PepO通过上调腹腔巨噬细胞中MircroRNA-155的表达来抑制IL-6的产生

探索microRNA-155在细胞炎症反应调控中的作用机制。采用重组PepO蛋白刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PEMs)诱导的microRNA-155(miR-155)及其对IL-6的调节。PepO刺激腹腔巨噬细胞诱导miRNA-155呈剂量和时间依赖性表达;Mimic和inhibitor转染实验显示过表达mi R-155可抑制IL-6及My D88的表达;IL-6及MyD88与PepO也呈剂量依赖性;且IL-6与MyD88存在PepO处理时间的相关性。这些结果提示,PepO刺激腹腔巨噬细胞诱导miRNA-155可能通过靶向myD88通路信号从而抑制IL-6的表达,避免宿主不至于过度炎症反应导致炎症损伤。

微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

冠心病患者外周血单核细胞中miR-125a-3p的表达研究

目的 探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)患者外周血单核细胞中miR-125a-3p的表达水平.方法 收集昆明医科大学附属延安医院心血管内科2014年8月1日至2014年10月30日收治并被确诊为冠心病的患者共63例,其中稳定型心绞痛组23例(B组);急性冠状动脉综合征组40例(C组),选择健康对照组20例(A组).抽取静脉血,分离单核细胞,提取单核细胞总核糖核酸(ribonucleic acids,RNA),使用实时荧光定量PCR(real-time fluoresecnt quantitative PCR,RT-PCR)检测miR-125a-3p的表达水平.结果 A组、B组、C组miR-125a-3p表达水平分别为1、3.12(2.86~3.38)、24.79(8.85~40.73).与A组比较,B组、C组miR-125a-3p表达水平显著上调(P<0.01);与B组比较,C组miR-125a-3p表达水平显著上调(P<0.01).结论 miR-125a-3p可能参与动脉粥样硬化的发生和进展,可能为动脉粥样硬化治疗的新靶点.

冠心病患者外周血单核细胞中miR-125a-5p、miR-193b的表达

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)患者外周血单核细胞中miR-125a-5p、miR-193b的表达水平。方法收集研究对象共102例,分为四组,其中对照组25例(A组),稳定型心绞痛组22例(B组),不稳定型心绞痛组26例(C组),急性心肌梗死组29例(D组)。抽取静脉血,进行单核细胞分离、提取总RNA,实时荧光定量(RT-q PCR),检测外周血单核细胞中miR-125a-5p、miR-193b表达水平。结果与A组比较,B组、C组、D组miR-125a-5p、miR-193b表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,C组、D组miR-125a-5p、miR-193b表达水平显著上调(P <0.01);而C组和D组之间miR-125a-5p、miR-193b表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 miR-125a-5p、miR-193b可能参与动脉粥样硬化的发生和进展,可能为动脉粥样硬化治疗的新靶点。

食管鳞癌肿瘤微环境中miRNA与TGF-β1的相关性分析

目的检测mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p和TGF-β1在食管鳞癌(ESCC)患者肿瘤微环境中的表达水平,分析它们在ESCC发生发展中的作用及相互关系。方法收集52例ESCC患者癌组织、癌旁组织手术标本;实时荧光定量PCR检测ECA-109、TE-1细胞株、正常食管上皮细胞和52例ESCC患者手术标本的mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p和TGF-β1的mRNA表达水平;Western blot法检测TGF-β1在上述细胞以及组织中的蛋白表达情况。结果与正常食管上皮细胞相比,mir-18a-5p、mir-24-3p、mir-25-3p、mir-23a-3p在ESCC细胞株ECA-109中的表达明显增高(P<0.05),其中前3种miRNA在ESCC细胞株TE-1的表达明显增高(P<0.05);TGF-β1在ESCC细胞株ECA-109、TE-1中明显低表达(P<0.05)。与癌旁组织对照组相比,52例ESCC患者癌组织标本的mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p显著升高[上调比例分别为86.5%(45/52)、63.5%(33/52)、78.8%(41/52)、86.5%(45/52),P<0.05],TGF-β1显著降低(P<0.05)。ESCC患者mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p的高表达和TGF-β1的低表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置等无明显关系,但mir-18a-5p、mir-23a-3p与患者癌组织分化程度相关,mir-25-3p与患者癌组织分化程度、浸润深度和范围相关(P<0.05)。癌组织中TGF-β1的低表达与患者癌组织分化程度、浸润深度和范围相关(P<0.05)。mir-18a-5p、mir-23a-3p与TGF-β1的表达无相关性,mir-24-3p、mir-25-3p与TGF-β1的表达呈负相关。结论 ESCC肿瘤微环境中mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p和TGF-β1可能在ESCC的发生发展中有一定作用。

miR-125b通过靶向MAP2K7抑制三阴性乳腺癌的上皮间充质转化机制研究

目的探讨miR-125b在三阴性乳腺癌患者中的表达情况并且探讨该条件下miR-125b对MAP2K7的表达影响进而对肿瘤发生上皮间充质转化的发生产生的影响。方法利用乳腺癌患者活检的组织芯片通过原位杂交检测miR-125b的mRNA表达水平;利用划痕实验和基质胶侵袭实验检测过表达miR-125b对乳腺癌细胞的恶性表型的影响,利用RT-PCR和Western blot实验检测miR-125b对其靶基因MAP2K7和上皮间充质转化发生的分子标志物钙粘附蛋白E(E-cadherin)和钙粘附蛋白N(N-cadherin)的表达影响;利用裸鼠成瘤实验检测在体内过表达miR-125b对MAP2K7表达产生的影响。结果 miR-125b在的三阴性乳腺癌患者中显著降低,过表达miR-125b能够逆转乳腺癌细胞的侵袭迁移能力并且促进E-cadherin的表达,抑制N-cadherin的表达,能够负向调控MAP2K7的表达水平;抑制裸鼠的成瘤能力。结论 miR-125b在三阴性乳腺癌患者体内低表达并且miR-125b能够通过靶向MAP2K7抑制三阴性乳腺癌的上皮间充质转化的发生,从而抑制三阴性乳腺癌的发生发展进程。

miR-221在胃腺癌中的表达及作用

目的研究miR-221在胃腺癌中的表达情况,分析其在胃腺癌中调控的靶基因及其可能的作用机制。方法应用荧光定量聚合酶链反应技术研究miR-221在51例胃腺癌组织及其癌旁正常组织中的表达情况,采用生物信息学技术预测miR-221调控的靶基因。结果 miR-221在胃腺癌组织中表达高于其癌旁正常组织;生物信息学预测miR-221抑制抑癌基因p53、p27的表达。结论 miR-221在胃腺癌组织中表达上调,可能通过调控p53、p27等肿瘤抑制基因的表达而发挥作用。

微小RNA在皮肤鳞状细胞癌中的研究进展

皮肤鳞状细胞癌(cSCC)是角质形成细胞来源的恶性肿瘤之一。转录组是特定条件下细胞内全部转录产物的总和,包括编码mRNA和非编码RNA。研究发现,与正常细胞相比,鳞癌细胞在基因转录水平和模式上存在很大差异,具有不同转录表达谱。微小RNA(miRNA)可通过抑制转录产物的翻译,从而调控靶基因的表达,影响cSCC细胞的增殖、分化和凋亡等病理过程。越来越多的研究表明,miRNAs作为cSCC诊断、预测预后和治疗靶点的生物标志物,在临床上具有广阔的应用前景。本文通过回顾分析cSCC的miRNA表达谱,主要对其中经实验证实表达上调和下调的miRNAs在cSCC中的研究进展作一综述。

舒芬太尼对心肌细胞缺血/再灌注细胞损伤的影响

目的研究舒芬太尼通过miR-199a-3p调节线粒体自噬减轻心肌细胞缺血/再灌注损伤的机制。方法以缺氧/复氧处理体外构建缺血/再灌注心肌细胞H9c2模型,实验分成对照组、模型组、实验组(0.4 ng·mL^(-1)舒芬太尼)、实验+anti-miR-NC组(0.4 ng·mL^(-1)舒芬太尼、inhibitor control)、实验+anti-miR-199a-3p组(0.4 ng·mL^(-1)舒芬太尼、miR-199a-3p inhibitor)。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测miR-199a-3p表达,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达,以二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯法检测活性氧(ROS),以JC-1法检测线粒体膜电位。结果对照组、模型组、实验组、实验+anti-miR-NC组、实验+anti-miR-199a-3p组心肌细胞中miR-199a-3p表达水平为1.00±0.09,0.56±0.05,0.92±0.06,0.90±0.07,0.42±0.02,细胞凋亡率分别为(8.36±0.72)%,(35.71±4.82)%,(15.84±1.67)%,(15.28±1.59)%,(25.48±2.19)%,Beclin1蛋白表达水平为0.25±0.04,0.47±0.05,0.31±0.02,0.29±0.05,0.39±0.04,LC3Ⅱ/Ⅰ水平分别为0.37±0.06,1.34±0.21,0.50±0.07,0.48±0.06,0.94±0.10,ROS水平分别为1806.95±162.24,5936.64±527.41,2495.77±263.38,2354.86±117.42,4224.90±502.42,线粒体膜电位分别为1.03±0.09,0.49±0.06,0.86±0.09,0.87±0.07,0.69±0.04。上述指标,模型组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验+anti-miR-199a-3p组与实验+anti-miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论舒芬太尼通过miR-199a-3p调节线粒体自噬减轻心肌细胞缺血/再灌注损伤。