miR200c过表达对寡灶型转移细胞株体外特性的影响

目的探索miR200c稳定过表达对寡灶型转移肿瘤细胞株体外癌症生物学特性的影响。方法通过慢病毒感染建立稳定上调miR200c表达的寡灶型转移细胞株MDA-435-OL-miR200c(实验组),并同时建立阴性对照组(感染空质粒LV3NC)和阳性对照组(多灶型细胞株MDA-435-POL),通过CCK-8增殖曲线测定、琼脂平板克隆实验、Transwell小室迁移和侵袭实验来阐明上调miR200c对寡灶型转移细胞体外特性的影响以及上调目的基因后寡灶型与多灶型转移细胞株体外癌症生物学特性的不同和联系。结果在稳定寡灶转移细胞株中过表达miR200c对细胞体外克隆形成率为(0.69±0.02),迁移细胞数为(21.20±2.35),侵袭细胞数为(56.80±5.22),均较阴性对照组显著增加(P<0.05),与阳性对照组体外特性基本一致。但miR200c过表达对增殖能力没有显著的影响。结论寡灶型细胞株稳定上调miR200c后体外克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均有所提高,且呈现出多灶型细胞株的特性。

miR200c、E-Cad和ZEB1在子痫前期患者胎盘组织中的差异表达

目的:探讨miR200c和E-Cad、ZEB1的靶向关系。方法:采用qRT-PCR检测子痫前期患者和正常妊娠者胎盘组织miR200c和E-Cad、ZEB1表达;western blotting检测E-Cad和ZEB1蛋白水平表达。结果:qRT-PCR结果显示,与正常妊娠者比较,子痫前期患者胎盘组织中miR200c的表达水平显著增高,E-Cad mRNA表达水平显著升高,ZEB1 mRNA表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。western blotting结果显示,与正常妊娠者比较,子痫前期患者E-Cad蛋白水平显著升高,ZEB1蛋白水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR200c调控E-Cad和ZEB1的表达。

miR200c对卵巢上皮性癌细胞转移潜能影响及其机制探讨

目的:探讨miR200c对卵巢癌细胞SKOV3和HO-8910转移潜能的影响及其调控机制。方法:人工合成miR200cmimic(实验组)和对照无关序列(阴性对照组),用脂质体将其转入SKOV3和HO-8910细胞,以SKOV3和HO-8910为空白对照,培养48h后,应用RT-PCR技术检测miR200c的相对表达;采用Transwell小室装置检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞中上皮向间质转化相关蛋白ZEB1、E-cadherin和Vimentin的表达;同时应用酶联免疫吸附实验检测间皮素和CA125的表达变化。结果:miR200c表达与空白对照组比较,SKOV3-mimic组为297.40±5.26倍,F=77.571,P<0.001;HO-8910-mimic组为348.57±6.50倍,F=63.563,P<0.001。侵袭到滤膜下的细胞数SKOV3-mimic组为74.20±7.44,低于空白对照组和阴性对照组,F=48.413,P<0.001;HO-8910-mimic组为98.67±7.62,低于空白对照组和阴性对照组,F=55.133,P<0.001。迁移到滤膜下的细胞数SKOV3-mimic组为56.27±6.36,低于空白对照组和阴性对照组,F=55.354,P<0.001;HO-8910-mimic组为91.33±5.75,亦低于空白对照组和阴性对照组,F=60.374,P<0.001。SKOV3-mimic组E-cadherin蛋白相对表达量为155.36±18.52,较对照组高,F=62.451,P=0.002,ZEB1和Vimentin蛋白表达降低,P值分别为0.003和0.005;HO-8910-mimic组E-cadherin蛋白相对表达量为149.90±38.53,较对照组高,F=54.536,P=0.002,ZEB1和Vimentin蛋白表达降低,P值分别为0.006和0.005。转染miR200cmimic后,SKOV3中CA125表达降低了33.2%,F=35.646,P=0.005,间皮素表达降低了39.6%,F=25.625,P=0.006;HO-8910中CA125表达降低了37.2%,F=27.426,P=0.007,间皮素表达降低了41.2%,F=33.735,P=0.005。结论:miR200c可通过miR200c/ZEB1/E-cadherin和间皮素/CA125通路抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力。

miR200家族在乳腺癌患者血浆中表达水平的检测及其临床意义

目的:检测microRNA200 (miR200)家族在乳腺癌患者和正常人血浆中表达水平,评价其对乳腺癌筛查、进展和预后评估的潜在价值。方法:收集82例乳腺癌患者(乳腺癌组)和30名健康女性(对照组)的血浆标本,提取血浆中的微小RNAs (miRNAs),逆转录后采用实时荧光定量PCR法检测2组受试对象血浆中miR200家族(miR200a、miR200b、miR200c、miR141和miR429)的表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆中miRNAs的诊断价值,分析乳腺癌患者血浆miRNAs表达水平与临床病理参数的关系;采用Cox风险比例模型进行生存分析。结果:乳腺癌组患者血浆中miR141表达水平低于对照组(P<0.01),ROC曲线下面积(AUC)为0.717 (P<0.01);miR200b表达水平低于对照组(P=0.006),AUC为0.685(P=0.003);但miR200a、miR200c和miR429表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P=0.268,P=0.075,P=0.872)。联用miR141和miR200b时,AUC为0.735,比单用miR141稍有提升。miR200家族的表达水平与乳腺癌临床病理特征和术后总生存期无关联(P>0.05)。结论:miR200b和miR141有可能作为乳腺癌诊断的分子生物学指标。

miR-200c在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的研究miR-200c在肝细胞癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法收集肝细胞癌手术组织标本52例,30例癌旁正常组织作为对照,采用qRT-PCR检测肝细胞癌组织及对照组织中miR-200c的表达情况,分析miR-200c表达水平与肝细胞癌临床病理参数之间的关系。结果肝细胞癌组织中miR-200c平均表达量明显低于癌旁对照组织,差异具有统计学意义,癌旁对照组织中miR-200c平均表达量约为肝细胞癌的2.90倍。miR-200c的表达水平与肝细胞癌恶性程度、肿瘤分化程度以及AFP表达有关,miR-200c的表达水平与肝细胞癌患者年龄、性别、HBsAg、肿瘤大小、是否合并肝硬化等无关。多元Logistic回归模型分析发现,肿瘤大(OR=2.44,95%CI:1.22～10.36)、血清AFP高(OR=2.39,95%CI:1.78～5.34)、肿瘤分化程度低(OR=3.08,95%CI:2.29～6.03)是肝癌发病的独立危险因素。结论 miR-200c与肝细胞癌的发生、临床进展密切相关,它可能是肝细胞癌新的潜在的治疗靶点及诊断预后分子标志物。

血清miR⁃200c表达与2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的相关性研究

目的研究血清miR⁃200c表达与2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的相关性。方法选择2015年3月至2019年10月期重复收治入院的108例2型糖尿病患者,根据首次入院时尿白蛋白水平分为无白蛋白尿组55例、微量白蛋白尿组35例、大量白蛋白尿组18例,根据第二次入院时尿白蛋白变化分为白蛋白尿进展组和非进展组,检测首次入院时血清miR⁃200c表达量并分析白蛋白尿短期进展的相关因素。结果与无白蛋白尿组、微量白蛋白尿组比较,大量白蛋白尿组患者的糖尿病病程明显延长,高血压率、FBG、HbA1c%、Scr、eGFR、miR⁃200c均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与非进展组患者比较,进展组患者高血压率、Scr、eGFR、miR⁃200c均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistics回归分析显示,高血压及miR⁃200c增加是白蛋白尿短期进展的危险因素,差异具有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR⁃200c对白蛋白尿短期进展具有预测价值,最佳截点为0.865。结论血清miR⁃200c表达增加是2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的危险因素且对白蛋白尿短期进展具有预测价值。

miR-200c在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-200c(Homo sapiens miR-200c)在人胃癌组织的表达改变情况及其临床意义。方法:采用原位杂交检测40例正常人群胃黏膜组织以及121例胃癌患者组织中miR-200c的表达情况。结果:原位杂交实验证实miR-200c在胃癌组织中表达显著下调。在121例胃癌组织中,miR-200c的表达水平与胃癌临床分期(P<0.05)以及淋巴结转移(P<0.01)情况显著相关。结论:miR-200c在胃癌组织中表达下调,其下调程度与胃癌临床分期以及淋巴结转移情况相关。

冬凌草甲素调控miR-200c/EZH2轴抑制黑色素瘤细胞上皮-间质转化的机制研究

目的 探究冬凌草甲素调控微小RNA200c(miR-200c)/组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)轴抑制黑色素瘤细胞(A375细胞)上皮-间质转化(EMT)的影响机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375细胞活力的影响;将A375细胞分为对照组、冬凌草甲素组、mimic control组、miR-200c mimics组、冬凌草甲素+inhibitor control组、冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组,qRT-PCR检测miR-200c、EZH2 mRNA表达情况;免疫印迹法检测EZH2及EMT相关蛋白表达情况;黏附实验检测A375细胞黏附能力;Transwell实验检测A375细胞侵袭及迁移能力;荧光素酶报告基因实验检测miR-200c与EZH2的靶向关系;构建移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤质量;免疫组化法分析EMT相关蛋白表达情况。结果 A375细胞存活率随冬凌草甲素浓度的增加以剂量依赖性显著降低(P<0.05),由于40μmol/L冬凌草甲素接近半数抑制浓度,因此选取40μmol/L冬凌草甲素进行后续实验;与对照组相比,冬凌草甲素组、miR-200c mimics组A375细胞中miR-200c、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,EZH2 mRNA及蛋白表达水平、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达水平、迁移细胞数、侵袭细胞数、黏附细胞数显著降低(P<0.05);与对照组、mimic control组相比,miR-200c mimics组EZH2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);miR-200c沉默可逆转冬凌草甲素对A375细胞的作用;与对照组相比,冬凌草甲素组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平显著降低,miR-200c、E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与冬凌草甲素组相比,冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平显著增加,miR-200c、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 冬凌草甲素可能通过促进miR-200c/EZH2轴来抑制A375细胞的EMT及肿瘤生长。

白花丹素对胶质瘤细胞生长侵袭的影响及机制研究

目的分析中药提纯制剂白花丹素对胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其作用机制。方法体外常规培养SWO-38和U251细胞，应用0～50μmol／L白花丹素作用48h后，MTT检测细胞存活率的变化，计算半数抑制浓度fIC如；应用0、2．5、5、10μmol／L白花丹素处理细胞48h后。流式细胞仪检测细胞凋亡；划痕实验检测细胞侵袭迁移能力；Western blotting检测细胞中SOX2蛋白的表达：实时荧光定量PCR检测细胞miR200b、miR200c、miR-203和miR-21表达的变化。结果MTT显示O～50μmol/L白花丹素处理SWO-38、U251细胞后细胞存活率逐渐下降，IC50分别为6．8μmol／L和7．4μmol／L；0、2．5、5、10μmol／L白花丹素作用SWO-38、U251细胞48h后凋亡细胞的比例逐渐增加，细胞中miR200b、miR200c和miR-203的表达逐渐增加，差异有统计学意义（P〈0．051；划痕实验显示白花丹素作用后两株细胞的侵袭能力下降；Western blotting结果显示SOX2蛋白的表达降低。结论白花丹素抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭迁移，促进其凋亡，可能与其升高miR200b、miR200c和miR-203的表达，降低SOX2蛋白的表达有关。