细胞可通过外泌体转运miR-223-3p,增加成骨细胞中miR-223-3p表达,进而抑制成骨细胞分化,提示miR-223-3p可以作为潜在的干预靶点。

血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断价值

目的探讨血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断价值。方法纳入收治的早期鼻咽癌患者90例为研究组,鼻咽炎患者90例为炎症组、90例健康体检者为对照组。检测3组血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平。用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)的AUC分析血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p检测在早期鼻咽癌中的诊断意义。结果研究组、炎症组、对照组血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平具有显著差异(P<0.05)。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p单项检测研究组与炎症组的灵敏度为91%、89%、98%,特异度分别为90%、90%、94%。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p单项检测研究组与对照组的灵敏度为96%、94%、95%,特异度均为95%。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断灵敏度为94.44%,特异度为93.89%,准确度为94.07%。结论血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平检测可作为早期鼻咽癌的潜在标志。

MiR-223-3p通过靶向SORBS1增加结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性

目的:5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的一线治疗药物,CRC细胞对5-FU的耐药是导致化学治疗(以下简称“化疗”)失败的主要原因,然而耐药机制仍不明确。本研究旨在探究参与CRC细胞对5-FU耐药的抑癌基因,并寻找对该基因存在调控作用的微RNA(microRNA,miRNA)。方法:在高通量基因表达(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载CRC数据集GSE28702和GSE69657,分别分析2个数据集中对FOLFOX化疗方案应答组和无应答组患者的差异表达基因并确定目标基因;采用在线生物信息学数据库TargetScan、miRwalk和miRDB预测靶向目标基因含山梨醇和SH3结构域蛋白1(sorbin and SH3 domain containing 1,SORBS1)的miRNA。采用瞬时转染技术在CRC细胞系HCT116、SW620中分别转染siSORBS1、HA-SORBS1、miR-223-3p mimic、anti-miR-223-3p及其相应的阴性对照(siNC、HA、miR-NC、anti-miR-NC),在HCT116细胞中共转染miR-NC和HA、miR-223-3p mimic和HA、miR-223-3p mimic和HA-SORBS1、anti-miR-NC和siNC、anti-miR-223-3p和siNC、anti-miR-223-3p和siSORBS1。采用实时反转录PCR(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)和/或蛋白质印迹法检测细胞中SORBS1和miR-223-3p的表达水平。转染后用不同浓度的5-FU处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,双荧光素酶报告分析验证miR-223-3p与SORBS1的靶向关系。结果:GSE69657数据集和GSE28702数据集应答组分别有409和528个高表达基因,共有22个高表达交集基因。在22个高表达交集基因中,与CRC化疗敏感性有关的抑癌基因有3个,选择SORBS1作为目标基因进一步探索。3个在线生物信息学数据库预测的靶向SORBS1的miRNA为miR-223-3p。用5-FU(25μmol/L)处理HCT116、SW620细胞12~36 h后,2种细胞中miR-223-3p的表达水平均显著下调(均P<0.05)。转染siSORBS1或miR-223-3p mimic后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均下调,细胞活力均增加(均P<0.05);转染HA-SORBS1或antimiR-223-3p后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均上调,细胞活力均下降(均P<0.05)。双荧光素酶报告分析结果显示:共转染SORBS13'-非翻译区(untranslated region,UTR)野生型质粒和miR-223-3p mimic的细胞荧光素酶活性显著低于共转染SORBS13'-UTR野生型质粒和miR-NC的细胞(P<0.05)。与共转染miR-223-3p mimic和HA的细胞比较,共转染miR-223-3p mimic和HA-SORBS1的细胞活力明显降低(P<0.01);与共转染anti-miR-223-3p和siNC组比较,共转染anti-miR-223-3p和siSORBS1组细胞活力明显增加(P<0.05)。结论:MiR-223-3p通过靶向SORBS1基因增加CRC细胞对5-FU的耐药性,miR-223-3p有望成为临床治疗CRC的新靶点。

2型糖尿病合并急性脑梗死患者血清miR-223-3p、miR-134-5p水平变化及其意义

目的观察2型糖尿病(T2DM)合并急性脑梗死(ACI)患者血清微小核糖核酸(miR)-223-3p、miR-134-5p水平变化,并分析其与氧化应激损伤及预后的关系。方法选择T2DM合并ACI患者123例纳入研究组,选择同期T2DM患者和体检健康者各50例分别纳入T2DM对照组、健康对照组。检测三组血清miR-223-3p、miR-134-5p及氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)],分析研究组血清miR-223-3p、miR-134-5p水平与氧化应激指标的相关性。研究组患者接受治疗后随访3个月,采用改良Rankin量表将患者分为预后良好亚组与预后不良亚组,采用多因素Logistic回归模型分析T2DM合并ACI患者预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-223-3p、miR-134-5p对T2DM合并ACI患者预后不良的预测价值。结果健康对照组、T2DM对照组、研究组血清miR-223-3p、SOD、GSH-Px水平依次下降,血清miR-134-5p、MDA水平依次上升(P均<0.05)。研究组患者血清miR-223-3p与SOD、GSH-Px呈正相关,与MDA呈负相关(P均<0.05);血清miR-134-5p与MDA呈正相关,与SOD、GSH-Px呈负相关(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,入院时NIHSS评分偏高、miR-134-5p偏高、MDA偏高是T2DM合并ACI患者预后不良的危险因素(P均<0.05),miR-223-3p偏高、SOD偏高、GSH-Px偏高为保护因素(P均<0.05)。血清miR-223-3p、miR-134-5p联合预测T2DM合并ACI患者预后不良的ROC曲线下面积为0.862,高于单独指标预测。结论T2DM合并ACI患者血清miR-223-3p水平降低、miR-134-5p水平增高,血清miR-223-3p、miR-134-5p水平与氧化应激损伤指标及预后关系密切,miR-223-3p、miR-134-5p联合检测有助于预测T2DM合并ACI患者的短期预后。

清脑滴丸通过调控miR-223-3p抑制NLRP3炎症小体信号通路对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠的抗炎作用机制

目的:探讨清脑滴丸(Qingnao dripping pills,QNDP)通过调控微小RNA-223-3p(microRNA-223-3p,miR-223-3p)介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体信号通路对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠的作用机制。方法:建立大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)损伤模型,随机分为缺血/再灌注损伤模型(MCAO/R)组、MCAO/R+QNDP组、MCAO/R+miR-223-3p拮抗剂(antagomiR-223)组和MCAO/R+QNDP+antagomiR-223组,另设假手术组作为对照,每组18只。MCAO/R术后灌胃给予QNDP(150 mg/kg),MCAO/R术前24 h侧脑室注射给予antagomiR-223。采用Garcia评分法测定各组大鼠神经功能缺损程度;TTC染色法观察脑缺血体积;干湿重法测定脑含水量;RT-qPCR法测定缺血皮层miR-223-3p表达;Western blot法检测缺血皮层NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)和cleaved caspase-1蛋白表达;免疫荧光染色法观察NLRP3在缺血侧皮层中的分布情况;ELISA法检测白细胞介素1β(inter-leukin-1β,IL-1β)和IL-18水平。结果:与假手术组比较,MCAO/R组神经功能缺损评分显著降低(P<0.01),脑缺血体积和脑含水量显著增加(P<0.01)。与MCAO/R组相比,MCAO/R+QNDP组大鼠的神经功能缺损评分升高,脑缺血体积和脑含水量显著降低(P<0.01),miR-223-3p表达增加(P<0.05),NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC及cleaved caspase-1)蛋白表达,NLRP3分布,以及IL-1β和IL-18水平均显著减少(P<0.05或P<0.01)。MCAO/R+QNDP+an-tagomiR-223组上述各项指标与MCAO/R+QNDP组趋势一致(P<0.05或P<0.01)。MCAO/R+antagomiR-223组上述各项指标与MCAO/R+QNDP组趋势相反(P<0.05或P<0.01)。与MCAO/R+QNDP组比较,MCAO/R+QNDP+an-tagomiR-223组大鼠的神经功能评分显著降低(P<0.01),脑梗死体积和脑含水量增加(P<0.05或P<0.01),miR-223-3p表达显著减少(P<0.01),NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达,NLRP3表达量,以及IL-1β和IL-18水平在缺血侧皮层增加(P<0.05或P<0.01),ASC蛋白差异无统计学意义。与MCAO/R+antagomiR-223组比较,MCAO/R+QNDP+antagomiR-223组大鼠ASC表达水平显著降低(P<0.01)。结论:QNDP可能通过上调miR-223-3p表达抑制NLRP3炎症小体信号通路,从而减轻脑缺血/再灌注损伤大鼠诱导的炎症反应。

益气活血中药对急性心肌梗死病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响

目的观察益气活血中药对急性心肌梗死(AMI)病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响。方法将AMI病人30例随机分为治疗组和对照组各15例,治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗,对照组予常规西药治疗,疗程2周。健康志愿者10名为健康组。健康志愿者于入组时,AMI病人于入院后1 h、第3天、第7天、第14天分别抽取肘静脉血,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测miR-2 2 3-3 p、miR-1 3 2-5 p的表达情况。结果AMI病人入院早期miR-2 2 3-3 p出现高表达、miR-132-5p出现低表达,与健康志愿者比较差异有统计学意义(P<0.01);与miR-132-5p及肌钙蛋白I(c Tn I)比较,miR-223-3p显示出高表达、高敏感性的特点。与对照组比较,治疗组治疗后病人血浆miR-223-3p表达降低、miR-132-5p表达上调更显著,差异有统计学意义(P<0.01);c Tn I于24 h上升和第3天下降更为明显(P<0.05)。结论益气活血中药联合常规西药治疗AMI较单纯常规西药治疗临床疗效较好,可能与调节miR-223-3p、miR-132-5p的表达有关,miR-223-3p有望成为新的AMI早期诊断标志物。