不同地理居群破布叶的psbA-trnH和ITS2序列及其聚类分析

目的探讨破布叶Microcos paniculata不同地理居群间的DNA序列变异与地理分布的关系,为其种质资源评价和基原植物的分子鉴定提供参考。方法对破布叶14个居群14份个体样品以改良的3×CTAB法提取基因组DNA,选择特异的引物扩增ITS2和psb A-trnH序列;PCR扩增产物直接双向测序分析。DNAMAN 8.0软件处理测序数据,MEGA6.0软件计算K2P遗传距离,运用NJ法构建系统聚类树。结果破布叶14个居群的ITS2序列均为462 bp,共检测到14个变异位点,居群间遗传距离0.000 0~0.019 8。除云南景洪居群样本的psb A-trnH序列存在8 bp缺失外,其他13个居群样本的psb A-trnH序列均长387 bp,无变异,居群间遗传距离为0.000 0。结论不同地理居群破布叶的psb A-trnH较ITS2更为保守,二者PCR扩增引物特异性好,扩增效率和测序成功率高,对其药材及基原植物的分子鉴定可采用psb A-trnH为主,ITS2序列为辅的DNA条形码技术。

RP-HPLC法同时测定布渣叶中牡荆苷和异牡荆苷的含量

目的:建立同时测定布渣叶中牡荆苷和异牡荆苷含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为SHISEIDO Capcell pak MG C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%甲酸溶液(30:70,V/V),流速为1.0ml/min,检测波长为339nm,柱温为30℃。结果:牡荆苷和异牡荆苷的进样量分别在53.40～1334.00、73.90～1847.00ng范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r均为0.9999);平均加样回收率分别为99.00%和99.37%,RSD分别为1.87%和1.77%(n均为9)。结论:本方法重复性好、操作简便、结果准确可靠,可为布渣叶的质量评价和资源利用提供试验依据。