中心性肥胖2型糖尿病189例血清微RNA-221表达与微血管并发症的关系

目的探讨中心性肥胖2型糖尿病(T2DM)病人血清微RNA-221(miR-221)表达与微血管并发症的关系。方法将2019年6月至2021年9月聊城市第二人民医院收治的中心性肥胖T2DM病人189例作为观察组,另选取181例健康体检者作为对照组,检测并比较两组的血清miR-221表达水平。根据观察组有无并发微血管并发症将其分为并发组和未并发组,采用多因素logistic回归分析微血管并发症发生的影响因素,并绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析相关血清指标对微血管并发症发生的诊断价值。结果观察组腹围、身体质量指数和空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血尿酸(UA)均高于对照组(P<0.05),血清miR-221水平高于对照组(0.86±0.27比0.32±0.06,P<0.05);观察组微血管并发症发生率为51.32%(97/189);并发组年龄、合并高血压及高脂血症占比、病程、未按时服药占比及空腹血糖、HbA1c、hs-CRP、UA均高于未并发组(P<0.05),血清miR-221水平高于未并发组(0.91±0.25比0.81±0.16,P<0.05),且均是中心性肥胖T2DM病人出现微血管并发症的危险因素(P<0.05);血清miR-221水平诊断中心性肥胖T2DM病人微血管并发症的临界值、灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.83、88.66%、79.35%、0.81,其诊断价值低于HbA1c水平(P<0.05),高于hs-CRP和UA水平(P<0.05),与空腹血糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清miR-221水平在中心性肥胖T2DM病人中呈高表达,是微血管并发症发生的危险因素,且对微血管并发症发生具有重要的临床诊断价值。

肿瘤相关巨噬细胞上调miR-221-3p可能参与了前列腺癌的恶性转移

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)上调miR-221-3p可能参与促进前列腺癌(PCa)恶性转移的作用机制。方法选择6例转移性PCa患者癌组织进行微小RNA(miRNAs)表达谱测序和差异表达miRNAs分析。分离上述转移性PCa患者癌组织中的原代TAMs。采用聚合酶链反应(qPCR)测定其中miR-221-3p的表达水平。向RAW264.7巨噬细胞转染miR-221-3p模拟物(mimic)或抑制物(inhibitor),然后与人PCa细胞系PC3细胞建立共培养体系。CCK-8法测定PC3细胞增殖能力,流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率,Transwell法测定细胞迁移和侵袭能力,Western blot法测定细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白因子的表达水平。结果在6例转移性PCa患者的癌组织中,与淋巴结转移阴性PCa组织来源TAMs相比,淋巴结转移阳性PCa组织来源TAMs中hsa-miR-221-3p显著上调(P<0.05)。在共培养体系中,与Mimic-NC组相比,miR-221-3p mimic组PC3细胞增殖能力明显增强;迁移能力和侵袭能力明显增强;EMT相关蛋白因子表达水平明显增强(除E-Cadherin)(P均<0.05)。与Inhibitor-NC组相比,miR-221-3p inhibitor组细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高;迁移能力和侵袭能力明显被抑制;EMT相关蛋白因子表达水平明显被抑制(除E-Cadherin)(P均<0.05)。结论TAMs上调miR-221-3p可能参与促进了PCa恶性转移。

miR-221-3p对胰腺癌细胞凋亡的抑制作用及机制研究

目的:研究miR-221-3p对胰腺癌细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法:对人胰腺癌细胞株PATU 8988T进行miR-221-3p质粒转染,设为miR-221-3p mimics组、mimics NC组、miR-221-3p inhibitor组及inhibitor NC组,以未处理的PATU8988T细胞作为空白对照(NC)组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证细胞转染效率;采用流式细胞术观察miR-221-3p对胰腺癌细胞凋亡的影响;采用Western blotting法测定各组细胞中p53、磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达。结果:qRT-PCR结果显示,与NC组、mimics NC组及inhibitor NC组比较,miR-221-3p mimics组细胞miR-221-3p表达显著增高,miR-221-3p inhibitor组表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与NC组、mimics NC组及inhibitor NC组比较,miR-221-3p inhibitor组细胞凋亡明显增加,miR-221-3p mimics组细胞凋亡明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示,mimics NC组和inhibitor NC组细胞中p53、PTEN蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),而miR-221-3p mimics组细胞中p53、PTEN蛋白表达水平较mimics NC组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PATU 8988T胰腺癌细胞中miR-221-3p表达上调,细胞凋亡受到抑制。miR-221-3p可能通过下调p53、PTEN蛋白表达促进胰腺癌的发生发展。

十溴联苯醚暴露通过胞外囊泡装载miR-221促进三阴性乳腺癌细胞转移

目的:探讨环境污染物十溴联苯醚(BDE-209)暴露促进三阴性乳腺癌(TNBC)恶性进展的机制。方法:将TBNC细胞分为空白对照组和BDE-209暴露组。超速离心法提取胞外囊泡,分别应用扫描电子显微镜和蛋白质印迹法对提取的胞外囊泡进行鉴定,采用纳米颗粒跟踪技术检测胞外囊泡生成量,细胞划痕实验和Transwell小室实验检测与胞外囊泡共培养后TNBC细胞的迁移能力和扩散能力,定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测囊泡中的miR-221表达水平,蛋白质印迹法检测共培养后TNBC细胞中基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达水平。结果:与空白对照组比较,2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209暴露可显著增加胞外囊泡的生成(均P<0.05),其中200.00 ng/mL BDE-209暴露诱导释放的胞外囊泡共培养的细胞迁移率较空白对照组提高86%,穿膜细胞数提高至1.32倍,miR-221表达水平提高至2.71倍,MMP9表达水平提高至1.62倍(均P<0.05)。转染抗miR-221抗体能降低BDE-209暴露诱导生成的胞外囊泡内miR-221表达水平,使BDE-209促进MDA-MB-231细胞迁移的能力被显著抑制。结论:BDE-209暴露可通过增加胞外囊泡的生成及装载miR-221增强TNBC细胞的迁移能力,促进TNBC细胞转移。

microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

基于PI3K/Akt信号通路探究下调miR-221对肝癌大鼠的干预效果

目的 探究基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路下调微小RNA-221(miR-221)对肝癌大鼠的干预效果。方法 选取43只大鼠,10只作为空白组,其余33只建立肝癌模型,最终有30只建模成功,将建模成功大鼠分为模型组、上调组、下调组各10只。上调组做miR-221过表达慢病毒转染、下调组做miR-221沉默慢病毒转染,空白组、模型组注射生理盐水,观察大鼠变化。结果 与空白组相比,模型组、下调组、上调组miR-221、PI3K、Akt表达量、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血清癌胚抗原(CEA)、血清甲胎蛋白(AFP)水平显著上升(P<0.05);与模型组相比,上调组miR-221、PI3K、Akt表达量、VEGF、bFGF、CEA、AFP水平显著上升,下调组miR-221、PI3K、Akt表达量、VEGF、bFGF、CEA、AFP水平显著下降(P<0.05)。结论 下调miR-221可抑制肝癌大鼠血管内皮生长因子水平,优化肿瘤标志物水平,其机制可能与PI3K/Akt信号通路被抑制有关。

miR-221、CAR与急性心肌梗死并发心力衰竭患者心功能和预后的关系

目的探讨微核糖核酸-221(miR-221)、C反应蛋白/白蛋白比值(CAR)与急性心肌梗死(AMI)并发心力衰竭(HF)患者心功能和预后的关系。方法选取2020年3月至2023年5月期间河北北方学院附属第一医院收治的AMI并发HF患者共计146例,根据Killip分级分为Ⅱ级组(n=66)、Ⅲ级组(n=48)、Ⅳ级组(n=32)。比较三组患者的miR-221及CAR水平;并以Spearman法分析miR-221、CAR表达水平与AMI并发HF患者Killip分级的相关性。以患者随访半年后患者的预后结局,分为预后良好组(n=108)与预后不良组(n=38)。以单、多因素Logistic回归分析影响AMI并发HF患者预后的危险因素;绘制受试者工作(ROC)曲线分析miR-221、CAR对于AMI并发HF患者预后的预测价值。结果Ⅱ级组的miR-221及CAR表达水平<Ⅲ级组<Ⅳ级组,差异均具有统计学意义(F=30.341、24.273,P<0.05);Spearman分析结果表明,miR-221、CAR表达水平与Killip分级呈现正相关(r=0.413、0.426,P<0.05);单因素分析结果显示,两组患者在年龄、Killip分级、高血压病史、左心射血分数(LVEF)、miR-221以及CAR表达水平上的比较差异有统计学意义(χ^(2)=4.897、40.842、7.432、14.128、3.460,P<0.05);多因素Logistic回归分析进一步证实,Killip分级为Ⅲ~Ⅳ级、miR-221、CAR表达水平的升高均为影响AMI并发HF患者预后情况的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR-221、CAR以及二者联合检测曲线下面积为0.811、0.794、0.869(P<0.05)。结论miR-221、CAR表达水平可能与AMI并发HF患者心功能有关,且二者联合检测对患者预后具备较高的预测价值。

磁共振成像联合血清microRNA-221对前列腺癌的诊断价值

目的探讨磁共振成像(MRI)结合血清microRNA-221-221(miR-221)检测在前列腺癌诊断中的价值。方法回顾性分析2019年5月—2023年1月襄阳市中心医院收治的103例疑似前列腺癌患者的临床资料,将前列腺穿刺病理结果作为金标准。所有患者行磁共振弥散加权成像(MRI-DWI)、动态增强磁共振成像(MRI-DCE)及血清miR-221检测,分析MRI参数、miR-221诊断前列腺癌的价值。结果穿刺活检病理诊断结果显示,103例前列腺癌疑似患者中,73例诊断为前列腺癌。前列腺癌患者表现弥散系数(ADC)值低于非前列腺癌患者(P<0.05)。前列腺癌患者容积转运常数(K_(trans))高于非前列腺癌患者(P<0.05),前列腺癌与非前列腺癌患者的速率常数(K_(ep))、细胞外间隙对比剂容积分数(V_(e))比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。前列腺癌患者miR-221相对表达量高于非前列腺癌患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,ADC、K_(trans)、miR-221及3者联合诊断前列腺癌的敏感性分别为72.60%(95%CI:0.607,0.821)、69.86%(95%CI:0.578,0.798)、73.97%(95%CI:0.622,0.832)、82.19%(95%CI:0.711,0.898),特异性分别为80.00%(95%CI:0.609,0.916)、73.33%(95%CI:0.538,0.870)、70.00%(95%CI:0.504,0.846)、86.67%(95%CI:0.684,0.956),AUC分别为0.756(95%CI:0.651,0.860)、0.741(95%CI:0.633,0.848)、0.739(95%CI:0.631,0.846)、0.907(95%CI:0.842,0.972)。结论ADC、K_(trans)、miR-221联合诊断前列腺癌效能较高,3者联合诊断前列腺癌可提供更加精确可靠的量化参数。

PD患者治疗期间血清miRNA-124、miRNA-221与非运动症状的相关性分析

目的探讨帕金森病(PD)患者外周血miR-124、miR-224在不同治疗时期的表达水平,并分析其与非运动症状的相关性,为临床PD患者非运动症状监测和治疗提供潜在干预靶点。方法选择2020年1月至2022年3月PD患者106例,分别于患者治疗前、治疗4、8、12周时,对患者血清miR-124、miR-221水平进行检测,并采用非运动症状评价量表(NMSS)对患者的非运动症状进行评估。采用统计学方法检验分析血清miR-124、miR-221与帕金森患者NMSS评分的相关性。结果治疗期间,患者血清miR-124逐渐上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-221表达水平及NMSS评分均逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清miR-124与患者NMSS评分均呈负相关(r=-0.346,P<0.001);miR-221与患者NMSS评分呈正相关(r=0.409,P<0.001);线性回归分析显示,PD患者血清miR-124和miR-221表达水平是其非运动症状的影响因素(P<0.05)。结论PD患者血清miR-124和miR-221表达水平与非运动症状严重程度密切相关,临床上可考虑通过监测或干预血清miR-124和miR-221表达水平,缓解PD患者非运动症状,进而改善患者预后。

miR-221-3p和miR-486-5p的表达与输卵管性不孕症患者腹腔镜术后生殖预后的相关性分析

目的探讨miR-221-3p和miR-486-5p的表达与输卵管性不孕症患者腹腔镜术后生殖预后的相关性。方法选取2019年10月至2021年9月就诊于沧州市人民医院的100例输卵管性不孕患者作为研究对象,根据腹腔镜术后1年内是否妊娠分为妊娠组(n=66)和未妊娠组(n=34)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者血清miR-221-3p和miR-486-5p的水平并进行分析,采用化学免疫发光法检测血清卵泡刺激素(FSH)、催乳素(PRL)和黄体生成素(LH)水平。收集并比较两组患者临床特征,采用Pearson相关性分析患者妊娠情况与血清miR-221-3p和miR-486-5p表达的相关性,采用Logistic回归分析输卵管性不孕症妊娠情况的影响因素。结果妊娠组患者血清miR-221-3p和miR-486-5p表达水平显著高于未妊娠组患者(P<0.05),FSH和LH水平均显著低于未妊娠组(P<0.05)。两组患者盆腔炎病史、子宫输卵管造影(HSG)检查、盆腔粘连和盆腔积液指标比较,差异具有统计学意义(P<0.05);患者术后未妊娠与miR-221-3p、miR-486-5p水平均呈负相关(r=-0.675、-0.585,P<0.05);miR-221-3p及miR-486-5p的表达、FSH、LH、HSG检查、盆腔粘连和盆腔炎病史为患者妊娠情况的影响因素(P<0.05)。结论miR-221-3p和miR-486-5p的表达与输卵管性不孕症患者腹腔镜术后未妊娠呈负相关,对判断患者预后情况具有一定的临床意义。

SVA及α-干扰素对PK-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15(PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αmRNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞miRNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异miRNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mirdeep2软件预测各组细胞中的新miRNA并通过与猪miRNA序列比对得到已知miRNA;分别采用GO功能和KEGG富集分析各组细胞转录显著差异miRNA涉及的生物学功能及信号通路。统计分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/IFN、PK-15/SVA和PK-15/SVA/IFN中均存在转录显著差异miRNA,且在SVA感染后细胞中转录的miRNA数量增多,IFN-α刺激则会减少细胞中转录的miRNA数量,SVA感染后再经IFN-α处理则转录的miRNA数量又有所降低。筛选结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA中有167种转录显著差异miRNA,其中94种转录显著上调,73种转录显著下调;与PK-15相比,PK-15/IFN中有98种转录显著差异miRNA,其中55种转录显著上调,43种转录显著下调。预测结果显示,共有290种转录显著差异miRNA有对应靶基因,且共预测到292种新miRNA和345种已知miRNA。选取6种转录显著差异miRNA采用Graphpad prism6.0进行miRNA-mRNA的互作网络展示。结果显示,miR-221-5p的靶基因显著多于其他miRNA,且其靶基因主要与癌症、病毒感染的治疗及宿主的免疫反应有关。GO功能结果显示,在经IFN-α处理或SVA感染后,转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于细胞组分和生物过程等功能。KEGG分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA和PK-15/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1和NF-κB信号通路;与PK-15/IFN相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于PI3K-Akt、NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)等抗病毒免疫相关信号通路;与PK-15/SVA相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1、NF-κB、TNF和MAPK信号通路。16种转录显著差异miRNA的qPCR结果与RNA-Seq结果一致。综上所述,本研究首次证实IFN-α处理、SVA感染均显著影响PK-15细胞miRNA转录谱,前者促进miRNA的转录,后者则抑制miRNA的转录。其中转录显著差异miRNA的靶基因与宿主抗病毒及肿瘤免疫均等信号通路密切相关,该结果为阐明SVA感染宿主细胞后非编码RNA转录谱变化的分子机制研究奠定基础。

miR-221-3p靶向沉默PARP1对三阴乳腺癌细胞的化疗药物敏感性的影响

目的分析miR-221-3p通过PARP1调节三阴乳腺癌(TNBC)细胞化疗耐药的分子机制。方法收集行肿瘤切除术的TNBC患者标本,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测癌旁组织、TNBC组织、TNBC化疗耐药组织和TNBC化疗敏感组织中miR-221-3p及其PARP1表达,取对数期MDA-MB-231细胞,将添加0.1μg/mL ADM的培养基加入细胞内,培养获得耐药的MDA-MB-231/ADM细胞。miR-221-3p inhibitor与inhibitor NC分别转染MDA-MB-231/ADM细胞,CCK-8法检测细胞药物敏感性,流式细胞仪分析细胞凋亡率,Western blot实验分析肿瘤细胞内Bax、Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2蛋白的表达情况。TargetScan数据库预测miR-221-3p的潜在靶点,双荧光素酶报告基因实验分析miR-221-3p与PARP1之间的关系,Western blot实验检测下调miR-221-3p表达后PARP1、BRD7蛋白表达情况。PARP1 siRNA与siRNA NC分别转染MDA-MB-231/ADM细胞,分别利用CCK-8、流式细胞仪和Western blot检测细胞药物敏感性和凋亡情况。最后分析上调miR-221-3p通过PARP1对MDA-MB-231/ADM细胞药物敏感性和凋亡的影响。结果与癌旁组织相比,TNBC组织中miR-221-3p表达下调(P<0.01),PARP1表达上调(P<0.01);与TNBC化疗敏感组织相比,TNBC化疗耐药组织中miR-221-3p表达下调(P<0.01),PARP1表达上调(P<0.01)。下调了miR-221-3p表达抑制了MDA-MB-231/ADM细胞的药物敏感性,细胞凋亡率明显降低。miR-221-3p靶向PARP1,下调miR-221-3p促进了PARP1蛋白表达,而抑制了BRD7蛋白表达,PARP1 siRNA转染MDA-MB-231/ADM细胞后促进了BRD7蛋白表达和细胞凋亡,上调了细胞药物敏感性。而过表达miR-221-3p通过PARP1上调了细胞凋亡和药物敏感性。结论miR-221-3p靶向沉默PARP1增加TNBC细胞对化疗药物的敏感性。

川崎病患儿血清miR-221-3p水平与冠状动脉病变及IVIG治疗反应的关系

目的探讨川崎病(KD)患儿血清微小RNA(miRNA)-221-3p水平与冠状动脉病变(CALs)及静脉注射免疫球蛋白(IVIG)治疗反应的关系。方法选取2019年5月至2021年5月该院收治的186例KD患儿作为KD组,另外纳入同期200例非KD发热儿童作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-221-3p表达水平。结果KD组血清miR-221-3p相对表达水平高于对照组(P<0.05)。发生CALs的患儿血清miR-221-3p相对表达水平高于未发生CALs的患儿(P<0.05);IVIG治疗无反应患儿的血清miR-221-3p相对表达水平高于IVIG治疗有反应患儿(P<0.05)。血清miR-221-3p用于区分KD和非KD发热患儿的曲线下面积(AUC)为0.762(95%CI:0.715~0.809)。KD患儿血清miR-221-3p相对表达水平与清蛋白、肌酸激酶、淋巴细胞计数、C反应蛋白水平呈正相关(P<0.05)。血清miR-221-3p预测CALs发生和IVIG治疗无反应的AUC分别为0.763(95%CI:0.671~0.856)、0.758(95%CI:0.663~0.854)。经Logistic回归分析,血清miR-221-3p相对表达水平升高是CALs发生(HR=6.341,95%CI:2.876~13.979,P<0.001)或IVIG治疗无反应(HR=5.262,95%CI:2.700~10.257,P<0.001)的独立预测因子。结论血清miR-221-3p表达是IVIG治疗无反应和随后CALs形成的一个预测因子。

MicroRNA-221通过抑制CDKN1C/p57表达促进结肠癌细胞增殖

目的探讨microRNA-221(MIR221)对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响。方法常规培养人结肠癌Caco2细胞系,预先给予或不给予CDKN1C/p57干扰性小RNA(anti-p57-siRNA)处理,再以脂质体分别转染MIR221前体(pre-MIR221)或MIR221特异性抑制剂(anti-MIR221)寡核苷酸,应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测Caco2细胞中MIR221表达状况,运用半定量RT-PCR及Western-blot分析CDKN1C/p57 mRNA及蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞的增殖状态;构建pGL3-p57荧光素酶报告载体并与pre-MIR221或anti-MIR221共转染Caco2细胞,检测转染细胞中荧光素酶活性变化。结果 Caco2细胞转染pre-MIR221后,CDKN1C/p57蛋白表达水平下降,细胞增殖显著(P<0.01);而anti-MIR221可上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖,且此种抑制作用可被anti-p57-siRNA逆转,说明此种抑制效应确由CDKN1C/p57所介导;在转染重组有CDKN1C/p57基因3'-UTR片段的荧光素酶报告载体的Caco2细胞中,共转染pre-MIR221后荧光素酶活性下降,而共转染anti-MIR221后荧光素酶活性增高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 MIR221可通过与CDKN1C/p57 mRNA 3'-UTR区域结合使结肠癌细胞中CDKN1C/p57蛋白表达下降而促进肿瘤增殖;anti-MIR221则可通过上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应。

肺炎支原体肺炎患儿血清microRNA-21和microRNA-221水平变化及与炎症因子、T淋巴细胞亚群的相关性

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清microRNA-21(miR-21)和microRNA-221(miR-221)的水平变化及与炎症因子、T淋巴细胞亚群的关系。方法选取2017年1月—2019年1月邯郸市中心医院就诊的MPP患儿120例为研究对象(MPP组),另选取本院同期体检的健康儿童100例为对照组(CON组)。比较两组研究对象血清miR-21和miR-221的水平差异,并分析二者与患儿外周血中炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))之间的相关性。结果MPP组血清miR-21和miR-221水平高于CON组(P<0.05)。MPP组外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)低于CON组,而IL-6、IL-8、TNF-α的水平高于CON组(均P<0.05)。MPP组血清miR-21和miR-221与患者外周血CD3^(+)(r=-0.494和-0.656,P=0.037和0.014)、CD4^(+)(r=-0.621和-0.554,P=0.015和0.031)、CD8^(+)(r=-0.772和-0.476,P=0.003和0.043)、CD4^(+)/CD8^(+)(r=-0.545和-0.660,P=0.023和0.014)均呈负相关,而与TNF-α(r=0.787和0.619,P=0.000和0.015)、IL-6(r=0.530和0.598,P=0.035和0.029)、IL-8(r=0.665和0.614,P=0.012和0.017)均呈正相关。结论MPP患儿血清miR-21和miR-221水平升高,且与患儿T淋巴细胞亚群水平的降低、炎症因子水平的升高有一定的相关性,监测两者的水平变化有助于评估MPP患儿的免疫状态和炎症反应,并为合理制订治疗方案提供帮助。

难治性癫痫患者神经调节蛋白1、microRNA-221-3p表达与认知功能的关系

目的探讨难治性癫痫患者血清神经调节蛋白1(NRG1)、microRNA-221-3p(miR-221-3p)表达水平与认知功能障碍(CD)的关系。方法选取64例难治性癫痫患者(难治性癫痫组)和58例抗癫痫药物控制良好患者(药物控制良好组)作为研究对象,另选取同期本院70例健康体检者纳入对照组。采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估难治性癫痫患者的认知功能受损程度,并根据MoCA总分将难治性癫痫患者分为CD组40例和非CD组24例。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-221-3p水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清NRG1水平,并采用Pearson相关性分析探讨miR-221-3p、NRG1水平与MoCA总分的相关性,采用多因素Logistic回归分析探讨难治性癫痫患者发生CD的影响因素。结果难治性癫痫组血清miR-221-3p、NRG1水平高于对照组、药物控制良好组,差异有统计学意义(P<0.05);CD组血清miR-221-3p、NRG1水平高于非CD组,MoCA总分、空间与执行能力评分、语言评分、延迟记忆评分、计算力与定向评分低于非CD组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,难治性癫痫CD患者血清miR-221-3p、NRG1水平均与MoCA总分呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,NRG1、miR-221-3p均为难治性癫痫患者发生CD的影响因素(P<0.05)。结论难治性癫痫合并CD患者血清miR-221-3p、NRG1水平较高,且miR-221-3p、NRG1均与难治性癫痫患者CD进程密切相关。

神经胶质瘤患者脑脊液microRNA-221水平的测定及意义

目的探讨microRNA-221(miR-221)在神经胶质瘤患者脑脊液中的水平及其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测49例神经胶质瘤患者及40例健康人脑脊液中miR-221的水平,分析miR-221与病理分级间的关系。结果神经胶质瘤患者脑脊液中miR-221水平与对照组相比明显升高,差异具有统计学意义(0.68±0.10 vs0.47±0.07,P<0.01);神经胶质瘤患者脑脊液中miR-221水平随着病理分级增加有所增高,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论神经胶质瘤患者脑脊液中miR-21水平增高,miR-221可能参与了胶质瘤的发生、发展过程。

microRNA-221在结直肠癌中的表达及其对癌细胞迁移的影响

目的研究上皮-间质转化(EMT)相关的微小RNA(micro RNA,以下简称miRNA)-221在结直肠癌患者中的表达水平,并探索其对结直肠癌细胞迁移水平的影响。方法选取该院40例结直肠癌患者为研究组,选取同期体检的40例健康人群为对照组。采用实时定量RT-PCR法检测结直肠癌患者癌组织以及癌旁组织中mi RNA-221表达水平,同时对比结直肠癌患者及正常人血浆中miRNA-221表达水平。对结直肠细胞采用miRNA-221的mimic及inhibitor分别高、低表达miRNA-221后,采用transwell法分别检测细胞的侵袭水平以及EMT相关蛋白表达。结果 miRNA-221在直肠癌组织的表达水平显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);mi RNA-221在直肠癌患者血浆中的表达水平显著高于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰结直肠癌HT-29细胞株中miRNA-221后,结直肠癌细胞迁移能力显著降低(均P<0.05),且细胞中EMT相关的上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达水平降低;而过表达HT-29细胞株中mi RNA-221,结直肠癌细胞迁移能力显著增加,且细胞中EMT相关的上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达水平增加。结论结直肠癌患者高表达的miRNA-221通过促进结直肠癌细胞的迁移水平来参与结直肠癌发生发展的进程。

X线辐射剂量对结直肠癌细胞中microRNA-221和p57^(kip2)表达的影响

目的探讨不同剂量X线辐射对人结直肠癌Caco2细胞系中microRNA-221(miR-221)和p57kip2表达的影响。方法常规培养Caco2细胞系并分为5组,分别给予不同剂量X线(0、2、4、6和8 Gy)照射,24 h后提取细胞总RNA和蛋白质,应用real-time Q-PCR检测细胞中miR-221和p57kip2mRNA的表达水平,Western blot检测p57kip2蛋白的表达变化。结果 Caco2细胞系在不同照射剂量下,miR-221表达水平随着照射剂量的增加而增加,而p57kip2蛋白表达水平则随着照射剂量的增加而逐步降低,且呈剂量依赖效应,两者差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论放射线辐射剂量可影响结直肠癌细胞中miR-221/p57kip2调控通路,抑制miR-221表达可能会提高结直肠癌细胞的放射敏感度。

粪便microRNA-221对早期结直肠癌检出的意义

目的:探讨micro RNA-221在早期结肠癌患者粪便中的表达情况,并研究其作为早期结直肠癌以及癌前病变分子诊断标志物的可行性。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测245例大肠病变患者的粪便及30例正常人群粪便中micro RNA-221的水平,分析micro RNA-221与不同临床病理分级的关系。结果:结肠病变的患者粪便中micro RNA-221水平随着病理分级增加而增高,差异具有统计学意义(P<0.001)。进展型腺瘤和早期结直肠癌组织中micro RNA-221水平与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:早期结直肠癌粪便中micro RNA-221的表达上调,可能参与了结直肠癌的发生及发展,粪便micro RNA-221有可能成为筛查早期结直肠癌非侵入性的标志物。