山萘酚、芹菜素对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响

目的:观察山萘酚和芹菜素对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法,体外分离和培养新生大鼠心肌细胞,建立H2O2损伤心肌细胞模型。以MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,JC-1荧光探针测定线粒体膜电位,Western blotting法检测胞浆中细胞色素C(CytC)的表达。结果:与模型组比较,山萘酚和芹菜素能显著提高心肌细胞活力,降低心肌细胞凋亡率,抑制线粒体膜电位下降和CytC释放。结论:山萘酚和芹菜素对H2O2诱导的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,山萘酚的抗氧化作用强于芹菜素,其机制可能依赖于抑制线粒体膜电位降低和CytC释放。

线粒体途径在慢性髓系白血病信号转导中的作用

本研究旨在探讨线粒体途径在慢性髓系白血病(CML)信号转导中的作用。用脂质体转染法将bcr3/abl2反义寡核苷酸(ASO)导入CML细胞系K562细胞中;用MTT法检测bcr3/abl2ASO对K562细胞活力的影响;流式细胞术(FCM)分析测定细胞凋亡率;荧光染料罗丹明123染色分析细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)的变化;Westernblot检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白细胞色素C(CytC)的表达。结果表明,2μmol/Lbcr3/abl2ASO与K562细胞作用24小时后,可明显抑制K562细胞活力,其抑制率为65.7%;可诱导细胞凋亡,凋亡率为16.9%;可下调K562细胞线粒体ΔΨm,有38.33%的细胞出现线粒体ΔΨm下降;可增强CytC的表达,激光光度扫描仪测得其表达光密度值由2.33±0.3升高到4.78±0.1。结论:线粒体途径通过介导凋亡信号而在CML信号转导中发挥重要作用。

实验性心肌损伤与呼吸链功能关系的研究

目的 探讨心肌缺血时线粒体功能的改变。方法 将大鼠分成正常对照组 ,损伤组 (异丙肾上腺素组 )和保护组 (辅酶Q10 组 )。观察损伤组大鼠在不同时间心肌损伤面积大小 ,以及以上 3组琥珀酸脱氢酶比活力 ,细胞色素C氧化酶比活力和辅酶Q10 含量的变化。结果 损伤组心肌损伤面积随时间的延长而扩大。保护组琥珀酸脱氢酶比活力和细胞色素C氧化酶比活力显著高于损伤组。损伤组的心肌线粒体中辅酶Q10 含量明显低于对照组和辅酶Q10 组。结论 心肌损伤后能量代谢发生障碍 。

线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用

目的探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用。方法应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组。Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase3和Caspase9的酶活性变化。结果与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase9和Caspase3的酶活性显著增高。结论HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡。

扇贝多肽对UVA损伤HaCaT细胞UCP2表达及线粒体功能的影响

目的探究紫外线A(ultraviolet A,UVA)损伤对HaCaT角质形成细胞线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)表达的影响以及扇贝多肽(polypeptide from Chlamysfarreri,PCF)的调节作用,并研究PCF对UVA损伤HaCaT细胞线粒体功能的保护作用。方法复制8 J.cm-2 UVA辐射损伤HaCaT角质形成细胞模型,免疫印迹法检测UVA损伤后HaCaT细胞UCP2蛋白表达的变化及PCF的影响、PCF对UVA损伤HaCaT细胞凋亡蛋白酶激活因子(apoptot-ic protease-activating factor 1,Apaf-1)、细胞色素C(Cyto-chrome C,Cyt C)蛋白表达的影响;电子自旋共振(electronspin resonance,ESR)技术检测ROS的释放量;流式细胞术检测线粒体膜电位;紫外分光光度法测定PCF对UVA损伤HaCaT细胞线粒体呼吸链复合酶Ⅰ(NADH-辅酶Q还原酶)活性的影响。结果正常HaCaT细胞UCP2几乎不表达,UVA照射后表达升高,3 h达高峰,6 h开始逐渐下降;1.42～5.69 mmol.L-1剂量范围内的PCF对UCP2的表达有抑制作用;PCF可明显抑制UVA诱导的ROS产生、线粒体膜电位下降、Cyt C的释放及Apaf-1的表达,可有效抑制UVA损伤后HaCaT细胞呼吸链复合酶I活性的下降。结论 PCF对UVA引起的HaCaT细胞线粒体损伤具有保护作用。

PrP106-126作用下N2a细胞线粒体的损伤机制

为探讨Prion相关疾病中神经细胞的损伤机制,应用毒性神经多肽PrP106-126与一定浓度的Fe3+离子共同作用,并通过测定细胞NADH活性评估细胞呼吸链功能状态,检测细胞线粒体膜电位的动态变化,及线粒体内细胞色素C的分布,探讨细胞在PrP106-126与Fe3+共同诱导的氧化应激条件下,N2a细胞线粒体可能的损伤及对整个细胞的影响。试验结果显示,毒性多肽与Fe3+作用下,N2a细胞的NADH酶活性显著下降(P<0.01),降低至正常活性的65%,细胞线粒体膜电位出现明显的去极化(P<0.01),细胞色素C自线粒体释放至细胞质中,并引起pro-caspase-9活化。

Annexin 5对人精子线粒体功能的影响

目的观察膜联蛋白5(annexin5)对人精子线粒体功能的影响。方法收集38例少弱精症患者精液标本。精子与an-nexin5共温育,用罗丹明(Rh123)和碘化吡啶(PI)染色并用流式细胞术检测人精子线粒体功能。结果添加annexin5组与对照组相比,线粒体功能良好的活精子百分率[(38.77±9.20)%vs(26.12±10.09)%,P<0.05]和线粒体荧光值[(509.72±45.02)vs(452.88±39.39),P<0.05]均有显著性升高。结论体外添加annexin5能增强精子线粒体的活性。

罗非鱼红色肉在冷藏期间的肉色稳定性

为研究罗非鱼红色肉冷藏期间的肉色的稳定性,该文测定了不同包装方式贮藏的红色肉的色差值、pH值、肌红蛋白含量、高铁肌红蛋白还原酶活力、线粒体膜通透性、琥珀酸脱氢酶及乳酸脱氢酶活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸含量。结果表明,冷藏期间红色肉的L值无明显变化,托盘包装红色肉红度值不断降低,真空包装红色肉红度值先升高后无明显变化。托盘包装红色肉中高铁肌红蛋白含量显著增加,而在真空包装中无明显变化。2种包装方式下氧合肌红蛋白含量、高铁肌红蛋白还原酶活力、线粒体膜通透性、琥珀酸脱氢酶活性、乳酸脱氢酶活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸含量不断降低,但真空包装均高于托盘包装,证明无氧条件冷藏能够更好地维持肌肉内肌红蛋白的氧化还原过程,从而提高肉色稳定性。通过各因素相关性分析,红度值变化与高铁肌红蛋白含量呈极显著负相关,而与氧合肌红蛋白含量、高铁肌红蛋白还原酶活性、乳酸脱氢酶活性、琥珀酸脱氢酶活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸含量呈现极显著正相关,说明线粒体活性降低,线粒体内乳酸和琥珀酸分解能力降低,电子传递链产生的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量减少,使高铁肌红蛋白还原能力降低,肉色稳定性变差。

犬肝胆细胞缺血性损伤的定量分析

杂交犬２３条，按自体原位肝移植模型的手术方法，在灌注前、后及肝动脉缺血１ｈ分别取标本，进行电镜观察，并通过自动图像分析仪测算肝胆细胞线粒体的平均光密度、平均面积、平均体积、平均周长及形态系数。结果显示，灌注后上述各种参数与正常值相比无显著性差异，肝动脉缺血１ｈ，其几何参数较正常值有明显差异（Ｐ＜０．００１）。本实验通过细胞线粒体超微结构的病理变化定量地说明肝动脉缺血对肝脏尤其是胆道系统的影响，比较准确地和客观地说明肝动脉对肝胆系统的重要地位，为今后肝移植手术中充分认识肝动脉的重要性提供了可靠的理论依据。

添加黄芪注射液对人精子线粒体功能的影响

目的 观察添加黄芪注射液对人精子线粒体功能的影响。方法 弱精子症精子与黄芪注射液共孵化,用若丹明(Rh123)和碘化吡啶(PI)染色并用流式细胞技术检测人精子线粒体功能。结果 添加黄芪组线粒体功能良好的活精子数(9.831.65)明显高于对照组(6.500.41),与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。添加黄芪组(42.493.73)的线粒体荧光值也明显高于对照组(31.074.49),与空白对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论 体外添加黄芪注射液能增强弱精子症精子线粒体的活性,为黄芪作为体外添加剂提高精子活力提供理论基础。

老年性黄斑变性线粒体DNA3243点突变分析

目的 了解老年性黄斑变性 (age- related macular degeneration,AMD)是否存在线粒体 DNA(mt DNA)点突变 ,探讨 AMD的发病机制。 方法 2 6例渗出型 AMD患者 ,10例萎缩型 AMD患者及 2 0例阴性对照者 ,采集外周血抽提 DNA,利用聚合酶链反应及限制性片段长度多态性 (polymerase chain reac-tion and restriction fragmentlong polymorphism,PCR- RFL P)技术 ,检测 mt DNA32 43位点 A→ G点突变。 结果 2 6例渗出型 AMD、10例萎缩型 AMD患者外周血细胞 mt DNA检测未发现 mt DNA32 43位点 A→G点突变。 结论 AMD可能与由母系遗传所致的 mt DNA32 43点突变无关。

创伤性脑损伤后大鼠脑线粒体功能的变化

目的通过改进型Feeney自由落体脑损伤装置制作大鼠重型颅脑损伤模型,检测损伤后不同时间点脑皮质组织线粒体功能的变化。方法雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为假手术组(n=5)和创伤性脑损伤(TBI)组(n=25),TBI组按伤后不同时间点(12 h、1 d、3 d、5 d、7 d)又分为5个亚组,每组分别5只动物。采用尼氏染色观察神经细胞损伤;采用多功能酶标仪检测线粒体膜电位(MMP)、H^+-ATPase活性、三磷酸腺苷(ATP)含量,观察TBI后脑皮质线粒体功能的变化。结果 TBI后尼氏染色结果显示,脑皮质神经元染色12 h组较假手术组神经元减少,1 d组更少,3 d组染色最少。MMP、H^+-ATPase活性、ATP含量在伤后均下降,且3 d组最低,相较于假手术组有显著性差异(P<0.05)。结论 TBI后脑皮质线粒体功能呈现先下降、后上升的趋势,尚可恢复部分功能,这对TBI后脑保护的机制研究提供了一定的实验基础,对脑损伤者进行有效的保护至关重要。

Mitofilin对线粒体功能和疾病发生的影响

Mitofi lin是一种线粒体内膜蛋白,与多种线粒体蛋白相互作用,共同参与线粒体内膜嵴形态的维持、线粒体内蛋白质的转运过程等。干扰mitofi lin的表达不仅引起线粒体结构的异常,而且明显抑制了线粒体功能的正常发挥。最近的研究表明,在多种疾病中mitofi lin都异常表达,从而导致线粒体结构的完整性和功能的障碍,促进了疾病的发生发展。