miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调(P<0.001)。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。

胃癌患者组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a的表达及其与胃癌的相关性研究

目的探讨转化生长因子-α(TGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β1)和微小RNA-302a(miR-302a)在胃癌患者组织中的表达及其与胃癌的相关性。方法选取2016年6月至2018年6月唐山市人民医院收治的92例胃癌患者作为研究对象,患者均接受手术治疗,手术过程中取病灶组织,设为胃癌组;选择癌旁组织(距离病灶≥3 cm),设为对照组。采用实时荧光PCR检测技术测定92组织样本中miR-302a的表达量,同时采用免疫组化法检测组织样本中TGF-α和TGF-β1的表达水平;并分析其与胃癌分级、淋巴转移和TNM分期等的相关性。结果胃癌组织中TGF-β1呈强阳性表达,在胃癌组织旁增殖区域及旺盛增殖区域呈现弱阳性表达,在正常黏膜中呈现弱阳性或阴性表达。胃癌组中TGF-α和TGF-β1表达水平明显高于对照组(P<0.01),胃癌组miR-302a表达水平明显低于对照组(P<0.01)。胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与年龄、性别无统计意义(P>0.05);胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关(P>0.05)。胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与患者临床分期呈正相关性(P<0.05)。结论TGF-α、TGF-β1和miR-302a在胃癌组织中表达量显著改变,且与肿瘤细胞的TNM分期、分化程度和淋巴结转移相关,提示TGF-α、TGF-β1和miR-302a可能在胃癌的发生、分化和转移过程中起一定作用。

miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞(mESC)增殖和凋亡的影响。方法 mESC分为完全培养基组(对照组),无叶酸培养基组(无叶酸组),无叶酸培养基+miR-302amimic组(miR-302a组),通过RT-PCR进行检测miR-302a在完全培养基及无叶酸培养基中的表达。构建miR-302amimic,后转染到无叶酸培养基mESC中,采用MTT法检测miR-302a mimic对mESC活力的影响,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞凋亡的影响;流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞周期的影响;Western blot检测及磷脂酰肌醇3羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路激活情况,以及下游分子细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、p27表达的影响。结果 RT-PCR证实无叶酸组中miR-302a表达量下降(P<0.01)。与完全培养基比较,无叶酸培养基中,mESC细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G1期,Akt及mTOR磷酸化水平下降,CyclinD1表达下调,p21及p27表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无叶酸组比较,miR-302a组中,mESC细胞活力上升,凋亡下降,G1期缩短,AKT及mTOR磷酸化水平提高,CyclinD1表达上调,p21及p27表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-302a类似物能显著抑制缺乏叶酸mESC凋亡,能促进其增值,与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

miR-302a-3p在食管鳞癌中的表达及临床意义

为探讨miR-302a-3p在食管鳞癌组织和细胞中的表达及其对细胞生物学特征和食管鳞癌患者临床病理特征的影响,qRT-PCR检测食管鳞癌组织和对应癌旁组织,以及食管鳞癌细胞ECA109和正常食管上皮细胞HEEC中miR-302a-3p的表达;ECA109细胞处理后分为NC组、miR-NC组和miR-302a-3p mimic组,MTT检测各组细胞的活力,Transwell试验检测各组细胞的侵袭和迁移能力;TUNEL试验检测各组细胞的凋亡情况;卡方检验分析miR-302a-3p与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果表明:miR-302a-3p在食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞ECA109中低表达;与miR-NC组相比,miR-302a-3p mimic组ECA109细胞增殖能力和迁移能力明显减弱(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。临床数据分析显示,miR-302a-3p表达与食管鳞癌的分化程度、临床分期、TNM分期和转归(P<0.01)相关。这一研究提示miR-302a-3p通过抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在食管鳞癌的发展中起到肿瘤抑制作用,其低表达有望成为预测食管鳞癌患者不良预后的潜在生物标志物。

草苁蓉多糖下调miR-302a-3p表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨草苁蓉多糖(boschniakia rossica polysaccharides,BRPS)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,不同剂量的BRPS处理H9c2细胞;酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性;流式细胞术检测凋亡率;qRT-PCR检测miR-302a-3p的表达量;anti-miR-NC、anti-miR-302a-3p分别转染至H9c2细胞后进行H/R处理,miR-NC、miR-302a-3p mimics分别转染至H9c2细胞后加入100 mg·L^(-1)BRPS处理24 h,进行H/R处理;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达;线软件预测和双荧光素酶报告实验检测miR-302a-3p和LRP8的靶向关系;Western blot检测低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)的表达量。结果BRPS降低H/R诱导的H9c2细胞中MDA的水平、miR-302a-3p的表达量、细胞凋亡率、Bax表达(P<0.05),提高SOD、GSH-Px、Bcl-2(P<0.05);转染anti-miR-302a-3p后,MDA的水平、细胞凋亡率、Bax表达下调(P<0.05),SOD、GSH-Px、Bcl-2上调(P<0.05);转染miR-302a-3p mimics后,MDA的水平、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px和Bcl-2降低(P<0.05)。miR-302a-3p靶向调节LRP8,且BRPS通过下调miR-302a-3p上调LRP8基因的表达。结论BRPS通过调节miR-302a-3p/LRP8轴减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。

lncRNA XIST靶向miR-302a-3p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的调控机制

目的 探讨lncRNA X染色体失活特异转录因子(XIST)靶向miR-302a-3p对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的调控机制。方法 SW1353细胞分为Control组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-XIST组、IL-1β+si-PDK1组、IL-1β+si-XIST+miR-NC inhibitor组、IL-1β+si-XIST+miR-302a-3p inhibitor组。检测XIST、miR-302a-3p以及3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)mRNA表达;噻唑蓝(MTT)实验测定细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR检测炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10)水平;双荧光素酶报告基因检测实验证实miR-302a-3p与XIST或PDK1的靶向关系;免疫印迹法检测凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)及PDK1蛋白表达。结果 与IL-1β组相比,IL-1β+si-XIST组XIST表达下调,细胞活力升高,凋亡率降低,Bax表达及TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降,Bcl-2表达及IL-4、IL-10水平升高(P<0.05)。XIST直接靶向下调miR-302a-3p表达,miR-302a-3p下调可恢复si-XIST介导的促增殖、抗凋亡和炎症反应作用(P<0.05)。PDK1是miR-302a-3p的靶基因,沉默PDK1可抑制细胞的炎症反应(P<0.05)。结论 敲低XIST可提高IL-1β诱导软骨细胞的细胞活力,减轻OA样软骨细胞损伤,其作用机制与靶向上调miR-302a-3p进而抑制PDK1表达有关。

miR-302a-3p靶向调节FGF19/GSK-3β/Nrf2通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的:探讨miR-302a-3p靶向调节成纤维细胞生长因子19(FGF19)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法:将H9C2细胞分为Ctrl组、H/R组、inhibitorNC组、miR-302a-3pinhibitor组、miR-302a-3pinhibitor+si-NC组、miR-302a-3pinhibitor+si-FGF19组,检测miR-302a-3p表达、细胞增殖(OD450)、凋亡、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平及FGF19、p-GSK-3β、核Nrf2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达变化并探究miR-302a-3p与FGF19的关系。结果:与Ctrl组比较,H/R组H9C2细胞中miR-302a-3p、细胞凋亡率、ROS、MDA水平、Bax、caspase-3、p-GSK-3β蛋白表达升高,FGF19、核Nrf2蛋白表达、OD450值、SOD水平降低(P<0.05);与inhibitor NC组比较,miR-302a-3p inhibitor组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);si-FGF19减弱了下调miR-302a-3p对H/R诱导的心肌细胞损伤的保护作用。结论:下调miR-302a-3p可通过靶向激活FGF19/GSK-3β/Nrf2通路减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制分析

目的探讨miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制。方法进行人心脏瓣膜间质细胞培养与钙化诱导,设置对照组(Control)、钙化模型组(Model)、模型组+miR-302b-3p mimics NC组(miR-302b-3p mimics NC)、模型组+miR-302b-3p mimics组(miR-302b-3p mimics)、模型组+miR-302b-3p inhibitor NC组(miR-302b-3p inhibitor NC)、模型组+miR-302b-3p inhibitor组(miR-302b-3p inhibitor),共6组。通过细胞转染、茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、MTT检测细胞活性、实时荧光定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测实验,检测相关分子的表达水平与活性变化。结果与Control组比较,Model组中miR-302b-3p、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平升高(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力升高,N-乙酰氨基半乳糖转移酶3(GALNT3)和成纤维细胞生长因子23(FGF23)蛋白的表达水平降低(P均<0.05)。与Model组比较,miR-302b-3p mimics组miR-302b-3p和FGF23蛋白的表达水平升高(P均<0.05),OPN、OCN、RUNX2、GALNT3、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平降低(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力降低。miR-302b-3p inhibitor组则呈现相反的变化。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,与miR-302b-3p mimics+wt组相比,miR-302b-3p mimics NC+wt组相对荧光素酶活性升高(P<0.05),miR-302b-3p mimics+mut组与miR-302b-3p mimics NC+mut组相比,相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-302b-3p可抑制细胞钙化及增殖,通过负向调控GALNT3的表达水平,调控FGF23/PI3K/AKT通路来影响主动脉瓣膜的钙化过程。

Ang-2、miR-302b、IL-6在心肌梗死伴肺部感染患者早期诊断及心肌损伤评估中的价值

目的:探讨促血管生成素2(Ang-2)、微小RNA-302b(miR-302b)、白细胞介素-6(IL-6)在急性心肌梗死(AMI)伴肺部感染患者早期诊断及心肌损伤评估中的价值。方法:选取2019年1月~2021年12月中山大学附属第三医院粤东医院AMI伴肺部感染患者49例作为感染组,同期选取62例AMI患者作为未感染组。统计两组入院时、入院48 h后、出院时Ang-2、miR-302b、IL-6水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及ROC曲线下面积(AUC),分析血液各指标单一或联合诊断AMI伴肺部感染价值,并根据是否发生心肌损伤分为中重度心肌损伤(n=26)和轻度心肌损伤(n=23),比较入院时、入院48 h后、出院时血液各指标及心肌酶谱指标[肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)、谷草转氨酸(AST)],分析两者相关性。结果:入院48 h后两组血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平达到峰值,感染组血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05);联合诊断AMI伴肺部感染价值的AUC>入院48 h后Ang-2>入院48 h后miR-302b>入院48 h后IL-6,差异有统计学意义(P<0.05);入院48 h后中重度心肌损伤及轻度心肌损伤患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平达到峰值,中重度心肌损伤患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于轻度心肌损伤患者,差异有统计学意义(P<0.05);Ang-2、miR-302b、IL-6均与CK-MB、cTnI、AST呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ang-2、miR-302b、IL-6在AMI伴肺部感染患者中呈高表达,具有较高的疾病诊断价值,且与心肌损伤呈显著正相关。

miR-302a在胃癌中表达及其对胃癌细胞凋亡与细胞周期影响

目的研究微小RNA-302a(miRNA-302a)在胃癌标本中的表达水平与临床病理特征的关系,以及其对胃癌细胞的凋亡和细胞周期调控作用,以探讨将miR-302a用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法采用实时PCR(RT-PCR)方法检测胃癌组织和正常胃黏膜组织中miR-302a的相对表达水平,并分析其与对应患者的临床病理资料的相关性。同时,采用RTPCR方法检测miR-302a在胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803和BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1中的表达情况;选取miR-302a表达水平最低者为癌细胞,并转染过表达miR-302a的真核重组质粒p CDNA3.1-miR-302a;转染后,采用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和PI单染法检测miR-302a对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果胃癌组织中miR-302a的相对表达水平显著低于癌旁正常胃癌黏膜组织(P<0.05),且其表达与临床分期、病理分级和转移均有密切关系(P<0.05)。同时,在胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823中miR-302a的相对表达水平显著低于正常细胞GES-1中的表达(P<0.05),且在BGC-823中表达水平最低。p CDNA3.1-miR-302a质粒转染组与空白组和p CDNA3.1质粒转染组比较,miR-302a质粒转染后48 h后细胞凋亡水平显著升高,且G2/M期细胞数显著增高(P<0.05)。结论在胃癌组织和细胞中miR-302a均呈现低水平表达,当miR-302a过表达后,能显著增高胃癌细胞的凋亡水平并使细胞出现G2/M期阻滞,可能成为胃癌治疗的新靶点。

12个物种miR-302基因簇的生物信息学分析

很多microRNA(miRNA)基因在基因组上聚集排列形成miRNA基因簇。miRNA基因簇在进化上较为保守,有其特殊的生物学意义。miR-302基因簇在胚胎干细胞中特异表达,对胚胎干细胞的自我更新和多潜能维持有重要的作用。本文采用miRBase数据库查询和BLAST同源搜索方法共搜寻并分析了12个物种的miR-302基因簇。生物信息学分析表明,这些物种miR-302基因簇均位于LARP7蛋白基因的内含子区,但转录方向与LARP7基因转录方向相反。序列相似性分析显示,同一物种miR-302簇成员间以及不同物种相应miR-302簇成员间相似性均较高。进化分析表明,基因复制可能是miR-302基因簇进化的主要驱动力。

炎症相关细胞因子对食管癌细胞株miR-302b表达的影响

目的:研究食管癌细胞在炎症相关细胞因子作用下miR-302b表达情况,以明确miR-302b的表达水平是否与食管癌肿瘤相关性炎症有关。方法:选择4株食管癌细胞及1株永生化食管上皮细胞株作为对照。用含LPS、IL-6、IFN-γ、TGF-β的RPMI 1640培养基以及普通RPMI 1640培养基培养细胞。于刺激0h、12h、24h、48h提取总RNA,qRT-PCR检测miR-302b表达水平。结果:食管癌细胞miR-302b的表达水平较永生化食管上皮细胞的表达水平低;炎症相关细胞因子可以抑制食管癌细胞miR-302b的表达水平,而且随着刺激时间的延长,对miR-302b的抑制率逐渐升高;而永生化食管上皮细胞miR-302b的表达无明显变化。结论:miR-302b的表达与食管癌肿瘤相关性炎症具有相关性。

血清miR-302b在老年急性心肌梗死中的表达及其临床意义

目的探讨血清miR-302b在老年急性心肌梗死(AMI)患者中的表达及其临床意义。方法选取本院收治的138例老年AMI患者和65例老年体检者,比较两组血清miR-302b、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平变化。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平对老年AMI的诊断价值。采用Pearson相关性分析,分析老年AMI患者miR-302b水平与cTnI、CK-MB的相关性。结果 AMI组血清miR-302b(4.25±1.30 vs. 0.51±0.16)、cTnI(ng/mL:3.17±1.36 vs. 0.04±0.01)及CK-MB(U/L:73.50±19.36 vs. 11.70±2.25)水平均明显高于对照组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-302b、cTnI及CK-MB诊断AMI的临界值分别为2.73、1.52 ng/mL、61.30 U/L,三项联合诊断老年AMI的AUC最大为0.935,95%CI(0.872~0.985),其敏感度和特异度分别为94.8%和89.2%。相关分析显示,老年AMI患者血清miR-302b水平与cTnI、CK-MB均呈正相关(r=0.826、r=0.745,P<0.01)。结论血清miR-302b在老年AMI患者中呈高表达,与cTnI、CK-MB联合检测有助于提高老年AMI诊断的准确性。

miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用

目的研究miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用。方法通过qRT-PCR检测ESCC癌症组织与癌旁组织中miR-302b的表达量,并在炎症刺激后观察食管鳞癌TE-10细胞的增殖与侵袭能力,以及miR-302b与癌症相关性炎症(cancer related inflammation,CRI)相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量变化;通过转染改变miR-302b的表达水平,观察TE-10细胞的增殖与侵袭能力以及IRF2、ERBB4、CXCR4蛋白的表达量。结论 ESCC组织中miR-302b表达量显著减少;miR-302b可以通过减少肿瘤相关性验证CRI相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量来抑制TE-10细胞的增殖与侵袭,从而抑制ESCC的发生与发展。

长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1(musculin antisense RNA 1,MSC-AS1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用Lipofectamine TM 2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高(P<0.05);MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P<0.01),并提示患者的预后不良(P<0.01);敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。

miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬

目的探讨miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬。方法运用TargetScan在线分析miR-302b-3p与SQSTM1的相关性;将SQSTM1的3′UTR构建进PMIR-RB-REPORT质粒,利用luciferase assay检测miR-302b-3p是否靶向调控SQSTM1;用RNA转染试剂转染miR-302b-3p mimics或miR-302b-3p inhibitor进乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测SQSTM1的表达量和乳腺癌MCF7细胞自噬标志蛋白表达情况。单丹磺酰尸胺染色检测细胞自噬发生水平。结果 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR的584-590的位置;过表达miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显下降(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显上升(P<0.05),MCF7自噬发生水平降低(P<0.05);敲低miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显上升(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显下降(P<0.05),MCF7自噬发生水平升高(P<0.05)。结论 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR后降低SQSTM1的蛋白水平,最终抑制乳腺癌细胞MCF7的自噬。

miR-302b过表达对人舌癌细胞株TSCCa增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究miR-302b过表达对人舌癌细胞株TSCCa增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在的分子机制。方法用miR-302b-NC和miR-302b mimic转染舌癌细胞TSCCa,命名为miR-302b-NC组和miR-302b mimic组,以未转染的细胞为对照,转染48 h后,采用流式细胞仪检测转染效率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TSCCa细胞中miR-302b的表达情况,分别采用MTT实验、划痕实验和Transwell小室检测TSCCa细胞增殖、迁移和侵袭能力,采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测TSCCa细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达情况。结果流式细胞仪检测结果显示转染效率达85%以上;转染后,miR-302b mimic组人舌癌细胞TSCCa中miR-302b的表达水平明显高于对照组和miR-302b-NC组(P <0. 05); miR-302b mimic组人舌癌细胞TSCCa增殖率、迁移能力和侵袭能力显著低于对照组和miR-302b-NC组(P <0. 05); miR-302b mimic组人舌癌细胞TSCCa中PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平明显低于对照组和miR-302b-NC组(P <0. 05)。结论 miR-302b过表达能够抑制人舌癌细胞TSCCa增殖、迁移和侵袭,推测这一作用是通过调控PCNA、MMP-2、MMP-9的表达水平实现的,为舌癌的靶向治疗提供一定的理论依据。

hsa-miR-302a-3p靶向VEGFA抑制胃癌细胞增殖的机制研究

目的探讨过表达hsa-miR-302a-3p下调血管内皮生长因子A(VEGFA)对胃癌细胞SGC-7901存活、运动和上皮间质转化的调节作用。方法采用细胞转染,将hsa-miR-302a-3p mimic转染于miR组细胞,pcVEGFA转染于VEGFA组细胞,同时将两个基因共转染于miR+VEGFA组。采用RT-PCR和Western blot检测转染效率,生物信息学靶向预测和荧光素实验验证两个基因靶向关系,采用CCK-8法检测各组细胞增殖,Transwell检测各组细胞侵袭能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力,显微镜下观察细胞的形态是否发生上皮间质转化(EMT),采用Western blot检测各组细胞存活相关蛋白Ki67和Caspase-3、EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Snail以及VEGFA下游靶基因p-P38、p-MAPKAPK和p-Hsp27蛋白表达水平。结果VEGFA是miR-302a-3p的预测靶位点;与对照组相比,miR组细胞数量、侵袭和迁移率均下降(P<0.05),VEGFA组细胞数量、侵袭和迁移率均升高(P<0.05);与VEGFA组相比,miR+VEGFA组细胞数量、侵袭和迁移率均下降(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.05),Vimentin、N-cadherin和Snail蛋白表达水平下调(P<0.05),p-P38、p-MAPKAPK和p-Hsp27蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 hsa-miR-302a-3p通过抑制VEGFA的表达,抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭和迁移。

miR-302b在结肠癌组织中的表达及意义

目的:检测不同结肠组织(结肠癌、癌旁组织、结肠腺瘤性息肉组织)中miR-302b的表达差异,明确其与结肠癌临床病理参数的关系.方法:采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测30例结肠腺瘤组织和60对结肠癌及其癌旁组织中miR-302b的表达,分析结肠癌中miR-302b表达与临床病理特征之间的关系.结果:miR-302b在结肠癌组织、腺瘤性息肉、癌旁组织的表达依次升高,且各组间表达的差异有统计学意义(P<0.05).在结肠癌中,miR-302b在不同肿瘤分化程度、淋巴结是否转移、有无远处转移组间表达有显著差异(P<0.05).结论:miR-302b在结肠癌中低表达,提示其可能发挥抑癌基因的功能.