血吸虫对吡喹酮抗药性的研究 Ⅺ日本血吸虫中国大陆现场分离株虫卵毛蚴尾蚴对吡喹酮的敏感性

目的测定日本血吸虫中国大陆主要流行区现场分离株虫卵、毛蚴和尾蚴阶段对吡喹酮的敏感性,为建立日本血吸虫吡喹酮敏感性检测技术提供基础。方法分别从中国湖南、湖北、江西、安徽、江苏和云南6省日本血吸虫病流行区病人粪便标本中分离虫卵,建立日本血吸虫现场分离虫株;采用实验室已有的3株曼氏血吸虫株为对照。将各虫株虫卵分别孵育于5×10-6、10-6、5×10-7、10-7mol/L吡喹酮溶液中24h后移至清水孵化,观察虫卵的孵化率。将各虫株毛蚴分别暴露于5×10-6、10-6、5×10-7、10-7mol/L吡喹酮溶液中,0、1、5min后观察比较毛蚴的运动及形态学变化。将各虫株尾蚴分别暴露于10-5、6×10-7、4×10-7、10-7mol/L吡喹酮溶液中,0、20、40、60、80、100min后,解剖镜下观察尾蚴的泳动、收缩和断尾率的变化。并将结果与曼氏血吸虫株进行比较。结果经10-6,5×10-7、10-7mol/L吡喹酮溶液中24h后,日本血吸虫虫卵的孵化率分别为0.52%、11.90%和49.15%,曼氏血吸虫分别为4.17%、31.37%和92.53%。当暴露于10-6mol/L吡喹酮1min后,日本血吸虫毛蚴的变形率为100.00%,曼氏血吸虫为55.73%;当分别暴露于5×10-7、10-7mol/L吡喹酮5min后,日本血吸虫毛蚴的变形率为96.82%和21.80%,曼氏血吸虫毛蚴为21.80%和0。当暴露于10-5mol/L吡喹酮中40min,日本血吸虫尾蚴的断尾率为96.75%,曼氏血吸虫为28.30%;暴露于4×10-7mol/L吡喹酮中100min,日本血吸虫尾蚴的断尾率为95.82%,曼氏血吸虫为11.40%;当暴露于10-7mol/L吡喹酮中80min,日本血吸虫尾蚴的断尾率为29.65%,曼氏血吸虫尾蚴为0。结论日本血吸虫各现场分离株间在虫卵、毛蚴和尾蚴阶段对吡喹酮的敏感性无明显差异,但均明显高于曼氏血吸虫。研究提示,将毛蚴移入5×10-7mol/L吡喹酮溶液中1min,镜下观察其变形率,可作为日本血吸虫对吡喹酮敏感性的观察指标,可用于现场判断病人化疗失败的原因是否是由于吡喹酮不敏感株产生所引起。将尾蚴移入4×10-7mol/L吡喹酮溶液中80～100min,镜下观察其断尾率,可用于螺体内虫株吡喹酮敏感性监测。

日本血吸虫毛蚴对钉螺趋向作用的观察

目的观察日本血吸虫毛蚴对钉螺的趋向作用。方法采用改良的Roberts比较法,将Roberts比较法中上层的“ф”形容器由有机玻璃制作并粘合,改为无需粘合的石蜡和玻璃板制成,用此方法检测了经螺蛳处理过的水(snailconditionedwater,SCW)和Mg2+对日本血吸虫毛蚴趋向钉螺的影响。结果加20μl的80只钉螺在40ml去氯水中生活4d的SCW和加20μl的100只钉螺在100ml去氯水中生活10d的SCW,都能影响日本血吸虫毛蚴的趋向,其能力似与浓度有关,加入5μl或20μl的0.10mol/LMg2+也能够影响日本血吸虫毛蚴的趋向运动。结论钉螺可能会释放吸引日本血吸虫毛蚴的物质。Mg2+能促进日本血吸虫毛蚴趋向钉螺。

离子对日本血吸虫毛蚴趋向的影响

目的研究几种常见离子对日本血吸虫毛蚴趋向作用的影响。方法采用改良的Roberts比较法,以不同浓度的Fe3+、Ca2+、Fe2+、Na+、NH4+、Mg2+、Al3+溶液为实验组,等量去离子水作为对照组,检测这些离子对日本血吸虫毛蚴趋向作用的影响。结果Fe3+、Mg2+、Al3+对日本血吸虫毛蚴趋向的影响为显著吸引作用;Fe2+、Ca2+为排斥作用;NH4+和Na+对日本血吸虫毛蚴趋向的影响依离子浓度不同而有差异。结论不同的离子对日本血吸虫毛蚴趋向运动有不同的影响。

日本血吸虫毛蚴存活曲线和期望寿命的实验观察

目的准确掌握日本血吸虫毛蚴从虫卵中孵化出后，在脱氯水中的存活时间。方法采用收集新鲜成熟兔肝虫卵孵化毛蚴，分组、定时、整群在解剖镜下观察的方法，对毛蚴在２０℃和２５℃有光照的两种状态水体中的存活情况进行实验观察。结果在２０℃时日本血吸虫毛蚴的期望寿命为１０．１１ｈ．最长存活时间为 ３８ｈ；在２５℃时日本血吸虫毛蚴的期望寿命为９．０７ｈ，最长存活时间为２６ｈ；两种温度状态下，毛蚴存活曲线属Ｂ型曲线。结论室内进行毛蚴感染钉螺实验时，感染时间应控制在１０ｈ内为宜。

日本血吸虫病快速粪便毛蚴孵化法检测研究

本试验通过快速法、尼龙筛法和直孵法检测粪便毛蚴孵出率,结果表明快速法毛蚴相对孵出率为100%,而传统的尼龙筛法为81.2%～84.6%,直孵法为4.0%～36.9%。经生物学统计,快速法和尼龙筛法毛蚴孵出率极显著地高于直孵法(P<0.01),而快速法与尼龙筛法之间的毛蚴孵出率差异不显著(P>0.05)。快速法比较简便实用。

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅱ 曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株虫卵和毛蚴对吡喹酮的反应性

目的 比较曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株虫卵和毛蚴对吡喹酮的反应性 ,旨在运用敏感株与抗性株反应性间的差异 ,建立简单快速吡喹酮敏感性检测方法。方法 将各株虫卵分别孵育于 5× 10 -6、10 -6、5× 10 -7mol/ L和 10 -7mol/ L吡喹酮溶液中 2 4h,后移至清水孵化 ,比较虫卵的孵化率。将各株毛蚴分别暴露于 10 -3 、10 -4 、10 -5、5× 10 -6、10 -6、5× 10 -7mol/ L和 10 -7mol/ L吡喹酮溶液中 ,0、1、5 min后观察比较毛蚴的运动及形态学变化。结果 经 10 -6mol/ L 和 5× 10 -7mol/L吡喹酮孵育 2 4h后 ,敏感株血吸虫虫卵的孵化率分别为 4.2 %和 3 0 .7% ,抗性株分别为 2 4.2 %和61.2 %。当毛蚴暴露于 5× 10 -6mol/ L吡喹酮中 ,敏感株 10 0 %毛蚴体中部立刻收缩变形 ,而抗性株仅见 13 .4%毛蚴变形 ;当暴露于 10 -6mol/ L 吡喹酮 0、1、5 min后 ,敏感株毛蚴的变形率分别为3 5 .5 %、63 .9%、91.2 % ;抗性株分别为 0、7.6%、14 .3 %。结论 曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株虫卵与毛蚴阶段对吡喹酮的体外反应性的差异均非常显著。提示 ,将毛蚴移入 10 -6mol/ L吡喹酮溶液中 1min,镜下观察其变形率 ,作为曼氏血吸虫对吡喹酮敏感性的检测方法 。

大片形吸虫幼虫的培育及其感染小鼠的研究

本试验旨在培育大片形吸虫囊蚴,着重研究大片形吸虫在中间宿主体内的发育过程和临床病理变化。人工培养和孵化大片形吸虫虫卵,用孵化出来的大片形吸虫毛蚴感染中间宿主小土蜗螺,收集大片形吸虫囊蚴,再用囊蚴感染试验小鼠。结果显示,囊蚴经口感染试验小鼠后1周即可在肝脏找到虫体,幼虫可在小鼠体内发育生存7~8周,随着时间的推移和感染囊蚴数量不同,可给小鼠肝脏造成不同程度的病变,甚至造成死亡。剖检小鼠可见肝脏质地脆,颜色发黄,脾脏肿大等严重病理变化。因此,可利用小鼠作为大片形吸虫幼虫感染的试验动物,进行片形吸虫病的早期诊断、免疫预防和治疗等方面的研究。

吡喹酮注射液对水牛血吸虫病的临床治疗效果

采用粪便毛蚴孵化法筛选自然感染血吸虫病水牛,考察30%吡喹酮注射液对水牛血吸虫病的临床治疗效果。在实验性临床试验中,将自然感染血吸虫病水牛随机分为5组,分别为吡喹酮注射液高(20 mg/kg)、中(10mg/kg)、低(5mg/kg)剂量组,吡喹酮片组(30mg/kg)和阳性对照组(不用药组)。给药30d后,吡喹酮注射液高、中、低剂量组及吡喹酮片组的粪便毛蚴孵化转阴率分别为100.0%、100.0%、77.8%和85.7%。在扩大临床试验中,将自然感染血吸虫病水牛随机分为2组,分别为吡喹酮注射液推荐剂量组(10mg/kg)和吡喹酮片组(30mg/kg),给药30d后,吡喹酮注射液组的52头患牛的粪便毛蚴孵化转阴率为100%,吡喹酮片组的6头患牛的粪便毛蚴孵化转阴率为100%。研究结果表明,30%吡喹酮注射液对水牛血吸虫病具有良好的治疗效果,给药方便,可以替代传统内服片剂,临床推荐剂量为10mg/kg。

日本血吸虫毛蚴对不同密度和距离湖北钉螺易感性的初步实验观察

为探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum)毛蚴对不同密度、不同距离湖北钉螺(Oncomelania hupensis)易感性,在现场环境下,采用20 000条新鲜孵化出的日本血吸虫毛蚴分别感染1、2、3、5 m处的湖北钉螺,每处钉螺分为5、10、50、100只/袋4个密度组,感染4 h后带回实验室饲养,8周后解剖观察钉螺感染情况。结果发现,距离1、2、3、5 m,密度5、10、50、100只/袋4个组钉螺感染率分别为7.06%、4.35%、2.47%和1.23%;4.55%、4.44%、4.11%和2.27%;2.62%、1.58%、1.29%和1.1%;2.36%、4.04%、2.73%和1.5%。研究表明,钉螺感染概率与距毛蚴投放的距离成反比;但是,未得出钉螺感染率与钉螺密度之间的线性关系。

温度对硫酸亚铁铵抑制血吸虫毛蚴趋向运动的影响

目的：观察硫酸亚铁铵对毛蚴的趋向怍用及温度的影响。方法：采用改良的Rorbert比较法。以0．2mol／L硫酸亚铁链溶液为实验组，等量去离子水怍为对照组．检测不同温度下硫酸亚铁铵对日本血吸虫毛蚴趋向作用的影响。结果：15℃左右环境下，硫酸亚铁铵显示为吸引作用，随温度升高出现排斥现象．尤其在27℃左右．药物排斥作用极为明显．此温度也正是毛蚴活动、繁殖的适宜温度；在31～35℃，药物仍然能够发挥有救的排斥作用。结论：硫酸亚铁链具良好的抑制毛蚴侵入钉蜾的作用，在血吸虫流行地区．春夏之交可能是最适应施用该药的季节。

肝片吸虫虫卵的人工孵化及感染萝卜螺试验

采用自然感染肝片吸虫的牛肝,用人工分离的方式取出肝脏、胆囊中的虫卵及肝片吸虫子宫中的虫卵,分别在池塘水、无氯自来水和冷开水中进行人工培养观察。结果表明:在实验室室温下(15～21℃)虫卵发育较缓慢,至第31d才孵出毛蚴。恒温条件(28℃)下只需10～13d即可孵出毛蚴。用无氯自来水孵化较好,用椭圆萝卜螺(Radixswinhoei)进行感染并能在其中顺利发育。

水环境对硫酸亚铁胺抑制日本血吸虫毛蚴趋向运动的影响

目的探索硫酸亚铁胺抑制日本血吸虫毛蚴侵入钉螺的最佳水环境。方法采用改良的Rorbert比较法,以0.2 mol/L硫酸亚铁胺溶液进行实验,等量去离子水作为对照组,比较不同pH、不同水硬度和盐度对硫酸亚铁胺抑制日本血吸虫毛蚴侵入钉螺的影响。结果在pH(6～10)的环境对硫酸亚铁胺抑制日本血吸虫毛蚴趋向运动无显著的影响。随着溶液的酸碱度在相对安全的范围内改变,毛蚴的趋向仍为排斥作用;水的硬度对硫酸亚铁胺抑制日本血吸虫毛蚴趋向运动无显著的影响;而水中盐度变化时,硫酸亚铁胺对日本血吸虫毛蚴大多仍呈排斥作用。结论以上结果说明硫酸亚铁胺无论在酸性或碱性土壤环境中都具有较好地抑制毛蚴侵入钉螺的作用;水硬度和含盐度在一定范围内变动对硫酸亚铁胺抑制日本血吸虫毛蚴趋向作用无显著影响。

三峡建坝后长江江苏段水位变化对血吸虫病流行影响的研究 Ⅲ.不同水深对血吸虫虫卵孵化、毛蚴感染钉螺的影响

为研究三峡建坝后长江江苏段水位春季提早升高对血吸虫及血吸虫病传播的影响，对不同深度水下血吸虫虫卵的孵化率及水下钉螺对毛蚴的易感性进行了观察。结果显示，水淹深度与水下血吸虫虫卵孵化率及水下钉螺对毛蚴的易感性均呈非常显著负相关。研究提示，三峡建坝后４ 月份提早浅水水淹有利于受淹滩上虫卵的孵化及毛蚴感染钉螺。

一种检测血吸虫毛蚴趋向作用的方法

目的提供一种检测血吸虫毛蚴趋向作用的新方法从而弥补改良的Roberts比较法的不足。方法利用SCW对毛蚴具有吸引作用这一结论设置对比实验,即用清水和SCW溶液分别吸引毛蚴,在钉螺模拟装置中计数检测的钉螺毛蚴数量,进行统计分析,得出结论。结果 A号钉螺模拟装置中(装有去氯水)分别检测到钉螺数:第一组:0只,第二组:1只,第三组:0只,第四组:2只;B号钉螺模拟装置中(装有SCW溶液)分别检测到钉螺数:第一组:7只,第二组:9只,第三组:11只,第四组:8只;经统计学计算P<0.001。结论与改良的Roberts(Φ形容器图3)相比,该装置具有制取和设计简便,取材方便,计数方便,方法简捷,更能准确的证明毛蚴的趋向作用,为研究工作节约了大量时间。

钉螺与血吸虫的共生机制

钉螺是血吸虫的唯一中间宿主,也是血吸虫病流行的重要环节,其在血吸虫病传播中发挥重要作用。本文从毛蚴入侵钉螺、胞蚴的发育、尾蚴的成熟与逸出和血吸虫寄生对钉螺的影响4个方面对钉螺与血吸虫的共生机制予以综述,旨在为揭示钉螺与血吸虫的共生关系提供文献数据。但是,血吸虫与钉螺的寄生关系较为复杂,二者共生的机制尚未完全阐明,有待更进一步的探讨。

营养因素对日本血吸虫毛蚴人工转变母胞蚴及体外培养的影响

本文报道了4种培养基、4种血清、不同浓度的半乳糖、二巯基苏糖醇及部分三羧酸循环中间产物对日本血吸虫毛蚴体外转变为母胞蚴及其存活的影响。发现稀释一倍的RPMI 1640加10％兔血清为较适宜的培养基。上述添加剂对毛蚴转变和母胞蚴存活均无有益作用,其中柠檬酸可显著抑制毛蚴的转变。文中描述了毛蚴在体外转变成母胞蚴的过程,对血吸虫的糖代谢途径进行了讨论。

埃及血吸虫毛蚴表皮板的观察

埃及血吸虫毛蚴表皮板共有4排,各排数目为6:9:4:3。除第1排之外,其他各排的表皮板均由无纤毛的嵴所分隔,在第1与第2排之间的环嵴中,除第1排各板底边中央小凹处各有1感受器外,尚可见4对感受器。第2与第3排的环嵴内可见16—20个感受器。此外,于体之两侧第3排表皮板间各见1个排泄孔。顶突似六边形,于其两侧各有1个侧腺开口,其内侧可见14个感受器。本文在讨论中与前人对本虫毛蚴表皮板的描述做了简单比较。

粪便毛蚴孵化法检测牛血吸虫病的评价

目的评价现场检测牛血吸虫病的常规粪便孵化法的真实性和可靠性。方法将已知的血吸虫病阳性牛粪和阴性牛粪分别用孵化法做病原学检测,评价孵化法的真实性;平行检测孵化法的可靠性。结果粪便孵化法检测血吸虫病的灵敏度为73.9%,特异性100%,假阴性率为26.08%,正确诊断指数为0.739;平行检测的观察符合率是77.9%,Kappa值为50.23%;平行检测中符合率和粪便中毛蚴数量相关(R^2=0.9476)。结论常规粪便孵化法检测牛血吸虫病的特异性高,但灵敏度较低。

新疆阿魏杀灭钉螺及血吸虫毛蚴的研究

目的:探讨新疆阿魏杀灭钉螺及血吸虫毛蚴效果。方法:(1)将新疆阿魏根浸泡24h,水浸液煮1h,配制成不同浓度的溶液处理钉螺及血吸虫毛蚴。(2)以95%乙醇提取、溶剂萃取、硅胶柱色谱分离等方法从新疆阿魏根中提取分离得7种化合物,并将其配制成不同浓度溶液作浸杀钉螺及血吸虫毛蚴的试验,统计钉螺及血吸虫毛蚴死亡率。结果:阿魏水浸液及其有效化合物具有显著的杀灭钉螺及血吸虫毛蚴的活性。

羊踯躅等6种中药对钉螺与血吸虫毛蚴杀灭效果观察

目的:研究羊踯躅、羊蹄、毛茛、苦楝子、田皂角、益母草6种中药的不同浓度混合液对钉螺及日本血吸虫毛蚴的杀灭作用。结果:该6种中药的浸煮液均有杀灭钉螺及血吸虫毛蚴的作用,其中羊踯躅杀灭钉螺效果极显著(P<0.01),羊蹄杀灭钉螺效果显著(P<0.05),且对水生生物影响较小。结论:中药羊踯躅与羊蹄均可以作为钉螺与血吸虫毛蚴的抑制剂。