结直肠癌组织microRNA-16-5p、microRNA-493-5p表达与PI3K/Akt/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的 探讨结直肠癌组织微小RNA-16-5p(miR-16-5p)、microRNA-493-5p(miR-493-5p)表达与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路和预后的关系。方法 选取2016年1月至2019年1月该院收治的126例接受根治性切除手术的结直肠癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测癌组织及癌旁组织中miR-16-5p、miR-493-5p及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA的表达水平并进行比较,分析癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA及临床病理特征的关系。术后随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-16-5p、miR-493-5p高表达和低表达患者的预后情况。结果 总RNA A260/A280为1.90,琼脂糖凝胶电泳提示28S与18S rRNA带亮度比值均>1.5,总RNA浓度750 ng/μL,说明RNA纯度高、完整性较好。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p表达水平均低于癌旁组织,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈负相关(P<0.05)。临床分期为Ⅲ期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达者占比高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05);低分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于中分化和高分化,且中分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于高分化(P<0.05);有淋巴结转移患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于无淋巴结转移(P<0.05);T4分期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于T1和T2分期(P<0.05),T3分期患者中miR-493-5p低表达患者占比高于T1分期(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-16-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为93.22%、68.33%,生存率比较差异有统计学意义(P=0.017)。miR-493-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为94.74%、67.74%,生存率比较差异有统计学意义(P=0.012)。结论 miR-16-5p、miR-493-5p在结直肠癌组织中表达下调,且与PI3K/Akt/mTOR信号通路呈负相关,miR-16-5p、miR-493-5p高表达患者的预后更好。

苍附导痰汤对肥胖型PCOS大鼠内分泌激素及miRNA-16和PDCD-4表达的影响

目的:探讨苍附导痰汤对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠内分泌激素及微小RNA(miRNA)-16和程序性细胞死亡因子4(PDCD-4)表达的影响。方法:将50只SPF级雌性SD大鼠随机分为5组,每组10只。阳性对照组大鼠灌胃格华止(0.43 g/kg),低剂量组大鼠灌胃低剂量苍附导痰汤(1.42 g/kg),高剂量组大鼠灌胃高剂量苍附导痰汤(5.68 g/kg),模型组和正常组大鼠灌胃等量生理盐水,各组均持续给药14 d。比较各组大鼠体质量,内分泌激素水平,miRNA-16和PDCD-4 mRNA表达,以及PDCD-4蛋白表达。结果:模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠体质量均高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠体质量均低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠血清E_(2)均水平低于正常组,而血清T、FSH和LH水平均高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠血清E_(2)水平均高于模型组,而血清T、FSH和LH水平均低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢miRNA-16表达均低于正常组,而PDCD-4 mRNA表达高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢miRNA-16表达均高于模型组,而PDCD-4 mRNA表达低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢PDCD-4蛋白相对表达量均高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢PDCD-4蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:苍附导痰汤可调节肥胖型PCOS大鼠内分泌激素水平,其机制可能与上调miRNA-16表达及下调PDCD-4表达有关。

miR-4645-5p通过靶向MUC16调控食管癌细胞的恶性生物学行为

目的 探讨微小RNA(miR)-4645-5p靶向黏蛋白16(MUC16)对食管癌细胞增殖、侵袭、上皮间充质转化的影响及其分子机制。方法 通过TCGA数据库在线分析miR-4645-5p在食管癌组织中的表达。利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)分析食管癌细胞系中miR-4645-5p的表达水平。通过脂质体转染技术将miR-4645-5p模拟物和阴性对照模拟物转染KYSE-30细胞,作为miR-4645-5p组和对照模拟物组。分别采用CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分析转染KYSE-30细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。通过生物信息学网站预测miR-4645-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测miR-4645-5p对靶基因的结合。采用qPCR检测MUC16 mRNA的表达水平,Western blotting检测MUC16、转录因子-1(ZEB-1)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平。结果 食管癌组织中miR-4645-5p表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。与HET-1A比较,食管癌细胞系中miR-4645-5p呈低表达(P<0.05)。miR-4645-5p过表达后,KYSE-30细胞增殖能力降低(P<0.05),迁移能力降低(P<0.01),侵袭能力明显降低(P<0.01)。miR-4645-5p靶向负调控MUC16 mRNA的表达(P<0.01)。miR-4645-5p过表达后,MUC16、ZEB-1、α-SMA蛋白表达均下调,ZO-1、Claudin-1蛋白表达均上调。结论 miR-4645-5p通过靶向MUC16调控食管癌KYSE-30细胞的恶性生物学行为。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

MicroRNA-16对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响

目的:研究microRNA-16(miR-16)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASFs)增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响。方法:体外分离培养RASFs,脂质体转染化学合成的miR-16 mimic或miR-16抑制剂,分别采用MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测其对RASFs增殖、侵袭及凋亡的影响;RT-PCR和Western blotting检测miR-16对RASFs基质金属蛋白酶3/13(matrix metalloproteinase 3/13,MMP3/13)及白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)表达的影响。结果:增殖实验结果表明miR-16可显著抑制RASFs的增殖;细胞侵袭结果表明miR-16可显著抑制RASFs的侵袭;流式细胞术检测发现miR-16对RASFs凋亡无显著影响;miR-16可下调MMP3/13及IL-1β的表达水平。结论:miR-16在RA的发生中起着重要作用,它可能通过下调MMP3/13及IL-1β的表达抑制RASFs增殖和侵袭。这为进一步研究miR-16在RA中的作用机制奠定了基础。

microRNA-16在系统性红斑狼疮患者血浆中的表达及意义

目的:分析microRNA-16(miR-16)在系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆中的表达水平及其临床意义。方法:用茎环RT实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测48例SLE患者和20例健康人血浆中miR-16的表达水平,并分析其与SLE各种临床资料的相关性。结果:茎环RT-PCR可以特异性扩增血浆中的miR-16。miR-16在SLE患者血浆中表达水平下调,和健康人相比差异有统计学意义(其Ct值分别为19.40±0.85和18.89±0.66,t=2.386,P=0.02)。血浆miR-16表达水平与SLE患者活动程度的SLEDIA评分呈负相关(r=0.313,P=0.03),SLE疾病活动度越高,miR-16水平越低。结论:SLE患者血浆miR-16下调表达与SLE疾病活动度有关。

MicroRNA-16及Let-7a在支气管哮喘患者中表达水平及与严重程度的关系

目的探讨微RNA-16(microRNA-16,miR-16)及Let-7a在支气管哮喘患者中表达水平及与严重程度的关系。方法选取2017年7月至2019年7月我院收治的128例支气管哮喘患者作为研究对象,按照严重程度将患者分为轻、中度组(n=85)和重度组(n=43)。选取同期120例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清miR-16和Let-7a相对表达量,并分析模型A(miR-16+Let-7a)、模型B(IL-13+IgE+EOS计数)及模型C(miR-16+Let-7a+IL-13+IgE+EOS计数)评估重度支气管哮喘的效能。结果轻、中度组及重度组血清miR-16和Let-7a相对表达量低于对照组,重度组血清miR-16和Let-7a相对表达量低于轻、中度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-16、Let-7a评估重度支气管哮喘的AUC分别为0.802、0.808。Logistic回归分析显示IL-13、IgE、EOS计数、miR-16、Let-7a与支气管哮喘病情加重密切相关。模型C评估重度支气管哮喘的效能高于模型A及模型B。结论血清miR-16和Let-7a与支气管哮喘严重程度关系密切,检测血清miR-16和Let-7a相对表达量有助于评估患者病情。

宫颈脱落细胞中miR-424和CUL2 mRNA表达对宫颈HPV16持续感染的预测价值

目的 研究宫颈脱落细胞中微小RNA-424(miR-424)和枯灵素2(CUL2)信使RNA(mRNA)表达水平对宫颈人乳头瘤病毒(HPV)16持续感染的预测价值。方法 选取2020年1月至2021年11月在邯郸市中心医院宫颈液基细胞学检查正常的259例宫颈HPV16感染者为研究对象,随访1年后复查,HPV16仍是阳性者归为HPV16持续感染组(136例),HPV16转为阴性者归为HPV16非持续感染组(123例)。对宫颈HPV16持续感染者在复查当日以组织病理学诊断结果进行分组:52例慢性宫颈炎症患者(宫颈炎症组),61例宫颈上皮内瘤变者(上皮瘤变组),23例宫颈鳞癌患者(宫颈鳞癌组)。采用荧光定量PCR法检测宫颈脱落细胞中miR-424和CUL2 mRNA表达水平,Pearson法分析HPV16持续感染者宫颈脱落细胞中miR-424和CUL2 mRNA的相关性,受试者工作特征曲线评价宫颈脱落细胞中miR-424和CUL2 mRNA表达水平对宫颈HPV16持续感染的预测价值。结果 与HPV16非持续感染组相比,HPV16持续感染组宫颈脱落细胞中miR-424表达水平较低,CUL2 mRNA表达水平较高(P均<0.001);宫颈炎症组、上皮瘤变组、宫颈鳞癌组宫颈脱落细胞中miR-424表达水平依次降低,CUL2 mRNA表达水平依次升高(P均<0.001);HPV16持续感染者宫颈脱落细胞中miR-424和CUL2 mRNA表达水平呈负相关(P<0.001);宫颈脱落细胞中miR-424、CUL2 mRNA、两者联合检测预测宫颈HPV16持续感染的曲线下面积分别为0.871、0.809、0.927。结论 宫颈HPV16持续感染患者宫颈脱落细胞中miR-424表达下降,CUL2 mRNA表达上升,二者呈负相关,且miR-451和CUL2 mRNA联合检测可提高对宫颈HPV16持续感染的预测价值。

微RNA-15a和微RNA-16在纤维化疾病中作用的研究进展

微RNA(microRNA,miR)是一类广泛存在于哺乳动物体内,具有高度保守性的非编码单链核糖核酸,可负性调节靶基因转录后的表达。MiR作为关键的调控因子,通过负性调节靶基因的表达进而扰乱重要的分子信号通路,导致参与纤维化过程的组织修复和炎症等多条途径失衡。其中miR-15a和miR-16可通过作用于细胞增殖与转化、细胞外基质蛋白的合成与降解以及炎症等重要细胞过程,参与调控肝、肺、心和肾的纤维化及其他纤维化疾病,具有潜在的诊断和治疗价值。阐明miR-15a和miR-16的生物学功能以及其在各种纤维化病变中的作用机制和治疗应用前景,对纤维化疾病的分子靶向治疗具有重要意义。

急性缺血性脑卒中的microRNA-16表达水平及其对预后的影响

目的探讨microRNA-16(miR-16)在急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)中表达水平及其对预后的影响。方法选取辽阳市中心医院神经内科2016年1月-2020年1月收治的279例AIS患者(AIS组)作为研究对象,治疗结束后3个月,采用改良Rankin量表(modified rankin scale,MRS)评价患者预后,根据预后情况将患者分为预后良好组(196例)和预后不良组(83例)。另选取114例在本院例行体检的健康者作为健康组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清中miR-16含量。比较AIS组和健康组外周血miR-16表达水平;比较预后不良组和预后良好组患者一般临床资料及生化指标;多因素Logistic回归分析预后不良的危险因素;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析外周血miR-16表达水平对AIS预后不良的预测价值。结果AIS组外周血miR-16、miR-135b表达水平显著高于健康组(P<0.05);预后不良组患者年龄,糖尿病史率,外周血中miR-16、miR-135b表达水平,MRS评分,美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)评分均显著高于预后良好组(均P<0.05);年龄、糖尿病史、miR-16、miR-135b、MRS、NIHSS评分为AIS患者预后不良的影响因素(均P<0.05);miR-16、miR-135b、miR-16联合miR-135b预测AIS预后不良的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.739(95%CI=0.676~0.801)、0.704(95%CI=0.638~0.770),0.802(95%CI=0.745~0.859);miR-16联合miR-135b预测AIS预后不良的AUC大于miR-16、miR-135b的AUC(P<0.05)。结论miR-16在AIS中表达水平升高,升高预示患者预后不良,可作为预测AIS预后不良的标志物,且miR-16联合miR 135b对AIS患者预后不良的测价值高于单独miR-16、miR-135b。

新生儿败血症并发心肌损害患儿血清miR16-、CF-6、Copeptin水平变化意义

目的探讨新生儿败血症并发心肌损害患儿血清微小RNA-16(miR-16)、线粒体偶联因子-6(CF-6)、和肽素(Copeptin)水平变化意义。方法将该院2020年1月至2022年9月收治的105例新生儿败血症患儿根据是否并发心肌损害分为心肌损害组(43例)与无心肌损害组(62例),比较两组一般资料、心肌损害标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP),以及血清miR-16、CF-6、Copeptin水平,分析各血清指标与心肌损害标志物相关性及对新生儿败血症并发心肌损害的诊断价值,对比心肌损害组不同病情患儿血清miR-16、CF-6、Copeptin水平,分析各血清指标与新生儿败血症并发心肌损害患儿病情的关系。结果心肌损害组败血症严重程度,以及血清cTnI、H-FABP、miR-16、CF-6、Copeptin水平均高于无心肌损害组(P<0.05),心肌损害组血清miR-16、CF-6、Copeptin与cTnI、H-FABP均呈正相关(P<0.05),血清miR-16、CF-6、Copeptin联合诊断新生儿败血症并发心肌损害的曲线下面积(AUC)为0.913(95%CI:0.842~0.959),优于三者单一诊断(P<0.05)。心肌损害组不同心功能分级患儿血清miR-16、CF-6、Copeptin水平由高到低依次为Ⅲ~Ⅳ级、Ⅱ级、Ⅰ级,差异均有统计学意义(P<0.05);心肌损害组有心脏收缩功能障碍患儿血清miR-16、CF-6、Copeptin水平高于无心脏收缩功能障碍患儿(P<0.05);血清miR-16、CF-6、Copeptin与新生儿败血症并发心肌损害患儿心功能分级、心脏收缩功能障碍均呈正相关(P<0.05)。结论血清miR-16、CF-6、Copeptin联合检测可作为新生儿败血症并发心肌损害的重要辅助诊断途径,且三者水平变化与病情严重程度显著相关。

脓毒症并发急性肾损伤患者外周血单个核细胞中微小RNA-16-5p、干扰素诱导跨膜蛋白3表达及临床意义

目的检测脓毒症及脓毒症并发急性肾损伤(sepsis-associated acute kidney injury,S-AKI)患者外周血单个核细胞中微小RNA-16-5p(microRNA-16-5p,miR-16-5p)、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein,IFITM3)表达情况,分析两者对S-AKI患者的临床意义。方法本研究以2019年2月至2021年2月武汉市蔡甸区人民医院确诊的脓毒症患者为研究对象,共纳入106例,将合并急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的脓毒症患者作为AKI组(52例),未合并AKI的患者为非AKI组(54例)。收集所有患者的血液样本3 mL并分离单核细胞,利用实时荧光定量技术检测外周血单个核细胞中miR-16-5p、IFITM3 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附法测定外周血中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,全自动生化分析仪检测外周血中胱抑素(cysteine,Cys)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;比较两组间的临床指标及miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平,Pearson法分析miR-16-5p、IFITM3 mRNA分别与BUN、Cys水平的相关性,以及miR-16-5p与IFITM3 mRNA表达水平的相关性,采用多元线性回归分析S-AKI患者miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平的影响因素,受试者工作特性曲线(receiver operator characteristic curves,ROC)评估miR-16-5p和IFITM3 mRNA对脓毒症患者发生S-AKI的诊断价值。结果AKI组患者急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分(15.67±4.39比13.31±3.56)、序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA)评分(5.62±1.28比4.89±1.41)、IL-1β[(22.03±5.78)mg/L比(10.44±3.05)mg/L]、Cys[(2.72±0.45)mg/L比(1.98±0.31)mg/L]和BUN[(7.93±2.24)μmol/L比(4.49±2.07)μmol/L]水平均高于非AKI组患者(P<0.05),AKI组患者的miR-16-5p(1.64±0.30比1.17±0.28)表达水平显著上调,IFITM3 mRNA(2.87±0.62比4.06±0.92)及蛋白(1.63±0.41比3.15±0.85)(r=0.560,P<0.05)水平呈正相关,IFITM3 mRNA表达水平与IL-1β(r=-0.754,P<0.05)、Cys(r=-0.554,P<0.05)、BUN(r=-0.695,P<0.05)水平呈负相关,miR-16-5p与IFITM3 mRNA的表达水平呈负相关(r=-0.496,P<0.05);多元线性回归分析结果显示,IL-1β升高、Cys升高是miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05);miR-16-5p、IFITM3 mRNA单一检测诊断脓毒症患者发生S-AKI的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.876(95%CI:0.809~0.944)、0.874(95%CI:0.811~0.938),miR-16-5p和IFITM3 mRNA联合检测的AUC为0.956(95%CI:0.929~0.992)。结论S-AKI患者中miR-16-5p表达上调,IFITM3表达下调,与S-AKI的病理过程密切相关,可能通过促进炎症反应加重肾损伤,有助于早期诊断S-AKI,为临床治疗S-AKI提供了有希望的靶点。

miR-944在HPV16阳性宫颈癌患者组织表达及临床意义

目的 探讨miR-944在HPV16阳性宫颈癌患者组织中的表达及临床意义。方法 将2019年1月至2020年12月就诊于汉中市中心医院的113例宫颈癌患者作为实验组,其中HPV16阳性70例,HPV16阴性43例;78例良性肿瘤患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)探究两组患者miR-944的相对表达量差异;采用ROC曲线评估miR-944对宫颈癌的早期诊断价值;分析miR-944与宫颈癌临床病理学参数的相关性。结果 miR-944在实验组HPV16阳性患者的相对表达量为2.55±0.34,在实验组HPV16阴性患者中的相对表达量为1.88±0.43,在对照组中的相对表达量为1.38±0.41;miR-944表达在实验组HPV16阳性患者、实验组HPV16阴性患者及对照组之间差异有统计学意义(F=189.516,P<0.05)。实验组患者miR-944的相对表达量明显高于对照组(P<0.05),实验组中HPV16阳性患者miR-944的相对表达量显著高于HPV16阴性患者(P<0.05)。实验组肿瘤组织miR-944的相对表达量为2.26±0.46,明显高于癌旁组织的1.32±0.39,差异有统计学意义(t=17.392,P<0.05)。miR-944对宫颈癌诊断的ROC曲线下面积为0.855,95%CI为0.790~0.921,敏感度为71.40%,特异度为97.30%。miR-944与HPV16感染、组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关(χ^(2)值分别为8.434、5.458、7.368、4.406,P<0.05)。结论 miR-944在HPV16阳性宫颈癌患者组织中呈高表达,并且在宫颈癌的诊断中有重要价值。

急性胰腺炎患者血清微小RNA-340-3p、CXC趋化因子配体-13和CXC趋化因子配体-16的表达意义

目的:检测急性胰腺炎患者血清中微小RNA-340-3p(miR-340-3p)、CXC趋化因子配体-13(CXCL-13)和CXC趋化因子配体-16(CXCL-16)的表达特征,分析其相关性。方法:选择确诊为急性胰腺炎的患者69例作为观察组,选择经体检健康的成人69例作为对照组。留取所有研究对象的血清标本,应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-340-3p的表达,应用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测CXCL-13、CXCL-16的表达。应用生物信息分析预测miR-340-3p和CXCL-13、miR-340-3p和CXCL-16的靶向关系。结果:miR-340-3p在观察组中的表达量明显低于对照组,CXCL-13和CXCL-16在观察组中的表达量明显高于对照组(均P<0.05)。miR-340-3p、CXCL-13和CXCL-16在观察组不同病变分级中的表达差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组中miR-340-3p和CXCL-13(r=-0.63,P=0.032)、miR-340-3p和CXCL-16(r=-0.62,P=0.022)均呈负相关性,CXCL-13和CXCL-16(r=0.61,P=0.014)呈正相关性。生物信息分析显示miR-340-3p与CXCL-13、miR-340-3p与CXCL-16具有可能的结合位点。结论:急性胰腺炎患者血清中miR-340-3p低表达、CXCL-13和CXCL-16高表达,miR-340-3p与CXCL-13、miR-340-3p与CXCL-16具有协同负向作用,参与病变的形成和进展。

类风湿关节炎患者外周血miR-146a及miR-16的表达及与病情活动的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-146a及miR-16的表达及与RA病情活动的相关性。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测RA患者活动组24例、缓解组16例及健康对照16例PBMCs-miR-146a、miR-16的表达水平,并且与RA患者临床指标进行相关性分析。结果 RA患者组miR-146a、miR-16的表达高于健康对照组(P<0.05);在RA活动组与缓解组的比较中发现活动组miR-146a、miR-16表达水平高于缓解组(P<0.05)。RA患者组miR-146a、miR-16的表达与ESR、CRP及DAS28评分之间呈正相关(P均<0.01),与RF无相关性(P>0.05)。结论 RA患者外周血miR-146a和miR-16表达上调,其表达水平与RA病情活动相关,提示miR-146a和miR-16的检测可作为RA病情活动的判断指标。

降低脑脊液miR-16的水平对大鼠抑郁样行为的影响

目的:探讨降低脑脊液微小RNA-16(miR-16)的水平是否通过影响中缝核miR-16与5-羟色胺转运体(SERT)的表达参与抑郁症的发病。方法:SD大鼠侧脑室分别注入生理盐水、阴性对照液及miR-16拮抗剂5、10和20 nmol,隔天1次,共3次。而后进行蔗糖偏好实验和强迫游泳实验,并取脑脊液与中缝核组织,通过RTqPCR法测定miR-16水平,Western blot法测定SERT蛋白水平。结果:拮抗剂10和20 nmol组蔗糖偏好率[(46.67±9.35)%和(40.28±10.54)%]显著低于空白对照组[(54.72±11.25)%]和阴性对照组[(53.34±13.71)%],不动时间[(30.54±12.78)s和(36.23±8.57)s]则明显长于空白对照组[(16.71±5.58)s]和阴性对照组[(19.15±7.46)s](P<0.05),随着miR-16拮抗剂剂量的增加,抑郁样行为越明显。与空白对照组和阴性对照组相比,中缝核miR-16水平在拮抗剂3组均下降,并与注射剂量呈负相关(r=−0.57,P=0.000),中缝核中SERT蛋白水平则相反。结论:降低脑脊液miR-16水平可影响大鼠中缝核miR-16及SERT的表达,并与抑郁症的发病机制相关。

沉默miRNA-16对肺结核模型小鼠免疫功能的调控作用及其机制研究

目的研究沉默miR-16对肺结核模型小鼠免疫功能的调控作用及其机制。方法选取CD2F1雌性小鼠40只,分为正常组、模型组、过表达组、沉默组各10只,模型组、过表达组、沉默组建立肺结核模型,建模成功后,过表达组、沉默组小鼠肺部无菌注射10μL miR-16慢病毒悬液。检测肺组织中T淋巴细胞亚群、胸腺指数、肺部炎症因子以及Toll样受体(TLRs)信号通路因子水平。结果过表达组小鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、胸腺指数、IL-10水平低于模型组,CD8+、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、NF-κB水平高于模型组(P<0.05)。沉默组小鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、胸腺指数、IL-10水平高于模型组,CD8+、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、NF-κB水平低于模型组(P<0.05)。沉默组小鼠CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、胸腺指数、IL-10水平高于过表达组,CD8+、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、NF-κB水平低于过表达组(P<0.05)。结论沉默miR-16可能通过作用于TLRs信号通路,抑制通路因子的异常表达,调节机体免疫反应,改善机体免疫障碍而起到调控肺结核小鼠免疫功能的作用。

雌二醇通过ERα抑制miR-16表达并促进蜕膜间充质干细胞生长

目的:研究雌二醇(E2)通过调控微小RNA-16(miR-16)的表达对胎盘蜕膜来源间充质干细胞(MSCs)活力的影响。方法:分别检测E2在正常孕妇及重度子痫前期(PE)患者外周血中的浓度。CCK-8法分析不同浓度E2对MSCs活力的影响。Real-time PCR分析不同浓度E2处理MSCs对miR-16表达的影响。探索E2通过何种受体调控miR-16表达。结果:与正常孕妇相比,重度PE患者外周血中E2浓度显著降低(P<0.01)。5、10和100 nmol/L E2分别处理MSCs 48 h后,MSCs活力显著增加(P<0.05)。5、10和100 nmol/L E2分别处理MSCs12 h后,miR-16的表达水平下调(P<0.05),而用10 nmol/L E2处理MSCs不同时间(0 h、3 h、6 h、12 h和24 h)后,miR-16表达水平随着时间呈现明显下调趋势。在E2处理之前预先转染miR-16,细胞活力被显著逆转。E2处理MSCs之前6 h,用雌激素受体拮抗剂ICI 182780和他莫昔芬预预处理,E2对miR-16失去抑制作用。雌激素受体α(ERα)激动剂丙基吡唑三醇(PPT)及ERβ受体激动剂二芳基丙腈DPN分别处理MSCs后,仅PPT可明显抑制miR-16表达。结论:雌二醇可能通过ERα抑制miR-16表达,从而促进蜕膜MSCs的生长。

LPS诱发急性肺损伤中miR-16的表达及功能研究

目的观察脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤中microRNA-16(miR-16)的表达变化及其对炎症因子TNF-α等表达的调节。方法通过生物信息学分析不同物种间miR-16基因序列的保守性。通过小鼠气道向其肺内注入LPS(10 mg.kg-1),构建小鼠急性肺损伤模型,采用实时荧光定量PCR分析miR-16、IL-6、TNF-α的表达水平;在培养的肺上皮细胞A549中采用miR-16 mi mic对miR-16进行过表达研究。结果 miR-16基因序列在斑马鱼、大鼠、小鼠和人中序列高度保守;miR-16在急性肺损伤病理过程中表达明显降低(P<0.05);A549细胞中miR-16的表达水平显著升高(P<0.01),相反,LPS诱导的炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P<0.05)。结论 miR-16在LPS诱发的急性肺损伤病理过程中的表达降低,miR-16过表达能够显著抑制LPS对炎症的诱发作用,表明miR-16在急性肺损伤的炎症发生过程中发挥着重要功能。

黄芪多糖调控微RNA-16/NF-κB轴对阿霉素肾病大鼠多药耐药基因1和P-糖蛋白170的影响

目的:肾病综合征是一种常见的泌尿系统疾病。本研究拟探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)通过调控微RNA(miR)-16/NF-κB轴,对阿霉素肾病(adriamycin nephropathy,AN)大鼠多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)及其表达产物P-糖蛋白170(P-glycoprotein 170,P-gp170)的影响。方法:将72只Wistar雄性大鼠分成对照组、模型组、APS低剂量组、APS高剂量组、APS+miR-16拮抗剂组和APS+miR-16拮抗剂对照组,每组12只。使用尿液分析仪检测各组大鼠的尿液中尿蛋白(urine protein,UP)含量;全自动生化分析仪检测血清中胆固醇(cholesterol,CHOL)、白蛋白(albumin,ALB)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,SCr)水平;ELISA试剂盒检测血清白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平;HE染色试剂盒观察肾组织的形态学变化;real-time RT-PCR检测肾组织中miR-16和MDR1 mRNA水平;蛋白质印迹法检测肾组织中NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65和P-gp170蛋白表达水平;双荧光素酶验证miR-16与NF-κB的靶向关系。结果:对照组大鼠肾组织结构正常,无炎性细胞浸润;模型组大鼠肾组织中肾小球轻度充血,毛细血管狭窄或闭塞,炎性细胞浸润明显;APS低剂量组和高剂量组大鼠肾小球无明显充血,系膜细胞增殖明显减少,炎性细胞减少;与APS高剂量组和APS+miR-16拮抗剂对照组相比,APS+miR-16拮抗剂组大鼠肾组织结构损伤较为严重。与对照组相比,模型组大鼠UP、CHOL、BUN、SCr、IL-6、IL-1β、TNF-α水平及MDR1 mRNA、p-NF-κB p65、P-gp170蛋白质水平均明显升高(均P<0.05),ALB和miR-16水平均显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,APS低剂量组和高剂量组大鼠UP、CHOL、BUN、SCr、IL-6、IL-1β、TNF-α水平及MDR1 mRNA、p-NF-κB p65、P-gp170蛋白质水平均明显降低(均P<0.05),ALB和miR-16水平均显著升高(均P<0.05)。与APS+miR-16拮抗剂对照组相比,APS+miR-16拮抗剂组大鼠UP、CHOL、BUN、SCr、IL-6、IL-1β、TNF-α水平及MDR1 mRNA、p-NF-κB p65、Pgp170蛋白质水平均明显升高(均P<0.05),ALB和miR-16水平均显著降低(均P<0.05)。MiR-16与NF-κB具有靶向调节关系。结论:APS可调节miR-16/NF-κB信号通路,影响MDR1、P-gp170水平,从而可减轻AN大鼠肾组织的炎症反应。