氧化应激在非酒精性脂肪性肝病发病机制中的作用研究进展

非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已成为全球范围内最常见的慢性肝病,并与氧化应激密切相关。脂质代谢紊乱导致肝脏脂质堆积,进而引起线粒体、内质网和其他氧化酶产生大量的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)。ROS生成增加可引起胰岛素敏感性改变以及脂质代谢关键酶的表达和活性改变,但是氧化应激对NAFLD发病机制的作用尚不清楚。基于上述观点,本文综述了可能导致ROS过度产生的机制以及ROS驱动NAFLD进展的潜在机制。

粗枝软骨藻Chondria crassicaulis组织培养初探

在固体培养基上研究了粗枝软骨藻(Chondria crassicaulis)再生的极性,并利用三种不同的培养液和不同的温度对粗枝软骨藻进行切段培养,探索了部分外界因素对粗枝软骨藻生长的影响。发现软骨藻在人工培养条件下的再生出芽过程并无明显极性。在10℃、15℃和22℃三个温度梯度和PES、改良的ASP1和改良的ES三种培养液中,15℃改良的ES培养液中较有利于再生芽的出现。同时我们还观察了粗枝软骨藻四分孢子的发育过程,发现软骨藻具有十字型和四面锥型两种不同的四分孢子囊,软骨藻在四分孢子萌发过程中可形成四种不同的孢子苗。

用户信息搜寻到信息规避的演化机制研究——以突发公共卫生事件领域为例

[目的/意义]为应对健康威胁带来的不安与焦虑,公众会本能地进行信息搜寻。然而,在突发公共卫生事件环境下,大量未经证实、夸张描述的信息在互联网上肆意传播,容易导致用户产生焦虑、心理抗拒与网络疑病症等负面心理状态,并最终导致用户信息规避行为。本文旨在厘清用户从信息搜寻转向信息规避演化机制,以丰富用户健康信息行为领域的研究。[方法/过程]本文梳理了用户信息搜寻和信息规避行为的研究现状,根据SOR理论提出相应的假设并构建相应的理论模型,利用问卷调查和结构方程模型进行实证研究。[结果/结论]本研究根据SOR模型揭示了用户信息搜寻转变到信息规避的行为的内在机理。研究结果表明,受内部刺激因素感知威胁和信息搜寻的影响,用户在信息搜寻过程中容易受信息环境中的信息冲突和信息过载影响,引发焦虑、心理抗拒和网络疑病症的不良机理反应,最终导致信息规避行为的发生。研究结论有助于理解用户健康信息行为,也为突发公共卫生事件下互联网的信息治理提供了行动参考。

基于2-Cl-MGV-1/BDNF-TrkB通路探讨脑梗死后认知功能改善的研究

目的基于2-(2-氯苯基)喹唑啉-4-基二甲基氨基甲酸酯(2-Cl-MGV-1)/脑源性神经营养因子(BDNF)-原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)通路探讨脑梗死后认知功能改善的研究。方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组20只,分别为对照组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和2-Cl-MGV-1组。除对照组外,其他组建立MCAO模型,2-Cl-MGV-1组在模型建立后采用2-Cl-MGV-1治疗,连续给药7 d。评估各组大鼠脑梗死面积、空间学习记忆障碍、线粒体损伤和BDNF/TrkB信号通路。体外将PC12神经元细胞系分为以下3组:对照(Con)组、氧气和葡萄糖剥夺/再灌注模型(OGD/R)组和2-Cl-MGV-1组。除Con组,其他组建立OGD/R模型,2-Cl-MGV-1组加入25μmol/L 2-Cl-MGV-1处理细胞24 h。通过CCK-8评估细胞活力。结果与MCAO组相比,2-Cl-MGV-1组梗死面积显著减少(P<0.05),和尼氏体的数量显著增加(P<0.05)。与对照组相比,MCAO组大鼠的逃避潜伏期显著增加(P<0.001),而2-Cl-MGV-1组的逃避潜伏期显著低于MCAO组(P<0.01)。在第7天,MCAO组大鼠穿过平台的次数显著低于对照组(P<0.001),而2-Cl-MGV-1组大鼠穿过平台的次数较MCAO组显著增加(P<0.05)。与对照组相比,MCAO组皮质中的线粒体膜电位和ATP产量显著降低(P<0.01),而2-Cl-MGV-1组线粒体膜电位和ATP产量较MCAO组显著增加(P<0.05)。与对照组相比,MCAO组大鼠皮层神经元中的BDNF、TrkB蛋白水平显著增加(P<0.05),并且2-Cl-MGV-1组BDNF、TrkB蛋白水平显著高于MCAO组(P<0.05)。与Con组相比,OGD/R组细胞活力和ATP产量显著降低(P<0.05),而2-Cl-MGV-1组细胞活力和ATP产量较OGD/R组显著增加(P<0.05)。与Con组相比,OGD/R组PC12细胞中BDNF、TrkB蛋白水平显著增加(P<0.05),并且2-Cl-MGV-1组BDNF、TrkB蛋白水平显著高于MCAO组(P<0.05)。结论2-Cl-MGV-1对MCAO诱导的大鼠脑缺血/再灌注损伤具有线粒体保护作用,并改善大鼠的认知功能。2-Cl-MGV-1可能通过调节BDNF/TrkB信号通路发挥神经保护作用。

吡咯喹啉醌对脂肪肝蛋鸡肝损伤的保护作用机制

本试验旨在研究吡咯喹啉醌(PQQ)防治蛋鸡脂肪肝综合征的作用机制。选用29周龄海兰褐蛋鸡288只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复12只鸡。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮(代谢能11.03 MJ/kg,粗蛋白质16.2%);Ⅱ组为病理模型组,饲喂高能低蛋白质饲粮(代谢能12.75 MJ/kg,粗蛋白质13.0%);Ⅲ和Ⅳ组分别在Ⅱ组的高能低蛋白质饲粮基础上添加0.08和0.16 mg/kg的PQQ。试验期4周。结果表明:1)与Ⅰ组相比,Ⅱ组高能低蛋白质饲粮成功诱导了蛋鸡脂肪肝试验模型,表现为肝细胞弥散性脂肪变性,肝脏中甘油三酯、总胆固醇含量显著升高(P<0.05),血浆谷丙转氨酶活性显著升高(P<0.05);2)饲粮PQQ可显著抑制高能低蛋白质饲粮引起的肝脏中甘油三酯和总胆固醇含量及血浆中谷丙转氨酶活性的升高(P<0.05),达到与对照组相当的水平;3)饲粮PQQ可显著抑制高能低蛋白质饲粮引起的肝脏中超氧化物歧化酶活性降低和丙二醛含量升高(P<0.05);4)饲粮PQQ可显著抑制高能低蛋白质饲粮引起的蛋鸡肝脏线粒体相对含量减少(P<0.05),抑制柠檬酸脱氢酶和细胞色素C氧化酶活性降低(P<0.05);5)饲粮PQQ可阻止采食高能低蛋白质饲粮的蛋鸡发生脂肪肝,维持与正常对照组相当的水平,不同剂量PQQ之间未见显著差异(P>0.05)。由此可见,饲粮PQQ可通过改善蛋鸡肝脏线粒体功能、调节脂质代谢和抗氧化功能预防蛋鸡脂肪肝综合征。

氧化还原状态的改变控制手霉素诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的研究手霉素对HL-60白血病细胞的作用,探讨其作用机制,主要是线粒体的改变。方法使用人的白血病细胞株HL-60细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用Annexin V和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡。细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)测定。应用化学发光法测定超氧歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathi-one,GSH),萤光素-萤光素酶发光法测定ATP含量。免疫印迹技术检测细胞色素C和Mn-SOD的表达。结果手霉素引起HL-60细胞活性的下降,且呈剂量依赖性。手霉素诱导产生反应性氧基(reactive oxygen species,ROS):NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响SOD。手霉素诱导线粒体降低细胞ATP的含量,线粒体肿胀和细胞色素C从线粒体释放到细胞质。手霉素诱导的凋亡与ROS的增加有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制ROS可保护HL-60细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡。结论细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用。手霉素通过包括上游ROS产生,线粒体形态改变和细胞色素C释放的线粒体途径,诱导白血病细胞凋亡。

苦杏仁苷对IL-1β诱导后大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响

目的观察不同浓度的苦杏仁苷对IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响,并进一步探讨其作用的可能机制。方法从1月龄SD大鼠椎间盘中分离软骨终板并培养,经鉴定后,随机分为正常组、诱导组、苦杏仁苷10-2、10-3、10-4、10-5mol·L-1给药组,采用流式细胞仪检测大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡,Real-time PCR(RT-PCR)检测凋亡相关基因的表达情况,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果不同浓度的苦杏仁苷能够拮抗IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡。流式分析显示各浓度的苦杏仁苷可以降低IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例;RT-PCR结果提示苦杏仁苷各浓度组可拮抗IL-1β上调Bax mRNA的表达,下调Bcl-2 mRNA的表达,各组与诱导组相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示苦杏仁苷10-4mol·L-1给药组能够拮抗IL-1β上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论苦杏仁苷能够拮抗IL-1β诱导大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡,起到延缓椎间盘退变的作用。

抗氧化肽SS-31对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的观察抗氧化肽SS-31对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法将体外培养小鼠肾小球系膜细胞分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SS-31组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK及细胞色素C的表达。结果与正常糖组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleavedcaspase-3和p-p38 MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高以及细胞色素C易位。SS-31干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论 SS-31能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制p38MAPK信号通路激活而实现的。

盐胁迫预处理对大麦根尖分生区细胞超微结构的影响

盐胁迫吸胀后的大麦种子转入正常条件下萌发，其发芽势严重降低，发芽率则和对照差异不大。电镜观察表明，萌发３天的大麦根尖分生区细胞膜系统已修复完善，内质网和高尔基体丰富，变形质体和变形线粒体大量出现。表明短时盐胁迫对种子萌发的抑制作用是可逆的，而且一旦抑制作用被解除，植物细胞内的生理代谢活动会更加活跃，这一现象称为“抑制效应的补偿作用”。由于盐胁迫吸胀后代谢加强总伴随着变形质体和变形线粒体的大量出现。因此，我们推测，变形质体和变形线粒体很可能是因代谢活动加强而出现的一种适应形式。

老龄大鼠脑缺血再灌注海马神经元线粒体形态计量分析(英文)

目的:探讨老龄大鼠脑缺血再灌注后海马神经元超微结构变化,以及线粒体形态改变程度及性质。方法:建立老年大鼠脑缺血动物模型,正常对照组(A组)、缺血30min再灌注6h(B组)、12h(C组)、24h(D组)、48h(E组)和7d组(F组),用透射电镜观察海马神经元的超微结构变化,通过计算机图像分析系统对线粒体形态计量分析。结果:B组海马神经元超微结构与A组相同,E组和F组海马神经元损伤较重;E组和F组线粒体体密度、数密度、比表面和嵴膜密度较A组明显减少(P<0.05),线粒体平均体积和平均截面积较A组明显增大(P<0.05)。结论:老龄大鼠脑缺血后产生延迟性神经元死亡,其线粒体的形态结构也发生明显变化,这些变化直接与脑缺血再灌注时程相关。

粗枝软骨藻化学成分研究

为了研究中国沿海海藻中的抗肿瘤活性成分,利用正相硅胶柱色谱和凝胶Sephadex LH-20色谱,从采自青岛的粗枝软骨藻(Chondria crasscaulis)中分离得到了5个化合物,经红外光谱(IR)、核磁共振光谱(1H NMR、13C NMR)以及质谱(MS)等现代波谱技术鉴定为loliolide(1),2-羟基苯甲醛(2),4-羟基苯甲醛(3),4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(4)和4-羟基苯甲酸(5)。

粒细胞集落刺激因子对乳鼠缺氧心肌细胞的保护作用及机制探讨

目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对缺氧心肌细胞的影响,探讨G-CSF发挥心肌细胞保护作用的分子机制。方法将心肌细胞分为3组,对照组、缺氧组和G-CSF组。流式细胞仪检测各组心肌细胞的存活率、凋亡率和坏死率。Northern blot法检测3组心肌细胞中Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA的表达,western blot法检测3组心肌细胞中细胞色素C(Cyt C)、信号转导与转录激活因子3(STAT-3)、caspase-3蛋白的表达。结果 6μg/LG-CSF开始发挥对缺氧心肌细胞的保护作用,150 μg/L保护作用最强,30μg/L和750μg/L保护作用相似。对照组、缺氧组和G-CSF组心肌细胞的存活率、凋亡率和坏死率差异有统计学意义。与缺氧组比较,G-CSF组Bcl-2mRNA表达增加,Bax、caspase-3 mRNA、Cyt C和caspase-3蛋白表达减少(P<0.01)。结论缺氧心肌细胞中,G-CSF可能通过线粒体途径发挥抗凋亡的作用。

粗枝软骨藻化学成分研究

利用多种层析方法，从粗枝软骨藻全藻95％的乙醇提取物中获得10个化合物，通过理化性质和波谱分析，鉴定为3，4-丙酮缩-1，3，4-戊三醇（1）、3β-羟基-胆甾-5-烯（2）、3β-羟基-胆甾-5，22-二烯（3）、豆甾-5-烯-3β，7α-二醇（4）、1，2-二亚麻酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖甘油酯（5）、2-亚麻酸甘油酯（6）、1，3-二亚麻酸甘油二酯（7）、1，2，3-三亚麻酸甘油三酯（8）、植醇十六烷酸酯（9）和软脂酸（10）。其中化合物1为新化合物，化合物2—10为首次从该种中报道。

湛江海域6种常见经济海藻的营养成分分析

分析采自湛江海域的粗枝软骨藻Chondria crassicaulis、日本沙菜Hypnea japonica、鱼栖菜Acanthophora sp、芋根江蓠Gracilaria blodgettii、平卧松藻Codium repens、网地藻Dictyota dichotoma等6种经济海藻的营养成分。结果表明:碳水化合物是这些海藻的主要营养成分,占藻体干重的42.81%～66.11%,平均为55.93%;粗蛋白含量6.63%～11.13%;粗脂肪含量最低,除网地藻D.dichotoma(2.85%)外,其余5种皆不足藻体干重的1%;粗纤维和灰分含量在种间差别较大;矿物质含量丰富,其中磷、铁和锌分别在平卧松藻C.repens、网地藻D.dichotoma和鱼栖菜Acanthophora中占藻体干重的0.093%、0.13%和0.0055%;氨基酸含量较高,其中Thr、Val、Ile、Leu、Phe几种必需氨基酸的含量均高于FAO标准;不少种类中汞、镉、铅、砷等含量超出我国食品卫生标准。海藻体内的营养成分含量因海藻种类和生长海域的不同而有差异。

线粒体DNA D-loop基因多态性与肾透明细胞癌关系的研究

目的探讨线粒体DNA D-loop(mtDNA D-loop)基因多态性与肾透明细胞癌的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)对59例肾透明细胞癌患者(肾癌组)和68例健康对照(对照组)的mtDNA D-loop区进行扩增并测序。将测序结果与线粒体文库中的Revised Cambridge Reference Sequence(rCRS)比对分析。分析2组人群中mtDNAD-loop区多态位点出现频率的差异。结果在对照组和肾癌组中的mtDNA D-loop区共发现143个多态性位点。与对照组比较,肾癌组患者的mtDNA D-loop区的262T、16293G出现的频率明显增高,16298C、16319A出现的频率下降(P<0.05)。结论 mtDNA D-loop区的多态性分析可作为肾透明细胞癌患者发生的预测因子,有助于早期发现肾透明细胞癌患者。

刺松藻和粗枝软骨藻脂溶性化学成分GC-MS分析

目的分析刺松藻和粗枝软骨藻脂溶性化学成分,为其开发利用提供理论依据。方法采用乙醚提取刺松藻和粗枝软骨藻脂溶性成分并用气相色谱-质谱-计算机联用技术对其进行分析。结果从刺松藻中分离鉴定出10个化合物,它们占总脂的92.15%,其主要成分为十四烷酸(4.43%)、正十六烷酸(33.01%)、植醇(8.18%)、油酸(7.07%)、十八碳二烯酸(3.69%)、十六碳三烯酸(3.12%)和豆甾醇(28.83%)等。从粗枝软骨藻中鉴定出16个化合物,占总脂的75.21%,其主要成分为荜澄茄油烯(5.77%)、十四烷酸(1.65%)、正十六烷酸(26.03%)、油酸(5.73%)、十八碳二烯酸(2.24%)、十八碳三烯酸(6.60%)、胆甾醇(7.22%)、胆甾-7,24-二烯-3-醇(11.89%)和豆甾-5,24(28)-二烯-3-醇(3.05%)等。结论饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、甾醇类成分是两种藻的主要成分,刺松藻和粗枝软骨藻脂溶性成分具有很好的药用前景。

色素上皮衍生因子对大鼠急性视神经损伤超微结构的影响

目的探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对大鼠视神经急性损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)轴突线粒体超微结构的保护作用。方法选取健康雌性SD大鼠60只随机分为三组:空白组、模型组和实验组,每组各20只,空白组不做任何处理,模型组和实验组均采用视神经钳夹法用反向镊钳夹左眼视神经造成视神经不全损伤,右眼不予处理。模型组和实验组左眼造模后即刻、1周、2周分3次分别向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μL和PEDF1μg。三组大鼠均在第3周时取材,分别取10只大鼠左眼眼球制作标本,电镜下观察视网膜组织超微结构的改变;并将三组剩余大鼠左眼眼球制备成5μm视网膜切片,常规HE染色后对视网膜神经节细胞进行计数。结果透射电镜观察模型组与实验组同空白组相比均存在线粒体水肿、胞质浓缩轴突肿胀。同模型组相比实验组胞质浓缩轴突肿胀轻,线粒体结构较完整。HE染色实验组和模型组的神经节细胞数都明显低于空白组(P<0.05),实验组神经节细胞从细胞形态上要好于模型组,且RGCs数量较模型组多。模型组和实验组神经节细胞计数较空白组分别下降73.3%、53.3%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论视神经不全损伤可引起视神经超微结构的明显损害,PEDF可以减轻视神经超微结构的损害,并减少视网膜神经节细胞凋亡。

急性缺氧后内皮细胞的超微结构变化及其机理探讨

将20只成熟健康Wistar大鼠分成两组,每组10只,实验组大鼠放入低压舱内,以15m/s速度上升至7500m高度,停留30min,造成体内重度缺氧.结果发现,缺氧后实验组心肌组织中内皮素(ET)含量明显下降(p<0.02);硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSHpx)浓度显著减少(P<0.001),但心肌组织丙二醛(MDA)改变不明显(p<0.05),SeGSHpx/MDA比值显著降低(P<0.001);心肌线粒体钙含量明显增加(p<0.001);心肌终末微血管内皮细胞超微结构发生明显改变.结果提示,内皮细胞超微结构改变可能与ET浓度的变化、组织细胞钙超载及抗氧化能力下降有关.

脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾脏能量代谢的比较研究

目的：研究脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾脏组织能量代谢变化及其差异,为科学解释中医脾脏理论内涵提供基础资料。方法：构建脾气虚证和脾不统血证大鼠模型,测定各组大鼠脾脏ATP含量、线粒体呼吸链复合物（ComplexⅠ、ComplexⅡ、ComplexⅢ、ComplexⅣ）活性、柠檬酸合酶（CS）活性和mtDNA拷贝数。结果：脾气虚证大鼠和脾不统血证大鼠脾脏ATP含量显著降低,呼吸链复合物活性、CS活性和mtDNA拷贝数较正常大鼠均发生显著改变,脾不统血证大鼠脾脏ATP含量、CS活性和mtDNA拷贝数与脾气虚证大鼠存在显著差异。结论：脾气虚证大鼠和脾不统血证大鼠脾脏组织线粒体能量代谢发生障碍,其柠檬酸循环和氧化磷酸化功能受到损伤,而脾不统血证和脾气虚证线粒体能量代谢障碍程度的不同是二者存在差异的重要原因。本研究认为,对中医脾虚证脾脏组织能量代谢功能损伤的研究能够积极的揭示脾虚证的科学本质。

渐进性咬合垂直距离降低对大鼠咬肌微观结构和线粒体Ca^(2+)含量的影响

目的:观察渐进性咬合垂直距离(occlusal vertical dimension,OVD)降低对大鼠咬肌显微、超微结构和线粒体Ca2+含量的影响。方法:8周龄雄性SD大鼠50只,随机分为两组(每组25只)。实验组采用人工逐次磨低大鼠上颌后牙牙冠高度的方法建立渐进性OVD降低动物模型,对照组模拟所有操作过程但不磨低牙齿。分别于建模后3、7、14、28、42 d时每组各处死5只大鼠,取深层咬肌分别进行HE染色观察和透射电镜观察;同时测定咬肌线粒体Ca2+含量。结果:渐进性OVD降低可引起大鼠显微和超微结构的改变。其中以超微结构的损伤为主,表现为线粒体结构破坏,并伴随有线粒体Ca2+含量明显增加(P<0.05)。但上述损伤表现仅出现在早期,且散在、局限,并未造成广泛性的损伤,至实验第42天时,肌纤维结构已趋于正常,同时线粒体Ca2+含量也恢复正常。而对照组显微及超微结构未观察到明显改变,线粒体Ca2+含量未见明显增加(P>0.05)。结论:渐进性OVD降低可导致大鼠咬肌损伤,主要表现为超微结构异常和线粒体Ca2+含量增加,但这种损伤是可逆的。