MicroRNA-126与胃癌患者放化综合治疗效果的关系及其对胃癌SGC-7901细胞的放射增敏作用

目的:研究microRNA-126与胃癌患者放化综合治疗疗效的关系及其对胃癌细胞的放射增敏效果。方法:选取2014年6月~2015年6月间我院收治的晚期胃癌患者60例为研究对象,其中男性32例,女性28例,年龄37~65岁,平均年龄(51±7)岁。所有患者均接受放化综合治疗。收集患者的胃癌病理组织标本,同时于治疗结束时采集静脉血标本。采用国际实体瘤疗效评价标准(RECIST)评价患者的近期疗效,根据疗效将患者分为治疗敏感组和非敏感组。实时荧光定量PCR检测各组患者组织及血浆中microRNA-126的表达变化。体外培养胃癌SGC-7901细胞并转染microRNA-126 mimic;平板集落形成实验分析microRNA-126 mimic转染对SGC-7901细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测转染microRNA-126 mimic对SGC-7901细胞凋亡率的影响。结果:根据RECIST,共28例患者对治疗敏感,32例患者对治疗不敏感。与敏感组患者相比,不敏感组患者血浆和胃癌组织中的microRNA-126相对水平较低,相对于敏感组的倍数分别为0.72±0.04和0.48±0.03,差异具有统计学意义(P<0.05)。MicroRNA-126 mimic转染后SGC-7901细胞的SF_2值和D_0值减小(P<0.05),增敏比为1.74。流式细胞术分析结果发现,microRNA-126 mimic转染可以诱导SGC-7901细胞凋亡,并增加射线引起的细胞凋亡。结论:较低的microRNA-126提示胃癌患者放化综合治疗疗效不佳;microRNA-126具有增加胃癌细胞放射敏感性的作用。

8周有氧运动对高脂喂养肥胖小鼠血管内皮炎症及microRNA-126表达的影响

目的:探讨有氧运动对肥胖小鼠胸主动脉内皮细胞分子粘附、血管内皮炎症的影响。方法:SPF级雄性断乳C57BL/6小鼠37只,随机分为正常饮食组(Control Diet,CD,n=17)和高脂饮食组(High Fat Diet,HFD,n=20),分别进行普通饲料和高脂饲料喂养。12周后,筛选肥胖小鼠17只随机分为肥胖对照组(Obesity Control,OC,n=8)和肥胖运动组(Obesity Exercise,OE,n=9),筛选对照组小鼠17只随机分为正常对照组(Normal Control,NC,n=8)和正常运动组(Normal Exercise,NE,n=9),OE组和NE组进行为期8周的有氧跑台运动。跑台活动持续8周,每周6次,每次30 min,跑速20 m/min。测定小鼠体重及腹腔脂肪含量;采用透射电镜观察胸主动脉内皮细胞的形态学改变;ELISA测定血清TNF-α、insulin水平;分别采用real-time PCR和免疫组化技术检测胸主动脉microRNA-126(miR-126)、TNF-α、NF-κB、VCAM-1 m RNA含量和各蛋白表达。结果:与NC相比,OC小鼠体重和腹腔脂肪均显著增加(P<0.01),血清TNF-α水平显著上调(P<0.01),透射电镜结果显示,OC组小鼠内皮细胞形态上已造成相应损伤,胸主动脉miR-126水平显著下降(P<0.01),TNF-α、NF-κB、VCAM-1蛋白表达显著上升(P<0.01)。与OC相比,OE小鼠体重、lee’s指数均显著下降(P<0.01),血清TNF-α水平表达显著下调(P<0.01),炎症水平减轻,小鼠内皮细胞形态受损情况改善,OE小鼠血管内皮miR-126水平显著上升(P<0.01),小鼠胸主动脉TNF-α(P<0.01)、NF-κB(P<0.01)、VCAM-1(P<0.05)蛋白表达显著下调,运动前后miR-126与TNF-α(r=-0.60,P<0.05)、VCAM-1(r=0.69,P<0.05)表达变化呈显著相关。结论:8周有氧运动干预显著减少血清炎性因子,缓解肥胖小鼠内皮细胞分子粘附,改善血管内皮炎症,其作用可能与运动诱导miR-126增加相关。

1型糖尿病患者血浆microRNA-126变化与内皮功能的相关性

目的探讨1型糖尿病患者血浆microRNA-126表达水平的变化及其临床意义,并分析microRNA-126与内皮功能的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测47例1型糖尿病患者及50例健康对照组人群血浆microRNA-126的表达水平,酶联免疫吸附法检测人内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量,分析血浆microRNA-126表达水平与人内皮型一氧化氮合酶含量的相关性。结果与健康对照组相比,1型糖尿病组血浆microRNA-126表达水平明显下降(P<0.05),人内皮型一氧化氮合酶含量也明显下降(P<0.05)。相关分析显示血浆microRNA-126表达水平与人内皮型一氧化氮合酶含量呈明显正相关(P<0.05)。结论 1型糖尿病患者血浆microRNA-126水平呈低表达,而糖尿病患者常伴有内皮功能损伤,提示microRNA-126的下调可能与内皮损伤有关。microRNA-126可能通过介导内皮功能的损伤而参与1型糖尿病血管并发症的发生发展。

MicroRNA-126对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、侵袭、凋亡的作用及其机制研究

目的探究microRNA-126(miR-126)通过靶向Dickkopf-1(DKK1)参与类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、侵袭、凋亡的机制研究。方法选取2018年6月—2019年9月在武汉市第一医院就诊的25例类风湿性关节炎(RA)患者的滑膜组织(RA组),同时收集在该院同期接受膝关节十字韧带断裂重建手术的21例非类风湿关节炎患者的滑膜组织作为健康组,检测其miR-126和DKK1蛋白。利用RA组织构建原代RASFs,通过双萤光素酶报告验证miR-126与DKK1的靶向关系。将RASFs分为对照组、miR-126组、DKK1组、miR-126+DKK1组。采用CCK-8、Transwell及流式细胞术检测过表达miR-126和/或DKK1对RASFs增殖、侵袭和凋亡的影响。结果RA组滑膜组织miR-126相对表达量低于健康组(P<0.05),而DKK1蛋白相对表达量高于健康组(P<0.05)。miR-126 mimic与DKK1 Wt共转染后的相对萤光素酶活性低于miR-126 NC质粒与DKK1 Wt共转染(P<0.05),证明miR-126与DKK1靶向结合。miR-126组RASFs增殖力和侵袭细胞数低于对照组(P<0.05),而凋亡率高于对照组(P<0.05)。DKK1组RASFs增殖力和侵袭细胞数高于对照组(P<0.05),而凋亡率低于对照组(P<0.05)。miR-126+DKK1组增殖力和侵袭细胞数高于miR-126组(P<0.05),而低于DKK1组(P<0.05);miR-126+DKK1组凋亡率低于miR-126组(P<0.05),而高于DKK1组(P<0.05)。结论miR-126在RA滑膜组织中低表达,miR-126可通过靶向DKK1抑制RASFs增殖、侵袭及凋亡。

microRNA-1与microRNA-126在支气管哮喘急性发作期患儿外周血中的表达及诊断价值

目的:探讨microRNA-1与microRNA-126在支气管哮喘急性发作期患儿外周血中的表达及其与患儿发病的相关性。方法:临床纳入2013年1月至2015年1月我院收治的支气管哮喘急性发作期患儿48例,设为哮喘组,同时纳入同时期内52例健康体检儿童作为对照组。分别采集两组外周血,并进行microRNA-1与microRNA-126水平检测,同时检测IL-4、INF-γ水平。结果:哮喘组患儿IL-4、INF-γ水平分别为(109.65±74.31)ng/L、(70.47±11.96)ng/L,对照纽患儿IL-4、INF-γ水平分别为(78.47±75.78)ng/L、(77.05±17.21)ng/L,差异有显著性(P<0.05);哮喘组患儿microRNA-1与microRNA-126水平分别为(2.15±0.97)、(7.34±1.26),对照组患儿microRNA-1与microRNA-126水平分别为(5.81±1.29)、(3.66±0.91),差异有显著性(P<0.05);microRNA-126、microRNA-1在支气管哮喘急性发作期患儿外周血中的灵敏度与在对照组的特异度分别为85.42%、79.17%、78.85%、73.08%;ROC曲线下面积分别为0.917、0.865。结论:支气管哮喘急性发作期患儿外周血中microRNA-126水平升高,microRNA-1水平降低,两者可以作为临床诊断儿童支气管哮喘急性发作的客观指标。

麝香保心丸联合瑞舒伐他汀治疗对老年冠心病患者血脂、血管内皮功能及外周血microRNA-126和microRNA-137表达的影响

目的探讨麝香保心丸联合瑞舒伐他汀治疗对老年冠心病患者血脂、血管内皮功能及外周血microRNA-126和microRNA-137表达的影响。方法采用随机数字表法将收治的94例老年冠心病患者分为对照组(47例)与麝香保心丸联合组(47例)。对照组患者给予瑞舒伐他汀治疗;麝香保心丸联合组患者在给予瑞舒伐他汀治疗基础上结合麝香保心丸治疗。两组疗程均为12周。比较两组治疗疗效及治疗前后血脂、血管内皮功能麝香保心丸联合组总有效率(93.62%)高于对照组(70.21%,P<0.05)。两组治疗后总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和甘油三酯(TG)水平较治疗前降低,而高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平较治疗前升高(P<0.05);麝香保心丸联合组治疗后TC、LDLC和TG水平低于对照组,而HDLC水平高于对照组(P<0.05)。两组治疗后内皮素1(ET-1)水平较治疗前降低,而一氧化氮(NO)水平较治疗前升高(P<0.05);麝香保心丸联合组治疗后ET-1水平低于对照组,而NO水平高于对照组(P<0.05)。两组治疗后microRNA-126表达较治疗前升高,而microRNA-137表达较治疗前降低(P<0.05);麝香保心丸联合组治疗后microRNA-126表达高于对照组,而microRNA-137表达低于对照组(P<0.05)。结论麝香保心丸联合瑞舒伐他汀治疗对老年冠心病患者疗效良好,可改善患者血脂代谢紊乱和血管内皮功能紊乱,上调外周血microRNA-126表达而下调microRNA-137表达,值得临床借鉴。

MicroRNA-126对人正常肝细胞株脂代谢的影响

目的探讨循环中MicroRNA-126在1型和2型糖尿病影响肝细胞的糖代谢及对正常肝细胞系Chang liver细胞脂代谢的影响。方法以人正常肝细胞系为对象,设置MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组。通过转染MicroRNA-126类似物及拮抗物,改变MicroRNA-126表达。RT-PCR法检测各组细胞中MicroRNA-126的表达量;转染MicroRNA序列48 h后,继而胰岛素作用12 h,甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)定量检测试剂盒检测每组肝细胞内TG和TC的含量。结果 RT-PCR结果显示MicroRNA-126 mimics转染组较正常对照组的MicroRNA-126表达量显著增加(t=26.18,P<0.05),其余各组较正常对照组的MicroRNA-126表达量则无显著差别(P=0.609)。胰岛素作用后,MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组相比,TG和TC含量无显著差别(F=1.074,0.436,均P>0.05)。结论 MicroRNA-126对正常肝细胞株TG及TC的代谢可能没有影响。

妊娠期高血压疾病患者血浆microRNA-126的表达及意义

目的探讨妊娠期高血压疾病(HDCP)、健康妊娠患者血浆microRNA-126表达变化及其临床意义。方法 HDCP患者根据脏器损害程度分为妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组,健康妊娠患者分为健康妊娠早期组、健康妊娠晚期组,采用RT-PCR检测血浆microRNA-126表达量,并分析HDCP与年龄、孕周、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、24 h尿蛋白关系。结果与健康妊娠早期组相比,重度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与健康妊娠晚期组相比,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);与轻度子痫前期组相比,重度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。多元线性回归分析显示年龄、孕周、收缩压、舒张压、24 h尿蛋白是HDCP的影响因素。结论 microRNA-126在HDCP患者血浆表达下调,且在重度子痫前期患者血浆microRNA-126表达最低,提示血浆microRNA-126表达下调可能参与了妊娠期高血压疾病的发生和发展进程。

MicroRNA-126、microRNA-328与急性非ST段抬高型心肌梗死患者心肌损伤标志物的相关性

目的研究血清microRNA-126(miR-126)、microRNA-328(miR-328)与急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者心肌损伤标志物的相关性。方法选取2021年1月—2022年1月宁夏医科大学总医院收治的191例急性NSTEMI患者为观察组,另选取同期该院门诊体检健康的180例志愿者为对照组。比较两组的心肌损伤标志物[脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]水平,以及miR-126、miR-328表达的差异。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析BNP、CK-MB、LDH、cTnI、miR-126、miR-328预测NSTEMI的价值。参照全球冠状动脉事件登记(GRACE)评分标准,将急性NSTEMI患者分为低危组、中危组及高危组,比较3组BNP、CK-MB、LDH、cTnI、miR-126、miR-328的差异。采用Pearson相关系数分析BNP、CK-MB、LDH、cTnI与miR-126、miR-328的相关性。结果观察组BNP、CK-MB、LDH、cTnI水平及miR-328 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05),miR-126 mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,BNP≥1149.684 ng/L、CK-MB≥34.760 ng/mL、LDH≥812.535 u/L、cTnI≥3.583μg/L、miR-126≤26.825、miR-328≥1.215是NSTEMI的最佳截断值,敏感性分别为84.2%(95%CI:0.714,0.854)、84.7%(95%CI:0.723,0.921)、83.7%(95%CI:0.741,0.882)、67.9%(95%CI:0.595,0.789)、87.2%(95%CI:0.623,0.932)、77.9%(95%CI:0.745,0.836),特异性分别为82.8%(95%CI:0.653,0.912)、83.9%(95%CI:0.675,0.931)、83.9%(95%CI:0.741,0.963)、74.4%(95%CI:0.628,0.844)、87.9%(95%CI:0.573,0.917)、82.8%(95%CI:0.749,0.901)。高危组BNP、CK-MB、LDH、cTnI水平及miR-328m RNA相对表达量较低危组、中危组升高(P<0.05),miR-126 mRNA相对表达量较低危组、中危组降低(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-126与BNP、CK-MB、LDH、cTnI呈负相关(P<0.05),miR-328与BNP、CK-MB、LDH、cTnI呈正相关(P<0.05)。结论NSTEMI患者的BNP、CK-MB、LDH、cTnI水平及miR-126、miR-328 mRNA相对表达量与健康人群有差异,并随NSTEMI病情进展而变化。miR-126、miR-328与BNP、CK-MB、LDH、cTnI相关,提示miR-126、miR-328有望成为NSTEMI早期诊断的新型标志物。

妊娠期高血压疾病与原发性高血压microRNA-126表达差异

目的探讨妊娠期高血压疾病(HDCP)、原发性高血压疾病患者血浆microRNA-126的表达水平差异。方法 HDCP患者分为妊娠期高血压组(A组)、轻度子痫前期组(B组)、重度子痫前期组(C组),原发性高血压组(NGT组),采用RT-PCR检测血浆microRNA-126表达量。结果与原发性高血压组患者相比,重度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达下调,有统计学差异(P<0.05)与原发性高血压组患者相比,重度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达下调,有统计学差异(P<0.05),与原发性高血压组患者相比,轻度子痫前期组患者血浆microRNA-126表达下调,无统计学差异(P>0.05)。结论重度子痫前期患者相比原发性高血压疾病患者血浆microRNA-126表达下降,microRNA-126可能参与妊娠期高血压疾病、原发性高血压疾病的发生发展。microRNA-126可能参与妊娠期高血压疾病、原发性高血压疾病的发生发展。

血浆循环microRNA-126在非小细胞肺癌诊断中的应用

目的探讨血浆循环microRNA-126浓度与非小细胞肺癌(NSCLC)的相关性及其诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法检测130例NSCLC患者和作为对照的170例健康人的血浆循环microRNA-126浓度。结果对照组血浆循环microRNA-126浓度显著高于NSCLC组(P<0.01)。血浆循环microRNA-126浓度ROC曲线下面积(area under theROC curve,AUC)为0.758,95%CI为0.704～0.811(P<0.01)。当血浆microRNA-126浓度为1051 fmol/L时,血浆microRNA-126对NSCLC诊断的特异度为90.0%,灵敏度为46.4%。其浓度与患者的年龄、性别、吸烟,病理分型和分期均无显著的相关性(P>0.05)。结论血浆循环microRNA-126浓度对NSCLC有一定的临床诊断意义,联合其他血浆microRNA或肿瘤标志物,如神经元特异性烯醇化酶、癌胚抗原和细胞角蛋白片段21-1,可以弥补单一检测的局限性,以提高肺癌的阳性检出率,为临床提供可靠的依据。

支气管哮喘急性发作期患儿外周血microRNA-126和microRNA-1表达的意义

目的：探讨分析支气管哮喘患儿急性发作期其外周血microRNA-126和microRNA-1的表达水平，并研究其与支气管哮喘发生发展的关系。方法选取支气管哮喘急性发作期患儿51例为研究组，同期经我院体检健康的儿童43例为对照组。取外周静脉血， microRNA-126、microRNA-1的表达水平采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测，同时白细胞介素12（IL-12）和白细胞介素25（IL-25）水平采用酶联免疫吸附双抗夹心法（ELISA）检测。分析比较2组受试对象各检测指标之间的差异。结果研究组microRNA-1表达水平及IL-12水平显著低于对照组（P<0.05），但研究组microRNA-126表达水平及IL-25水平显著高于对照组（P<0.05）。结论microRNA-126、microRNA-1可通过差异性表达调节细胞因子水平，并进一步调控辅助性T淋巴细胞，参与了支气管哮喘的发生发展过程。

microRNA-126在多能干细胞定向分化为视网膜神经干细胞过程中表达量的变化及意义

目的研究microRNA-126(miR-126)在湿性老年黄斑变性(wet AMD)疾病患者来源的多能干细胞(i PSC)定向分化为视网膜神经干细胞(RNSC)中表达量的变化及意义。方法选取新发现的wet AMD患者10例作为观察组,无眼底病变及全身病的10例作为对照组。抽取受试者的外周静脉血,提取单个核细胞(PBMC),进一步提取CD34+细胞,行腺病毒转染,诱导产生i PSC且进行鉴定;应用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测miR-126在10个不同诱导发育阶段的RNSC中的相对表达量。结果 wet AMD疾病患者的外周血成功诱导分化出RNSC;观察组miR-126的不同诱导时间相对表达量的差异除了时刻8、9、10其余测试时间点均有统计学意义(P<0.05);对照组miR-126的不同诱导时间相对表达量的差异无统计学意义(P>0.05);观察组与对照组细胞miR-126相对表达量在不同诱导时间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 wet AMD患者早期miR-126的表达量显著升高,且有逐渐降低的趋势。

胃癌患者microRNA-126水平与其放化综合疗效的关系及对其胃癌细胞放射增敏作用的影响

目的探究胃癌患者microRNA-126水平与其放化综合疗效的关系及对其胃癌细胞放射增敏作用的影响。方法回顾性选取2015年4月至2016年10月商洛市中心医院肿瘤诊治中心收治的75例晚期胃癌患者作为研究对象。观察临床资料、放化疗效果不同的患者中MicroRNA-126相对表达水平,以及转染情况和放射增敏作用。结果中、高分化组患者的microRNA-126相对表达水平为(1.14±1.40)2-△△Ct,明显低于低分化的(1.97±2.05)2-△△Ct,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ～Ⅳ期患者的microRNA-126相对表达水平为(1.02±1.27)2-△△Ct,明显低于Ⅰ～Ⅱ期的(1.84±1.97)2-△△Ct,差异有统计学意义(P<0.05);直径<5 cm组患者的microRNA-126相对表达水平为(2.17±2.24)2-△△Ct,明显高于直径≥5 cm的(1.16±1.16)2-△△Ct,差异具有统计学意义(P<0.05);非敏感组患者的组织、血浆的microRNA-126相对表达水平分别为(0.73±0.07)2-△△Ct、(0.57±0.03)2-△△Ct,显著低于敏感组的(1.00±0)2-△△Ct、(1.00±0)2-△△Ct,差异具有统计学意义(P<0.01);转染microRNA-126组患者的D0、SF分别为(2.35±0.29)、(0.53±0.15),明显低于未转染组、转染microRNA-NC组的(4.12±0.25)、(0.84±0.06),(4.24±0.24)、(0.79±0.09),而SER为(1.79±0.1),明显高于其他两组的(1.00±0)、(1.06±0.11),差异均具有统计学意义(P<0.05);未转染组与转染microRNA-NC组的D0、SF、SER比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 microRNA-126可能具有放射增敏作用,并提高放化疗效果;且在不同胃癌患者中microRNA-126相对表达水平有差异,可能提示其具有诊断胃癌的作用。

MicroRNA-124 rs531564、microRNA-26A rs7372209和microRNA-126 rs4636297多态性与结直肠癌易感性关联研究

目的探讨microRNA-124 rs531564(miR-124 rs531564)、microRNA-26A rs7372209(miR-26A rs7372209)和microRNA-126 rs4636297(miR-126 rs4636297)基因多态性与结直肠癌遗传易感的关系。方法利用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术,对724例结直肠癌患者和626例健康对照个体的miR-124 rs531564、miR-26A rs7372209和miR-126 rs4636297多态位点进行分型。采用非条件逻辑回归分析统计该多态位点与结直肠癌易感的相关性,计算相对危险度的比值比(OR∧)及95%置信区间(CI)。结果该试验中miR-126 rs4636297多态位点,在病例中经调整年龄、性别、吸烟、饮酒等影响相对于CC基因型个体,发现携带AG或AA的基因型个体与结直肠癌的患病风险有一定的相关性(P<0.05),调整后的OR∧(95%)分别为[1.289(1.007,1.650)和1.383(0.396,4.834)]。相对于G等位基因,A等位基因显著提高个体患结直肠癌的风险(OR∧=1.307,95%CI=1.054,1.622,P=0.013);还发现携带A等位基因(AG+AA)的个体患结直肠癌风险是携带GG基因型个体的1.327倍(AG+AA vs GG,OR∧=1.327,95%CI=1.042,1.688,P=0.019)。而miR-124 rs531564、miR-26A rs7372209位点的多态性并未发现不同基因型个体与结直肠癌的患病风险相关(P>0.05)。结论miR-126 rs4636297基因多态性与结直肠癌的遗传易感有密切关系,携带A等位基因可能是促进结直肠癌发病风险的重要因素。

过表达microRNA-126诱导INS-1细胞凋亡

目的研究过表达microRNA-126对INS-1细胞(大鼠胰岛β细胞株)增殖和凋亡的影响。方法将INS-1细胞分为4组:阴性对照(NC)组、阳性对照(miR-375)组、miR-126过表达(miR-126m)组、miR-126低表达(miR-126in)组,分别转染nonsense segment、miR-375mimic、miR-126mimic、miR-126inhibitor,48h后予胰岛素刺激细胞12h。用实时定量RT-PCR方法检测转染效果;MTS法检测INS-1细胞增殖情况;电子显微镜下观察细胞超微结构的变化。结果 miR-126m组INS-1细胞的miR-126水平较NC组升高(P<0.01),miR-126in组miR-126水平较NC组降低(P<0.05);miR-126m组及miR-375组INS-1细胞活力较NC组及miR-126in组降低(P<0.05);电镜下可见miR-126m组及miR-375组INS-1细胞大量凋亡,细胞核折缝样改变,染色质高度浓缩、边集;NC组及miR-126in组偶见凋亡细胞。结论过表达microRNA-126可以显著降低INS-1细胞活力,诱导细胞凋亡,提示microRNA-126可能与糖尿病的发生有关。

microRNA-126基因敲减小鼠的鉴定及其血糖水平变化

目的:检测micro RNA-126(mi R-126)基因敲减(knock down,KD)小鼠各组织器官中mi R-126的表达,并观察小鼠血糖的变化,初步探讨其意义。方法:分别提取野生型(wild type,WT)和mi R-126 KD模型小鼠中12种组织器官的总RNA,荧光定量PCR探针法检测mi R-126在12种组织器官的表达水平;检测小鼠血糖的变化,并观察小鼠体质量的变化;HE染色观察肝脏和胰腺的病理改变。结果:与正常小鼠相比,mi R-126 KD模型小鼠的脾、胰腺、肝、肌肉和肺等器官组织中mi R-126的表达显著下调(P<0.05);出生第7周和第16周模型小鼠血糖水平均明显增高(P<0.05),HE染色显示模型小鼠胰腺和肝组织呈明显病理异常;出生第13周后,模型小鼠体质量逐渐增加(P<0.05)。结论:mi R-126KD小鼠血糖水平明显增加,可能与胰腺和肝的病理改变有关,提示mi R-126在血糖代谢中具有重要作用,可能与2型糖尿病的发生发展密切相关。

MicroRNA-126通过靶向抑制EZH2增加胃癌SGC-7901细胞的放射敏感性

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)增强胃癌细胞放射敏感性的分子生物学机制。方法:体外培养胃癌SGC-7901细胞,通过转染miR-126模拟序列上调细胞内的miR-126水平,使用RT-q PCR及Western blot检测miR-126上调后zeste基因增强子同源物2(EZH2)的mRNA及蛋白水平的变化。双萤光素酶报告基因实验确认miR-126与EZH2的靶向结合关系。在上调miR-126水平的同时,通过共转染pc DNA3.1-EZH2真核表达质粒提高细胞内的EZH2表达,CCK-8法及流式细胞术分析照射后胃癌细胞的活力及凋亡率的变化,从而评估EZH2过表达对miR-126放射增敏作用的影响。结果:上调胃癌SGC-7901细胞中的miR-126水平可以显著抑制EZH2的mRNA及蛋白水平(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验提示miR-126与EZH2的mRNA间存在直接靶向关系。与仅上调miR-126的细胞相比,上调miR-126水平的同时过表达EZH2水平,将导致照射后SGC-7901细胞的活力增加,凋亡率减少(P<0.05)。结论:对EZH2靶向抑制是miR-126增强胃癌SGC-7901细胞放射敏感性的机制之一。

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

目的研究micro RNA-126(mi R-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达mi R-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证mi R-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果与对照组相比,转染mi R-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达mi R-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,mi R-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论过表达mi R-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。