中药狼疮定对MRL/Ipr小鼠肾脏的影响

[目的]观察中药狼疮定对MRL/lpr小鼠肾脏的影响,探讨其作用机制。[方法]分别对10周龄的模型组、中药组、西药组和中西药组小鼠灌胃10周后,检测其血清sICAM-1和尿蛋白含量,同时取出肾脏制成切片。[结果]与模型组相比,中药组、西药组和中西药组的小鼠尿蛋白含量和血清sICAM-1表达水平均有所下降(P<0·05或P<0·01);尿蛋白含量与血清slCAM-1表达水平呈正相关(P<0·01)。[结论]中药狼疮定能防治MRL/lpr小鼠出现的肾脏病变,其机制可能与下调血清sICAM-l表达水平有关。

脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响

目的:探讨移植脂肪间充质干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)对MRL/lpr小鼠的治疗作用及对MRL/lpr小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:15只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠采用随机数字表法分为ADSCs治疗组(ADSCs组)、对照组(control组)和环磷酰胺治疗组(cyclophosphamide,CTX组),每组5只。ADSCs组经尾静脉注射ADSCs,每次注射的细胞数为1×106/150μL,每周1次,共注射8次;control组经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液,每周1次,共注射8次;CTX组经尾静脉注射环磷酰胺,剂量为15 mg/kg(体重),每周1次,连用2次,休息2周后重复,共注射4次。留取治疗前和治疗后尿液检测24 h尿蛋白浓度。治疗8周后,处死MRL/Ipr小鼠,以流式细胞仪分析脾细胞Th17/Treg细胞比例变化。结果:(1)24 h尿蛋白浓度变化:治疗前,3组小鼠的24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P>0.05);治疗4周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组,差异有统计学意义[(5.02±1.61)g/L vs.(7.10±1.63)g/L、(4.90±0.71)g/L vs.(7.10±1.63)g/L,P<0.05],而且治疗时间越长,效果越明显,治疗8周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组[(2.24±0.73)g/L vs.(10.36±1.64)g/L、(3.80±1.45)g/L vs.(10.36±1.64)g/L,P<0.01];ADSCs组和CTX组之间24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P>0.05)。(2)脾脏Treg细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率高于control组,3组分别为13.62%±1.87%、14.14%±1.29%、0.71%±1.23%,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)脾脏Th17细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Th17细胞占CD4+T细胞的百分率显著低于control组,3组分别为1.43%±0.20%、1.63%±0.65%、6.37%±1.64%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:移植ADSCs能够减少MRL/lpr小鼠尿蛋白浓度,治疗时间越长,效果越显著。ADSCs能够降低MRL/lpr小鼠脾脏Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,负向调节Th17/Treg细胞平衡,进而发挥抗炎和免疫调节的作用。

三氧化二砷对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响(英文)

目的研究三氧化二砷(As2O3)对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响。方法45只MRL/lpr狼疮小鼠ip给予环磷酰胺50 mg·kg-1(每周1次)和As2O30.8 mg·kg-1,每天1次,共2个月。用ELISA法检测血清抗双链DNA(dsDNA)抗体、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)浓度;用流式细胞术测定脾CD3+,CD19+,CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞亚群的百分比;用PAS染色法观察肾组织病理变化;用免疫荧光方法检测肾组织IgG和补体C3的表达。结果与给药前比较,给药2个月后,正常对照组血清抗dsDNA抗体水平升高,由给药前1.18±0.26升高至1.80±0.26(P<0.01),As2O3和环磷酰胺组该抗体水平明显降低,分别由给药前1.14±0.58和1.09±0.22降低至0.92±0.06和0.67±0.14(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较:①As2O3和环磷酰胺组血清抗ds-DNA抗体、IFN-γ和IL-12浓度明显降低(P<0.05),环磷酰胺组抗ds-DNA抗体比As2O3组显著降低(P<0.01);②As2O3组CD3+,CD3+CD4+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01),环磷酰胺组CD3+,CD3+CD8+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01);As2O3组CD3+CD4+细胞百分率明显降低(P<0.01);③As2O3和环磷酰胺组小鼠肾小球细胞计数和活动度积分明显降低(P<0.05,P<0.01),As2O3和环磷酰胺组无显著差异;④As2O3和环磷酰胺组肾IgG表达明显降低(P<0.05),补体C3表达无明显差异,As2O3和环磷酰胺组之间无显著性差异。结论As2O3能降低MRL/lpr狼疮小鼠血清抗ds-DNA抗体水平,抑制T,B和Th细胞活化和增殖,降低血清IFN-γ和IL-12水平,从而缓解狼疮肾炎的病理变化。

中药狼疮定方对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞凋亡和Bcl-2/Bax基因表达的影响

目的探讨中药狼疮定方对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞(PBLC)凋亡及其Bcl-2/BaxmRNA表达的影响。方法将80只MRL/lpr小鼠随机分为模型组、中药组、西药组和中西药组,分别以0.9%氯化钠溶液、狼疮定悬液、强的松混悬液、狼疮定悬液联合强的松混悬液灌胃;另取20只正常昆明小鼠以0.9%氯化钠溶液灌胃。连续饲养用药12周后取血,以梯度离心法分离外周血单个核细胞,培养48h后取PBLC悬液,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;另以RT-PCR法检测PBLC中Bcl-2/BaxmRNA的表达水平。结果正常组、中药组、西药组和中西药组PBLC培养0h和48h时凋亡率高于模型组(P<0.05或0.01),0h时西药组、正常组与中西药组的PBLC凋亡率无明显差异,但中药组和模型组凋亡率显著低于中西药组(P<0.05),48时中药组、模型组和西药组凋亡率明显低于中西药组(P<0.05或0.01);正常组、中药组和中西药组PBLC中Bcl-2/BaxmRNA比值水平均明显低于模型组和西药组(P<0.05或0.01)。结论狼疮定方对MRL/lpr小鼠的PBLC凋亡率及其Bcl-2/Bax比值均可起到调节作用。

CD40 siRNA对MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响

目的:观察CD40的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)动物模型MRL/Lpr小鼠细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-4和抗双链DNA(anti-double strand DNA,anti-dsDNA)抗体表达水平的影响,探讨CD40 siRNA治疗MRL/Lpr小鼠的可能性。方法:16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只,将成功构建的CD40 siRNA表达载体尾静脉注射MRL/Lpr小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液(PBS)和p GFP-V-RS空载体,每隔1天1次,共6次,14 d处死小鼠,称其脾的质量,组织切片在荧光显微镜下观察小鼠脾是否有CD40 siRNA的表达,注射前及注射后第2、5、8、11和14天小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的表达水平变化,RT-PCR法检测小鼠脾组织中CD40 mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测小鼠脾组织中CD40蛋白的表达水平。结果:注射后的siRNA表达载体可以在小鼠脾中表达;注射CD40 siRNA组的小鼠脾质量减轻,由对照组(141.88±7.81)mg和空载体组(153.10±7.60)mg降低至CD40-siRNA1组(78.85±5.61)mg和CD40-siRNA2组(80.25±4.07)mg,注射前4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的(质量)浓度比较,差异无统计学意义;而注射后第2、5和8天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠血清中IFN-γ、IL-17和(质量)浓度明显下降,CD40-siRNA1组的IFN-γ的(质量)浓度依次为(118.74±10.32)ng/L(pg/m L)、(115.24±8.26)ng/L、(113.71±5.02)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(117.83±6.83)ng/L、(114.07±0.97)ng/L、(112.67±9.66)ng/L;CD40-siRNA1组的IL-17的(质量)浓度依次为(7.05±0.41)ng/L、(6.34±0.76)ng/L、(5.83±0.43)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(7.07±0.22)ng/L、(6.35±0.49)ng/L、(6.12±0.80)ng/L;CD40-siRNA1组的anti-ds DNA的浓度依次为(7.51±0.29)ng/L、(6.74±0.45)ng/L、(6.32±0.39)ng/L;CD40-siRNA2组依次为(8.19±0.38)ng/L、(7.14±0.50)ng/L、(6.48±0.29)ng/L。IL-4的(质量)浓度明显升高,CD40-siRNA1组IL-4的(质量)浓度依次为(26.51±1.81)ng/L、(27.80±1.72)ng/L、(28.08±2.21)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(26.28±2.03)ng/L、(28.15±2.95)ng/L、(28.37±1.71)ng/L。CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05),注射后第11和14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组中这4个指标的(质量)浓度逐渐恢复至对照组和空载体组的(质量)浓度水平,IFN-γ、IL-17、IL-4的(质量)浓度4组小鼠比较,差异无统计学意义,注射后第11天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组anti-ds DNA抗体的水平尽管与对照组和空载体组比较有所提高,4组比较差异有统计学意义(P<0.05),而注射后第14天anti-ds DNA抗体的水平4组小鼠比较,差异无统计学意义。注射后第14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠脾组织中CD40 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MRL/Lpr小鼠注射CD40 siRNA载体后,血清中IFN-γ、IL-17和anti-ds DNA抗体水平降低,IL-4的浓度升高,CD40 mRNA和蛋白的表达水平下降,说明CD40 siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠炎症反应减轻,疾病活动度下降,提示其对SLE动物模型MRL/Lpr小鼠有治疗作用。

人参养荣汤和强的松龙联合疗法对MRL/1pr小鼠的免疫调节作用

本研究报道了人参养荣汤(RYT)和低剂量强的松龙(PSL)的联合疗法对自身免疫性 MRL/1pr 小鼠的免疫功能的影响。结果表明:联合疗法能减少 MRL/1pr 小鼠淋巴器官异常的 B220^+T 细胞,促进脾细胞和淋巴细胞产生 IL-2和 IL-6,但却降低血清中 IL-6的水平。单用 RYT 可增强 MRL/1pr 小鼠产生γIFN 的能力,加用小剂量 PSL 则逆转此作用,联合疗法还能显著抑制 MRL/1pr 小鼠血清抗 DNA 抗体活性。

骨髓间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮

背景:目前对系统性红斑狼疮患者治疗一般采用非特异性免疫抑制方法,但是预后存在易感染、复发率高等问题。目的:评价骨髓间充质干细胞对系统性红斑狼疮小鼠的治疗作用。方法:16只系统性红斑狼疮小鼠随机平均分为对照组与实验组,实验组小鼠经尾静脉注射移植第3代骨髓间充质干细胞,对照组注射等量的生理盐水。收集小鼠尿液采用Bradford法检测尿蛋白水平,采集两组小鼠尾尖血液,利用放射免疫方法测定血清抗ds-DNA抗体浓度;组织学切片进行苏木精-伊红染色及免疫组化学染色,显微镜下观察小鼠肾脏病理学改变,采用流式细胞仪检测眼内眦血液、新鲜脾脏与胸腺中CD4^+CD25^+T细胞水平。结果与结论:(1)骨髓间充质干细胞移植后10周内,两组MRL/LPR小鼠尿液中尿蛋白均逐渐升高,对照组尿蛋白升高速率明显高于实验组,从第4周至第10周,实验组小鼠尿蛋白水平明显低于对照组(P<0.05)。(2)对照组小鼠肾脏组织被淋巴细胞浸润,出现少量的浆细胞,表现出间质性肾炎病理,实验组小鼠无肾脏病理改变。(3)对照组与实验组小鼠的肾小球系膜区域均呈现出免疫复合物,对照组呈片状分布,实验组呈点状分布,相对所占面积比例明显低于对照组。(4)实验组小鼠血液和胸腺内CD4^+CD25^+T细胞水平明显高于对照组(P<0.05);实验组小鼠脾脏CD4^+CD25^+T细胞水平略高于对照组小鼠,但差异无显著性意义(P>0.05)。(5)实验组小鼠血清抗ds-DNA抗体浓度明显低于对照组(P<0.05)。(6)结果提示骨髓间充质干细胞移植可改善系统性红斑狼疮小鼠的病理损伤,对系统性红斑狼疮疾病具有一定的治疗效果。

扶正汤对红斑狼疮小鼠血清和肾组织中γ干扰素和细胞间粘附分子-1水平的影响

目的研究中药扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠肾损害相关细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)水平的影响。方法将MRL/1Pr模型小鼠随机分成4组:0.9%盐水对照组(A组)、西药组(B组)、中药组(C组)、中西医结合组(D组),治疗6周。取小鼠血清和肾组织匀浆应用酶联免疫法(ELISA)检测IFN-γ和ICAM-1水平。结果 3组治疗组血清中IFN-γ含量明显低于对照组(P<0.01),各治疗组间差异无统计学意义。肾组织中IFN-γ含量中药组较对照组、西药组和中西医结合组明显减少(P<0.01),而对照组、西药组、和中西医结合组间差异无统计学意义。对照组血清和肾组织中ICAM-1水平较高,3组治疗组ICAM-1水平均明显低于对照组(P<0.01),中药组ICAM-1水平较低,明显低于西药组和中西药组(P<0.01)。结论扶正汤可能通过下调细胞因子IFN-γ和ICAM-1水平,减少对肾组织的损伤,对狼疮小鼠肾炎发挥明显的治疗作用。

黄芪多糖对系统性红斑狼疮小鼠免疫调节的影响

目的探讨黄芪多糖对系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠免疫功能的影响及作用机制。方法将20只MRL/lpr狼疮小鼠依据随机数字表法分为模型组和药物组,每组各10只,另选择10只雌性C57BL/6小鼠作为对照组。药物组采用黄芪多糖治疗,对照组和模型组均采用同等剂量生理盐水治疗。比较各组小鼠的自身抗体水平。采用流式技术法测定各组脾脏组织辅助性T细胞1(Th1)和辅助性T细胞2(Th2)细胞比例,使用蛋白质印迹法(Western blotting)和q-PCR技术测定T盒转录因子(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)的表达情况。本次研究起止时间为2019年2—6月。结果模型组小鼠血清抗核抗体(ANA)、抗双链脱氧核糖核酸抗体(Anti-dsDNA)和抗小核糖核蛋白/Sm抗体(Anti-snRNP/Sm)水平分别为(38.11±3.84)ng/L、(524.63±52.69)μmol/L、(23.05±2.31)ng/L,与对照组(24.23±2.41)ng/L、(340.26±34.37)μmol/L、(15.01±1.51)ng/L相比均明显升高(P<0.05);药物组小鼠血清ANA抗体、Anti-dsDNA抗体和Anti-snRNP/Sm抗体水平分别为(29.45±2.95)ng/L、(468.14±46.88)μmol/L、(18.44±1.83)ng/L,与模型组相比明显降低(P<0.05)。模型组小鼠Th1亚群比例、Th2亚群比例分别为(11.32±1.13)%、(2.84±0.29)%,与对照组小鼠(18.95±1.71)%、(2.21±0.22)%相比,模型组小鼠Th1亚群比例明显降低,Th2亚群比例明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物组小鼠Th1亚群比例(14.69±1.47)%明显升高,Th2亚群比例(2.49±0.24)%明显降低(P<0.05)。与对照组小鼠比较,模型组小鼠T-bet蛋白表达和mRNA水平显降低,GATA-3蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组小鼠相比,药物组小鼠T-bet蛋白和mRNA表达水平明显升高,GATA-3蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论黄芪多糖可影响MRL/lpr狼疮小鼠T-bet、GATA3的表达水平,调节Th1/Th2细胞的平衡,进而下调自身抗体水平发挥治疗作用。

脐带间充质干细胞移植治疗MRL／lpr狼疮鼠的疗效

目的探讨脐带问充质干细胞（UC—MSCs）对MRL／lpr狼疮鼠的治疗作用。方法24只18周龄雌性MRL／lpr小鼠，分为3组：UC～MSCs1次治疗组（G1）、UC—MSCs3次治疗组（G2）、对照组（G3）。观察体质量，考马斯亮蓝法检测尿蛋白定量（24h），酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗双链DNA（dsDNA）抗体水平，观察肾脏、肺病理改变。结果①尿蛋白定量（24h）25周时G1组（2．3±1．9）mg和G2组（1．8±1．4）mg显著低于对照组（3．8±2．1）mg（P〈0．05），27周时G1组（2．5±1．5）mg和G2组（1．9±1．2）mg也显著低于对照组（5．4±2．4）mg（P〈0．01）。②24周时治疗组体质量显著高于对照组（P〈0．05），29周时血清肌酐G1组（7．2±3．2）μmol／L和G2组（6．2±2．8）μmol／L显著低于对照组（12．5±2．3）μmol／L （P〈0．05）。③移植1周时，抗dsDNA抗体滴度G1组（46±11）×10^2U／ml和G2组（49±43）×10^2U／ml显著低于对照组（99±42）×10^2U／ml（P〈0．05）；29周时G2组（36±15）×10^2U／ml显著低于对照组（68±32）×10^2U／ml。④肾小球新月体形成率G1组（0．12±0．07）和G2组（0．08＋0．02）显著低于对照组（0．20±0．06）（P〈0．05），G2组较G1组显著减低（P〈0．05）。⑤间质性肺炎G1组和G2组较对照组减轻。结论UC—MSCs对MRL／1Dr狼疮鼠有显著疗效，安全且无排斥反应。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠淋巴细胞亚群和细胞因子表达的影响

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对MRL/lpr狼疮鼠淋巴细胞亚群和细胞因子表达的影响。方法MRL/lpr狼疮鼠随机分为ATO组(0.4mg·kg-1·d-1,ip)、环磷酰胺(CTX)组(50mg·kg-1每周1次,ip)和生理盐水(NS)组(按体重取量,ip),给药2个月。取脾脏制成脾细胞悬液,加入佛波醇酯(PMA)和ionomycin活化,同时加monensin抑制蛋白转运,于37℃,5%CO2培养4h后,用四色流式细胞术测脾脏CD3+(T)细胞和CD3+CD4+(Th)细胞的百分率以及CD3+CD4+(Th)细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的水平;分离血清,用ELISA法测血清中抗ds-DNA抗体、IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的浓度。结果①给药后,ATO组小鼠血清的抗ds-DNA抗体水平较给药前明显下降(P<0.01),而NS对照组则明显升高(P<0.05)。②ATO组CD3+细胞和CD3+CD4+百分率均显著低于NS组(P<0.01);③ATO组的血清IFN-γ和IL-12浓度均低于NS组(前者P<0.01,后者P=0.018);④ATO组Th细胞内IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12表达均显著低于NS组(P<0.01)。结论三氧化二砷能显著降低MRL/lpr狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体的水平,抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IFN-γ和IL-12的血清水平和Th细胞内IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的水平。

DNA甲基化转移酶在MRL／lpr狼疮鼠CD4^＋T淋巴细胞中的表达水平研究及功能分析

目的研究DNA甲基化转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B在发病MRL/lpr狼疮鼠脾脏CD4^＋T淋巴细胞的表达情况，并对其与免疫相关的甲基化敏感基因ITGAL、CD70的表达水平进行相关性分析。方法CD4单抗标记的免疫磁珠分选小鼠脾脏CD4^＋T淋巴细胞，实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）测定DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和免疫相关的甲基化敏感基因ITGAL、CD70的相对表达量。结果①DNA甲基化转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B在发病MRL／lpr狼疮鼠CD4^＋T淋巴细胞中与健康对照BALB／c小鼠相比，表达水平均有降低趋势，其中DNMT3B差异有统计学意义（P〈0．05）；CD70在发病MRL/lpr狼疮鼠表达水平升高（P〈0．01），ITGAL表达水平呈升高趋势，差异无统计学意义（P〉0．05）。②相关性分析显示：DNMT3B与CD70分子表达水平呈显著负相关（r=-0．769，P〈0．01）。结论DNMT3B在发病MRL／lpr狼疮鼠CD4^＋T淋巴细胞中表达水平降低，可能通过影响免疫相关的甲基化敏感基因CD70的表达，造成CD4^＋T淋巴细胞功能异常，参与系统性红斑狼疮的发病。

JAK/STAT1信号转导途径在MRL/lpr狼疮鼠不同器官中的活化研究

目的探讨Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)/信号转导和转录激活子1(STAT1)信号转导途径在MRL/lpr狼疮鼠肾脏、肺脏、脑等不同器官中的活化和作用。方法实验组是12周龄以上已经发病的MRL/lpr雌性小鼠．对照组是未发病的同龄MRL/lpr雌性小鼠。采用免疫组织化学方法研究肾脏中磷酸化STAT1的组织分布情况。采用Western blot方法研究STAT1磷酸化蛋白表达,采用SYBR greenⅠre- M-time定量聚合酶链反应(PCR)研究SOCS-1 mRNA的表达；并与肺脏、脑相对比。结果MRL/lpr狼疮鼠STAT1磷酸化蛋白在各器官均明显活化。肾脏和肺脏的STAT1磷酸化蛋白活化较脑组织明显；肾脏、肺脏和脑组织的SOCS-1基因的表达均升高．但肾脏的SOCS-1基因表达升高程度低于肺脏和脑组织。结论JAK/STAT1信号转导途径的异常可能参与和促进了系统性红斑狼疮(SLE)各器官病理损害的发生；狼疮肾炎的病理损害还可能与SOCS-1的负反馈调节作用降低有关。

MRL/lpr鼠骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞作用的研究

目的探讨狼疮鼠(MRL/lpr)及正常鼠(C57BL/6)骨髓间充质干细胞(MSCs)体外生物学特性、对T淋巴细胞作用的影响。方法采用直接贴壁筛选法分离培养扩增两种鼠系骨髓MSCs,流式细胞术鉴定MSCs表面标记物。观察MSCs生长状况并绘制生长曲线;取C57BL/6鼠脾脏细胞,经尼龙毛柱分选CD3^+T淋巴细胞,经刀豆蛋白A(ConA)刺激,取正常及狼疮鼠MSCs或MSCs培养上清与T细胞共培养72h,然后羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色测定T细胞增殖,流式细胞术检测共培养前后T细胞活化及T细胞的凋亡率。结果第2代(P2)后狼疮鼠MSCs生长增殖快于正常鼠MSCs;正常及狼疮鼠MSCs共培养均可抑制正常鼠T细胞的增殖(P<0.05),与MSCs上清共培养对正常鼠T细胞增殖无抑制作用(P>0.05);与两种MSCs或上清共培养均可降低正常T细胞的活化(P<0.05)及凋亡率(P<0.05)。对正常T细胞增殖、活化、凋亡的影响,狼疮鼠MSCs与正常鼠MSCs间差异无统计学意义(P>0.05)。结论狼疮鼠MSCs在体外生长上存在异常,但对T细胞增殖、活化、凋亡免疫调节无异常。

全淋巴区电子线照射治疗MRL／lpr狼疮小鼠疗效观察与机制探讨

目的 观察全淋巴区电子线照射治疗MRL/lpr狼疮小鼠的疗效，并探讨其与调节性T细胞的关系。 方法 将18只4月龄的MRL/lpr小鼠随机分为阴性对照组、放射治疗组、地塞米松治疗组，每组6只，雌雄各半，阴性对照组予生理氯化钠溶液0.5 ml腹腔注射每日1次，连续2周；放射治疗组全身淋巴结予电子线照射，2 Gy/d，每周5次，连续2周；地塞米松治疗组予地塞米松1 mg/kg腹腔注射每日1次，连续2周，实验结束后2周测各项指标。考马斯亮蓝法测24 h尿蛋白，ELISA法检测各组小鼠ANA及抗dsDNA抗体水平，直接免疫荧光法观察各组小鼠IgG抗体在肾脏的沉积情况，PAS染色法观察各组小鼠的肾脏情况，流式细胞仪测定各组小鼠脾脏细胞中调节性T细胞所占比例。用SPSS11.5统计软件进行多样本组间单因素方差。 结果 放射治疗组小鼠24 h尿蛋白含量为（3.33 ± 0.17） mg，阴性对照组为（3.97 ± 0.33） mg，两组比较，P 〈 0.05。放射治疗组小鼠血清抗核抗体ANA水平为（275.12 ± 30.18） U/ml，抗小鼠dsDNA抗体为（455.74 ± 43.38） IU/ml；阴性对照组小鼠分别为（434.82 ± 36.63） U/ml和（956.78 ± 37.69） IU/ml，两组比较，均为P 〈 0.05。放射治疗组与地塞米松治疗组小鼠肾小球内IgG沉积较阴性对照组减少，强度较弱，放射治疗组、地塞米松治疗组两组无明显差异。PAS染色可见放射治疗组与地塞米松治疗组肾脏病变较阴性对照组减轻，放射治疗组、地塞米松治疗组两组无明显差异。流式细胞仪检测显示，放射治疗组小鼠调节性T细胞所占比例为（1.08 ± 0.52）%，地塞米松治疗组为（1.18 ± 0.60）%，阴性对照组为（0.38 ± 0.14）%，放射治疗组、地塞米松治疗组两组的调节性T细胞所占比例较阴性对照组升高（P 〈 0.05）。 结论 全淋巴区电子线照射能降低MRL/lpr狼疮小鼠尿蛋白、血清抗核抗体、双链DNA抗体水平，对肾脏病理改变亦有恢复作用，其机制可能与提高体内调节性T细胞的比例有关。

狼疮模型鼠各脏器中T细胞受体Vβ基因的表达

目的探讨MRL/lpr和(NZB×NZW)F1两种狼疮模型鼠中致病性T细胞克隆在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增狼疮模型鼠各脏器中的T细胞受体(TCR)Vβ基因,单链构象多态性分析法(SSCP)分析TCRVβ的表达,并应用磁珠细胞分离法(MACS)确定广泛浸润于各脏器中的T细胞的表型。结果两种狼疮模型鼠在SLE发病时,多个脏器中出现相同的T细胞寡克隆扩增带;该广泛浸润的T细胞克隆扩增呈TCRVβ限制性;此共同的T细胞克隆大多来源于CD4+T细胞。结论两种狼疮模型鼠的CD4+T细胞被活化后呈克隆扩增,广泛浸润于多脏器。

成年发病狼疮鼠的T细胞受体Vβ基因测序分析

目的分析MRL/lpr和(NZB×NZW)F1两种狼疮鼠成年发病时,广泛浸润于多脏器的T细胞克隆T细胞受体(TCR)Vβ基因编码的氨基酸基序特点,揭示该T细胞克隆的抗原特异性。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增不同成年发病狼疮鼠个体的肾脏、大脑中的TCRVβ6基因,对扩增产物进行基因克隆和DNA测序分析;单链构象多态性分析法(SSCP)鉴定广泛浸润的T细胞克隆TCRVβ6基因编码的氨基酸基序。结果两种成年发病狼疮鼠的不同个体之间,广泛浸润于多脏器的T细胞克隆TCRVβ6基因的互补决定区3(CDR3)中出现相同的氨基酸基序。结论不同个体成年发病狼疮鼠的多脏器中广泛浸润的T细胞克隆TCRVβ基因的CDR3中出现相同的氨基酸,表明该克隆针对特定的自身抗原。

Blimpl—BCMA调控浆细胞功能在系统性红斑狼疮发病中的意义

目的探讨Blimp1在MRL／lpr狼疮鼠中的表达水平，为靶向浆细胞治疗SLE提供思路。方法用EMSA和CHIP证实Blimp1对B细胞成熟抗原（BCMA）的调控作用，并用实时定量PCR检测MRL／lpr狼疮鼠与正常鼠脾脏和淋巴结中Blimp1mRNA的表达差异。结果Blimp1能与BCMA基因启动子相结合。狼疮鼠组脾脏Blimp1mRNA的相对表达水平高于正常对照组Blimp1mRNA的相对表达水平（Z=2．609，P〈0．01），狼疮鼠组淋巴结中Blimp1的相对表达水平也高于正常对照组Blimp1mRNA的相对表达水平（Z=3．402，P〈0．01），差异有统计学意义。结论BCMA可能是Blimp1的靶基因，Blimp1可直接调控BCMA表达，在维持浆细胞存活及抗体分泌中发挥作用。