食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

天麻素调控miR-181b对创伤性颅脑损伤大鼠行为及脑水肿的作用机制探究

目的探究天麻素(GAS)调控miR-181b对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠行为及脑水肿的作用机制。方法将120只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、TBI模型组(Model组)、低剂量GAS组(GAS-L组,50 mg/kg GAS)、高剂量GAS组(GAS-H组,100 mg/kg GAS)、高剂量GAS+miR-181b antagomir NC组(GAS-H+miR-181b antagomir NC组,100 mg/kg GAS+200 nmol miR-181b antagomir NC)和高剂量GAS+miR-181b antagomir组(GAS-H+miR-181b antagomir组,100 mg/kg GAS+200 nmol miR-181b antagomir),每组20只大鼠。采用改良神经功能缺损严重程度评分量表(mNSS)对各组大鼠神经功能进行评估。采用转棒测试、旷场实验评价大鼠行为学变化。干湿重法测定大鼠脑组织含水量。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定各组大鼠脑组织miR-181b水平。Western blot法测定大鼠脑组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、水通道蛋白-4(AQP-4)的表达水平。结果与Sham组相比,Model组大鼠mNSS评分、脑组织含水量、脑组织MMP-9、AQP4蛋白表达显著升高(P<0.05),转棒测试跌落时间、旷场实验区域中心停留时间、脑组织miR-181b水平显著降低(P<0.05),大鼠脑皮质神经元萎缩,结构紊乱,细胞轮廓不清晰,出现严重的脑损伤。与Model组相比,GAS-H组大鼠相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05)。miR-181b antagomir减弱了GAS对TBI导致的大鼠行为学障碍和脑水肿的减轻作用。结论GAS可能通过提高miR-181b的表达来改善TBI导致的大鼠行为学障碍和脑水肿。

lncRNA MALAT1通过调控miR-181a促进氧化应激模型中的心肌细胞损伤

目的在心肌细胞氧化应激模型中探究长链非编码RNA(lncRNA)转移相关肺腺癌转录物1(MALAT1)与微小RNA-181a(miR-181a)的表达及作用机制。方法qRT-PCR检测30例急性心肌梗死患者(AMI组)和30例健康对照组(Normal组)外周血中MALAT1与miR-181a的表达,Pearson相关性分析明确MALAT1与miR-181a在AMI中的相关性;lncBase在线预测数据库预测MALAT1与miR-181a之间的结合位点,并利用双荧光素酶基因报告实验进行验证;采用过氧化氢(H_(2)O_(2))处理人心肌细胞株AC16建立心肌细胞氧化应激模型,将沉默MALAT表达的siRNA(si-MALAT)和阴性对照si-NC转染入AC16细胞中,并将细胞分为:H_(2)O_(2)处理(H_(2)O_(2))组,H_(2)O_(2)+si-NC组,H_(2)O_(2)+si-MALAT组;CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot实验检测各组细胞中促凋亡蛋白裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和凋亡抑制蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达水平。结果与Normal组相比,AMI组患者MALAT1的表达水平升高,而miR-181a的表达水平降低(P<0.05),且MALAT1和miR-181a表达呈负相关。lncBase在线预测数据库预测和双荧光素酶基因报告实验表明MALAT1可靶向调控miR-181a表达。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+si-MALAT1组细胞活力升高(P<0.05),TUNEL阳性率降低(P<0.05),cleaved caspase-3和Bax表达水平降低(P<0.05),而Bcl-2的表达水平升高(P<0.05),H_(2)O_(2)+si-NC组均无明显改变(P>0.05)。结论LncRNA MALAT1在AMI患者中表达升高,可通过靶向抑制miR-181a促进氧化应激诱导的心肌细胞损伤。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

远华蟾毒精通过下调miR-181a抑制胃癌细胞生长及侵袭研究

目的 回顾性分析胃癌患者样本中miR-181a的表达水平,根据临床病例病理数据分析miR-181a与胃癌的相关性。采用药物干预的方法,观察远华蟾毒精对胃癌细胞中miR-181a表达的影响以及参与胃癌生长及侵袭的作用机制。方法 本实验纳入2019年1月—2020年12月于滨州医学院附属医院诊治的90例胃癌患者的胃部病变标本及血液,另纳入30份癌旁组织样本。远华蟾毒精组使用0.05、0.10、0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精干预,对照组不加药。RT-qPCR探究组织层面的miR-181a表达水平。比较miR-181a在胃癌患者癌组织和癌旁组织中的表达水平,分析miR-181a表达水平与临床参数的相关性。以胃癌细胞系SGC-7901为研究对象,利用MTT法、细胞凋亡实验和Transwell实验探究远华蟾毒精对胃癌细胞增殖、细胞系SGC-7901细胞活力、侵袭力、细胞凋亡率的影响,并检测远华蟾毒精对miR-181a表达水平的影响。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-181a呈高表达(P<0.05)。miR-181a低表达的胃癌患者生存曲线优于高表达者(P<0.05)。miR-181a高表达患者间肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移率大于miR-181a低表达(P<0.05);miR-181a高表达与miR-181a低表达患者年龄、体质指数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。远华蟾毒精组细胞系SGC-7901 24、48 h存活率及侵袭数低于对照组,浓度为0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组48 h存活率低于24 h存活率(P<0.05)。浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901细胞早期和晚期的凋亡率及总凋亡率高于对照组,且浓度为1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901晚期凋亡率低于早期凋亡率(P<0.05)。与对照组比较,浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901中miR-181a表达水平降低(P<0.05),且浓度为1.00μg/ml的远华蟾毒精组48 h的miR-181a表达水平较24 h低(P<0.05)。结论 miR-181a表达水平是胃癌患者中的风险基因,远华蟾毒精可以通过下调miR-181a表达来发挥抗癌功能。

miR-181a靶向Bcl-2调控氧糖剥夺/再灌注模型诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡

目的皮层是响应脑缺血缺氧最为敏感的组织之一,基于前期深度测序技术,我们筛选获得响应脑缺血缺氧应激的皮层区目标基因miR-181a及Bcl-2。本研究旨在SH-SY5Y细胞株氧糖剥夺/复糖复氧模型验证二者靶向调控关系及功能,明确miR-181a—Bcl-2调控网络在OGD/R诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法采用线栓法构建大鼠缺血缺氧再灌注损伤模型,脑切片TTC染色及行为学评分法评估模型。应用qRT-PCR及Western Blot验证目标基因的表达。生物信息学分析miR-181a与Bcl-2的靶向结合位点并比对结合位点的保守性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a与Bcl-2靶向结合的特异性。采用OGD/R细胞模型体外模拟脑缺血再灌注损伤,检测凋亡相关蛋白表达及Hoechst荧光染色评估细胞凋亡。结果大鼠大脑中动脉阻塞后miR-181a、Bcl-2表达变化趋势相反。RNA hybird软件预测miR-181a可结合Bcl-2的3′-UTR区,且结合区域高度保守。双荧光素酶报告基因实验发现,相对于Bcl-23′UTR-WT与mimic-NC共转染组,Bcl-23′UTR-WT与miR-181a mimic共转染后的荧光活性更低(P<0.001),而Bcl-2-Mut与miR-181a mimic共转染组,荧光活性无显著差异(P>0.05)。分别用miR-181a的模拟物及抑制物转染OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞,miR-181a可以抑制Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平(P<0.001)。过表达miR-181a显著增加了SH-SY5Y细胞的凋亡(P<0.001),而抑制miR-181a表达可使SH-SY5Y细胞凋亡显著降低(P<0.001)。结论miR-181a可靶向结合Bcl-2,下调miR-181a可通过促进Bcl-2的表达进而抑制SH-SY5Y神经细胞OGD/R损伤诱导的细胞凋亡。

血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法前瞻性选取NSCLC患者65例作为研究对象,为NSCLC组;另选取同期体检健康者60例为健康组。收集NSCLC患者的一般资料,包括年龄、性别、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度等。NSCLC患者治疗前、健康组体检时抽取空腹静脉血,血清中提取外泌体,RT-PCR法检测外泌体的miR-181c-5p和miR-142-5p的表达。结果NSCLC组血清中miR-181c-5p和miR-142-5p的表达明显低于健康组(t=7.358、8.613,P<0.001)。NSCLC患者miR-181c-5p和miR-142-5p表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度相关(P<0.05)。miR-181c-5p曲线下面积AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925,P<0.001),当截断值为0.673时,灵敏度为81.54%,特异度为71.67%;miR-142-5p曲线下面积AUC为0.878(95%CI:0.819~0.936,P<0.001),当截断值为0.752时,灵敏度为84.62%,特异度为72.30%;miR-181c-5p和miR-142-5p联合诊断的曲线下面积AUC为0.912(95%CI:0.863~0.961,P<0.001),灵敏度为86.15%,特异度为78.33%。结论miR-181c-5p和miR-142-5p在NSCLC患者血清中低表达,其有望成为临床NSCLC辅助诊断的分子标志物。

雷公藤甲素通过调节miR-181b-5p/SMAD2抑制结直肠癌细胞的增殖和转移

目的识别雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖,迁移和侵袭的影响并识别其作用机制。方法CCK-8和EdU检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖的影响;使用Transwell检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响。qRT-PCR检测结直肠癌细胞中miR-181b-5p和SMAD2 mRNA的表达;使用Western blot实验检测结直肠癌细胞中SMAD2蛋白的表达。结果CCK-8实验表明随着雷公藤甲素浓度增加,结直肠癌细胞存活率逐渐降低。EdU实验表明雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞增殖率。Transwell实验显示雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭数目。qRT-PCR结果证实雷公藤甲素可显著促进miR-181b-5p的表达并抑制SMAD2 mRNA和蛋白表达。此外,过表达SMAD2可部分逆转雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论雷公藤甲素以浓度依赖的方式抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-181b-5p/SMAD2轴有关。

过表达miR-181a-5p的口腔癌皮下移植瘤小鼠模型的小肠代谢组学研究

目的通过检测口腔癌皮下移植瘤小鼠小肠中代谢物和代谢通路的变化,分析过表达miR-181a-5p对皮下移植瘤小鼠小肠中代谢物和代谢物组的影响。方法实验分为3组,空白对照(Control)组、阴性对照(negative control,NC)组以及实验(over expression of miR-181a-5p,OE)组。将不同组别处理后的细胞混悬液,通过皮下注射到M-NSG重度免疫缺陷雌性小鼠右侧腹股沟中上部,构建成口腔癌皮下移植瘤小鼠模型。按时记录小鼠体重变化,对小鼠小肠组织进行HE染色,观察各组病理变化。采用超高效液相色谱-串联飞行时间质谱联用仪和串联Orbitrap质谱联用仪检测NC组、OE组和Control组小鼠小肠中的代谢物,使用XCMS预分析原始数据,质量评价样本数据,鉴定Control组与NC组、NC组与OE组的差异代谢物,进行KEGG富集分析获取差异代谢通路。结果Control组和NC组小肠组织中共鉴定出170种差异代谢物。代谢物富集的显著性信号通路包括胆碱代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、γ-氨基丁酸(GABA)神经突触代谢、甘油磷脂代谢、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路代谢、癌症中心碳代谢以及烟酸和烟碱胺代谢通路。NC组和OE组相比,小鼠小肠中检测到VIP(variable importance in the projection)>2的差异代谢物有16种,显著性差异代谢物包括甘油磷酰胆碱、棕榈酸、3-羟基丁酰肉碱、β-羟丁酸等。代谢物富集到的显著性差异通路为胆碱代谢通路。结论口腔癌皮下移植瘤可引起小鼠小肠的代谢物发生变化,主要改变了小肠中与能量代谢相关的代谢物。过表达miR-181a-5p影响口腔癌皮下移植瘤小鼠小肠代谢物,代谢物富集通路为胆碱代谢通路。

miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌患者中的表达及临床意义

目的探讨miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌及宫颈癌前病变组织中的表达差异及对宫颈癌诊断的价值。方法收集2020年6月—2022年12月河北中石油中心医院收治的30例宫颈低级别鳞状上皮内病变(CINⅠ级组)、30例宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(CINⅡ~Ⅲ级组)、50例宫颈癌(宫颈癌组)患者的临床资料及宫颈组织标本。采用免疫组化法检测各组宫颈组织中miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达情况,比较各组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率;采用RT-qPCR法检测宫颈癌组患者癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量,分析miR-495-3p和miR-181d-5p表达量与宫颈癌患者临床病理特征的关系、miR-495-3p和miR-181d-5p对宫颈癌的诊断价值及二者在宫颈癌组织中表达的相关性。结果宫颈癌组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率均明显低于CINⅠ级组及CINⅡ~Ⅲ级组(P均<0.05)。宫颈癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量与FIGO分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05),FIGO分期越高、浸润越深二者表达量越低;miR-181d-5p表达量与分化程度有关(P<0.05),分化程度越高miR-181d-5p表达量越低。miR-495-3p、miR-181d-5p联合检测对宫颈癌的诊断价值高于miR-495-3p、miR-181d-5p单一检测(P=0.001)。宫颈癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达呈正相关。结论miR-495-3p、miR-181d-5p表达量与宫颈癌患者的FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移情况相关,两者表达之间具有一定相关性,二者联合检测有助于宫颈癌的诊断。

miR-181a、GAL3在急性缺血性脑卒中病情及预后评估中的临床价值

目的研究miR-181a、半乳凝素-3(galectin-3,GAL3)在急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)病情及预后评估中的临床价值。方法选取2019年1月至2021年1月诊治的82例AIS患者(AIS组)和40例同期无缺血性脑卒中的颅脑血管疾病患者(对照组)为研究对象,比较两组患者的血清miR-181a、GAL3、美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)、改良Barthel指数评定量表(modified Barthel index,MBI)及Fugl-Meyer肢体运动功能(Fugl-Meyer assessment of gait,FMA)评分的差异。Pearson相关性分析miR-181a、GAL3与神经功能指标(NIHSS、MBI、FMA评分)的相关性。采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析miR-181a、GAL3预测AIS患者1年预后不良的效能。Logistic回归分析AIS患者1年死亡的危险因素。结果与对照组比较,AIS组患者的miR-181a、GAL3、NIHSS评分显著增高(P<0.05);MBI及FMA评分均显著降低(P<0.05)。AIS组患者的miR-181a、GAL3与NIHSS评分呈正相关(r>0,P<0.05);与MBI评分、FMA评分呈负相关(r<0,P<0.05)。miR-181a、GAL3预测AIS组患者1年预后不良的敏感度、特异性、曲线下面积(areaunder the curve,AUC)均高于NIHSS评分、MBI评分、FMA评分;miR-181a联合GAL3预测AIS组患者1年预后不良的敏感度、特异性、AUC均高于miR-181a、GAL3、NIHSS评分、MBI评分、FMA评分。miR-181a≥1.3、GAL3≥12.3ng/ml、NIHSS评分≥17.4分、MBI评分<67.6分、FMA评分<84.2分为AIS患者1年死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论AIS患者血清miR-181a及GAL3水平明显增高,在AIS病情及预后评估中具有一定的临床价值。

炙甘草汤通过miR-181a-5p靶向SPHK2调控心肌纤维化改善糖尿病心肌病

目的探究炙甘草汤对糖尿病心肌病(DCM)模型大鼠心肌纤维化的影响以及调控机制。方法雄性Sprague Dawley(SD)大鼠30只,10只大鼠作为对照组;20只通过高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DCM模型大鼠,造模后按随机数字表法分成DCM组、炙甘草汤组。炙甘草汤组予2 mL/100 g炙甘草汤(1 g/mL)灌胃,对照组及DCM组予等量生理盐水灌胃,连续给药4周,每天1次。灌胃给药结束后,HE染色观察DCM模型大鼠心肌组织的病理改变,Masson染色观察DCM模型大鼠的心肌纤维化情况。提取大鼠乳鼠心肌成纤维细胞,分为对照组、高糖组、炙甘草汤组、miRNA-NC组、miR-181a-5p模拟物组、miR-181a-5p拮抗剂组、炙甘草汤+miRNA-NC组和炙甘草汤+miR-181a-5p拮抗剂组并进行相应处理。通过高糖(30 mmol/L)诱导心肌成纤维细胞增殖模型。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠心肌组织和心肌成纤维细胞中的α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)和鞘氨醇激酶2(SPHK2)蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-181a-5p、CollagenⅠ和CollagenⅢ的相对表达水平。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测心肌成纤维细胞的细胞活力。TargetScan数据库预测miR-181a-5p与SPHK2的结合序列。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a-5p与SPHK2的靶向关系。结果与对照组比较,DCM组大鼠血糖水平显著升高[(30.40±3.48)mmol/L比(5.08±0.17)mmol/L,P<0.01],心肌细胞肥大、排列紊乱、成纤维细胞增生伴炎症细胞浸润,炙甘草汤组大鼠上述情况均得到改善。与对照组比较,DCM组大鼠心肌组织α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、SPHK2蛋白水平升高,miR-181a-5p水平显著下降[(0.45±0.20)比(1.00±0.12),P<0.01];而炙甘草汤喂养能够逆转上述表达水平变化。与对照组比较,高糖组心肌成纤维细胞的细胞活力[(194.03±25.59)%比(100.00±11.00)%,P<0.01]、CollagenⅠ[(3.73±0.81)比(1.00±0.17),P<0.01]、CollagenⅢ[(3.93±0.97)比(1.00±0.24),P<0.01]、α-SMA蛋白、SPHK2蛋白水平升高,miR-181a-5p水平显著下降[(0.41±0.18)比(1.00±0.21),P<0.01];与高糖组比较,炙甘草汤组心肌成纤维细胞的细胞活力[(147.63±25.80)%比(194.03±25.59)%,P<0.01]、CollagenⅠ[(1.91±0.58)比(3.73±0.81),P<0.01]、CollagenⅢ[(2.02±0.45)比(3.93±0.97),P<0.01]、α-SMA蛋白、SPHK2蛋白水平降低,miR-181a-5p水平显著升高[(0.69±0.17)比(0.41±0.18),P<0.01]。与miRNA-NC比较,心肌成纤维细胞转染miR-181a-5p模拟物后miR-181a-5p表达显著升高[(2.82±0.86)比(1.00±0.28),P<0.01],SPHK2表达下降;而转染miR-181a-5p拮抗剂后miR-181a-5p表达显著下降[(0.29±0.09)比(1.00±0.28),P<0.01],SPHK2表达升高。TargetScan数据库分析发现,miR-181a-5p与SPHK2的3’UTR存在结合序列。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-181a-5p和SPHK2存在靶向作用。与炙甘草汤+miRNA-NC组比较,炙甘草汤+miR-181a-5p拮抗剂组心肌成纤维细胞CollagenⅠ[(2.95±0.67)比(1.89±0.26),P<0.01]、CollagenⅢ[(2.99±0.74)比(1.85±0.63),P<0.01]、细胞活力[(78.57±10.64)%比(59.75±8.08)%,P<0.01]、α-SMA蛋白、SPHK2蛋白水平升高,miR-181a-5p水平显著降低[(0.77±0.17)比(2.89±0.57),P<0.01]。结论炙甘草汤可能通过miR-181a-5p靶向SPHK2调控心肌纤维化来实现对DCM的改善作用。

LncRNA TUG1通过调节miR-181b-5p/PDCD4轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)通过调节miR-181b-5p/程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 采用高糖(25 mmol/L葡萄糖)在体外构建糖尿病心肌病(DCM)细胞模型。AC16细胞分为NG组、HG组、HG+sh-NC组、HG+sh-TUG1组、HG+miR-NC组、HG+miR-181b-5p组、HG+sh-TUG1+anti-miR-NC组、HG+sh-TUG1+anti-miR-181b-5p组、HG+miR-181b-5p+pcDNA组、HG+miR-181b-5p+pc-PDCD4组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒检测LDH释放总量;采用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测TUG1、miR-181b-5p和PDCD4 mRNA表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测B细胞淋巴瘤2-相关X(Bax)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)和PDCD4蛋白表达;caspase-Glo3检测试剂盒评估caspase 3活性;双萤光素酶报告基因实验验证TUG1或PDCD4与miR-181b-5p的靶向关系。结果 与NG组比较,HG组细胞活性降低,LDH释放总量、凋亡率、Bax、cleaved caspase 3表达及caspase 3活性升高(P<0.05),敲低TUG1或上调miR-181b-5p表达可拮抗上述变化(P<0.05)。抑制miR-181b-5p可减轻TUG1沉默对高糖处理下心肌细胞活力和凋亡的影响(P<0.05)。PDCD4过表达可减弱miR-181b-5p上调对高糖处理的心肌细胞活力的促进作用和对凋亡的抑制作用。TUG1可通过吸附miR-181b-5p上调PDCD4表达(P<0.05)。结论TUG1通过下调miR-181b-5p、上调PDCD4表达促进高糖诱导的心肌细胞凋亡。

原花青素下调miR-181a抑制颗粒细胞氧化损伤的作用机制

旨在研究葡萄籽原花青素(grape seed procyanidins, GSP)抑制颗粒细胞氧化损伤的作用及其可能机制。腹腔注射3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid, 3-NP)诱导小鼠卵泡氧化损伤,并补充GSP进行干预处理;体外分离培养小鼠卵巢颗粒细胞,通过抑制或过表达miR-181a,研究原花青素B2(grape seed procyanidin B2,GSPB2)通过下调miR-181a抑制颗粒细胞氧化损伤的作用。采用定量PCR方法检测miR-181a表达水平,应用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium, MTT)法检测细胞活力,利用免疫组化法检测活化天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3),应用酶标仪法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,采用双荧光素酶报告基因检测miR-181a和转化生长因子β受体Ⅰ(TGFBR1)的靶向调控关系,使用原位末端标记法(TUNEL)染色检测颗粒细胞凋亡情况,应用Western blot法检测TGFBR1蛋白水平。结果显示:在动物试验中,与对照组相比,3-NP组颗粒细胞活力显著降低(P<0.05);同时caspase-3活性、cleaved caspase-3蛋白及miR-181a表达明显升高(P<0.05);而GSP干预处理可扭转上述各指标的改变(P<0.05)。双荧光素酶报告试验结果显示,TGFBR1为miR-181a的靶基因;进一步分析发现,与对照组相比,miR-181a模拟物转染后TGFBR1蛋白表达和细胞活力均显著降低(P<0.05),而miR-181a抑制剂转染后TGFBR1蛋白表达和细胞活力均显著升高(P<0.05)。在细胞试验中,与对照组比较,H2O2组细胞中miR-181a表达升高,TGFBR1表达降低(P<0.05),细胞活力下降,caspase-3活性和细胞凋亡率均显著升高;而GSPB2预处理可扭转上述各指标的改变(P<0.05)。综上,GSP可抑制颗粒细胞的氧化损伤,其作用可能是通过抑制miR-181a表达而调控TGFBR1表达实现。

血清miR-181c-5p和miR-582-5p水平在老年急性缺血性脑卒中早期诊断中的应用

目的探讨血清miR-181c-5p、miR-582-5p在老年急性缺血性脑卒中(AIS)早期诊断中的应用。方法选取2019年3月至2021年3月成都市第六人民医院神经内科治疗的89例老年AIS患者为AIS组,根据NIHSS评分将患者分为重度组24例、中度组34例、轻度组31例。另选取同期到本院就诊并确诊为无神经功能障碍、无梗死病灶的一般脑血管疾病患者60例为对照组。采用qRT-PCR检测血清miR-181c-5p、miR-582-5p表达水平;Spearman法分析老年AIS患者血清miR-181c-5p、miR-582-5p水平与NIHSS评分的相关性;Logistic回归分析老年AIS发生的影响因素;ROC曲线分析血清miR-181c-5p、miR-582-5p水平对老年AIS的诊断价值。结果与对照组相比,AIS组血清miR-181c-5p显著升高(P<0.05),血清miR-582-5p显著降低(P<0.05)。老年AIS患者血清miR-181c-5p水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.676,P<0.001),血清miR-582-5p水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.656,P<0.001);随病情程度增加,血清miR-181c-5p水平逐渐升高,miR-582-5p水平逐渐降低(P<0.05)。miR-181c-5p是影响老年AIS发生的危险因素,miR-582-5p是保护因素(P<0.05)。血清miR-181c-5p、miR-582-5p以及两者联合诊断老年AIS的AUC分别为0.893、0.803、0.938,联合诊断的敏感度为88.80%,特异性为85.00%,两者联合优于血清miR-181c-5p、miR-582-5p各自单独诊断(P=0.022、P<0.001)。结论老年AIS患者血清miR-181c-5p水平上调,miR-582-5p水平下调,为早期诊断老年AIS及判断病情严重程度的标志物,两者联合诊断老年AIS具有较高效能。

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过miR-181c对脊髓损伤的修复作用研究

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的miR-181c对脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法用全骨髓贴壁法分离大鼠BMSC,流式细胞术检测CD29、CD90、CD45及CD34表达。根据转染物质的不同分为Control组(未处理)、miR-181c组(转染miR-181c mimc质粒)及miR-NC组(转染miR-NC质粒)。提取外泌体,用透射电子显微镜观察外泌体形态。构建SCI大鼠模型,造模后1 h,SCI+外泌体组大鼠尾静脉注射BMSC来源的外泌体;SCI+miR-181c组大鼠尾静脉注射转染miR-181c mimic的BMSC来源的外泌体;SCI+miR-NC组大鼠尾静脉注射转染miR-NC的BMSC来源的外泌体;Sham组、模型组大鼠尾静脉注射等体积的0.9%氯化钠溶液(生理盐水)。处理后第1天、第3天、第7天、第14天及第28天采用行为学评分(BBB)评估大鼠的运动功能,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测脊髓组织、外泌体中miR-181c,脊髓组织中TNF-α、IL-1βmRNA水平,Western blot检测脊髓组织中Cleaved半胱胺酸蛋白酶第三型(Caspase 3)、Caspase 3、Bcl关联X蛋白(Bax)及B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl2)蛋白,BMSC、外泌体中CD9、CD63表达水平。结果透射电子显微镜下观察,BMSC来源的外泌体呈类圆形,直径约50~100 nm。Control组与miR-NC组外泌体中miR-181c表达水平差异无统计学意义(t=0.297,P>0.05)。与miR-NC组比较,miR-181c组外泌体miR-181c表达水平升高(1.03±0.21 vs 0.34±0.04)(t=7.813,P<0.05)。与SCI组比较,SCI+外泌体组脊髓组织miR-181c表达水平升高(0.42±0.06 vs 0.23±0.03)(t=9.500,P<0.05)。与SCI+miR-NC组比较,SCI+miR-181c组脊髓组织miR-181c表达水平升高(0.22±0.03 vs 1.32±0.13)(t=18.440,P<0.05)。SCI+miR-181c组大鼠BBB评分高于SCI+miR-NC组(t=18.440,P<0.05)。SCI+外泌体组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TNF-α、IL-1β表达水平均低于SCI模型组(P<0.05),SCI+miR-181c组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TNF-α、IL-1β表达水平低于SCI+miR-NC组(P<0.05)。与SCI组比较,SCI+外泌体组大鼠脊髓组织中Cleaved Cas pase 3/Caspase 3、Bax表达水平降低,Bcl2表达水平升高,脊髓组织凋亡率降低(P<0.05)。与SCI+miR-NC组比较,SCI+miR-181c组大鼠脊髓组织中Cleaved Caspase 3/Caspase 3、Bax表达水平降低,Bcl2表达水平升高,脊髓组织凋亡率降低(P<0.05)。结论BMSC来源的外泌体中miR-181c可修复脊髓损伤,机制可能与抑制炎症、抗凋亡有关。

三七皂苷R1通过miR-181/IL-8/TLR4通路调控糖尿病性视神经病变的机制研究

目的探究三七皂苷R1(NGR1)通过微小RNA-181/白细胞介素-8/Toll样受体4(miR-181/IL-8/TLR4)通路调控糖尿病性视神经病变(DON)大鼠的作用及抗炎机制。方法尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(MG)、低剂量NGR1组(LNGR1)、中剂量NGR1组(MNGR1)、高剂量NGR1组(HNGR1),另设对照组(CG),每组8只,共40只。LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠每2日灌胃1次,剂量依次为15、30、60 mg/kg的NGR1,CG、MG组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠注射液,连续给药6周,期间监测大鼠血糖及体质量。给药完成后苏木精-伊红(HE)染色观察检测大鼠视神经形态,酶联免疫吸附法(ELISA)检测视神经糖化血红蛋白(HbA1c)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测视神经miR-181表达,荧光素酶报告试验检测miR-181和IL-8靶向关系,Western Blot法检测视神经IL-8、TLR4的蛋白表达。结果(1)体重、血糖和HbA1c:与CG组比较,MG大鼠体重降低(t=-3.675,P=0.001),血糖、HbA1c较高(t_(血糖)=67.721,t_(HbA1c)=27.213,均P=0.000);与MG组比较,MNGR1、HNGR1组大鼠体重较高(t_(MNGR1)=4.863,t_(HNGR1)=6.018,均P=0.000),血糖较低(t_(MNGR1)=-29.171,t_(HNGR1)=-43.981,均P=0.000),HbA1c较低(t_(MNGR1)=-18.468,t_(HNGR1)=-22.799,均P=0.000),差异均有统计学意义。(2)炎症因子:与CG组比较,MG组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α和MMP-9表达较高(t_(IL-1β)=22.949,t_(IL-6)=20.732,t_(TNF-α)=12.785,t_(MMP-9)=12.276,均P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠血清IL-1β水平较低(t_(LNGR1)=-6.465,t_(MNGR1)=-18.598,t_(HNGR1)=-21.943,均P=0.000)、IL-6水平较低(t_(LNGR1)=-3.765,P=0.001;t_(MNGR1)=-13.274,t_(HNGR1)=-15.405,均P=0.000)、TNF-α水平较低(t_(MNGR1)=-9.221,t_(HNGR1)=-10.523,均P=0.000)、MMP-9水平较低(t_(LNGR1)=-2.934,P=0.006;t_(MNGR1)=-4.343,t_(HNGR1)=-9.991,均P=0.000),差异均有统计学意义。(3)视神经形态:与CG比较,MG组大鼠视神经出现明显的出血和血管扩张、轴突肿胀以及胶质细胞增生,但LNGR1、MNGR1、HNGR1组以上情况较MG随药物剂量较高改善。与CG组比较,MG组大鼠视神经横截面积较低(t=-27.680,P=0.000),胶质细胞数较高(t=5.501,P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠视神经横截面积较大(t_(LNGR1)=6.241,t_(MNGR1)=7.853,t_(HNGR1)=10.248,均P=0.000),HNGR1组胶质细胞数较低(t_(HNGR1)=-3.097,P=0.004),差异均有统计学意义。(5)IL-8与miR-181的靶向关系:miR-181与IL-8存在结合位点。(6)miR-181/IL-8/TLR4通路蛋白:与CG组比较,MG组大鼠视神经miR-181、IL-8、TLR4表达较高(t_(miR-181)=33.870,t_(IL-8)=62.851,t_(TLR4)=20.802,均P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠视神经miR-181表达较低(t_(LNGR1)=13.476,t_(MNGR1)=14.420,t_(HNGR1)=11.187,均P=0.000)、IL-8表达较低(t_(LNGR1)=2.460,P=0.019;t_(MNGR1)=19.230,t_(HNGR1)=46.383,均P=0.000)、TLR4表达较低(t_(LNGR1)=8.350,t_(MNGR1)=14.185,t_(HNGR1)=11.502,均P=0.000),差异均有统计学意义。结论NGR1可降低DON大鼠血糖,改善视神经病理状况,其机制可能与调控视神经miR-181/IL-8/TLR4通路及相关炎症有关。

miR-181基因家族在临床常见疾病中的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,广泛存在于真核生物体内,能够在转录后通过抑制目的基因信使RNA(mRNA)的翻译或促进mRNA降解来调节基因表达。miRNA已成为多种生物过程的关键调控因子,各种调控机制不仅控制着它们的表达,还控制着它们的活性和生物利用度,这取决于miRNA在人类相关蛋白质编码基因的潜在结合位点。miRNA在免疫系统的发育和调控中也发挥着重要的作用,可以调控机体关键的细胞过程,包括细胞分化、血管生成和炎症反应的发生。现已发现很多生理过程和病理结果高度依赖于miRNA,包括癌症、心血管疾病和代谢性疾病。其中,miR-181基因家族在胚胎发育、细胞增殖、凋亡、自噬、线粒体功能和免疫反应等关键生物过程中发挥调节作用。该文综述了近年来miR-181基因家族在临床疾病中的诊断和治疗方向及研究前沿,以期为miRNA的临床疾病治疗提供新的思路。

外泌体源性miR-181b-5p在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的:探讨外泌体源性miR-181b-5p在急性淋巴细胞白血病患儿不同疾病阶段的表达水平差异及其与临床特点的相关性。方法:收集86例ALL患儿骨髓血浆标本,采用外泌体提取试剂盒提取血浆中外泌体,TRIzol法提取外泌体中RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测初诊组、复发组、缓解组、对照组患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平,比较分析miR-181b-5p表达水平在各组患儿中的差异,以及miR-181b-5p表达水平与临床特征之间的关系。结果:初诊和复发组ALL患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平均明显低于缓解组和对照组(P<0.05);初诊组T-ALL患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平明显高于B-ALL患儿(P<0.05);初诊组男性患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平明显高于女性患儿(P<0.01)。结论:外泌体源性miR-181b-5p在ALL儿童病程中呈动态变化,可以作为监测疾病状态的标记性miRNA;外泌体可以在肿瘤微环境中传递信息,作为生物分子靶向治疗的潜在载体。

HDCP患者血清miR-181b、PLGF、IL-17与疾病严重程度的关系及其对不良妊娠结局的预测价值

目的:探讨妊娠高血压疾病(HDCP)患者血清miR-181b、胎盘生长因子(PLGF)、白细胞介素17(IL-17)与疾病严重程度的关系及对不良妊娠结局的预测价值。方法:选取126例HDCP孕妇为研究对象,根据HDCP严重程度不同分为妊娠期高血压组(n=61)、子痫前期组(n=37)和重度子痫前期组(n=28);根据妊娠结局分为正常组(n=62)和不良妊娠组(n=64)。比较不同疾病严重程度及不同妊娠结局患者血清IL-17、PLGF、miR-181b水平,分析其与HDCP严重程度的关系及其对不良妊娠结局的预测价值。结果:不同疾病严重程度组患者血清miR-181b、IL-17及PLGF水平差异有统计学意义(P<0.05),且患者血清miR-181b和IL-17水平比较:重度子痫前期组>子痫前期组>妊娠期高血压组;PLGF水平比较:重度子痫前期组<子痫前期组<妊娠期高血压组。miR-181b和IL-17水平与HDCP严重程度正相关(P<0.05),PLGF水平与HDCP严重程度负相关(P<0.05)。早产和产后出血为主要不良妊娠结局,重度子痫前期组不良妊娠结局发生率最高(P<0.05)。不良妊娠组患者miR-181b、IL-17水平高于正常组(P<0.05),PLGF水平明显较低(P<0.05)。miR-181b(AUC=0.725,P<0.05)、IL-17(AUC=0.692,P<0.05)及PLGF(AUC=0.698,P<0.05)对不良妊娠结局均有预测价值,三者联合检测的AUC=0.792,敏感度为85.94%,特异度为64.52%。结论:血清miR-181b、PLGF、IL-17水平与HDCP严重程度相关,对不良妊娠结局有预测价值,联合检测的预测价值更高。