阻断Sp1蛋白对Ki-67基因转录的影响

目的观察阻断转录因子Sp1蛋白及其和顺式作用元件的结合，对Ki-67基因转录的抑制作用。方法Sp1小干扰RNA（Sp1-siRNA）、Sp1蛋白竞争剂光神霉素分别作用于宫颈癌Hela细胞、人肾癌OS—RC-2和肺癌A549细胞。Westernblot检测Hela细胞Sp1蛋白表达。细胞免疫组织化学检测3种肿瘤细胞Ki．67蛋白表达。Sp1—siRNA或光神霉素与Ki-67基因核心启动子pGLBK235共转染上述3种肿瘤细胞，双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性。结果Sp1—siRNA处理的Hela细胞Sp1蛋白表达显著减少。Sp1-siRNA、光神霉素处理的3种肿瘤细胞Ki-67蛋白均显著减少。Sp1-siRNA共转染的质粒pGLBK235启动子活性在Hela、OS-RC-2、A549细胞中分别降至单独转染pGLBK235的45．9％、64．5％、46．0％；光神霉素共转染的pGLBK235启动子活性随着药物浓度的升高而降低，其中药物浓度为500nmol／L时其活性最低，在Hela、OS—RC一2、A549细胞分别降至单独转染pGLBK235的34．7％、44．2％、29．8％。结论抑制Spl蛋白或是阻断其与Sp1顺式作用元件的结合，可以有效抑制Ki-67基因转录。