血清miR-375、miR-155与原发性肝癌临床分期及预后的关系

目的探讨原发性肝癌患者血清miR-375、miR-155与其临床分期及预后的关系。方法回顾性分析86例原发性肝癌患者资料,比较不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平,应用Spearman相关系数分析相关性;将患者以肝外转移分成转移组、非转移组,比较两组患者血清miR-375、miR-155差异,应用受试者曲线(ROC)分析两者诊断临床分期效能;随访1年内生存情况,应用Kaplan-Meier法、COX比例风险模型进行生存分析。结果不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375表达水平与肿瘤临床分期呈负相关(P<0.05),miR-155表达水平与临床分期呈正相关(P<0.05);转移组血清miR-375表达水平低于非转移组,miR-155表达水平高于非转移组,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155及联合诊断肿瘤转移的AUC分为0.898、0.847、0.941;miR-375高表达患者平均生存时间均长于miR-375低表达患者,miR-155高表达患者平均生存时间均短于miR-155低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155表达水平是患者预后独立影响因素(P<0.05)。结论血清miR-375、miR-155与患者临床分期密切相关,是预后独立影响因素指标,可作为原发性肝癌肿瘤转移的重要标志物,对临床诊疗提供参考与指导。

miR-375靶向PI3K/AKT通路在高糖诱导的人视网膜内皮细胞增殖和血管生成中的作用

目的探讨miR-375靶向磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)增殖和血管生成的影响机制。方法体外培养hRECs,对hRECs进行转染及双荧光素酶检测。hRECs分为对照组、高糖组、高糖+miR-375组、高糖+miR-375+LM22B-10组。采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用血管形成实验检测细胞血管形成能力,采用RT-qPCR检测hRECs内miR-375和PI3K mRNA的表达情况,采用Western blot检测hRECs内PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达的情况。结果与对照组比较,高糖组、高糖+miR-375组、高糖+miR-375+LM22B-10组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、PI3K和p-AKT/AKT的蛋白表达水平、血管形成能力和PI3K mRNA表达均显著升高,而miR-375表达降低(均为P<0.05);与高糖组比较,高糖+miR-375组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、PI3K mRNA和蛋白以及p-AKT/AKT的蛋白表达水平、血管形成能力均降低,而miR-375表达升高(均为P<0.05);与高糖+miR-375组比较,高糖+miR-375+LM22B-10组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、血管形成能力和p-AKT/AKT蛋白表达水平均升高(均为P<0.05),而miR-375、PI3K mRNA差异均无统计学意义(均为P>0.05)。转染miR-375模拟物和PI3K野生型载体后,hRECs中相对荧光素酶活性分别较转染miR-375阴性对照、转染PI3K突变型载体后显著降低(均为P<0.05)。结论miR-375靶向抑制PI3K/AKT通路可抑制高糖诱导的hRECs增殖和血管生成,进而缓解DR。

CircAGFG1通过miR-375/USP22轴调节食管鳞癌细胞的放射敏感性研究

目的研究环状带有FG重复序列1(CircAGFG1)通过miR-375/泛素特异性蛋白酶22(USP22)轴对食管鳞癌(ESCC)细胞放射敏感性的影响。方法采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测人ESCC细胞株KYSE150及人ESCC放射性抵抗细胞KYSE150-R中CircAGFG1、miR-375、USP22表达。将体外培养的KYSE150-R细胞随机分为对照组、辐照组、辐照+阴性对照组、辐照+CircAGFG1敲低组、辐照+CircAGFG1敲低+miR-375 inhibitor组,分组转染后,4Gy 6MV-X线辐照后24 h采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组KYSE150-R细胞中CircAGFG1、miR-375、USP22表达;采用CCK-8法和平板集落形成实验检测各组KYSE150-R细胞增殖;采用流式细胞术检测各组KYSE150-R细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组KYSE150-R细胞凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2比值(Bax/Bcl-2)。将各组细胞接种在裸鼠右后肢腋下来构建ESCC移植瘤模型,饲养3周后检测各组裸鼠肿瘤体积及重量。采用双荧光素酶报告基因实验检测KYSE150-R中CircAGFG1对miR-375的靶向调节与miR-375对USP22的靶向调节。结果与KYSE150细胞相比,KYSE150-R细胞中CircAGFG1 mRNA表达、USP22 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-375 mRNA表达降低(P<0.05)。与对照组相比,辐照+CircAGFG1敲低组CircAGFG1 mRNA表达、USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达升高(P<0.05);辐照组、辐照+阴性对照组细胞各指标比较无明显差异(P>0.05)。与辐照组相比,辐照+CircAGFG1敲低组CircAGFG1 mRNA、USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达升高(P<0.05)。与辐照+CircAGFG1敲低组相比,辐照+CircAGFG1敲低+miR-375 inhibitor组USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达降低(P<0.05);辐照+阴性对照组与对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。CircAGFG1可靶向下调KYSE150-R细胞miR-375表达,而miR-375可靶向下调KYSE150-R细胞USP22表达。结论敲低CircAGFG1可通过上调miR-375来减弱USP22表达,从而增强ESCC细胞的放射敏感性,提升放射性对ESCC细胞的杀伤力,并促使其凋亡。

miR-375靶向MMP13抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的为了探究miR-375是否通过影响基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达来调控骨肉瘤(osteosarcoma,OS)恶性特征。方法用Lipofectamine 3000试剂盒将质粒、miRNA转染至骨肉瘤细胞和HEK293细胞中。实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测OS患者和OS细胞中miR-375和MMP13的表达。蛋白质印迹法(Western blot)分析OS患者和OS细胞中MMP13蛋白的表达。双荧光素酶法分析miR-375与MMP13的靶向关系。伤口愈合和transwell实验分别分析OS细胞的迁移和侵袭。结果OS组织中miR-375的表达低于正常组织。MMP13在OS组织中表达上调。在OS患者中,MMP13的表达与miR-375呈负相关。与转染miRNA对照的OS细胞相比,转染miR-375模拟物OS细胞的迁移和侵袭明显被抑制。MMP13能部分逆转miR-375对OS细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论在OS细胞中,过表达miR-375通过调控MMP13的表达抑制细胞的迁移和侵袭。

CCAT1靶向抑制miR-375-3p通过线粒体途径诱导的人口腔癌SAS细胞凋亡

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)靶向miR-375-3p通过线粒体途径诱导人口腔癌SAS细胞凋亡的作用。方法:人口腔癌SAS细胞随机分为空白组、CCAT1下调组、CCAT1上调组、CCAT1下调对照组、CCAT1上调对照组、miR-375-3p下调组、miR-375-3p上调组、miR-375-3p下调对照组和miR-375-3p上调对照组。转染48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-375-3p表达、线粒体凋亡通路相关的基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达;免疫印迹检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶报告实验分析CCAT1与miR-375-3p的靶向关系。结果:与空白组和CCAT1下调对照组比较,CCAT1下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低;与空白组和CCAT1上调对照组比,CCAT1上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p下调对照组比较,miR-375-3p下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p上调对照组比较,miR-375-3p上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低。双荧光素酶实验结果提示CCAT1可靶向调控miR-375-3p。结论:CCAT1可抑制人口腔癌SAS细胞凋亡,推测是通过靶向抑制miR-375-3p的表达,调控线粒体凋亡通路相关基因及蛋白的表达来实现的。

长链非编码RNA IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达对喉癌细胞迁移及增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)-AS1通过调控微RNA-375(miR-375)表达对喉癌细胞迁移和增殖的影响。方法研究时间为2022年1月至2023年11月,研究地点为郑州大学附属洛阳中心医院中心实验室,研究类型为基础研究。实时荧光定量PCR(qPCR)检测喉癌细胞系AMC-NH-8、TU159、TU138、TU686和支气管上皮细胞系16HBE中IGF2BP2-AS1的表达。以TU686细胞为研究对象,将TU686细胞分为si-NC组和si-IGF2BP2-AS1组,采用IGF2BP2-AS1小干扰RNA下调IGF2BP2-AS1表达水平。划痕愈合实验和CCK-8法分析敲降IGF2BP2-AS1对TU686细胞迁移及增殖的影响。双荧光素酶报告基因实验验证IGF2BP2-AS1与miR-375的靶向关系。qPCR检测敲降IGF2BP2-AS1对miR-375表达的影响。Western blotting检测细胞中迁移蛋白N-钙黏着蛋白(N-Cadherin)、叉头框蛋白C2(FOXC2)和增殖蛋白CDK2、细胞周期蛋白A(Cyclin A)的表达。统计学方法采用单因素方差分析、t检验。结果与16HBE细胞相比,IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中均高表达(F=37.42,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞划痕愈合率低于si-NC组[(28.16±6.13)%比(65.08±3.82)%],差异有统计学意义(t=5.11,P<0.01)。在铺板后第2、3、4、5天,si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞增殖能力均低于si-NC组(t=3.83、3.17、3.02、6.31,均P<0.01)。IGF2BP2-AS1-Wt中,miR-375组相对荧光素酶活性低于miR-NC组(t=8.95,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞中miR-375表达高于si-NC组[(4.95±0.49)比(1.02±0.40)],差异有统计学意义(t=6.23,P<0.01)。敲降IGF2BP2-AS1后TU686细胞中迁移蛋白N-Cadherin、FOXC2表达与增殖蛋白CDK2、Cyclin A表达均低于si-NC组。结论IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中呈高表达,敲降IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达抑制喉癌TU686细胞的迁移及增殖能力。

产前超声联合血清miR-148b、miR-375检测在胎儿先天性心脏病诊断中的应用价值

目的 探讨微小RNA(miR)-148b、miR-375在胎儿先天性心脏病孕妇血清中的水平,及其联合产前超声在胎儿先天性心脏病诊断中的价值。方法 收集2019年1月至2023年1月进行产前筛查的疑似胎儿先天性心脏病的106例孕妇作为研究对象,根据产后随访结果将其分为病例组(先天性心脏病,n=80)和对照组(均无先天性心脏病,n=26)。比较2组血清miR-148b、miR-375水平;ROC曲线分析血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病的诊断效能;四表格法分析产前超声联合血清miR-148b、miR-375水平对胎儿先天性心脏病的诊断效能。结果 与对照组比较,病例组血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高(P<0.05)。产前超声联合血清miR-148b、miR-375诊断胎儿先天性心脏病的准确率为93.40%,敏感性为92.50%,特异性为96.15%。其中,三项联合诊断的敏感性高于血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05),三项联合诊断的准确率和特异性高于产前超声、血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05)。结论 胎儿先天性心脏病的孕妇血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高,产前超声联合血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病具有较高的诊断价值。

急性心肌梗死病人PCI术后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相对表达水平及其与主要不良心血管事件发生的关系

目的:分析急性心肌梗死(AMI)病人行经皮冠状动脉介入(PCI)术后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相对表达水平及其与主要不良心血管事件(MACE)发生的关系。方法:选取2018年1月—2021年1月我院收治的150例因患AMI进行PCI术的病人,同时选取同期100名健康体检者为对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测血清miR-135b-3p、miR-375-3p表达水平;采用Pearson法分析血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及其与临床资料的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-135b-3p、miR-375-3p对AMI病人PCI后发生MACE的预测价值。结果:相较于对照组,试验组血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平显著升高(P<0.05)。与非MACE组相比,MACE组C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-135b-3p、miR-375-3p水平显著上升(P<0.05)。AMI病人血清miR-135b-3p与miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关(P<0.05);血清miR-375-3p与CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。ROC结果显示,血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者联合预测AMI病人PCI术后发生MACE的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.78,0.756,0.869,其中联合预测AUC显著高于二者单独预测(P<0.05)。结论:AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高,且PCI术后发生MACE病人miR-135b-3p、miR-375-3p水平高于非MACE病人,可能成为AMI病人PCI术后发生MACE的预测因子。

间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375对结直肠癌发生的影响机制

目的探究间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375对结直肠癌发生的影响机制。方法分离培养并鉴定结直肠癌组织中间充质干细胞,从间充质干细胞中分离并鉴定胞外囊泡。将胞外囊泡装载miR-375过表达模拟物,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-375的表达情况。培养结直肠癌细胞系SW480,将胞外囊泡和SW480细胞共培养。双荧光素酶报告分析miR-375和同源框蛋白(HOX)A3的靶向关系。qRT-PCR检测共培养后,细胞中miR-375和HOXA3 mRNA的表达情况。Western印迹检测HOXA3蛋白的表达情况。对细胞分别进行miR-375和HOXA3过表达处理,CCK-8法、Transwell实验分别检测各组细胞增殖和侵袭能力变化情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果成功分离间充质干细胞来源的胞外囊泡,并将miR-375过表达模拟物装载至胞外囊泡。miR-375可靶向负调控HOXA3的表达。过表达miR-375后抑制SW480细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡,而过表达HOXA3则会促进SW480细胞增殖、侵袭,抑制细胞凋亡,且过表达HOXA3后,会阻断miR-375对SW480细胞增殖和侵袭的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375,进入结直肠癌细胞后,通过靶向抑制HOXA3的表达,进而抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭,并促进细胞凋亡。

早发型子痫前期患者血清miR-152,miR-375水平与妊娠结局关系

目的:探讨早发型子痫前期患者血清miR-152、miR-375水平与妊娠结局关系。方法:回顾性收集2017年8月-2019年8月在本院住院分娩的早发型子痫前期患者88例(病例组)和规律产前检查健康孕妇78例(对照组),比较两组一般资料,通过随访妊娠结局将病例组分为不良组和良好组;采用实时荧光定量PCR检测两组血清miR-152、miR-375相对表达水平;多因素Cox回归分析早发型子痫前期患者发生不良妊娠结局的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-152、miR-375对早发型子痫前期患者发生不良妊娠结局的预测价值。结果:病例组血清miR-152(7.56±2.42)、miR-375(4.72±1.02)表达高于对照组(1.00±0.26、1.10±0.25)(均P<0.05),病例组中发生不良妊娠结局26例(29.6%),妊娠结局不良患者血清miR-152、miR-375(9.39±2.78、5.98±1.53)表达高于良好患者(6.79±2.06、4.19±0.51)(均P<0.05)。病例组收缩压、舒张压、血清miR-152,miR-375是患者发生不良妊娠结局的独立危险因素;血清miR-152、miR-375评估早发型子痫前期患者发生不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.769、0.829,截断值分别为7.88、4.99,灵敏度分别为73.1%、69.2%,特异度分别为72.6%、98.4%,且miR-152、miR-375联合评估的AUC为0.921,灵敏度为80.8%,特异度为96.8%。结论:早发型子痫前期患者血清miR-152、miR-375升高,是发生不良妊娠结局的危险因素,且可作为评估不良妊娠结局的参考指标。

外周血miR-92a、miR-375及miR-760对结直肠癌不同TNM分级的诊断预测价值

目的 探讨外周血miR-92a、miR-375及miR-760对结直肠癌不同TNM分级的诊断价值。方法 选取2018年1月至2021年1月运城市中心医院收治的70例结直肠癌患者,提取其血清总RNA行反转录,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction, RT-qPCR)分析不同TNM分期外周血miR-92a、miR-375及miR-760的表达水平。采用Pearson相关性分析miR-92a、miR-375及miR-760表达水平与TNM分期的相关性,采用ROC曲线分析3种miRNAs在不同TNM分期的诊断价值。结果 miR-92a在结直肠癌TNM各分期中的表达呈上升趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P <0.05)。miR-760在结直肠癌TNM各分期中的表达呈下降趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P <0.05)。miR-375在TNM各分期中表达水平呈下降趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P<0.05)。miR-92a、miR-375及miR-760表达水平与性别和年龄均无相关性(P> 0.05),miR-92a表达水平与结直肠癌TNM分期呈正相关(r=0.683,P <0.01),miR-375、miR-760表达水平与结直肠癌TNM分期呈负相关(r=-0.472,-0.684,P <0.01)。miR-92a、miR-375及miR-760鉴别结直肠癌TNM IV期和TNMⅠ~Ⅲ期的AUC分别为0.926(95%CI:0.856~0.997),0.804(95%CI:0.622~0.985)和0.836(95%CI:0.733~0.938),灵敏度分别为100.00%,63.64%和72.73%,特异性分别为73.58%,86.79%和76.56%。结论 miR-92a、miR-375及miR-760可以鉴别结直肠癌不同TNM分期,有望应用于其预后判断。

miR-375表达对脉络膜黑色素瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-375表达对脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞增殖和侵袭的影响。方法:培养MUM-2B细胞,分别转染miR-375模拟物序列(模拟物组)、miR-375抑制物序列(抑制物组)、阴性对照序列(阴性对照组)和不做任何处理(空白组),分别采用qRT-PCR实验、CCK-8实验、细胞凋亡实验、Transwell实验检测细胞中miR-375、细胞增殖活性、细胞凋亡情况、细胞迁移和侵袭情况。结果:相比于阴性对照组(1.01±0.10)和空白组(1.03±0.07),模拟物组细胞中miR-375表达量(2.65±0.15)升高,而抑制物组细胞中miR-375表达量(0.28±0.06)降低(P<0.05);与空白组和阴性对照组比较,模拟物组细胞24、48、72和96h时OD值均降低(P<0.05),而抑制物组细胞24、48、72和96h时OD值均升高(P<0.05);与空白组细胞凋亡率(20.54±4.01)%和阴性对照组细胞凋亡率(22.80±4.28)%比较,模拟物组细胞凋亡率(39.11±3.37)%升高(P<0.05),而抑制物组细胞凋亡率(10.13±2.17)%降低(P<0.05);与空白组和阴性对照组比较,模拟物组细胞迁移数和细胞侵袭数均降低(P<0.05),而抑制物组细胞迁移数和细胞侵袭数均升高(P<0.05)。结论:上调MUM-2B细胞中miR-375表达可降低细胞增殖活性,加速细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,下调miR-375表达则发挥相反的作用,表明miR-375可能在脉胳膜黑色素瘤病程中发挥抑癌功能。

miR-375-3p过表达的甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭能力变化

目的探讨miR-375-3p过表达后甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭能力以及PI3K/AKT/EMT信号通路相关蛋白的变化。方法取人甲状腺上皮细胞系Nthy-ori3-1和人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1、BHP5-16、BHP2-7、K-1,采用RT-qPCR法检测细胞miR-375-3p表达。以四种甲状腺乳头状癌细胞中miR-375-3p表达最低的细胞为研究对象,将其分为转染组和阴性对照组,转染组通过转染miR-375-3p模拟物miR-375-3p-mimics上调细胞中miR-375-3p表达,阴性对照组转染阴性对照序列scramble。采用MTT法检测两组细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT和上皮间质转化(EMT)相关蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达。取甲状腺乳头状癌细胞,随机分为阴性对照组、miR-375-3p过表达组和miR-375-3p过表达+IGF-1组,miR-375-3p过表达组、阴性对照组分别转染miR-375-3p模拟物miR-375-3p mimics和阴性对照序列scramble,miR-375-3p过表达+IGF-1组转染miR-375-3p mimics并加入PI3K/AKT信号通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)。观察三组细胞增殖和侵袭能力。结果人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1、BHP5-16、BHP2-7、K-1中miR-375-3p表达水平均低于人甲状腺上皮细胞Nthy-ori3-1(P均<0.05)。miR-375-3p过表达组转染24、48、72 h的OD值低于阴性对照组,侵袭细胞数少于阴性对照组(P<0.05或<0.01)。与阴性对照组比较,miR-375-3p过表达组p-PI3K和p-AKT表达水平降低,E-cadherin表达水平升高,N-cadherin、波形蛋白表达水平降低(P均<0.05)。加入IGF-1后,与miR-375-3p过表达组比,miR-375-3p过表达+IGF-1组细胞增殖OD值和细胞侵袭数均增加(P均<0.05)。结论miR-375-3p在甲状腺乳头状癌细胞系中下调表达,miR-375-3p过表达可抑制细胞增殖、侵袭过程,其机制可能与抑制PI3K/AKT/EMT信号通路有关。

曲妥珠单抗结合帕妥珠单抗治疗HER2阳性乳腺癌的疗效及对血清miR-375 miR-30d表达变化的影响

目的:观察曲妥珠单抗联合帕妥珠单抗治疗人表皮生长因子受体-2(HER2)阳性乳腺癌的疗效及血清微RNA-375(miR-375)、微RNA-30 d(miR-30d)表达量变化的影响。方法:采用简单随机数字表及随机数余数分组法将2020年2月至2023年2月我院收治的139例HER2阳性乳腺癌患者分为联合组(n=70,曲妥珠单抗联合帕妥珠单抗治疗)与对照组(n=69,曲妥珠单抗治疗),每隔21d给药1次为1个疗程,共治疗4个疗程。比较两组临床疗效,比较治疗前、治疗后两组肿瘤相关指标[糖类抗原(CA125、CA153)、癌胚抗原(CEA)、循环肿瘤细胞(CTC)]、T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、血清微RNA(miR-375、miR-30d)表达量及生活质量[癌症患者生命质量测定量表(QLQ-C30)]水平变化,并统计两组不良反应。结果:治疗期间两组均无患者死亡。联合组临床总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后,两组血清CA125、CA153、CEA、CTC阳性率、CD8^(+)、miR-375、miR-30d表达量、QLQ-C30评分均低于治疗前(P<0.05),血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于治疗前,联合组各项指标差值均高于对照组(P<0.05);所有不良反应经对症处理后均缓解,联合组心悸发生率高于对照组(P<0.05)。结论:曲妥珠单抗联合帕妥珠单抗能有效提高HER2阳性乳腺癌患者免疫功能,降低肿瘤标志物水平及miR-375、miR-30d表达,改善生活质量,且安全性较高,临床疗效显著。

miR-375-3p过表达调控Akt-eNOS信号通路促进心肌梗死大鼠心肌修复作用机制

目的探究miR-375-3p过表达调控丝氨酸-苏氨酸激酶(Akt)-内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路促进心肌梗死(MI)大鼠心肌修复作用的机制。方法将大鼠分为假手术(sham)组、MI组、阴性对照(NC)组、miR-375-3p组,各10只。比较各组miR-375-3p相对表达、心功能指标[左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、短轴缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)]、心肌损伤标志物[乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(cTnT)I、脑钠肽前体(Pro-BNP)]、心肌梗死面积、心肌组织病理学变化及Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS蛋白表达。结果与sham组比较,MI组、NC组miR-375-3p表达显著降低;miR-375-3p组miR-375-3p表达显著高于sham组及MI组(P<0.05)。与sham组比较,MI组、NC组及miR-375-3p组LVEDD、LVESD及LDH、cTnTI、Pro-BNP显著升高,FS、LVEF及Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS蛋白表达显著降低,MI面积显著增加(P<0.05)。与MI组比较,miR-375-3p组LVEDD、LVESD及LDH、cTnTI、Pro-BNP显著降低,MI面积显著减少,FS、LVEF及Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论miR-375-3p过表达可激活Akt-eNOS信号通路促进MI大鼠心肌修复。

胃癌血清miR-375和CHSY1表达与幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的探讨胃癌血清miR-375和硫酸软骨素酶1(CHSY1)表达水平与幽门螺杆菌(Hp)感染的相关性。方法选取2018年6月至2021年6月我院收治的胃癌患者96例设为胃癌组,另选取同期在我院就诊的慢性浅表性胃炎患者68例设为对照组。采用13C呼气试验检测Hp感染情况,根据Hp的感染密度将患者分为Hp轻度组(25例)、Hp中度组(30例)、Hp重度组(26例)。采用qPT-PCR测定血清中miR-375和CHSY1 mRNA表达水平。Spearman相关性分析血清中miR-375和CHSY1表达水平与胃癌患者Hp感染的相关性。结果与对照组相比,胃癌组Hp感染阳性率显著较高(P<0.05),Hp阴性及Hp阳性患者血清中miR-375表达水平均显著降低(P<0.05),CHSY1 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)。胃癌组及对照组Hp阳性患者血清中miR-375表达水平低于Hp阴性患者,CHSY1 mRNA表达水平高于Hp阴性患者(P<0.05)。随着Hp的感染程度增加,miR-375的表达水平呈降低趋势(P<0.05),CHSY1 mRNA的表达水平呈升高趋势(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清中miR-375表达水平与胃癌患者Hp感染呈负相关(r=-0.648,P<0.001),CHSY1 mRNA表达水平与胃癌患者Hp感染呈正相关(r=0.534,P<0.001)。结论胃癌患者血清中miR-375表达水平降低,CHSY1表达水平升高,且与Hp感染密切相关。

lncRNA BDNF-AS靶向miR-375调控氧化型低密度脂蛋白诱导的动脉粥样硬化模型细胞损伤实验研究

目的探讨长链非编码RNA脑源性神经营养因子反义因子(lncRNA BDNF-AS)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的动脉粥样硬化模型细胞损伤的影响及其对miR-375的靶向调控作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别将lncRNA BDNF-AS小分子干扰RNA与miR-375寡核苷酸模拟物及其阴性对照、lncRNA BDNF-AS小分子干扰RNA si-lncRNA BDNF-AS与miR-375特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照、si-lncRNA BDNF-AS与miR-375特异性寡核苷酸抑制剂转染至HUVECs,并用ox-LDL处理24 h;仅使用ox-LDL处理的细胞为ox-LDL组,正常细胞为Con组。采用qRT-PCR法检测lncRNA BDNF-AS、miR-375的表达量;利用试剂盒检测丙二醛(MDA)的含量与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测lncRNA BDNF-AS、miR-375的靶向关系。结果与Con组比较,ox-LDL组lncRNA BDNF-AS的表达水平升高(t=26.180,P<0.01),miR-375的表达水平降低(t=32.413,P<0.01);ox-LDL诱导的HUVECs中MDA含量、凋亡率升高(t=27.588、26.806,P<0.01),SOD、CAT的活性降低(t=18.925、37.887,P<0.01)。转染lncRNA BDNF-AS小分子干扰RNA后,lncRNA BDNF-AS的表达水平、MDA含量、凋亡率降低(t=17.220、15.527、18.930,P<0.01),SOD、CAT的活性升高(t=12.570、17.202,P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实lncRNA BDNF-AS可靶向结合miR-375;转染miR-375寡核苷酸模拟物可明显降低MDA的含量及凋亡率(t=11.945、20.881,P<0.01),提高SOD、CAT的活性(t=15.859、13.102,P<0.05)。共转染si-lncRNA BDNF-AS和anti-miR-375后,MDA含量、凋亡率升高(t=10.712、15.218,P<0.01),SOD、CAT的活性降低(t=7.961、10.773,P<0.01)。结论抑制lncRNA BDNF-AS表达可上调miR-375的表达而抑制ox-LDL诱导HUVECs氧化应激及细胞凋亡,从而减轻动脉粥样硬化模型细胞损伤。

甲状腺乳头状癌组织中galecti-3与miR-375水平表达意义及相关性研究

目的探索甲状腺乳头状癌组织中半乳糖凝集素(galectin)-3与微小RNA(micro RNA,miRNA)-375水平表达意义及相关性。方法选取2014年5月~2018年9月于张家口市第一医院普通外科接受手术治疗的87例甲状腺乳头状癌患者作为研究对象,收集其甲状腺癌组织及对应的癌旁组织标本。通过实时荧光定量反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测galectin-3和miR-375在各个组织中的表达情况,分析二者的表达关系及其与临床病理特征的相关性。此外,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测入院时患者血清galectin-3水平,采用RT-PCR法检测血清miR-375水平,通过Kaplan-Meier生存曲线评估血清galectin-3与miR-375表达对甲状腺乳头状癌病人预后的影响。结果与癌旁组织相比,galectin-3在甲状腺乳头状癌中表达上调(1.77±0.48 vs 0.57±0.16),差异有统计学意义(t=22.122,P<0.001);而miR-375在癌组织中的表达水平下调(1.34±0.39 vs 2.12±0.62),差异有统计学意义(t=9.933,P<0.05)。galectin-3表达与肿瘤大小、包膜侵犯、血管浸润、淋巴结转移有关(χ^(2)=9.936~20.028,均P<0.05);miR-375表达与肿瘤大小、血管浸润有关(χ^(2)=12.590,6.403,均P<0.05)。血清galectin-3与miR-375表达水平呈负相关(r=-0.487,P<0.001)。血清galectin-3高表达者三年总体生存期(overall survival,OS)低于低表达者(71.7%vs 93.3%),差异有统计学意义(Log-rank=7.493,P=0.001);miR-375高表达患者的三年OS高于低表达者(93.3%vs 73.9%),差异有统计学意义(Log-rank=7.021,P=0.001)。结论galectin-3在甲状腺乳头状癌组织中表达升高,miR-375在甲状腺乳头状癌组织中表达降低,二者共同参与甲状腺乳头状癌的发生发展,对预后具有一定影响。

miR-375、miR-146a及miR-21在慢性乙型病毒性肝炎、肝硬化及肝癌患者中表达及其对肝癌的诊断意义

目的观察慢性乙型病毒性肝炎(简称乙肝)、肝硬化及肝癌患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)-DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)和碱性磷酸酶(ALP)水平,并分析miR-375、miR-146a及miR-21在3组中的表达变化。方法收集43例慢性乙肝患者纳入慢性乙肝组、36例肝硬化患者纳入肝硬化组,31例肝癌患者纳入肝癌组。采用全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST、GGT和ALP水平;采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测3组血清中HBV-DNA的浓度及miR-375、miR-146a和miR-21的表达情况,并用受试者工作特征(ROC)曲线进行分析。结果肝硬化组HBV-DNA阳性率明显低于慢性乙肝组和肝癌;3组血清ALT、AST、GGT和ALP水平有明显差异(P<0.05);肝癌组血清ALT、AST水平明显低于慢性乙肝患者,血清ALP水平明显高于慢性乙肝组。miR-146a及miR-21在慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者血清中的水平呈现显著增高趋势,miR-375表达则呈现显著下调趋势(P<0.05);miR-375、miR-146a及miR-21者联合检测对肝癌诊断的灵敏度、特异度和准确度较单独检测明显提升。结论血清HBV-DNA和血清酶学检测对于慢性乙肝患者疾病进展的判断有一定辅助作用;联合检测miR-375、miR-146a及miR-21可提高对肝癌的诊断效能。

miR-375靶向YAP1调控上皮-间质转化参与乳腺癌细胞曲妥珠单抗的耐药

背景与目的:曲妥珠单抗作为人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)常用靶向抗体药物,其耐药问题日益凸显。探讨miR-375靶向Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)介导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)参与乳腺癌细胞曲妥珠单抗的耐药。方法:建立HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药的细胞株,转染miR-375 mimic来上调其表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-375的表达情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测其EMT标志蛋白波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达变化情况。采用MTT实验和平板克隆实验检测其药物敏感性及增殖能力的变化。双荧光素酶报告基因实验验证miR-375与YAP13’-UTR的靶向关系,采用RTFQ-PCR检测临床水平上两者的相关性。对细胞株共转染miR-375 mimic和YAP1-MUT载体后,采用Western blot检测其EMT蛋白表达的恢复情况,采用MTT实验和平板克隆形成实验检测其药物敏感性和增殖能力的恢复情况。结果:与NC组比较,miR-375 mimic组的药物敏感性、平板克隆形成能力均下调(P均<0.01),其EMT标志蛋白vimentin、E-cadherin表达也发生逆转(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,YAP1是miR-375的靶基因,miR-375与YAP1在乳腺癌患者肿瘤组织中呈负相关(r=-0.5868,P=0.0028)。miR-375 mimic组同时过表达YAP1后可恢复其药物敏感性(P<0.01)、克隆形成能力(P<0.05)和EMT标志蛋白vimentin、E-cadherin表达情况(P均<0.05)。结论:miR-375通过靶向YAP1在曲妥珠单抗耐药细胞株中介导EMT,进而调控曲妥珠单抗耐药细胞株的药物敏感性。