菌群移植对氟尿嘧啶抗鼠源结肠肿瘤的协同作用

目的:观察菌群移植对氟尿嘧啶抑制结肠癌MC38荷瘤小鼠移植瘤生长的协同作用效果。方法:选取雌性C57BL/6N小鼠21只作为研究对象,分为空白组、对照组、实验组。培养MC38小鼠结肠癌细胞接种于小鼠右前肢背部皮下构建结肠癌荷瘤模型。空白组无任何处理,取其粪便制作干预菌液,实验组和对照组自分组后每两天1次给予0.1 mL菌液/生理盐水灌胃至实验结束。成瘤后第6天,按照65 mg/kg剂量连续5天腹腔注射氟尿嘧啶,3天后处死实验动物,计算肿瘤体积和抑瘤率。采用HE染色观察结直肠组织情况。采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子Alpha(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)血清水平,通过16S测序进行肠道菌群检测和分析。结果:与空白组相比,实验组和对照组模型小鼠体重均明显降低(P<0.05),但对照组和实验组体重变化未见明显差异(P>0.05)。对照组荷瘤平均体积大于实验组荷瘤平均体积(P<0.05)。与对照组相比,实验组结直肠组织病理镜下可见更多的隐窝细胞,绒毛更完整。实验组IL-6血清水平高于对照组和空白组(P<0.05);实验组和对照组TNF-α血清水平与空白组相比升高明显(P<0.05),但实验组和对照组差异无统计学意义(P>0.05)。16S测序结果提示自体菌群移植干预后,实验组肠道菌群更接近空白组,对照组菌群丰富度最低,但三组未见明显区别(P>0.05)。进一步分析三组菌群差异,发现在属(Genus)水平上,与空白组相比,实验组的Mar-Odoribacter和Tan-Parabacteroide富集增多,对照组Ent-Escherichia-Shigella富集增多。结论:菌群移植后上调Mar-Odoribacter和Tan-Parabacteroide菌,下调Ent-Escherichia-Shigella菌,可保护肠道黏膜,改善机体代谢,激活机体免疫系统,促进了IL-6和TNF-α细胞因子表达,提高抗肿瘤免疫能力,对氟尿嘧啶抑制MC38荷瘤小鼠移植瘤增殖起到了协同作用。

免疫系统人源化小鼠及其在肿瘤免疫治疗中的应用

肿瘤免疫治疗的有效性多借助于小鼠模型进行评价。但由于物种差异,传统小鼠模型不能完全模拟人体免疫应答的真实情况,导致大部分基于小鼠的研究成果不适用于人体。近年随着免疫缺陷小鼠的出现和品系改良,基于免疫缺陷小鼠构建的免疫系统人源化小鼠有望帮助研究者克服这一难题。本文就免疫缺陷小鼠模型和免疫系统人源化小鼠模型的最新研究进展和存在的问题以及免疫系统人源化小鼠在肿瘤免疫研究中的应用进行总结,为后续人源化小鼠模型的完善及其在肿瘤免疫治疗中的应用提供参考。

中药复方WCAP及拆方对人胰腺癌皮下移植瘤裸小鼠模型及IL⁃6/STAT3信号通路的影响

目的观察中药复方WCAP及其拆方对人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤生长及对白介素-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)信号通路的影响。方法建立人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤模型,将30只SPF级裸小鼠随机分为6组,即空白对照组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、复方组、健脾组、清热解毒组和软坚散结组,每组5只,观察各组裸小鼠皮下移植瘤瘤质量及抑瘤率,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测瘤组织中IL-6/STAT3通路及其下游靶基因c-myc癌基因(c-myc)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的mRNA和蛋白表达水平。结果①与空白对照组比较,各干预组瘤质量均轻于空白对照组,5-FU组、复方组及各拆方组均可抑制裸小鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05),复方组抑瘤率高于各拆方组(P<0.05)。②与空白对照组比较,5-FU组、复方组和软坚散结组IL-6/STAT3通路及其下游靶基因c-myc、cyclin D1、VEGF、MMP-2的mRNA表达均降低(P<0.05)。③与空白对照组比较,5-FU组、复方组IL-6/STAT3通路及其下游靶基因涉及的c-myc、cyclin D1、VEGF、MMP-2蛋白表达均降低(P<0.05),软坚散结组c-myc、MMP-2和IL-6蛋白表达均降低(P<0.05)。结论WCAP复方可抑制人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长,其机制与抑制IL-6/STAT3通路并调节其下游靶基因c-myc、cyclin D1、VEGF、MMP-2的表达水平有关;与各拆方相比,WCAP复方在抑瘤率、小鼠体质量及IL-6/STAT3通路及其下游靶基因调控方面作用更好。

黄芩苷调节肠道菌群抑制高脂饮食诱导的结直肠癌肝转移研究

目的评估黄芩苷抑制结直肠癌肝转移的疗效并探讨其潜在的作用机制,为中医药防治结直肠癌转移提供科学依据。方法24只6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,每组6只,分别为正常饮食组、高脂饮食组、黄芩苷低剂量组(50 mg/kg,喂饲高脂饮食)和黄芩苷高剂量组(200 mg/kg,喂饲高脂饮食)。小鼠接受正常或高脂饮食喂养4周后构建结直肠癌肝转移模型,术后给药干预4周。实验期间记录各组小鼠的体质量。实验结束后采血并检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;称量腹股沟白色脂肪组织(iWAT)、附睾白色脂肪组织(eWAT)及背部棕色脂肪组织(BAT)的质量;记录原位肿瘤质量、肝脏质量、肝转移灶数量,计算肝脏指数(肝质量/体质量)和肝转移率;采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织形态学变化;利用16S rRNA测序分析小鼠肠道菌群变化;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测小鼠肝转移灶中上皮间质转化(EMT)标志物波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和闭合蛋白(Occludin)等相关基因mRNA的表达水平;采用皮尔森(Pearson)相关性分析方法检测肝转移灶中EMT基因表达水平与厚壁菌门细菌丰度的相关性。结果与正常饮食组比较,高脂饮食组小鼠体质量、血清TC和LDL-C水平、脂肪质量、原位肿瘤质量、肝质量、肝脏指数、肝转移灶数量及肝转移率明显增加,黄芩苷低、高剂量组上述指标均低于高脂饮食组,差异有统计学意义(P<0.05)。高脂饮食组小鼠厚壁菌门丰度上升(P<0.05),厚壁菌门/拟杆菌门比值增加(P<0.05),经黄芩苷干预后,厚壁菌门/拟杆菌门比值下降(P<0.05)。与正常饮食组比较,高脂饮食组小鼠肝转移灶Vimentin和N-cadherin mRNA表达水平明显升高(P<0.05),E-cadherin和Occludin mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与高脂饮食组比较,黄芩苷组小鼠肝转移灶Vimentin和N-cadherin mRNA表达水平明显降低(P<0.05),E-cadherin和Occludin mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。厚壁菌门多种细菌相对丰度与Vimentin和N-cadherin mRNA表达水平呈正相关,但与E-cadherin和Occludin mRNA表达水平呈负相关。结论黄芩苷可有效抑制高脂饮食诱导的结直肠癌肝转移,且与肠道菌群结构的恢复、上皮间质转化的逆转相关。

tRF-Pro-CGG对小鼠胰腺癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

背景与目的:tRNA衍生的片段(tRNA-derived fragments,tRF)是一类长度为14~30 nt的小分子非编码RNA,其影响着恶性肿瘤的发展进程。本研究旨在探讨tRF-Pro-CGG对小鼠胰腺癌细胞生物学行为的影响及其可能的分子机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测tRFPro-CGG在小鼠胰腺癌细胞系pan02、LTPA,人胰腺癌细胞系Capan-2和正常胰腺细胞HPDE6-C7中的表达水平。通过慢病毒转染技术过表达pan02细胞及敲低LTPA细胞中tRF-Pro-CGG的表达,采用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测过表达和敲低效果。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖情况。采用transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用动物模型检测tRF-Pro-CGG对胰腺癌裸鼠移植瘤生长和转移的影响。采用H-E染色观察移植瘤的组织病理学结构。采用Western blot检测移植瘤组织中Ki-67增殖指数、转移相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号转导通路蛋白的表达及磷酸化情况。结果:小鼠胰腺癌细胞系pan02中tRF-Pro-CGG表达最低,在pan02细胞中转染tRF-Pro-CGG mimics后,tRF-Pro-CGG的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞迁移(P<0.001)和侵袭能力(P<0.001)显著降低,裸鼠移植瘤体积(P<0.01)和重量(P<0.001)均显著降低,裸鼠移植瘤组织中出现明显坏死和凋亡细胞;裸鼠移植瘤组织中Ki-67增殖指数和vimentin的表达显著降低(P<0.001),而E-cadherin的表达显著升高(P<0.001),PI3K、P-PI3K、AKT和P-AKT的表达显著降低(P<0.001),胰腺癌肝转移例数差异无统计学意义(P>0.05)。小鼠胰腺癌细胞系LTPA中tRF-Pro-CGG表达最高,在LTPA细胞中转染tRF-Pro-CGG inhibitor后,tRF-Pro-CGG的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞增殖能力显著升高(P<0.01),细胞迁移(P<0.001)和侵袭能力(P<0.001)显著升高,裸鼠移植瘤体积(P<0.01)和重量(P<0.01)均显著升高,裸鼠移植瘤组织中出现少量的坏死及凋亡细胞;裸鼠移植瘤组织中Ki-67和vimentin的表达显著升高(P<0.001),而E-cadherin的表达显著降低(P<0.001),PI3K、P-PI3K、AKT和P-AKT的表达显著升高(P<0.001),胰腺癌肝转移例数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达tRF-Pro-CGG可以抑制小鼠胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,下调Ki-67增殖指数、vimentin的表达水平和PI3K/AKT磷酸化水平。tRF-Pro-CGG可能通过调节PI3K/AKT信号转导通路抑制胰腺癌的发生、发展。

温肾消水膏皮肤给药舒缓H22肝癌腹水瘤模型小鼠癌性腹水的作用机制研究

目的观察温肾消水膏皮肤给药舒缓H22肝癌腹水瘤模型小鼠癌性腹水的作用机制。方法将9只C57BL/6小鼠随机分为模型组、温肾消水膏组、空白组,每组3只,其中模型组、温肾消水膏组采用腹腔接种H22肝癌细胞悬液的方法建立H22肝癌腹水瘤小鼠模型。空白组和模型组不予药物,温肾消水膏组从接瘤后24 h开始,每日予温肾消水膏外敷腹部,每天4 h,连续10天。于第11天以颈椎脱臼法处死小鼠,取腹水、肾脏组织;用注射器计量腹水量,采用显微镜计数法计算肿瘤细胞数,用蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测肾脏组织的水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肾脏组织中AQP1、AQP2、TNF-α、VEGF-A mRNA表达水平;对肾脏组织进行苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色,观察肾脏的病理形态学改变。结果与模型组比较,温肾消水膏组腹水量减少,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,温肾消水膏组腹水瘤细胞计数减少,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组、温肾消水膏组小鼠肾脏组织VEGF-A蛋白表达均降低(P<0.05),AQP1、AQP2、TNF-α蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,温肾消水膏组小鼠肾脏组织AQP1蛋白表达升高(P<0.05),AQP2、TNF-α、VEGF-A蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组、温肾消水膏组肾脏VEGF-A mRNA表达均降低(P<0.05),AQP1、AQP2、TNF-αmRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,温肾消水膏组小鼠肾脏组织AQP1、AQP2、TNF-α、VEGF-A mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,与空白组比较,温肾消水膏组、模型组小鼠肾小球系膜区增宽,系膜细胞增生,肾小管变性,部分区域肾小球萎缩,肾间质有炎性细胞浸润;与模型组比较,温肾消水膏组小鼠肾间质炎性细胞浸润情况较少,系膜细胞增生减少。Masson染色结果显示,与空白组比较,模型组、温肾消水膏组有大量胶原纤维沉积于肾小球系膜区;与模型组比较,温肾消水膏组胶原纤维较少。结论温肾消水膏有一定的舒缓肝癌癌性腹水作用,其机制可能涉及以下方面:一是温肾消水膏减轻了肾间质炎症,减少肾小球系膜细胞增生,改善了肾脏病理;二是可能与温肾消水膏上调肾脏AQP1、AQP2蛋白表达,调节肾脏VEGF蛋白表达使之接近正常的作用有关。

C_3H非自发性小鼠乳腺癌模型的建立

目的建立C3H非自发性小鼠乳腺癌模型.方法采用肿瘤组织块接种法和肿瘤细胞悬液接种法,将C3H自发性乳腺癌进行同种移植及异种移植,观察肿瘤生长情况,并连续传代.切除肿块作病理切片,免疫组化法检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR).结果 >1 mm3体积的瘤块或>1×106细胞悬液移植接种,在接种后6～9 d在局部形成瘤性结节,继之迅速增大,成瘤率为100%;<0.5 mm3的瘤块和<0.5×106个细胞接种的成瘤率分别为40%和50%.肿瘤模型连续传代18代,生长稳定,传代周期固定.病理学检查为浸润性导管癌,ER阳性、PR阳性.结论该法建立的肿瘤模型,接种成功率高,成瘤时间周期短,适用于大面积的抗肿瘤药物实验.

提高人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤成瘤率的方法学研究

目的:提高人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤的成瘤率。方法:人肺腺癌SPC-A-1、GLC-82培养细胞或相应的瘤组织匀浆接种于裸鼠皮下之前,先用富含生长因子的小鼠肉瘤S180腹水上清液按比例稀释,然后在裸鼠背部或腋窝皮下接种。观察人肿瘤细胞或肿瘤组织在加入小鼠肉瘤S180腹水上清液后,对移植瘤生长速度及成瘤率的影响。结果:加入小鼠肉瘤S180腹水上清液后,人肺腺癌SPC-A-1和GLC-82成瘤率明显提高,而且移植后的人肿瘤生长速度较未加小鼠肉瘤S180腹水上清液的人肺腺癌细胞明显加快。结论:小鼠肉瘤S180腹水上清液能明显提高人肺腺癌SPC-A-1和GLC-82裸鼠皮下移植瘤的成瘤率,促进肿瘤生长。

人颅咽管瘤裸鼠皮下移植瘤模型的初步建立

目的初步建立人颅咽管瘤(CP)的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用胰蛋白酶消化法将新鲜颅咽管瘤组织进行原代细胞培养,然后将纯化的第3代颅咽管瘤细胞接种于到BALB/c裸小鼠背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织生长情况和特点,明确肿瘤性质。结果 CP细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后8d可见有移植瘤形成,成瘤率为33.3%,病理切片显示肿瘤样鳞状上皮细胞团增生。结论利用颅咽管瘤细胞初步建立了人颅咽管瘤裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究颅咽管瘤的生长特性奠定了基础。

利用裸鼠建立人泌尿生殖系统肿瘤细胞系

目的 建立人泌尿系肿瘤无限细胞系 ,为泌尿系肿瘤研究提供实验模型。方法 无菌取下肿瘤标本后 ,将标本剪成大小约 1 0mm3的组织块 ,在裸鼠右后肢皮下包埋 ,当皮下肿瘤块发生明显增殖并长到一定程度后 ,再行裸鼠体内传代两次 ,最后取下组织块进行原代培养。培养细胞传代超过 2 0代后按建系标准[2 ] 进行检测。结果 共取 40例标本 ,裸鼠体内传代F1代成功 6例 ,F3代成功 3例 ,该 3例标本行原代培养后建成 3个无限细胞系 :人肾透明细胞癌RCC 9863,人膀胱癌BC 6,人前列腺癌PC 981 0 6,全部细胞传代 1年以上 ,生长稳定 ,传代周期固定 ,其形态结构 ,分化程度与原发瘤保持一致 ,染色体形态仍为人类核型。结论 裸鼠肿瘤皮下种植法是泌尿系肿瘤建系的一个较好方法。

顺铂联合DC疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用观察

目的:观察顺铂联合DC疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用。方法:用终浓度20μg/ml的顺铂处理体外培养的小鼠黑色素瘤B16或B16-hsp70L1细胞,24小时后,Western blot方法观察HMGB1、hsp70蛋白表达;用顺铂处理的B16或B16-hsp70L1细胞裂解液负载DC,LPS诱导成熟,流式细胞仪分析DCs表面MHCⅠ、ICAM-1、CD86的表达。制备荷瘤小鼠模型,给荷瘤小鼠经腹腔注射顺铂(100μg/只),瘤内注射DC疫苗(3×106/只),观察肿瘤生长曲线、荷瘤小鼠脾脏中肿瘤抗原特异性CD8+T淋巴细胞IFN-γ的分泌及CTL活性。结果:顺铂显著促进B16或B16-hsp70L1细胞HMGB1的表达,对hsp70蛋白表达影响不明显;顺铂处理的B16或B16-hsp70L1细胞裂解液负载DC后,MHCⅠ、ICAM-1及CD86表达率分别为41%、39%、42%和47%、41%、42%;顺铂联合DC疫苗不仅显著抑制荷瘤小鼠肿瘤增殖(P<0.05),对荷瘤小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞IFN-γ的分泌及CTL活性也有明显的提高。结论:顺铂处理的B16细胞裂解液可诱导DC活化;联合DC疫苗后不仅显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,对肿瘤特异性免疫应答也具有一定的促进作用。

人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用组织块直接贴壁法将新鲜成釉细胞瘤组织进行原代细胞培养,反复贴壁法和胰酶消化法使之纯化。然后将纯化的成釉细胞瘤细胞接种于裸鼠颈背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织大体生长情况以及常规病理切片观察瘤细胞的侵袭生长情况。结果成釉细胞瘤细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后第23天见有移植瘤形成,成瘤率为25%。病理切片显示瘤细胞可向裸鼠肌间生长,保持了其侵袭性生长的特性。结论初步建立了人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究成釉细胞瘤的侵袭生长特性奠定了基础。

对不同的卵巢上皮性腺癌细胞株建立裸鼠动物模型的实验研究

目的 :探讨卵巢上皮性腺癌细胞株建立裸鼠动物模型的最佳方案。 方法 :采用两种卵巢上皮性腺癌细胞株CAOV3(贴壁细胞 )、COC2 (悬浮细胞 )对裸鼠进行不同细胞密度皮下接种及不同方法的组织块接种。 结果 :在 5× 10 6/ (0 .2 0ml·只 )到 6× 10 7/ (0 .2 0ml·只 )细胞浓度内 ,两株细胞的成瘤率及肿瘤成形时间与接种细胞量无关。与COC2细胞株相比 ,CAOV3成瘤早 (以组织块接种者为甚 ) ,成瘤率高 ,成瘤后生长缓慢。而COC2细胞株一旦成瘤 ,则肿瘤生长速度极快 ,以至于实验尚未完成荷瘤鼠已死亡。 结论 :在建立卵巢上皮性腺癌裸鼠动物模型的实验中 ,以选用贴壁细胞株。

CpG增强DC疫苗对黑色素瘤B16-HLA-MAGE-3的免疫效果

目的:观察CpG对抗原肽负载DC疫苗免疫效果的增强作用。方法:分别用50μg/ml的MAGE-3271-279抗原肽、4μg/ml的CpG和MAGE-3271-279抗原肽(50μg/ml)+CpG(4μg/ml)刺激培养到第6天的小鼠骨髓DC细胞,2天后用LPS再刺激24小时诱导其成熟;给HLA-A*0201/Kb转基因鼠移植B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤,并于小鼠荷瘤的第-4、5和8天分别于颈部皮下注射同系小鼠DC疫苗(2×105/鼠),观察荷瘤鼠肿瘤生长情况;在荷瘤的第23天处死小鼠,检测脾脏NK细胞活性。给正常HLA-A2转基因小鼠皮下注射DC疫苗,8周后接种肿瘤细胞,观察免疫记忆形成情况。结果:抗原肽负载的DC疫苗,在小鼠荷瘤的第14天之前,小鼠肿瘤生长受到抑制,在第15天后抑瘤作用不明显;CpG与MAGE-3271-279+CpG负载的DC疫苗可显著抑制荷瘤鼠肿瘤的生长,且可诱导较高的NK细胞活性。MAGE-3271-279+CpG负载的DC疫苗在免疫8周后依然可抑制肿瘤细胞的生长,说明可以诱导免疫记忆形成。结论:CpG对抗原肽负载的DC疫苗的免疫效果具有潜在的增强作用。

人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的初步建立不同浓度下制备人胃癌细胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤模型,观察其生物学特性。方法培养人胃癌细胞系BGC-823细胞,并分别以四个浓度皮下注射于裸鼠腋下每只0.2 mL。根据BGC-823细胞注射浓度将40只裸鼠随机分为四组:组一5×107个活细胞/mL(n=10);组二1×107个活细胞/mL(n=10);组三1×106个活细胞/mL(n=10);组四1×105个活细胞/mL(n=10)。观察各组裸鼠摄食、活动情况、精神状态、死亡率、成瘤时间、成瘤率、肿瘤生长情况,采用免疫组化法检测肿瘤微血管密度。结果各组裸鼠摄食、精神情况正常,无死亡现象。除组四1×105个活细胞/mL浓度组成瘤率为0%外,其余各组成瘤率均为100%,瘤体出现时间在3～7 d,肿瘤血管密度MVD平均为:(123.26±31.57)个/mm2。结论初步建立了人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型及建立此细胞系模型的最低浓度。为胃癌的进一步研究奠定了基础。

已烯雌酚致新生鼠肺肿瘤模型的建立

背景与目的:研究已烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)对新生ICR小鼠的致肿瘤作用,寻求建立DES致肺肿瘤模型经济有效的方法。材料与方法:ICR新生鼠,分设DES、乌拉坦(urethan,U)和U+DES组。U在14d以500mg/kg腹腔注射(intraperitoneal,ip);DES分别在1d、8d、15d ip,共3次,分别以注射日龄LD50的1/7、2/7、4/7为DES低(L)、DES中(M)、DES高(H)组。至26周时剖检,观察肿瘤发生情况。计算主要脏器系数、肺肿瘤发生率和平均肿瘤结节数。结果:新生鼠DES、U+DES及U各组均有明显的肺肿瘤发生。DES(L,M,H)各组的肺肿瘤发生率分别为16.7%、22.4%、43.1%;U+DES(L,M,H)各组分别为70.4%、90.9%、70.8%,U组为53.1%。U+DES(L,M)组肺肿瘤平均结节数高于DES(L,M)组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:DES与U联合作用可致新生鼠肺肿瘤高发,可作为肺肿瘤模型建立的有效方法。

裸鼠荷瘤实验中常见问题的解析和总结

目的探讨裸鼠荷瘤过程中的出现的常见问题,提高裸鼠荷瘤的成功率。方法通过分析实验过程中影响裸鼠荷瘤的各种因素,寻求裸鼠荷瘤常见问题的解决方案。结果总结了在裸鼠荷瘤实验中的各种影响因素,并提出了合理的建议。结论裸鼠肿瘤模型的制备是研究肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价以及有效性筛选等研究课题的基础,本文为制备良好的裸小鼠肿瘤模型提供合理的建议。

用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建

目的构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系以建立可用于活体成像的三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型。方法采用磷酸钙共沉淀的方法构建表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,体外感染MDA-MB-231细胞,经G418筛选得到稳定细胞系后,通过活体成像评价感染后细胞表达荧光素酶的情况,并通过MTT法、transwell肿瘤侵袭模型、细胞划痕实验等评价细胞的增殖、侵袭及转移能力是否改变;此外将细胞接种至雌性BALB/c-nu//nu裸小鼠的右侧第2对乳房垫内,构建乳腺癌原位肿瘤模型。利用活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况,并通过冰冻切片、HE染色评价细胞系在活体内的稳定性及成瘤能力。结果成功构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的MDA-MB-231细胞系,荧光素酶的活性达到每细胞9689 photons/s,慢病毒的整合没有改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力;成功建立了乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型。结论(1)慢病毒以其高效稳定的感染率,应作为标记荧光素酶基因的首选载体;(2)带有荧光素酶的MDA-MB-231细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到,这将为人三阴性乳腺癌转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供一个直观、方便及灵敏的平台;(3)荧光素酶和荧光蛋白基因双标记优于单标记。

白桦脂醇通过抑制PI3K/AKT途径抑制宫颈癌小鼠移植瘤增殖

目的:阐明白桦脂醇对宫颈癌细胞系c4-1移植瘤模型裸鼠的影响和机制。方法:皮下注射宫颈癌细胞系c4-1建立异种移植瘤模型,将移植瘤BALB/c裸鼠模型随机分为3组:对照组(DMSO)、白桦脂醇低剂量组(Betulin50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin200),进行后续使用。白桦脂醇治疗后,检测移植瘤体积和裸鼠存活率;免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平;TUNEL实验检测移植瘤细胞凋亡情况;Westernblot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT通路蛋白表达情况和磷酸化情况。结果:与对照组(DMSO)相比较,白桦脂醇低剂量组(Betulin50)、白桦脂醇高剂量组(Betulin200)肿瘤体积明显减小(P<0.01),裸鼠存活率明显增加(P<0.01),Ki67和VEGF表达水平明显下降(P<0.01),且PI3K/AKT磷酸化水平明显被抑制(P<0.01)。结论:白桦脂醇能抑制c4-1移植瘤体积,增加移植瘤裸鼠存活率,下调Ki67和VEGF表达水平和PI3K/AKT磷酸化水平。白桦脂醇可能通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌细胞系c4-1移植瘤。

两种荷人卵巢癌腹腔移植瘤的免疫重建SCID小鼠模型的建立及比较

背景与目的:卵巢癌的死亡率在妇科恶性肿瘤居首位。目前,常规的手术、化疗和放疗难以再提高患者的生存率,因此,生物治疗成为卵巢癌的第四大治疗模式,而生物治疗的评价需要合适的动物模型。本实验目的是建立两种荷人卵巢癌腹腔移植瘤的免疫重建的严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficiency,SCID)小鼠模型,通过比较选出较适宜的模型。方法:分别用人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和SKOV3.ip1细胞腹腔注射6只和10只C.B17/SCID小鼠建立腹腔瘤模型,比较其生物学、组织学和免疫学特性;并将SKOV3.ip1组小鼠的腹水转种6只小鼠的腹腔,观察成瘤情况。以上22只SCID小鼠均用人外周血淋巴细胞腹腔注射进行人免疫功能重建。结果:用SKOV3细胞和SKOV3.ip1细胞分别建立的两种模型小鼠成瘤率均为100%;成瘤潜伏期分别为20～41天和22～30天(P>0.05);生存期分别为50～78天和32～43天(P<0.0001)。SKOV3.ip1组小鼠的腹水进行转种后有83.3%(5/6)能形成腹腔肿瘤和腹水。两种模型小鼠尸检发现肿瘤分布相似,均形成广泛的盆腔播散;但SKOV3.ip1组伴有0.35～5.60ml血性腹水,而SKOV3组仅有1只有0.20ml腹水。组织学显示两种模型都保持了人卵巢浆液性乳头状腺癌的特点,免疫组化结果表明两种模型都表达卵巢癌相关抗原OC166-9。72.7%(16/22)?