目的:通过使用3’末端碱基游移混合引物,减少引物末端错配,提高多变区基因片段的PCR检测阳性率。方法:在HBV DNA P基因区设计一对检测阳性率相对较高的引物(原型引物),在原型引物序列基础上将两根引物的3’末端分别截去1个或2个碱基,设...目的:通过使用3’末端碱基游移混合引物,减少引物末端错配,提高多变区基因片段的PCR检测阳性率。方法:在HBV DNA P基因区设计一对检测阳性率相对较高的引物(原型引物),在原型引物序列基础上将两根引物的3’末端分别截去1个或2个碱基,设计出两对参数与原型引物近似的突变引物。分别单独用原型引物和原型引物与突变引物组成的混合引物,在相同条件下对27份HBV DNA阳性标本行PCR,比较二者阳性率。用混合引物扩增4例拉米呋丁治疗无效患者血清HBV DNA,将扩增产物测序并评价3’末端错配对PCR的影响。结果:原型引物和混合引物检测阳性率分别为70.4％(19/27)和85.2％(23/27),两者差异非常显著(P<0.05)。引物3’末端错配能导致PCR假阴性。结论:扩增保守性相对较差的基因片段,采用3’末端单个或多个碱基截短的引物,构成3’末端碱基游移混合引物,可以避免因3’末端错配产生的PCR假阴性,提高检测阳性率。展开更多
目的探讨腹腔器官移植供、受者的ABO血型基因型的分布频率,分析移植供、受者在ABO血清型相同的基础上的基因型随机错配情况。方法肾移植受者89例、肝移植受者22例为受者组,同期86名无关随机供者为供者组。两组均采用单克隆抗体检测ABO...目的探讨腹腔器官移植供、受者的ABO血型基因型的分布频率,分析移植供、受者在ABO血清型相同的基础上的基因型随机错配情况。方法肾移植受者89例、肝移植受者22例为受者组,同期86名无关随机供者为供者组。两组均采用单克隆抗体检测ABO血清学分型,同时采用聚合酶链反应-序列特异性引物(sequence-specific prime rpolymerase chain reaction,PCR-SSP)技术测定ABO血型基因型。所用引物可识别6个ABO血型基因(O1、O2、A1、A2、B1和B3)和21个ABO血型复等位基因。计算ABO血型基因频率,并在ABO血清学分型相同的基础上,分析供、受者之间ABO基因型的错配率。结果供者组和受者组均表达出O1、O2、A1、B1、A2共5个ABO血型基因和O1O1、O1O2、O2O2、A1A1、A1O1、A1O2、A2O1、A2O2、A1B1、A2B1、B1O1、B1O2和B1B1共13个ABO血型复等位基因;与其血清学分型一致率为100%。受者组及供者组患者中ABO血型基因频率从高到低依次为:O1(38.7%比43.0%)、O2(25.7%比21.5%)、A1(17.6%比18.0%)、B1(16.0%比16.3%)、A2(1.8%比1.2%),两组的分布频率比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。A型和B型中的杂合子血型基因型比例均超过85%。在ABO血清学同型的基础上,供、受者ABO基因的平均随机错配率为53.1%,其中供受者O→O的错配率为47.4%,A→A的错配率为66.8%,B→B的错配率为55.1%;AB→AB的错配率为16.7%。结论受者组及供者组患者中ABO血型基因频率从高到低依次为O1、O2、A1、B1、A2。在ABO血清学分型相同的基础上,供、受者ABO基因随机错配率较高。因此,有必要检测器官移植供、受者ABO血型基因分型,这有利于供受体间进行合理的配对。展开更多
基金This work is supported by the National Natural Science Foundation of China(30070958).
文摘目的:通过使用3’末端碱基游移混合引物,减少引物末端错配,提高多变区基因片段的PCR检测阳性率。方法:在HBV DNA P基因区设计一对检测阳性率相对较高的引物(原型引物),在原型引物序列基础上将两根引物的3’末端分别截去1个或2个碱基,设计出两对参数与原型引物近似的突变引物。分别单独用原型引物和原型引物与突变引物组成的混合引物,在相同条件下对27份HBV DNA阳性标本行PCR,比较二者阳性率。用混合引物扩增4例拉米呋丁治疗无效患者血清HBV DNA,将扩增产物测序并评价3’末端错配对PCR的影响。结果:原型引物和混合引物检测阳性率分别为70.4％(19/27)和85.2％(23/27),两者差异非常显著(P<0.05)。引物3’末端错配能导致PCR假阴性。结论:扩增保守性相对较差的基因片段,采用3’末端单个或多个碱基截短的引物,构成3’末端碱基游移混合引物,可以避免因3’末端错配产生的PCR假阴性,提高检测阳性率。
文摘目的探讨腹腔器官移植供、受者的ABO血型基因型的分布频率,分析移植供、受者在ABO血清型相同的基础上的基因型随机错配情况。方法肾移植受者89例、肝移植受者22例为受者组,同期86名无关随机供者为供者组。两组均采用单克隆抗体检测ABO血清学分型,同时采用聚合酶链反应-序列特异性引物(sequence-specific prime rpolymerase chain reaction,PCR-SSP)技术测定ABO血型基因型。所用引物可识别6个ABO血型基因(O1、O2、A1、A2、B1和B3)和21个ABO血型复等位基因。计算ABO血型基因频率,并在ABO血清学分型相同的基础上,分析供、受者之间ABO基因型的错配率。结果供者组和受者组均表达出O1、O2、A1、B1、A2共5个ABO血型基因和O1O1、O1O2、O2O2、A1A1、A1O1、A1O2、A2O1、A2O2、A1B1、A2B1、B1O1、B1O2和B1B1共13个ABO血型复等位基因;与其血清学分型一致率为100%。受者组及供者组患者中ABO血型基因频率从高到低依次为:O1(38.7%比43.0%)、O2(25.7%比21.5%)、A1(17.6%比18.0%)、B1(16.0%比16.3%)、A2(1.8%比1.2%),两组的分布频率比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。A型和B型中的杂合子血型基因型比例均超过85%。在ABO血清学同型的基础上,供、受者ABO基因的平均随机错配率为53.1%,其中供受者O→O的错配率为47.4%,A→A的错配率为66.8%,B→B的错配率为55.1%;AB→AB的错配率为16.7%。结论受者组及供者组患者中ABO血型基因频率从高到低依次为O1、O2、A1、B1、A2。在ABO血清学分型相同的基础上,供、受者ABO基因随机错配率较高。因此,有必要检测器官移植供、受者ABO血型基因分型,这有利于供受体间进行合理的配对。
