血浆外泌体miR-548k在食管鳞癌中的表达及诊断价值

目的探讨血浆外泌体中与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生相关的microRNAs(miRNAs),并评估其在ESCC诊断中的应用价值。方法选取2020年3月至2021年6月山东大学第二医院胸外科收治的55例ESCC患者为ESCC组,另选取55例健康体检者为对照组,提取受试者血浆外泌体,并通过透射电镜、NanoSight粒径分析及Western blotting进行鉴定。筛选阶段,送检对照组、ESCC组术前血浆外泌体RNA各5例进行测序。采用qRT-PCR法对训练集、验证集中差异性miRNAs分子表达进行检测,并通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估差异性miRNAs分子的诊断价值。结果测序结果显示,与对照组相比,5个miRNAs(miR-548k、miR-6516-5p、let-7b-3p、miR-3934-5p、miR-196a-5p)在ESCC组血浆外泌体中表达显著上调,8个miRNAs(miR-34c-5p、novel_167、miR-548u、miR-548ah-3p、miR-548p、miR-200a-5p、miR-200b-3p、miR-1228-5p)明显下调。通过训练队列证实,miR-548k在ESCC组血浆外泌体中明显上调(P<0.001),血浆外泌体miR-548k用于ESCC诊断时ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.918,明显优于miR-34c-5p、miR-548u、miR-6516-5p。通过验证队列进一步证实,miR-548k在ESCC组血浆外泌体中高表达(P<0.001),血浆外泌体miR-548k可用于ESCC患者诊断(AUC值为0.889)。结论miR-548k在ESCC组血浆外泌体中表达显著增高,血浆外泌体miR-548k对ESCC诊断有一定的临床应用价值。

重症肌无力伴胸腺增生患者胸腺内miR-548k调控CXCL13表达的研究

目的 探讨重症肌无力伴胸腺增生（MGH）患者胸腺内B细胞趋化因子13（CXCL13）表达的微小RNA（miRNAs）调控机制。方法 收集26例胸腺标本，分别来源于自2012年3月至2013年8月在广西医科大学第一附属医院心胸外科住院确诊为重症肌无力并行胸腺完整切除术的13例患者（MGH组），以及同期因先天性心脏病行开胸治疗并在手术过程中切除胸腺的13例患者（对照组）。应用miRNAs基因芯片筛选MGH组与对照组之间表达有差异的miRNA；应用生物信息学预测方法并结合miRNAs芯片检测结果寻找靶向B细胞趋化因子13（CXCL13）的miRNA；对CXCL13mRNA和预测的miRNAs在MGH组与对照组胸腺内的表达进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析，然后进行双荧光报告分析微小RNA-548k（miR-548k）模拟物组与空白对照组的CXCL13-3’非翻译区（UTR）双荧光载体荧光素酶活性。结果 （1）miRNAs芯片筛选结果显示，在MGH患者胸腺内呈显著差异表达的miRNAs有33个，其中miR-548k是下调最显著的一个（1．98倍）。（2）生物信息学预测显示，miR-548k与CXCL13的3’UTR有明显的相互作用。（3）qRT-PCR定量分析发现，MGH组胸腺内miR-548k的表达量较对照组明显下调（0．55±0．20vs1．33±0．36）．差异有统计学意义（P〈0．05）；MGH组胸腺内CXCL13的表达量较对照组明显上调（4．93±1．95vs1．04±0．20），差异有统计学意义（P〈0．05）；MGH组胸腺内miR-548k与CXCL13表达呈明显负相关（r=-0．93，P=0．003）。（4）双荧光报告分析显示，miR-548k模拟物组的CXCL13-3’UTR双荧光载体荧光素酶活性较空白对照组下降约61．5％（0．385±0．016vs1．000±0．0501，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 MGH患者胸腺内miR-548k的低表达很可能通过转录后基因沉默机制使其靶基因CXCL13过表达，从而参与重症肌无力的发生发展。