肝细胞癌中miR-219表达对肝细胞癌干细胞特性的影响及作用机制

目的检测微小RNA(miR)-219在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及敲低其表达水平后对干细胞特性的影响。方法20例HCC患者的HCC组织和癌旁组织,采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测HCC组织、癌旁组织、HCC细胞(Huh-7、SMMC-7721和HepG2)及正常人肝细胞(L02)中miR-219表达水平。将si-NC、si-miR-219质粒转染至HepG2细胞中分别设为si-NC组和si-miR-219组,同时设置未转染质粒的Control组,并采用qRT-PCR实验验证miR-219表达水平。流式细胞术检测3组细胞中CD133+、EpCAM+细胞比例,细胞肿瘤球形成实验检测3组细胞中肿瘤球形成的数量,qRT-PCR检测3组细胞中c-Myc、SOX2、OCT4、Bmi-1和Nanog mRNA水平。结果HCC组织中miR-219表达显著高于癌旁组织,Huh-7、SMMC-7721和HepG2细胞中miR-219表达显著高于L02细胞(P<0.05)。si-miR-219组中miR-219相对表达水平、CD133+细胞比例、EpCAM+细胞比例及细胞悬浮肿瘤球形成数量显著低于Control组和si-NC组(均P<0.05)。si-miR-219组c-Myc、SOX2、OCT4、Bmi-1和Nanog mRNA水平显著低于Control组和si-NC组(P<0.05)。结论miR-219在HCC中表达水平增加,敲低其表达水平后可抑制HCC干细胞的干性表达,可能是通过降低c-Myc、SOX2、OCT4、Bmi-1和Nanog水平实现的。

晚熟耐密型玉米新品种GL219的选育及高产栽培技术

GL219是锦州市农业科学院玉米研究所以自选系L59为母本、自选系锦9-12为父本,应用美国杂交种选系×国内种质资源相互改良的杂优模式组配而成,并采用系谱法通过南繁北育、多代自交、中高代测配选育的晚熟耐密型玉米新品种。该品种丰产性好,抗倒伏倒折,抗病性强,活秆成熟,适应性广,于2022年通过辽宁省审定,适宜在辽宁晚熟区域中上等肥力或平肥地块种植。本文作者阐述了GL219的选育方法、品种来源、品种特征特性、制种技术要点,并提出了配套高产栽培技术。

氮高效型优质晚粳稻‘上农粳219’的选育及高产栽培技术

‘上农粳219’是中垦种业股份有限公司自主选育的高产、优质、多抗型水稻新品种,适合在江苏沿江地区及苏南地区推广种植。为促进‘上农粳219’的进一步推广种植,现对其选育经过、特征特性、产量表现及栽培技术进行介绍,以期为稳定江苏省及周边地区的粮食生产提供参考。

miR-219-5p靶向SOX5在口腔癌中的作用初探

目的 研究miR-219-5p与SOX5在口腔鳞状细胞癌中是否存在差异性表达,并探讨miR-219-5p对SOX5的靶向调控作用,方法 运用口腔鳞状细胞癌细胞株SCC4及SCC9,人正常皮肤成纤维细胞系(HF)作为对照,对miR-219-5p与SOX5在个细胞系中的表达情况进行检测(RT-qPCR、Western blot);并在SCC4及SCC9细胞株中验证miR-219-5p对SOX5表达的靶向调控作用。结果 与正常人纤维细胞相比,miR-219-5p的表达水平显著降低,而SOX5的表达水平显著增加,差异有统计学意义(P <0.05);miR-219-5p与SOX5的表达水平具有负相关(P <0.05);在SCC4及SCC9细胞中,miR-219-5p通过结合3’非编码区(3’-UTR)靶向调控SOX5的表达。结论 miR-219-5p可能通过对SOX5的靶向调控参与了口腔鳞状细胞癌的发生发展,为协助临床预后评估和/或筛选治疗的新候选药物提供了科学依据。

紫杉醇3周给药联合顺铂化疗对非小细胞肺癌患者miR-564、miR-219表达及预后的影响

目的:分析紫杉醇3周给药联合顺铂化疗对非小细胞肺癌患者癌组织miR-564、miR-219表达及预后的影响。方法:将106例非小细胞肺癌患者,依据治疗方案不同分为观察组(n=53)和对照组(n=53)。观察组行紫杉醇3周给药联合顺铂化疗,紫杉醇第1天给药135~175 mg/m^(2),顺铂第2天给药75 mg/m^(2),21 d为1个周期;对照组行紫杉醇每周给药联合顺铂化疗,紫杉醇第1、8、15天给药,静脉滴注45~60 mg/m^(2),顺铂第2天给药,静脉滴注75 mg/m^(2),21 d为1个周期;两组均重复6个周期。治疗前后取两组的癌组织,以qRT-PCR法测定组织中miR-564和miR-219表达,并比较两组患者近期疗效、远期疗效和不良反应发生情况。结果:与治疗前比较,治疗后两组患者肺癌组织miR-219、miR-564表达水平均升高(P<0.05),但组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组近期疗效、1年生存率、复发率和转移率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组不良反应比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:紫杉醇3周与每周给药联合顺铂化疗方案都可以改善非小细胞肺癌患者癌组织miR-564、miR-219表达水平,但对患者近期疗效、远期疗效和不良反应影响无明显差异。

BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p影响NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡

目的:探讨BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p调控非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:qRT-PCR检测BSN-AS2和miR-219a-5p在NSCLC组织和细胞系中的表达;原位杂交FISH检测BSN-AS2和miR-219a-5p的信号强度;双荧光素酶报告基因检验miR-219a-5p靶向调控BSN-AS2;Transwell、CCK8和Tunel细胞凋亡分别检测BSN-AS2-miR-219a-5p轴对侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响;构建NSCLC裸鼠皮下移植瘤模型进行验证BSN-AS2-miR-219a-5p轴的调控作用。结果:BSN-AS2在NSCLC组织和细胞系中高表达,miR-219a-5p为低表达,BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p;siBSN-AS2组抑制NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,且促进细胞凋亡,而In-miR-219a-5p组促进NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡,siBSN-AS2+In-miR-219a-5p组相比siBSN-AS2组促进了NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡;BSN-AS2增加体内肿瘤细胞增殖和肿瘤生长,miR-219a-5p则能抑制。结论:BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p促进NSCLC细胞侵袭、迁移和增殖,且抑制凋亡,而干扰BSN-AS2-miR-219a-5p轴可能作为抗NSCLC的新靶点。

微RNA-219通过ERK1/2通路改善炎症所致新生SD大鼠脑内少突胶质细胞成熟障碍

目的建立新生SD大鼠炎症模型,初步探究微RNA-219(miR-219)促进少突胶质细胞成熟的机制。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、脂多糖(LPS)组(LPS 0.15 mg/kg腹腔注射)、LPS+miR-219 agomir组(LPS 0.15 mg/kg腹腔注射,miR-219 agomir 3μL侧脑室注射)、miR-219 antagomir组(miR-219 antagomir 3μL侧脑室注射)和LPS+miR-219 agomir+U0126组(LPS 0.15 mg/kg腹腔注射,miR-219 agomir 3μL侧脑室注射,U012630 mg/kg腹腔注射)。于大鼠出生第7天和第14天处死后取脑组织,采用qPCR检测脑组织中miR-219及炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测少突胶质细胞成熟标志物髓鞘碱性磷脂蛋白(MBP)和ERK 1/2表达水平,免疫荧光检测大鼠胼胝体少突胶质细胞的数量。结果与对照组相比,大鼠腹腔注射LPS后脑组织内IL-1β、TNF-αmRNA表达均升高(P<0.01),miR-219表达减少(P<0.01)。与LPS组相比,在用miR-219 agomir提升大鼠脑内miR-219的表达后MBP和ERK 1/2蛋白表达均增加(P<0.01),胼胝体少突胶质细胞数量增加。与对照组相比,在用miR-219 antagomir降低大鼠脑内miR-219的表达后,MBP和ERK 1/2蛋白表达均减少(P<0.01),胼胝体少突胶质细胞数量减少。用ERK 1/2通路抑制剂U0126处理后,miR-219对少突胶质细胞的促成熟作用受到了抑制(P<0.01)。结论在大鼠脑内miR-219对少突胶质细胞的促成熟作用是通过ERK 1/2通路发挥作用的。

玉米新品种禾盛219的选育及高产制种技术

为了促进甘肃省玉米产业提质增效发展,培育丰产、稳产、优质玉米新品种,实现品种培优、品质提升、品牌打造和标准化生产,甘肃禾盛种植农民专业合作社与甘肃省白银市种子站等科研单位合作以自育系HS44为母本、自育系HS41为父本配制杂交组合,经过多年穗行种植鉴定与株系筛选、品种比较试验、甘肃省区域试验、生产试验以及DNA指纹检测、DUS测试、品质化验、抗性鉴定等育种环节,培育出了高产优质玉米杂交种禾盛219,2022年通过甘肃省农作物品种审定委员会审定,适宜在甘肃省中晚熟春玉米生态类型区种植。

胃癌组织中miR-219a-5p的表达及其临床意义

目的 探讨miR-219a-5p在胃癌组织中的表达状况,并分析其与临床病理特征、生存预后的关系。方法 分析2019年1月至2021年12月于苏州大学附属第二医院行手术治疗的102例胃癌患者临床资料。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测比较患者胃癌组织和癌旁组织蜡块中miR-219a-5p相对表达量。比较不同临床病理特征、生存预后情况患者的胃癌组织miR-219a-5p相对表达量,并分析患者胃癌组织miR-219a-5p相对表达量对其生存预后的判断效能。结果 患者胃癌组织中miR-219a-5p相对表达量明显低于其癌旁组织,差异有统计学意义(t=22.297,P<0.05)。随着TNM分期增加,胃癌组织miR-219a-5p相对表达量降低,差异有统计学意义(F=8.879,P<0.05);随着肿瘤分化程度升高,胃癌组织miR-219a-5p相对表达量升高,差异有统计学意义(F=15.588,P<0.05);有远处转移患者胃癌组织miR-219a-5p相对表达量低于无远处转移患者,差异有统计学意义(t=5.233,P<0.05);有肌层浸润患者胃癌组织miR-219a-5p相对表达量低于无肌层浸润患者,差异有统计学意义(t=6.331,P<0.05)。患者随访至2022年10月的死亡率为10.78%(11/102),且死亡患者的胃癌组织miR-219a-5p相对表达量低于存活患者(t=4.544,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,胃癌组织中miR-219a-5p相对表达量预测术后1年内的胃癌患者死亡的曲线下面积为0.890(95%CI:0.823~0.958),判断阈值为0.426时,敏感度为81.82%,特异度为92.31%。结论 miR-219a-5p在胃癌组织中的表达下调,且与临床病理TNM分期和分化程度、生存预后相关。

miR-219在妊娠期糖尿病大鼠心肌损伤中的作用及其机制

目的探讨miR-219在妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)大鼠心肌损伤的作用及潜在分子机制。方法SD大鼠随机分为对照组(normal组)、模型组(model组)、抑制物阴性对照组(NC inhibitor组)、miR-219抑制物组(miR-219 inhibitor组)、miR-219抑制物+阴性对照质粒组(miR-219 inhibitor+NC-siRNA组)、miR-219抑制物+GSK-3β-siRNA质粒组(miR-219 inhibitor+GSK-3β-siRNA组),每组10只。model组大鼠采用腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素(STZ)构建GDM大鼠模型。NC inhibitor组、miR-219 inhibitor组、miR-219 inhibitor+NC-siRNA组、miR-219 inhibitor+GSK-3β-siRNA组大鼠在构建GDM模型后分别经尾静脉注射NC inhibitor、miR-219 inhibitor、miR-219 inhibitor+NC-siRNA、miR-219 inhibitor+GSK-3β-siRNA治疗。检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶-MB(CK-MB)水平;HE染色观察心肌组织病理变化;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-219和GSK-3βmRNA的表达;Western blotting检测心肌组织中Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达;ELISA试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的含量。双荧光素酶报告基因实验验证miR-219和GSK-3β的靶向关系。结果与normal组比较,model组大鼠中miR-219水平显著升高,GSK-3βmRNA水平显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示GSK-3β是miR-219的靶基因。与normal组比较,model组和NC inhibitor组大鼠血清中FBG、HbAlc、hs-CRP、cTnI、CK-MB水平显著升高(P<0.05);心肌细胞排列紊乱,心肌纤维水肿严重,部分肌原纤维断裂,横纹消失;心肌组织中Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著升高(P<0.05);SOD、NOS活性和NO含量降低,MDA含量升高(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-219 inhibitor组、miR-219 inhibitor+NC-siRNA组大鼠血清中FBG、HbAlc、hs-CRP、cTnI、CK-MB水平显著降低;心肌细胞排列较整齐,仅有少量心肌纤维肿胀;心肌组织中Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著降低(P<0.05);SOD、NOS活性和NO含量升高,MDA含量降低(P<0.05)。与miR-219 inhibitor+NC-siRNA组比较,miR-219 inhibitor+GSK-3β-siRNA组大鼠血清中FBG、HbAlc、hs-CRP、cTnI、CK-MB水平显著升高;心肌损伤加重,心肌细胞排列较紊乱,大量肌原纤维结构断裂;Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著升高(P<0.05);SOD、NOS活性和NO含量降低,MDA含量升高(P<0.05)。结论GDM大鼠中miR-219水平显著升高,下调miR-219可减轻GDM大鼠心肌损伤,其机制可能通过靶向GSK-3β发挥作用。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨丙泊酚调控miR-219-5p抑制肝癌细胞增殖、侵袭的作用机制

目的:探讨丙泊酚调控mi R-219-5p抑制肝癌细胞增殖、侵袭的作用机制。方法:体外培养人肝癌细胞株Huh7,分为空白组、2、5、10μg/ml丙泊酚组和丙泊酚+干扰mi R-219-5p组;PCR检测细胞mi R-219-5p表达;MTT检测丙泊酚对肝癌细胞的增殖抑制作用;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移率;Western blot检测β-catenin、c-Myc蛋白含量。结果:与空白组相比,不同浓度丙泊酚组mi R-219-5p表达升高,细胞增殖被抑制,侵袭能力减弱,迁移率降低,β-catenin、c-Myc蛋白表达降低,且呈浓度依赖性(P<0.05);与丙泊酚各组比较,丙泊酚+干扰mi R-219-5p组增殖抑制能力减弱,侵袭能力增强,迁移率升高,β-catenin、c-Myc蛋白含量升高(P<0.05)。结论:丙泊酚可通过上调mi R-219-5p表达抑制肝癌细胞增殖和侵袭,其机制可能为调控Wnt/β-catenin信号通路。

国道219沿线崩滑地质灾害隐患遥感调查及发育分布规律

国道219北起新疆喀什地区叶城县,南至西藏日喀则市拉孜县,沿线地形条件复杂、气候恶劣、人烟稀少,地质灾害隐患地面调查工作开展难度大,遥感技术是进行该地地质灾害隐患研究不可或缺的手段之一。根据遥感影像上色调、形态、纹理、阴影等特征建立崩塌隐患、滑坡隐患的遥感解译标志,在国道219沿线共识别出崩滑隐患126处,其中岩质滑坡隐患39处、土质滑坡隐患6处、岩质崩塌隐患81处。结合斜坡坡度、岩(土)体类型、地质构造和斜坡结构,分析了崩滑隐患的影响因素和空间分布规律,划分出4个集中分布区,分别为萨嘎集中分布区(Ⅰ)、索得—唐热集中分布区(Ⅱ)、日松—多玛集中分布区(Ⅲ)和西昆仑集中分布区(Ⅳ)。结果显示,位于斜坡上部的崩滑地质灾害隐患具有高位链式灾害的特征,灾害过程隐蔽性强、运动距离远、破坏性大,在地质灾害防治工作中应尤为注重此类灾害的研究。研究成果可为沿线防灾减灾工作及重大工程建设规划提供参考。

血清miR-219a-5p在孤立性眩晕患者中的表达及临床意义

目的探讨血清miR-219a-5p在孤立性眩晕患者中的表达水平及临床意义。方法将我院2021年4月至2022年8月住院治疗的66例孤立性眩晕患者设为研究组,另选取同期66例健康体检者为对照组;采用qRT-PCR法检测血清miR-219a-5p的相对表达水平,并分析miR-219a-5p表达水平与患者临床病理参数的关系;采用ELISA法测定TNF-α和IL-6表达水平;采用Pearson法分析孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p与TNF-α、IL-6表达的相关性;采用Logistic回归分析发生孤立性眩晕的影响因素;采用ROC曲线分析血清miR-219a-5p对孤立性眩晕患者的诊断价值。结果与对照组相比,孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p表达水平明显降低(P<0.05),TNF-α与IL-6表达水平均明显升高(P<0.05)。miR-219a-5p表达水平与患者空腹血糖、总胆固醇、TNF-α及IL-6水平有关(P<0.05)。Pearson分析结果显示,孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p与TNF-α呈负相关(r=-0.310,P<0.05),孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p与IL-6呈负相关(r=-0.361,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-219a-5p、TNF-α、IL-6均是发生孤立性眩晕的影响因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-219a-5p诊断孤立性眩晕的AUC为0.884(95%CI 0.817~0.933),截断值为0.95,灵敏度为96.97%,特异性为74.24%,Youden指数为0.7121。结论miR-219a-5p在孤立性眩晕患者血清中低表达,TNF-α与IL-6在孤立性眩晕患者血清中高表达,血清miR-219a-5p分别与TNF-α、IL-6呈负相关,三者均是发生孤立性眩晕的影响因素,且miR-219a-5p对孤立性眩晕具有良好的诊断效能,检测miR-219a-5p水平有望成为早期预估孤立性眩晕疾病发生的潜在血清学指标。

血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断子宫内膜癌及预判淋巴结转移的价值分析

目的:探讨血清微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、miR-219-5p诊断子宫内膜癌(Endometrial carcinoma,EC)及预判淋巴结转移的临床价值。方法:选取我院2019年2月到2022年2月收治的120例子宫内膜癌患者为观察组,另选取同期健康体检女性100例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测纳入对象血清miR-205-5p、miR-219-5p水平,比较两组血清miR-205-5p、miR-219-5p水平,同时分析血清miR-205-5p、miR-219-5p水平与EC患者病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-205-5p和miR-219-5p水平对EC淋巴结转移的预测价值,多因素Logistic回归分析探讨子宫内膜癌淋巴结转移的相关因素。结果:观察组血清miR-205-5p水平高于对照组,miR-219-5p低于对照组(P<0.05);子宫内膜癌患者血清miR-205-5p、miR-219-5p水平与病理类型、FIGO分期、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移有关(P<0.05)。血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断子宫内膜癌的AUC为0.732、0.746,预判淋巴结转移的AUC为0.753、0.787。多因素Logistics回归分析显示,血清miR-205-5p高表达(OR=2.44,95%CI:1.62~3.67)、miR-219-5p低表达(OR=4.89,95%CI:2.55~9.39)均为子宫内膜癌淋巴结转移的危险因素(P<0.05)。结论:血清miR-205-5p在子宫内膜癌患者血清中呈高表达,miR-219-5p呈低表达,二者均与患者肌层浸润、淋巴结转移有关。

miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ的变化

目的观察miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1(DISC1)及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CaMK2γ)的变化,探讨氯胺酮诱发精神分裂症样不良反应的相关机制。方法采用随机数字表法将N2a细胞分为三组,分别加入DMEM培养液(C组),1μmol/L氯胺酮(K组),1μmol/L氯胺酮+anti-miRNA-219转染(KA组)培养。定量分析miRNA-219,检测DISC1和CaMK2γ。结果与C组相比,K组miRNA-219及DISC1表达显著下调,CaMK2γ显著上调(P<0.01);与K组相比,KA组miRNA-219及DISC1表达显著上调,CaMK2γ显著下调(P<0.01)。结论 miRNA-219下调可介导氯胺酮引起的N2a细胞中DISC1下调及CaMK2γ上调。

microRNA-219-2-3p在胃癌中的表达及其作用机制初探

目的探讨microRNA-219-2-3p(miR-219-2-3p)与胃癌的相关性及机制。方法运用实时聚合酶链反应(real timeRT PCR)检测82份配对的胃癌组织和周围正常组织样本中的miR-219-2-3p的表达水平。在胃癌细胞株MGC803中过表达miR-219-2-3p后,测定细胞增殖活性,并在细胞株和胃癌组织标本中采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定与肿瘤增殖相关的蛋白ERK1/2表达水平。结果 miR-219-2-3p在晚期胃癌组织中的表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。在胃癌细胞株MGC803中过表达miR-219-2-3p后细胞增殖受显著抑制(P<0.05)。过表达miR-219-2-3p后,MGC803细胞中的ERK磷酸化水平显著下降,总ERK表达量不变。在组织标本中,胃癌组织的ERK磷酸化(p-ERK)水平明显高于周围癌旁组织。结论 miR-219-2-3p可能通过参与调控ERK1/2信号通路而在胃癌发生和发展中起抑癌基因的作用。

长链非编码CCAT1靶向miR-219a对宫颈癌Hela细胞生长、侵袭和迁移的调节作用

目的探究长链非编码RNA结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的调节作用及作用机制。方法 RT-PCR法检测CCAT1 shRNA(sh-CCAT1)转染细胞后CCAT1的表达水平和sh-CCAT1+miR-219a inhibitor或CCAT1+miR-219a mimic转染细胞后miR-219a的表达情况。荧光素酶报告实验验证CCAT1和miR-219a的靶向关系。流式细胞术和CCK-8法检测细胞生存能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞增殖、凋亡和迁移相关蛋白的表达。结果 sh-CCAT1能显著抑制CCAT1的表达并能显著减弱miR-219a inhibitor对miR-219a表达的抑制作用;CCAT1能明显减弱miR-219a mimic诱导miR-219a表达的作用;同时,荧光素酶报告实验表明CCAT1和miR-219a存在靶向关系;sh-CCAT1能显著抑制Hela细胞增殖及侵袭、诱导细胞凋亡;miR-219a inhibitor能显著减弱sh-CCAT1对Hela细胞增殖、侵袭的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用;此外,sh-CCAT1还能明显抑制Ki67和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达、促进半胱天冬酶(Caspase-3)表达,miR-219a inhibitor能明显减弱sh-CCAT1对Ki67、MMP-9和Caspase-3表达的调控作用。结论CCAT1能通过下调miR-219a表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移、抑制细胞凋亡。

miR-219与TGFBR2的调控关系在肾脏纤维化中的作用

目的:研究微小RNA-219(miR-219)通过靶向调控转化生长因子βⅡ型受体(TGFBR2)在肾脏纤维化中发挥的作用。方法:收集2017年9月～2018年3月于我院就诊的70例肾脏纤维化患者,选取同期来本院体检的20例健康人设为对照组,RT-qPCR检测肾脏纤维化患者及对照组血清中miR-219的表达水平,并检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠肾成纤维细胞NRK49F后miR-219的表达水平。Western blot检测转染miR-219模拟物(miR-219 mimics)的NRK49F细胞在AngⅡ刺激后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达情况。筛选出miR-219的潜在靶基因TGFBR2,并通过萤光素酶报告基因法进行验证。RT-qPCR和Western blot检测miR-219 mimics对TGFBR2的mRNA及蛋白表达的影响。RT-qPCR检测miR-219 mimics对α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和COL3A1的mRNA表达水平的影响。构建单侧输尿管闭塞(UUO)小鼠模型并检测其肾脏组织中miR-219的表达水平,对UUO小鼠注射miR-219后观察肾脏纤维化的变化情况,并检测COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平。结果:肾脏纤维化患者血清中miR-219的表达水平明显低于对照组,UUO小鼠肾脏组织中miR-219的表达显著下降(P<0.01);AngⅡ刺激NRK49F细胞后miR-219的表达水平明显降低,且miR-219 mimics可抑制α-SMA蛋白的表达(P<0.01);miR-219 mimics对TGFBR2具有靶向调控作用,可抑制TGFBR2的mRNA及蛋白表达;miR-219 mimics可抑制α-SMA、CTGF、COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平;miR-219可下调UUO小鼠中COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平并抑制其肾脏纤维化进程。结论:miR-219可通过抑制TGFBR2的表达从而抑制肾脏纤维化的发展,可能成为肾脏纤维化诊断及治疗的新靶点。

miR-219-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡与侵袭的 影响及其机制

目的:探索miR-219-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、凋亡及侵袭的影响,并探讨其机制。方法:采用RT-PCR检测miR-219-5p在NSCLC细胞系H1299,A549,H1975及正常肺上皮细胞系BEAS-2B中的表达。将NSCLC细胞系H1299分成对照组和miR-219-5p组,用Lipofectamine 2000分别转染miR-219-5p scramble和miR-219-5p mimics,采用MTT法、流式细胞术及Transwell实验分别检测比较两组细胞增殖、凋亡及侵袭能力,Western印迹测定表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及裂解型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP ribose polymerase,PARP)在两组细胞中的表达。结果:miR-219-5p在H1299,A549和H1975细胞系中的表达量均低于BEAS-2B,差异有统计学意义(P<0.05);MTT实验显示在48,72,96及120 h,miR-219-5p组OD490 nm值显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-219-5p组细胞凋亡率显著高于对照组(13.33%±1.20%vs 3.43%±0.12%),差异有统计学意义(P<0.01);miR-219-5p组侵袭细胞数显著少于对照组(67.5±9.9 vs 189.5±16.7),差异有统计学意义(P<0.05);miR-219-5p组EGFR蛋白相对表达量为0.35±0.07,miR-219-5p组EGFR蛋白相对表达量显著低于对照组(1.0),差异有统计学意义(P<0.01);miR-219-5p组裂解型PARP蛋白相对表达量显著高于对照组(2.74±0.17 vs 1.0),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-219-5p可抑制NSCLC的细胞增殖和侵袭并促进其凋亡,其机制可能与下调EGFR及上调PARP的表达有关。