大黄素蒽醌衍生物介导KB及KBv200细胞氧化损伤的研究

目的 研究以大黄素为母体结构 ,人工半合成的 4种蒽醌衍生物抑制 KB和 KBv2 0 0细胞增殖的作用机制。方法 采用 MTT比色法测定细胞毒作用 ;采用流式细胞仪检测分别用 DCFH- DA和 Di OC6 荧光探针标记的细胞内活性氧 (ROS)和线粒体跨膜电位 (ΔΨm)。结果 4种蒽醌衍生物均能不同程度地抑制 KB和 KBv2 0 0细胞的增殖 ,表现为较强的体外抗肿瘤作用 :1,8-二 (二甲氨乙氨基 ) - 3-甲基 - 6 -甲氧基蒽醌 (H- 19)对 KB和 KBv2 0 0细胞 IC50 分别为 1.37和 1.4 2μmol/ L ;1-吡啶乙氨基 - 3-甲基 - 6 ,8-二甲氧基蒽醌 (H- 2 1)的 IC50 分别是 13.0和17.9μm ol/ L;1-吡咯烷乙氨基 - 3-甲基 - 6 ,8-二甲氧基蒽醌 (H- 2 5 )的 IC50 分别是 8.5和 11.7μmol/ L;1-羟丁氨基 -3-甲基 - 6 ,8-二甲氧基蒽醌 (H - 2 8)的 IC50 分别是 7.6和 8.6μmol/ L ,且各药对敏感株 KB和相应的多药耐药(MDR)细胞 KBv2 0 0的 IC50 相近 (P>0 .0 5 )。用 4种药物分别处理两种细胞 12、2 4、4 8h,12 h即能引起 ROS的明显增加 ,2 4 h达到最大 ,与 4 8h引起的 ROS增加差异不显著 ;各药均引起两种细胞ΔΨm时间依赖性的降低 ,4 8h时 ΔΨm降低达到最大。结论 4种大黄素蒽醌衍生物可能通过诱导细胞内 ROS的增加 ,使得 ΔΨm降低 ,从?

氟康唑诱导热带念珠菌凋亡机制的研究

目的观察氟康唑对热带念珠菌作用后存活率、活性氧(ROS)、线粒体膜电位(△Ψm)和细胞周期的变化,初步探讨其作用机制。方法参照CLSIM27A方案中的微量稀释法测定氟康唑对热带念珠菌的最低抑菌浓度(MIC);热带念珠菌在加入不同浓度氟康唑培养后,流式细胞术(FCM)分析荧光探针碘化丙啶(PI)标记存活率、荧光探针双氢罗丹明(DHR)标记ROS、荧光探针四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)标记线粒体△Ψm和DNA-Prep试剂盒标记细胞周期的变化。结果氟康唑作用后,热带念珠菌氟康唑耐药株存活率、ROS、线粒体△ψm和细胞周期各期比例均没有明显变化;而热带念珠菌氟康唑敏感株存活率和线粒体△ψm明显下降,ROS明显升高,而且大部分热带念珠菌阻滞于G2/M期,G01期热带念珠菌减少,呈一定的时间剂量依赖关系;且ROS升高与线粒体△Ψm成正相关(r=0.913,P【0.05)。结论氟康唑可能提高刺激后热带念珠菌产生ROS,导致线粒体△ψm的改变和G2/M阻滞,从而诱导热带念珠菌凋亡。

双氢青蒿素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制研究

目的探讨双氢青蒿素在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用,并初步研究其可能分子机制。方法 25,50,100,200和400μmol·L^(-1)双氢青蒿素作用SMMC-7721细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,激光共聚焦显微镜检测凋亡形态的变化,Rho123染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测细胞内Bcl-2,Bax,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达变化。结果 MTT实验结果表明,25~400μmol·L^(-1)双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖具有明显的抑制作用。流式细胞仪检测周期结果显示,双氢青蒿素可以使SMMC-7721细胞周期阻滞于G2/M期。Hochest 333258染色结果显示,给药组细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂的凋亡形态。流式细胞仪检测凋亡结果显示,双氢青蒿素给药组细胞凋亡随药物浓度呈现升高趋势(P<0.01)。Rho 123染色结果显示,双氢青蒿素给药组细胞线粒体膜电位呈现明显的下降趋势(P<0.01)。Western blot结果显示,双氢青蒿素给药组细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。结论双氢青蒿素能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关。

氟康唑对热带念珠菌活性氧和线粒体膜电位的影响

为了探讨氟康唑作用机制,观察它对热带念珠菌作用后存活率、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,△Ψm)和细胞周期的变化。参照NCCLS M27-A方案的微量稀释法测定氟康唑对热带念珠菌的最低抑菌浓度(MIC);热带念珠菌与不同浓度氟康唑共同培养后用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析热带念珠菌存活率、ROS、线粒体膜电位△Ψm和细胞周期的变化。结果表明,氟康唑作用后,热带念珠菌氟康唑耐药株的存活率、ROS、线粒体膜电位△Ψm和细胞周期各期比例均没有明显变化;而热带念珠菌氟康唑敏感株的存活率和线粒体膜电位△Ψm明显下降,ROS明显升高,而且大部分热带念珠菌阻滞于G2/M期,并出现明显凋亡峰,呈一定的时间剂量依赖关系。自由基清除剂谷胱甘肽抑制热带念珠菌ROS的产生,阻止细胞周期G2/M期阻滞和降低凋亡。由此可见,氟康唑可能通过刺激热带念珠菌产生过多ROS,并使线粒体膜电位△Ψm下降,从而诱导热带念珠菌凋亡。