miR-126过表达和ADAM9基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)过表达和解整联蛋白金属蛋白酶9(ADAM9)基因沉默对胃癌细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人胃低分化腺癌SGC-7901细胞和人正常胃黏膜上皮NGEC细胞,提取细胞中总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2种细胞中miR-126和ADAM9 mRNA表达水平。将处于对数生长期的SGC-7901细胞分为miR-126过表达组(miR-126-OE组)和ADAM9基因沉默组(ADAM9 siRNA组),以LipofectamineTM 2000为载体分别转染miR-126模拟物(miR-126 mimics)和敲低ADAM9的RNA寡核苷酸,并设置相应的阴性对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平。TargerScan网站预测miR-126的靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-126和ADAM9的靶向调控关系,采用RT-qPCR法和Western blotting法检测转染miR-126 mimics后SGC-7901细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法检测,与人正常胃黏膜上皮NGEC细胞比较,胃癌SGC-7901细胞中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),而ADAM9mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。MTT法检测,SGC-7901细胞过表达miR-126或沉默ADAM9基因48和72 h后,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验检测,与相应阴性对照组比较,48 h后miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞迁移率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与相应阴性对照组比较,miR-126-OE组和ADAM9 siRNA组细胞中E-钙黏蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),而N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。靶基因预测,ADAM9的3´-UTR含有与miR-126-3p互补的核苷酸序列。双荧光素酶报告基因实验,ADAM9是miR-126靶向负调控的下游基因。SGC-7901细胞转染miR-126 mimics 48 h后,与mimics NC组比较,miR-126 OE组细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:胃癌SGC-7901细胞中miR-126低表达而ADAM9基因高表达。miR-126过表达可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,其机制可能与miR-126靶向负调控ADAM9并抑制胃癌细胞的上皮-间质转化(EMT)进程有关。

miR-126-5p通过靶向TRAF3抑制糖氧剥夺再灌注介导的HT22细胞凋亡和炎症

目的探讨miR-126-5p通过靶向肿瘤坏死因子受体相关因子3(tumor necrosis factor receptor-associated factor 3,TRAF3)对糖氧剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)介导的小鼠海马神经元细胞HT22细胞凋亡和炎症的影响。方法模拟缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)损伤在体外建立氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)细胞模型,分析miR-126-5p与TRAF3靶向关系及对HT22细胞凋亡和炎症反应的影响。结果与对照组比较,OGD/R组中miR-126-5p下调而TRAF3 mRNA及蛋白水平上调,细胞存活率及Bcl-2蛋白水平降低,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、细胞凋亡率、Bax及Cleaved caspase-3蛋白水平升高(P均<0.05)。与OGD/R+mimic-NC组比较,OGD/R+miR-mimic组、OGD+miR-mimic+pcDNA组TRAF3蛋白水平、LDH释放量、细胞凋亡率、Bax及Cleaved caspase-3蛋白水平明显降低,细胞存活率及Bcl-2蛋白水平升高,而OGD+miR-mimic+pcDNA-TRAF3组各指标升高,细胞存活率明显下降(P均<0.05)。结论miR-126-5p通过靶向TRAF3,抑制OGD/R介导的HT22细胞凋亡和炎症反应,从而对神经元细胞发挥保护作用。

METTL3调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞焦亡的影响及机制研究

目的:研究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞(HRMC)焦亡的影响并探讨潜在机制。方法:将HRMC分为7组,即对照组、高糖处理组、pcD-null组、pcD-METTL3组、pcD-METTL3+miR-126-5p抑制剂(inhibitor)组、pcD-METTL3+inhibitor-NC组、pcD-METTL3+inhibitor+AKT抑制剂(AZD5363)组。用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126-5p表达,western blotting检测METTL3、Gasdermin D、NLRP3、磷酸化(p-)AKT、p-NF-κB表达。用RNA甲基化免疫沉淀技术(Me-RIP)测定miR-126-5p前体的m6A修饰水平。结果:与对照组比较较,高糖处理组细胞焦亡增多,miR-126-5p前体N6-甲基腺苷(m6A)修饰增加,p-AKT和p-NF-κB表达水平升高,METTL3和miR-126-5p表达水平降低(均P<0.05)。转染METTL3过表达载体后,高糖处理的细胞上述指标发生了显著逆转(均P<0.05)。而在过表达METTL3的基础上加入miR-126-5p inhibitor后,miR-126-5p表达下调,细胞焦亡增多,p-AKT、p-NF-κB表达上调(均P<0.05),但METTL3表达水平和miR-126-5p前体m6A修饰无显著变化(P>0.05)。在过表达METTL3的基础上加入AZD5363后,细胞焦亡减少(P<0.05),p-AKT、p-NF-κB表达下调,METTL3和miR-126-5p表达及miR-126-5p前体m6A修饰无显著改变(P>0.05)。结论:METTL3促进miR-126-5p的m6A甲基化,并通过抑制AKT/NF-κB信号通路减少高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡。

缺氧诱导因子-1α通过miR-126/JAK2-STAT3轴调控慢性肾病小鼠肾纤维化

目的:探究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通过miR-126/JAK2-STAT3轴促进慢性肾病小鼠肾纤维化的分子机制。方法:选取8周龄雄性C57/BL6小鼠,分为假手术组、模型组、HIF-1αmimic组、miR-126 mimic组、HIF-1α+miR mimic组、WP1066组、miR-126 mimic+WP1066组;用全自动生化仪检测小鼠肾24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平,qRT-PCR检测肾组织内miR-126相对表达量,免疫印迹检测肾组织内HIF-α,肾纤维化关键蛋白fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA,JAK2/STAT3信号通路关键蛋白表达;Masson染色分析小鼠肾病理形态及间质纤维化程度。结果:模型组模型建立后miR-126表达受到抑制,差异有统计学意义。与假手术组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白、BUN、SCr水平均上调,肾组织肾小管、间质结构紊乱,肾纤维化明显,fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达上调;HIF-1α过表达进一步上调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;miR-126过表达下调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;HIF-1α过表达可以逆转miR-126过表达抑制肾纤维化的趋势,差异有统计学意义。与模型组相比,JAK2/STAT3信号通路被阻断后,p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达明显下调,miR-126的过表达可以进一步下调小鼠肾组织内p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达,差异有统计学意义。结论:小鼠肾纤维化促进肾组织内HIF-1α高表达,HIF-1α通过抑制miR-126提升JAK2-STAT3信号通路活性,最终促进肾纤维化进展。

中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

miR-126对七氟烷麻醉致老龄大鼠认知功能障碍的影响及机制

目的 观察微小RNA(miR)-126对七氟烷麻醉致老龄大鼠认知功能障碍的影响,并探讨相关作用机制。方法 采用随机数字表法将60只大鼠分成对照(Control组)、七氟烷麻醉(Model)组、miR-126激动剂对照(agonist NC)组和miR-126激动剂(agonist)组,每组15只。采用3%七氟烷麻醉4 h建立麻醉造模,agonist NC和agonist组大鼠于麻醉前1 d经侧脑室注射miR-126 agonist或agonist NC进行干预。术后2 d进行Morris水迷宫验测试大鼠认知功能;苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理学变化;Tunel染色观察海马组织细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测海马组织中miR-126表达水平;Western印迹检测海马组织中磷脂酰肌醇3激酶[PI3K(p110α亚基)]、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、AKT、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和裂解凋亡蛋白酶(Cleaved-caspase)-3蛋白表达水平。结果 与Control组比较,Model组逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间明显缩短,穿越平台次数明显减少,海马组织损伤明显严重,海马组织细胞凋亡率、IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显升高,miR-126表达水平明显降低,PI3K(p110α亚基)、p-AKT、Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax和Cleaved-casapse-3蛋白表达量明显升高(P均<0.05);与Model组比较,agonist组逃避潜伏期明显明显缩短,原平台象限停留时间明显延长,穿越平台次数明显增加,海马组织损伤明显改善,海马组织细胞凋亡率、IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显下降,miR-126表达水平明显增加,PI3K(p110α亚基)、p-AKT、Bcl-2蛋白表达量明显上升,Bax和Cleaved-casapse-3蛋白表达量明显下降(P均<0.05),而agonist NC组以上各指标无显著性变化(P>0.05)。结论 miR-126通过激活PI3K/AKT信号通路抑制细胞凋亡及炎症反应,改善七氟烷诱导的老龄大鼠认知功能障碍。

MicroRNA-126、microRNA-328与急性非ST段抬高型心肌梗死患者心肌损伤标志物的相关性

目的研究血清microRNA-126(miR-126)、microRNA-328(miR-328)与急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者心肌损伤标志物的相关性。方法选取2021年1月—2022年1月宁夏医科大学总医院收治的191例急性NSTEMI患者为观察组,另选取同期该院门诊体检健康的180例志愿者为对照组。比较两组的心肌损伤标志物[脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]水平,以及miR-126、miR-328表达的差异。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析BNP、CK-MB、LDH、cTnI、miR-126、miR-328预测NSTEMI的价值。参照全球冠状动脉事件登记(GRACE)评分标准,将急性NSTEMI患者分为低危组、中危组及高危组,比较3组BNP、CK-MB、LDH、cTnI、miR-126、miR-328的差异。采用Pearson相关系数分析BNP、CK-MB、LDH、cTnI与miR-126、miR-328的相关性。结果观察组BNP、CK-MB、LDH、cTnI水平及miR-328 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05),miR-126 mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,BNP≥1149.684 ng/L、CK-MB≥34.760 ng/mL、LDH≥812.535 u/L、cTnI≥3.583μg/L、miR-126≤26.825、miR-328≥1.215是NSTEMI的最佳截断值,敏感性分别为84.2%(95%CI:0.714,0.854)、84.7%(95%CI:0.723,0.921)、83.7%(95%CI:0.741,0.882)、67.9%(95%CI:0.595,0.789)、87.2%(95%CI:0.623,0.932)、77.9%(95%CI:0.745,0.836),特异性分别为82.8%(95%CI:0.653,0.912)、83.9%(95%CI:0.675,0.931)、83.9%(95%CI:0.741,0.963)、74.4%(95%CI:0.628,0.844)、87.9%(95%CI:0.573,0.917)、82.8%(95%CI:0.749,0.901)。高危组BNP、CK-MB、LDH、cTnI水平及miR-328m RNA相对表达量较低危组、中危组升高(P<0.05),miR-126 mRNA相对表达量较低危组、中危组降低(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-126与BNP、CK-MB、LDH、cTnI呈负相关(P<0.05),miR-328与BNP、CK-MB、LDH、cTnI呈正相关(P<0.05)。结论NSTEMI患者的BNP、CK-MB、LDH、cTnI水平及miR-126、miR-328 mRNA相对表达量与健康人群有差异,并随NSTEMI病情进展而变化。miR-126、miR-328与BNP、CK-MB、LDH、cTnI相关,提示miR-126、miR-328有望成为NSTEMI早期诊断的新型标志物。

循环miR-126-3p在非小细胞肺癌中表达及诊断价值

目的探讨循环微小核糖核酸(miR)-126-3p在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及诊断价值。方法收集多中心miR芯片及测序数据探讨NSCLC的循环miR-126-3p的表达差异。为了评估循环miR-126-3p综合表达水平,计算标准化均数差(SMD)和综合受试者工作特征(sROC)曲线,分析sROC曲线的曲线下面积(AUC),探讨灵敏度、特异度、阳性阴性似然比,并结合组织进一步综合分析循环miR-126-3p表达。通过miRDB、starBase v2.0和TargetScan 7.1,结合NSCLC中的上调差异基因,利用互补序列方法筛选了循环miR-126-3p潜在靶基因。结果基于6项循环miR数据集发现循环miR-126-3p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),受试者工作曲线显示循环miR-126-3p有较强的诊断效能(AUC>0.5),而在199例NSCLC组中综合表达低于对照组(SMD=-1.46)。sROC曲线显示循环miR-126-3p区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.91),Egger's检验不存在发表偏倚(P>0.05),灵敏度、特异度均≥0.80,阳性似然比、阴性似然比为5.37和0.18。此外,对26个数据集1320例NSCLC循环和组织综合分析显示,循环miR-126-3p在NSCLC组中表达低于对照组(SMD=-2.07)。sROC曲线显示低表达的循环miR-126-3p在区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.97)。此外,筛选得到循环miR-126-3p的潜在靶基因ADAM9和SLC7A5在NSCLC组中表达均高于对照组。结论低表达的循环miR-126-3p可能是NSCLC高准确性筛查的重要生物标志物。

沉默miR-126对关节软骨细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响及其机制

目的探讨沉默miR-126对关节软骨细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响及其机制。方法体外传代培养关节软骨细胞HC-a。取传3代、对数生长期、生长状态良好的HC-a细胞,随机分为对照组、IL-1β组、IL-1β+miR-NC组、IL-1β+miR-126 inhibitor组,IL-1β+miR-NC组和IL-1β+miR-126 inhibitor组分别转染miR-NC和miR-126 inhibitor;除对照组外,其余三组均予10 ng/mL IL-1β诱导骨关节炎细胞模型。收集各组细胞,采用RT-qPCR法检测miR-126表达,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测培养上清液炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-γ,采用Western blotting法检测SIRT1、Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,IL-1β组miR-126相对表达量升高,细胞增殖活性下降,细胞凋亡率升高,培养上清液TNF-α、IL-6、IFN-γ水平升高,SIRT1蛋白相对表达量降低,Caspase-3蛋白相对表达量升高(P均<0.05);与IL-1β+miR-NC组比较,IL-1β+miR-126 inhibitor组miR-126相对表达量降低,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,培养上清液TNF-α、IL-6、IFN-γ水平下降,SIRT1蛋白相对表达量升高,Caspase-3蛋白相对表达量降低(P均<0.05);而IL-1β组和IL-1β+miR-NC组上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论沉默miR-126能够促进关节软骨细胞增殖并抑制其凋亡和炎症反应,其机制可能与调控SIRT1蛋白表达有关。

外周血miRNA-126与miRNA-143表达对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值

目的:探讨外周血微小RNA-126(miRNA-126)、miRNA-143表达水平对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值。方法:选取113例行介入栓塞术治疗的颅内动脉瘤患者为研究对象,根据术后不同Raymond分级分为RaymondⅠ级组(n=88)、RaymondⅡ级组(n=13)和RaymondⅢ组(n=12);根据不同预后分为复发组(n=19)和未复发组(n=94)。比较不同分级患者、不同预后患者外周血miRNA-126、miRNA-143表达水平,分析其与Raymond分级的相关性及其对颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的预测价值。结果:与RaymondⅠ级组相比,RaymondⅡ级组和RaymondⅢ级组患者miRNA-126表达水平均升高(P<0.05),miRNA-143表达水平均降低(P<0.05)。相关性分析显示,miRNA-126水平与Raymond分级正相关(r=0.364,P<0.05),miRNA-143水平与Raymond分级负相关(r=-0.347,P<0.05)。复发组患者外周血miRNA-126表达水平高于未复发组(P<0.05),miRNA-143表达水平低于未复发组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-126、miR-143及其联合预测颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的曲线下面积分别为0.767、0.826、0.968,联合检测预测的价值高于两者单独预测(P<0.05)。结论:外周血miRNA-126、miRNA-143联合检测能提高颅内动脉瘤介入术后复发的预测价值。

microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

血浆外泌体微RNA-126-5p在儿童注意缺陷多动障碍中的表达及临床意义

目的探究血浆外泌体微RNA-126-5p(miR-126-5p)在儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)中的表达及临床意义。方法选取2021年7月至2022年7月在江苏省人民医院确诊的ADHD病儿70例为ADHD组,同时纳入同期江苏省人民医院健康体检的志愿者70例为对照组,采用韦氏幼儿智力量表第4版(WISC-Ⅳ)和家长评定行为量表(SNAP-Ⅳ)评估研究对象的临床症状,采用miRNA测序绘制研究对象的差异miRNA表达谱后寻找关键的miRNA,并利用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价miRNA诊断ADHD的价值,分析miRNA与临床症状的相关性,同时分析miRNA的生物学功能。结果与对照组比较,ADHD病儿WISC-Ⅳ的计算言语理解指数(VCI)[(76.99±6.93)分比(95.30±5.94)分]、知觉推理指数(PRI)[(75.38±4.49)分比(94.69±6.33)分]、工作记忆指数(WMI)[(76.35±7.01)分比(94.11±5.87)分]、加工速度指数(PSI)[(81.36±6.90)分比(89.49±6.20)分]以及总智商(FSIQ)[(79.18±9.30)分比(90.19±5.22)分]的分值显著降低,而SNAP-Ⅳ中注意缺陷和多动/冲动评分明显增高。同时miRNA测序筛选出11个差异miRNAs,其中miR-126-5p在ADHD病儿的血浆外泌体表达升高,并与病儿临床症状存在相关性,且ROC曲线显示miR-126-5p的AUC为0.817,灵敏度为78.6%,特异度为91.4%。此外miR-126-5p主要涉及突触囊泡循环、轴突导向、炎症介质以及长时程增强等生物学功能有关。结论ADHD病儿血浆外泌体miR-126-5p升高,具有诊断ADHD的临床应用价值,同时具有调控突触可塑性和炎症介质参与ADHD的病理机制。

LEASO患者血清miR-21、miR-126水平与HMGB1/TLR4信号通路活性和术后复发的关系

目的 探讨股腘型下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者血清微小核糖核酸(miR)-21、miR-126水平与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路活性和术后复发的关系。方法 选取行介入手术的股腘型LEASO患者120例,根据术后是否复发将股腘型LEASO患者分为复发组和未复发组。RF-qPCR剂检测血清miR-21、miR-126表达和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达。采用Pearson相关性分析法分析股腘型LEASO患者血清miR-21、miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达的相关性。多因素Logistic回归分析股腘型LEASO患者介入术后复发的影响因素。结果 120例股腘型LEASO患者随访2年,术后复发率为34.17%。与未复发组比较,复发组血清miR-21和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达升高,血清miR-126表达降低(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,股腘型LEASO患者血清miR-21与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关(r分别为0.660、0.649,P均<0.05),miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈负相关(r分别为-0.632、-0.641,P均<0.05),外周血单个核细胞HMGB1mRNA与TLR4 mRNA表达呈正相关(r=0.742,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高血压、糖尿病和miR-21、HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA升高为股腘型LEASO患者介入术后复发的独立危险因素,miR-126升高为独立保护因素(P均<0.05)。结论 股腘型LEASO患者血清miR-21高表达和miR-126低表达与HMGB1/TLR4信号通路激活有关,是股腘型LEASO患者术后复发的独立影响因素。

新生儿缺氧缺血性脑病血清miR-124与miR-126的表达及临床意义

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血清微小核糖核酸(miR)-124、miR-126的表达及临床意义。方法选取2019-01—2023-02湘南学院附属医院收治的92例HIE患儿为HIE组,根据病情严重程度分为轻度组44例,中度组27例,重度组21例,另选取同期31名健康新生儿为对照组。采用Spearman相关性分析HIE患儿血清miR-124、miR-126表达与S100B、NSE水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-124、miR-126水平对新生儿HIE的诊断价值。结果与对照组比较,HIE组血清miR-124、miR-126表达降低,S100钙结合蛋白B(S100B)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平升高(P<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清miR-124、miR-126表达依次降低,S100B、NSE水平依次升高(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,HIE患儿血清miR-124、miR-126表达与S100B、NSE水平呈负相关(rs=—0.757、—0.781、—0.800、—0.785,P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清miR-124、miR-126表达单独和联合诊断新生儿HIE的曲线下面积分别为0.872、0.882、0.946。结论新生儿HIE血清miR-124、miR-126低表达,可能通过神经细胞损伤参与新生儿HIE过程,血清miR-124、miR-126表达联合诊断新生儿HIE的价值较高。

miRNA-126通过抑制自噬逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的作用研究

目的:比较人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞与人肺腺癌顺铂敏感株A549细胞的自噬水平,观察微小RNA-126(microRNA-126,miRNA-126)对肺癌顺铂耐药细胞自噬的影响,并探讨miRNA-126在肺癌顺铂耐药中的作用。方法:MTT法检测顺铂的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);RT-qPCR检测miRNA-126转染后肺癌细胞中miRNA-126的表达量;吖啶橙染色观察肺癌细胞自噬囊泡的形成情况;Western blot检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达变化。结果:A549/DDP细胞自噬囊泡数量和LC3水平显著高于A549细胞(P<0.01);转染miRNA-126上调了A549/DDP细胞中miRNA-126的表达量(P<0.01);miRNA-126降低A549/DDP细胞中自噬囊泡比例和LC3-II蛋白表达水平(P<0.01),从而抑制了顺铂耐药细胞A549/DDP的自噬水平;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,miRNA-126联合3-MA进一步增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.01)。结论:miRNA-126通过抑制自噬逆转了肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药。

血清微小核糖核酸-133a、微小核糖核酸-126、髓系细胞表达触发受体-1、肺表面活性蛋白A表达水平与脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征风险及预后关系

目的:研究血清微小核糖核酸-133a(miR-133a)、微小核糖核酸-126(miR-126)、髓系细胞表达触发受体-1(TREM-1)、肺表面活性蛋白A(SP-A)表达水平与脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)风险及预后的关系。方法:将248例脓毒症患者根据其是否发生ARDS分为无ARDS组(97例)和ARDS组(151例),统计两组血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A表达水平;分别根据脓毒症并发ARDS患者病情严重程度及入院后28 d预后情况将其分为轻度组(51例)、中度组(73例)、重度组(27例)及存活组(122例)、死亡组(29例),比较不同病情严重程度及预后脓毒症并发ARDS患者血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A对脓毒症并发ARDS患者预后的预测价值。结果:ARDS组血清miR-133a、miR-126、TREM-1表达水平高于无ARDS组,血清SP-A表达水平低于无ARDS组(均P<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清miR-133a、miR-126、TREM-1表达水平呈升高趋势,血清SP-A表达水平呈降低趋势,组间比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。死亡组血清miR-133a、miR-126、TREM-1表达水平高于存活组,血清SP-A表达水平低于存活组(均P<0.05)。血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A联合预测脓毒症并发ARDS患者预后的曲线下面积(AUC)值高于四者单独检测(均P<0.05);敏感度比较,血清SP-A、TREM-1高于血清miR-133a、miR-126及联合检测,血清SP-A高于血清TREM-1,联合检测高于血清miR-133a、miR-126(均P<0.05);特异度比较,血清miR-133a高于血清TREM-1、SP-A及联合检测,血清miR-126、联合检测高于血清TREM-1、SP-A(均P<0.05)。结论:血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A表达水平与脓毒症并发ARDS患者病情的发生和发展均关系密切,四者联合对脓毒症并发ARDS患者预后具有较好的预测效果。

miR-126-3p.1通过SLC7A5调控间变性甲状腺癌细胞糖酵解的作用机制

目的 探讨miR-126-3p.1对间变性甲状腺癌(ATC)细胞糖酵解的作用,并分析其潜在的机制。方法 通过TCGA数据库检索miR-126-3p.1在甲状腺癌中的表达及与甲状腺癌诊断、预后的关系。运用荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测人正常甲状腺细胞Htori-3、人间变性甲状腺癌细胞SW1736、人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1中miR-126-3p.1、溶质运载家族7成员5(SLC7A5)的表达;将TPC-1细胞分为agomiRNA(转染agomiRNA)组、agomiR-126-3p.1(转染agomiR-126-3p.1)组、si-NC(转染si-NC)组、si-SLC7A5(转染si-SLC7A5)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA-SLC7A5(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA-SLC7A5)组,各组细胞用脂质体法转染至SW1736细胞。细胞计数试剂(CCK8)、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)法检测细胞增殖能力;ELISA法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成能力;蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞SLC7A5蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果 TCGA显示miR-126-3p.1在甲状腺癌中低表达。与Htori-3相比,SW1736、TPC-1细胞miR-126-3p.1低表达,SLC7A5表达显著升高(均P<0.05)。与agomiRNA组相比,agomiR-126-3p.1组细胞miR-126-3p.1表达显著升高,TPC-1细胞增殖率、EdU阳性率、相对葡萄糖消耗率、相对乳酸生成率、TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量均降低(P<0.05)。与antagomiRNA组相比,antagomiR126-3p.1组TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量显著升高(P<0.05)。敲减SLC7A5对TPC-1细胞具有相似作用。miR-126-3p.1靶向负调控SLC7A5,并且二者在甲状腺癌中呈负相关(R=-0.266,P<0.05)。过表达SLC7A5降低miR-126-3p.1表达,减弱miR-126-3p.1对SW1736细胞增殖、糖酵解的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-126-3p.1可能通过调控SLC7A5参与癌细胞的增殖、糖酵解,具有潜在的治疗价值。

miR-126对皮肤黑色素瘤C8161迁移、侵袭作用机制的研究

本研究主要观察微小RNA-126-3p(miR-126)的差异性表达对人皮肤黑色素瘤(CM)细胞株C8161的迁移、侵袭性的影响,并探究了Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路和上皮-间质转化(EMT)过程在其中的角色。采用细胞转染法实现miR-126的差异性表达,用JAK2/STAT3通路抑制剂AG490、激动剂Coumermycin A1处理miR-126差异表达的细胞,并将C8161细胞分为对照组(不做转染,不做药物处理)、阴性对照(NC)组(转染模拟物对照,不做药物处理)、miR-126组(转染miR-126模拟物,不做药物处理)、miR-126+通路抑制剂组(转染miR-126模拟物后AG490处理)和miR-126+通路激动剂组(转染miR-126模拟物后Coumermycin A1处理)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126的表达水平;利用蛋白免疫印迹法测定EMT关键蛋白和JAK2/STAT3通路蛋白的表达水平;利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、划痕愈合试验、Transwell小室联合基质胶法分别检测细胞的活力、迁移和侵袭能力。与NC组相比,miR-126模拟物转染使miR-126的表达水平在miR-126组显著提高(^(#)P<0.05),与此同时,相对细胞活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均显著降低(^(#)P<0.05)。此外,miR-126组的上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)高于NC组(^(#)P<0.05),而波形蛋白(vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、纤维连接蛋白(FN)、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的比值均低于NC组(^(#)P<0.05)。更重要的是,与NC组和miR-126组相比,JAK2和STAT3蛋白的表达水平的上述指标在miR-126+通路抑制剂组中的变化更显著(^(#)P<0.05和^(&)P<0.05),而上述指标在miR-126+通路激活剂组中的变化趋势减弱(^(#)P<0.05和^(&)P<0.05),其中细胞侵袭数和FN、JAK2、STAT3蛋白的表达水平在miR-126+通路激动剂组和NC组之间无显著差异。过表达miR-126抑制人CM细胞的活力、迁移和侵袭能力,而该作用很可能是通过阻碍EMT进程、抑制JAK2/STAT3通路的活化来实现的。这些研究结果有助于为人CM的临床治疗提供新的理论依据,为其治疗方法提供新的策略。

miR-181b miR-210 miR-126在妊娠期高血压疾病中的表达及与炎症反应的相关性

目的:探究微小RNA-181b(miR-181b)、miR-210、miR-126在妊娠期高血压疾病(HDP)中的表达及与炎症反应的相关性。方法:选取2018年1月至2019年12月承德市妇幼保健院收治的213例HDP单胎孕妇作为观察组,以病情严重程度为依据将其设为妊娠期高血压(GH组,62例)、轻度子痫前期(MP组,90例)及重度子痫前期(SP组,61例)3个亚组;另选取同期同医院收治的78名健康孕妇作为对照组。检测各组miR-181b、miR-210、miR-126相对表达量及血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、白介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平,并分析HDP患者各指标间的相关性。结果:观察组miR-181b、miR-210相对表达量及IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、MCP-1、VCAM-1均比对照组高(P<0.05);观察组miR-126相对表达量及IL-10均比对照组低(P<0.05)。GH组miR-181b、miR-210相对表达量及IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、MCP-1、VCAM-1均比MP组及SP组低,且MP组比SP组低(P<0.05);GH组miR-126相对表达量及IL-10均比MP组及SP组高,且MP组比SP组高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,HDP患者miR-181b、miR-210相对表达量与IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、MCP-1、VCAM-1均呈正相关,与IL-10呈负相关(P<0.05);HDP患者miR-126相对表达量与IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、MCP-1、VCAM-1均呈负相关,与IL-10呈正相关(P<0.05)。结论:miR-181b、miR-210在HDP中呈高表达,miR-126在HDP中呈低表达,且三者与HDP炎症反应密切相关。