利用Rank氧电极测定焦化废水Michaelis-Menten常数

在用生物降解法处理焦化废水的研究中。发现由于焦化废水成色物质成分复杂，难以做定性和定量分析。无法用通常的方法来测定菌种对其的k值。针对这种情况，文章提出了一种用Rank氧电极测定k值的新方法。其主要原理为：以氧气消耗速率来衡量反应速率，用底物的COD来衡量其浓度。该方法比较适用于当底物成分难以分析时的k值测定。本方法具有方便、快捷．微量化．灵敏度高等优点。

基于米氏机理的酶催化反应中反应速率常数的计算

对基于米氏机理的酶催化反应模型,本文介绍了求解全部反应速率常数的两种方法:瞬态法和数学计算法,其中瞬态法的核心是分析反应达到稳态前的过程,数学计算法的核心是寻找反应过程中酶与底物浓度之间的关系。通过求解全部反应速率常数,不仅可以加深对酶催化反应动力学的理解,而且有助于提高对反应动力学的认识。

虚拟仿真实验“米氏常数测定”在实验教学中的应用

虚拟仿真实验作为信息技术与实验教学深度融合的产物,代表了未来医学实践教学的发展方向。为进一步提升基础医学实践教学的教学效果,设计虚实结合的酶学实验“碱性磷酸酶米氏常数的测定及抑制剂对酶的抑制作用”,一方面通过虚拟操作将实验内容与酶促反应动力学的知识点紧密结合,另一方面通过虚拟平台的拓展研究帮助学生探索不同药物分子作为酶的抑制剂对米氏常数(Km值)的影响,通过具体的数据分析得出结论,联系临床应用深入理解多种药物治疗疾病的分子机制。将抽象的理论知识点与生动的操作场景和临床应用相结合,使动力学方程的各种参数不再是空洞的数字而是直观的体验,激发学生的学习兴趣和探究精神,为将来的进一步学习和临床应用打下基础。

类普鲁士蓝纳米酶材料的制备及其酶催化反应动力学探究——推荐一个分析化学综合实验

将类普鲁士蓝纳米酶引入本科实验教学,设计了一个探究性的分析化学综合实验,实验内容包括三种类普鲁士蓝纳米酶材料的制备、表征和酶催化反应速率常数的测定,并将这些纳米酶材料应用于过氧化氢(H2O2)的分析检测。本实验所用试剂价廉易得、反应条件温和、实验现象直观、时间分配合理,适合本科实验教学,用于提升学生的实验技能和科研创新能力。

一株黄杆菌及其粗酶液对芘降解的动力学特征研究

实验研究了一株黄杆菌FCN2对芘降解的动力学特性,以及该菌株对芘的好氧氧化具有催化作用的酶的分布特征、芘在胞内酶存在下酶促降解的动力学特征.研究结果表明,本实验室经驯化、筛选、分离所得的FCN2菌株对芘有良好的降解性能;反应后10h内,降解反应近似表现为一级动力学特性,且随着芘初始浓度的增加,反应速度加快;当芘的初始浓度达到200mg·L-1时,菌体的降解活性被抑制;菌体的初始浓度越大,芘的降解转化速率越快;当菌量达到3.0×108CFUs·mL-1(CFUscolony-formingunits)时,芘的降解转化速度不再随着起始菌量的增加而增加.在本实验的好氧条件下,最适初始菌量为1.0×108～2.0×108CFUs·mL-1范围内.FCN2菌株对芘好氧降解起催化作用的活性酶为胞内酶,它对芘降解的催化作用迅速、有效,短时间内即达到分解平衡;胞内酶最适pH值为5,在pH5.0～6.0之间均有较高的催化活性;胞内酶最适温度为32℃,在30～50℃之间能保持较高的催化活性;粗提胞内酶催化芘的好氧降解过程中,米氏常数较小,为1×10-4mol·L-1,最大反应速率为2×10-6mol·L-1·min-1,说明酶与芘的亲和力大.

大麦发芽过程中多酚氧化酶酶学特性初步研究

通过研究反应速率与底物浓度之间的关系,确定大麦多酚氧化酶(PPO)的米氏常数Km为1.89×10-3mol/L。利用双因素全面性实验测定大麦PPO作用的最适条件,结果表明,80℃、pH8.4为大麦PPO最适作用条件。建立分光光度法测定大麦发芽过程中PPO活性变化的方法,最适测定条件为酶添加量<5mL,反应时间4min,检测波长450nm。PPO在沸水中处理9min即可有效抑制其活性。

用微量热法研究漆酶和过氧化氢的反应

漆树酶是含铜酶。在酶系统中属于一种选择性较差的氧化酶,它能与许多还原底物作用,同时亦能还原分子氧生成水。在这些反应中漆酶中的三个不同的氧化还原活性中心和其作用途径常常是研究中的主要对象。在无氧条件下,漆酶被底物还原后,可用氧再氧化,实验表明,酶分子中的Cu2^+—Cu^(1+)循环是催化机理的一部分。1970年Farver等人在研究漆树酶与过氧化氢之间的反应时发现,漆树酶与过氧化氢有一种特殊作用,二者会生成一种稳定的具有高亲合力的复合物,该复合物不会被氧再氧化,其反应可用下式表示:式中L-Cu(Ⅱ)表示含二价铜的漆酶分子,二价铜在此反应中起活性中心的作用。本工作中,用微量热法测量了漆树酶与过氧化氢反应的一些热动力学性质。

微量热法研究过氧化氢酶反应

利用微量热法和热动力学方程研究了过氢化氢酶反应。该反应遵循Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ动力学，２９８．１５Ｋ和ｐＨ７．０时，其米氏常数、酶转换数以及摩尔反应焓分别为２．３６×１０－２ｍｏｌ／Ｌ、１．２０×１０４ｓ－１和－８３．６７ｋＪ·ｍｏｌ－１。过氧化氢酶反应后期对底物是一级反应，其总反应速度常数和一级速度常数分别为ｋｏ＝６．３１×１０５Ｌ·ｍｏｌ－１·ｓ－１和ｋ１＝６．３１×１０５／［Ｅｏ］ｓ－１。该反应服从Ｏｇｕｒａ机理，其酶－底物三元复合物的分解速度常数为６．００×１０３ｓ－１。

抗性品系棉蚜乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的变异

用浸叶法测定了采自我国不同地区 (泰安、莱阳、南京、北京和安阳 )的棉蚜品系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ对久效磷、甲胺磷、抗蚜威和灭多威等杀虫剂的抗性水平 ,各棉蚜品系对杀虫剂的抗性依次为Ⅴ >Ⅳ >Ⅲ ,Ⅱ >Ⅰ。进一步研究表明 ,Ⅴ和Ⅳ品系棉蚜乙酰胆碱酯酶对杀虫剂的敏感性显著下降 ,Ⅱ品系次之 ,Ⅲ和Ⅰ品系接近于敏感品系。Ⅴ和Ⅳ品系乙酰胆碱酯酶的Km值显著下降 ,表明酶发生了质的变化。不同棉蚜抗性品系的酯酶 (全酯酶和羧酸酯酶 )活性均显著升高 ,其中Ⅲ品系的酯酶活力为Ⅱ品系的 2倍。Ⅴ品系羧酸酯酶Km值达 2 4 6 0 4 μmol L ,而Ⅳ品系仅为 84 4 μmol L ,该两个品系羧酸酯酶发生了质的变化。研究结果表明 ,不同抗性程度的棉蚜品系均存在代谢抗性和靶标抗性。低抗水平的棉蚜品系 ,以代谢抗性为主 ,靶标抗性为辅 ;中抗水平的棉蚜品系 ,抑或由于解毒代谢酶的活性显著增强 ,也可能由于靶标的敏感性显著下降 ;而高抗水平的棉蚜品系 。

一硫代磷酸酯杀虫剂的酶促降解

从降解菌ＹＦ１１中提取了降解酶并测定了该降解酶对对硫磷、甲基对硫磷和杀螟松的降解特性．对硫磷和甲基对硫磷酶促降解的最适ｐＨ均为８．０，杀螟松的最适ｐＨ为８．５，最适温度为３２．５℃．该降解酶对对硫磷、甲基对硫磷和杀螟松的米氏常数分别为１８７．２、２０５．５和２１２．

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测技术及临床应用研究

该文研究了甘氨酰辅氨酸二肽氨基肽酶（GPDAEC．3．4．14．5）的最适反应条件，9次测定米氏常数（Km）值为（1．91±0．08）mmol／L，选用158mmol／LTris、64mmol/L，双甘氨肽，10mmol／L底物，pH8．6缓冲液，同时建立了手工法和自动化分析法，酶促反应速度在70min内呈线性，酶活力用手工法在750IU／L，内成线性，自动化分析法在1300IU/L，以下成线性，三份高、中、低值酶活力标本手工法及自动化分析法批内变异系数分别为1．7％～3．1％和0．7％～1．4％，批间变其分别为3.8％～6．7％和1．2％～4．4％。132例正常人GPDA为185．2±28．6（x±s），65例原发性肝癌组为408．0±216．1（x±s）明显高于正常组（P＜0．001）且与AFP水平无相关意义（r＝0．0361）．24例胃癌和59例肺癌分别为（99．5±16．6）IU／L和（11．8±23．0）IU／L，明显伏于正常组（P＜0．001）；并发现GPDA在食道癌及有门癌病人亦有下降趋势（P＜0．01）。

蒽和菲的酶促降解条件及动力学特征

研究了蒽和菲酶促降解的最佳反应条件及其动力学特性.结果表明,利用黄杆菌FCN2产生的胞内酶降解蒽、菲时的最佳pH为6,而且在弱酸性介质中胞内酶的活性较高;在30℃—35℃之间胞内酶能保持较好的降解活性,32℃时胞内酶活性最高.对蒽和菲酶促降解的米氏常数分别为3×10-4mol.l-1和4×10-4mol.l-1,相同实验条件下,对蒽降解的最大反应速率为2×10-6mol.l-1.min-1,对菲的最大反应速率为1×10-6mol.l-1.min?1.酶促降解蒽的反应级数接近于0.93,表观速率常数的对数lgk为-1.86,而降解菲的反应级数接近于0.76,表观速率常数的对数lgk为-2.05.

截形叶螨抗哒螨灵品系和敏感品系体内解毒酶活性的变化

【目的】通过对截形叶螨Tetranychus truncatus Ehara抗哒螨灵品系体内解毒酶活性分析和增效剂与哒螨灵混用的增效作用测定,明确截形叶螨对哒螨灵的抗性动态及抗性机理,获得抗性治理的途径。【方法】采用室内生测法培育截形叶螨抗哒螨灵品系,微量滴度酶标板测定抗性和敏感品系体内解毒酶比活性、米氏常数(Km)及最大反应速度(Vmax),再用增效醚(PBO)、顺丁烯二酸二乙酯(DEM)和磷酸三甲苯酯(TPP)进行增效作用测定。【结果】室内筛选的截形叶螨对哒螨灵产生了抗性,筛选至49代,抗性倍数达到955.25;PBO,TPP和DEM对哒螨灵药剂有不同程度的增效作用,相对增效系数分别为95.97%,85.14%和97.37%;抗哒螨灵品系体内的羧酸酯酶(CarE)、谷胱甘肽转移酶(GSTs)、多功能氧化酶(MFO)活性较敏感品系显著性提高(P<0.05),酸性磷酸酯酶(ACP)和碱性磷酸酯酶(ALP)的活性与敏感品系差异不大(P>0.05);抗性品系中的CarE,GSTs和MFO 3种解毒酶的米氏常数(Km)下降,最大反应速度(Vmax)高于敏感品系。【结论】截形叶螨对哒螨灵产生抗性可能与其体内CarE,GSTs和MFO 3种解毒酶与底物的亲和力提高和代谢能力增强有关;3种增效剂(PBO,TPP和DEM)与哒螨灵混用能提高对截形叶螨的毒杀效果。

大麦萌发时植酸酶酶学特性及形成机理的初步研究

利用双因素全面性实验来测定大麦植酸酶作用的最适条件.结果显示:大麦植酸酶在60℃,pH5.0的条件下有最高的酶活性.通过反应速率与底物浓度之间的关系,确定大麦植酸酶的米氏常数Km为3.03×10-5mol/L.半种子试验检测结果显示,大麦植酸酶分布不均衡,在胚中要比胚乳中分布多一些,并且赤霉素对植酸酶的激活没有直接的作用.通过高浓度金属盐的培养发现,各种金属离子对植酸酶没有明显的激活作用,而且一些二价金属离子对植酸酶有明显的抑制作用.在以上基础上对大麦植酸酶的形成机理做了初步探讨.

菲降解菌的降解特性及酶促反应动力学研究

通过对取自MBR膜生物反应器中的活性污泥加入菲进行富集培养、驯化,分离、纯化出一株能以菲为唯一碳源和能源的短杆状革兰氏阴性菌J-1,细菌长2～5μm,宽1～3μm;研究了初始底物浓度、温度、pH对菌株J-1降解菲的影响,探讨了菌株J-1胞内酶对菲降解的底物抑制动力学。试验表明:菌株J-1在48h内能将不同浓度菲的水溶液中的菲完全降解;菲浓度增加,达到完全降解的时间延长。温度对细菌的降解能力影响较大,菌株J-1对菲降解的最佳温度为28℃。1.15mg·L-1的菲,28℃时48h内能完全降解,而相同时间内10℃时的降解率仅为36.65%。菌株J-1对pH的波动具有一定的适应性,pH在一定范围内(6.0～8.4)变化对菲降解的影响不大,降解反应的最佳pH为7.2。菌株J-1对菲的降解符合一级动力学反应方程。较高的底物浓度对酶促降解反应具有抑制作用,酶促反应的最大速率常数vm=1.17mg·L-1·h-1,米氏常数Km=61.70mg·L-1;底物抑制常数kS=49.60mg·L-1;最佳底物浓度[S]opt=55.32mg·L-1。

引江济太对太湖水体碱性磷酸酶动力学参数的影响

采用野外定点采样、室内同步分析水体碱性磷酸酶活性及水化学指标的方法,研究引江济太调水对太湖各湖区水体碱性磷酸酶最大反应速率(vmax)、米氏常数(Km)值的影响。结果表明:在引江济太调水试验期间,各湖区水体中vmax及Km值时空分布存在差异性。调水稀释了各湖区蓝藻浓度,抑制了水体碱性磷酸酶vmax;贡湖区、西岸河口区及湖心区水体中Km值与入湖累积水量之间有显著的二次函数关系(p=0.007)。梅梁湖、竺山湖、贡湖及西岸河口区水体碱性磷酸酶vmax/Km随着总磷浓度升高而增加,但竺山湖、贡湖、草型湖、湖心及西岸河口区水体vmax/K随生物可利用磷(PO3--P)浓度增加而下降。除草型湖区外,其它湖区水体v/K随叶绿素a浓度升高而增加。

番鸭小肠碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

分离纯化番鸭小肠中碱性磷酸酶,并对其酶促动力学性质进行研究.结果表明:该酶催化磷酸苯二钠水解反应时最适温度为45℃,最适pH为9.72,米氏常数(Km)为4.76 mmol.L-1.Mg2+对碱性磷酸酶活性有明显激活作用;Cd2+浓度小于0.4 mg.L-1时对碱性磷酸酶有激活作用,而浓度高于0.4 mg.L-1时则有抑制作用;Cu2+对碱性磷酸酶活性有明显抑制作用.

几种海洋微藻硝酸还原酶特性的初步研究

确定了离体法提取时间，并采用离体法对5种海洋微藻硝酸还原酶的特性进行了初步研究。结果表明，离体法的最佳提取时间为5min；在pH7．9及20℃条件下，各藻硝酸还原酶的酶促反应恒速时间及以KNO。为底物的米氏常数存在差异，但以NADH为底物的米氏常数基本相同。酶促反应恒速时间顺序为锥状斯氏藻〈尖刺拟菱形藻〈东海原甲藻〈中肋骨条藻〈旋链角毛藻，以KNO。为底物的米氏常数大小顺序为旋链角毛藻〈东海原甲藻～中肋骨条藻〈锥状斯氏藻～尖刺拟菱形藻。此外，FAD对各藻硝酸还原酶活性的影响存在种属差异。

酶促反应热动力学方程的研究

由酶促反应速率方程积分式和酶促反应中能量变化与物质参与反应量的关系推出了单底物酶促反应的热动力学方程。并用精氨酸的酶促水解反应进行了验证,求出的米氏常数K_m和最大速率Vmax与文献值相符。

新鲜香菇子实体漆酶的纯化与性质

用硫酸铵分级沉淀，离子交换纤维素柱层析分离技术，对香菇〔Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ）ｅ－ｄｏｄｅｓ〕子实体漆酶进行分离纯化，得到单一组分的漆酶，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳法，测得其摩尔式量为５５０００。研究表明该酶的最适ｐＨ为２．６，最适温度为７０℃，酶的动力学研究测出米氏常数Ｋｍ值为０．１４２ｍｍｏｌ。