胃癌患者病灶组织CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达变化研究

目的:探究胃癌患者病灶组织角蛋白7(CK7)、人表皮生长因子受体-2(HER2)、错配修复蛋白MutL同源物1(MLH1)、错配修复蛋白MutS同源物2(MSH2)及错配修复蛋白MutS同源物6(MSH6)的表达变化情况。方法:选取2020年2月—2023年1月苏州市相城人民医院收治的120例胃癌患者为研究对象,比较病灶组织及癌旁组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达情况,并比较不同性别、年龄、TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况及病灶位置者的病灶组织CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6表达情况。结果:胃癌患者病灶组织CK7、HER2阳性率及MLH1、MSH2、MSH6表达缺失率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄及病灶位置病灶组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ期、Ⅳ期病灶组织CK7、HER2阳性率高于Ⅰ期、Ⅱ期,MLH1、MSH2、MSH6表达缺失率均显著低于Ⅰ期、Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度较低者病灶组织的CK7、HER2阳性率显著高于分化程度较高者,MLH1、MSH2及MSH6表达缺失率显著低于于分化程度较高者,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移者CK7、HER2阳性率显著高于无淋巴结转移者,MLH1、MSH2及MSH6表达缺失率显著低于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胃癌患者病灶组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达相对异常,且不同TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况者的差异较大。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

淋巴结转移性结直肠癌中MLH1与MSH2基因的表达水平及其临床意义

目的分析淋巴结转移性结直肠癌中DNA错配修复基因(mismatch repair,MMR)系统MLH1(Mut L homolog1)和MSH2(Mut S homolog 2)基因的表达水平及临床意义。方法选取2015年6月至2017年4月收治的120例淋巴结转移性结直肠癌患者为研究对象,同期选取120例无淋巴结转移的结直肠癌患者为对照;通过免疫组化法、实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)、Western blot法,分别检测两组正常癌旁组织及病灶组织中MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率,MLH1、MSH2 m RNA及蛋白表达水平。结果两组患者病灶组织MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率均高于癌旁组织,而MLH1、MSH2 m RNA及蛋白相对表达水平均低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P均<0.05);淋巴结转移性结直肠癌组病灶组织MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率均高于无淋巴结转移组,MLH1、MSH2 m RNA及蛋白相对表达水平均低于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P均<0.05);两组癌旁组织MLH1、MSH2蛋白阳性表达缺失率、MLH1、MSH2 m RNA及蛋白相对表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);MLH1、MSH阳性表达缺失率与淋巴结转移性结直肠癌患者的肿瘤直径、浸润深度、分化程度及淋巴结转移数有密切关系(P均<0.01),而与年龄无关(P>0.05)。结论淋巴结转移性结直肠癌中MLH1、MSH2表达水平显著降低,推测其在结直肠癌由无淋巴结转移进展为发生淋巴结转移中具有重要作用。

ERCC1、MSH2和PARP1在非小细胞肺癌中的表达及对接受铂类药物治疗患者的预后价值

目的 分析核苷酸剪切修复交叉互补基因1（ERCC1）、MutS同种组织蛋白2（MSH2）和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1 （PARP1）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及对接受铂类药物治疗患者的预后价值.方法 采用免疫组织化学方法检测111例NSCLC患者石蜡包埋肿瘤组织中ERCC1、MSH2和PARP1的表达情况.通过OG-Rank生成分析,评价3种指标的临床预后价值及相应的临床病理学因素,采用Cox回归分析评价3种指标作为接受铂类药物治疗的NSCLC患者疾病预后因素的可行性.结果 111例NSCLC患者中,ERCC1、MSH2和PARP1阳性率分别为33.3 ％（37/111）、36.9 ％（41/111）和55.9％（62/111）.其中72例接受铂类药物化疗患者有完整的生存随访资料,ERCC1和PARP1表达与患者生存时间密切相关（P＜ 0.001,P=0.033）,而MSH2表达则无相关性（P=0.298）.ERCC1和PARP1阴性患者的生存期长于ERCC1（P=0.042）或PARP1 （P=0.027）阳性患者;ERCC1和PARP1阳性患者的生存期短于ERCC1 （P=0.048）或PARP1 （P=0.010）阳性患者.结论 接受铂类药物辅助化疗的ERCC1和（或）PARP1阴性NSCLC患者可能取得较为理想的临床疗效,ERCC1和PARP1检测可以作为评估NSCLC患者临床预后的重要方法.

子宫内膜癌组织中MMR蛋白表达及MLH1基因甲基化的临床意义

目的探讨子宫内膜癌组织中错配修复(MMR)基因包括MLH1、MSH2、MSH6、PMS2基因的蛋白表达及MLH1甲基化的临床意义。方法收集2007—2016年10年间解放军总医院病理科确诊为子宫内膜癌的组织蜡块共420份,采用免疫组化EnVision二步法检测子宫内膜癌组织中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表达并分析其临床意义,当出现MMR蛋白表达缺失(即MLH1、PMS2、MSH2及MSH6中的任何1个或多个蛋白表达缺失)则高度疑为Lynch综合征相关子宫内膜癌(LS-EC);进一步采用甲基化特异性多重连接探针扩增(MS-MLPA)技术检测其中MLH1蛋白表达缺失(72份)的子宫内膜癌组织中MLH1基因的甲基化状态,当出现MLH1基因甲基化阳性时,可判定该患者为散发性子宫内膜癌,而非LS-EC。结果(1)420份子宫内膜癌组织中,MMR蛋白总缺失率为34.5%(145/420),其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白缺失率分别为17.1%(72/420)、8.1%(34/420)、7.4%(31/420)、26.2%(110/420);MLH1和PMS2蛋白的联合缺失率为16.7%(70/420)、MSH2和MSH6蛋白的联合缺失率仅为6.2%(26/420)。(2)病理类型为子宫内膜样癌与非子宫内膜样癌组织中MMR蛋白总缺失率(分别为32.4%、58.8%)、PMS2蛋白缺失率(分别为23.6%、55.9%)分别比较均有明显差异(P<0.01)。不同病理分化程度的子宫内膜样癌组织中MMR蛋白总缺失率及MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白缺失率分别比较均有明显差异(P<0.05)。不同手术病理分期的子宫内膜癌组织中MSH2蛋白缺失率(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为5.5%、10.6%、18.6%)比较有明显差异(P<0.01)。不同浸润深度的子宫内膜癌组织中MMR蛋白总缺失率(黏膜内、浅肌层、深肌层浸润分别为35.0%、30.8%、48.1%)比较有明显差异(P<0.05)。有、无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中MMR蛋白总缺失率及MSH2、MSH6蛋白缺失率分别比较均有明显差异(P<0.05)。(3)72份MLH1蛋白表达缺失的子宫内膜癌组织中57份DNA质量检测合格,其中MLH1基因甲基化阳性27份,甲基化阳性率为47.4%(27/57)。结论子宫内膜癌组织中MMR蛋白表达缺失可能提示患者预后不良。免疫组化方法及进一步的MLH1基因甲基化检测可作为初步筛查LS-EC的方法。

微卫星不稳定的人类结直肠癌细胞系对5-氟尿嘧啶敏感性增高(英文)

目的 我们研究了 3个人类结直肠癌细胞系中一组微卫星位点状况和 5 氟尿嘧啶 (5 FU)敏感性的相关性 ,该组位点来自或邻近于肿瘤化疗敏感性可能相关的多个因子。方法 LoVo、SW4 80和SW116细胞系对 5 FU的敏感性经MTT方法测定 ;用免疫组织化学方法检测三细胞系hMSH2、hMLH1表达水平。用PCR SSLP 银染法分别分析了三个细胞系基因组中 10个微卫星位点状况。结果 比较三个细胞系MTT分析获得的IC50 结果发现 ,对 5 FULoVo细胞系较SW4 80和SW116更加敏感 (分别为 :0 .8μmol/L ,2 .2 μmol/L和 1.9μmol/L ,P =0 .0 0 0 )。免疫组织化学检测结果显示hMSH2在SW4 80和SW1116阳性 ,百在LoVo阴性 ;hMLH1在 3个细胞系均阳性。PCR SSLP 银染法结果显示LoVo细胞系在 8/ 10个位点和其余两个细胞系不同 ,电泳条带有不同程度的增加或位移 ,而另外的 2 / 10个位点则具有相同的电泳带型。结论 该组微卫星位点和错配修复状况可以一同作为离体人类结直肠癌细胞系对 5 FU敏感性的指标 ,为了深入阐明它们能否作为临床结直肠癌化疗病人药物筛选和预后评价的有效指标 。