黄芪对老年小鼠脑线粒体Mn-SOD、MDA及脑细胞凋亡影响的实验研究

目的 研究黄芪对老年小鼠脑抗氧化系统的影响。方法 用 TUNEL法观察老年小鼠神经细胞凋亡率 ,并检测脑线粒体锰超氧化物歧化酶 (Mn- SOD)活性及丙二醛 (MDA)含量。以黄芪水煎剂灌胃老年小鼠 30 d,观察黄芪对老年小鼠上述指标的影响。结果 老年小鼠 Mn- SOD活性降低 ,MDA含量升高 ,具有典型的凋亡特征 ;与老年组比较黄芪组脑线粒体 Mn- SOD活性升高 ,MDA含量降低 ,凋亡细胞数减少。结论 黄芪通过抗氧化作用抑制老年小鼠脑神经细胞凋亡。

朱桔Mn-SOD的纯化、鉴定及浓度梯度胶电泳在其中的应用

朱桔叶中存在Mn SOD、Fe SOD和CuZn SOD三种类型 ,在 1 0 %的PAGE中有三条活性带 ,其中Mn SOD的Rf值大于Fe SOD与CuZn SOD1 的Rf 值相同 ;在 4%～ 35 %的梯度胶电泳中有四条活性带 ,而Mn SOD的Rf 值最小 ,表明该酶带有较高的电荷密度。Mn SOD占总活性的2 0 %左右 ,已被纯化到均一程度。该酶的比活性为 1 2 4 9U/mg ,分子量和亚基分子量分别为5 4 .0kD和 2 6.6kD ,在紫外区最大吸收值为 2 80nm ,在 95℃处理 1 5min仍保留了 46%的酶活性 ,等电点为 5 .0 6。该酶的活性不被KCN、H2 O2 抑制 ,但对 1 %SDS和氯仿

中枢神经系统靶向性Mn-SOD的克隆和在大肠杆菌中的表达研究

靶向性超氧化物歧化酶 (SOD)是治疗氧自由基引起神经细胞损伤所致疾病等的有效途径 .将破伤风毒素C部分 (tetanustoxinfragmentC ,TTC)基因与编码Mn SOD的cDNA融合克隆进pET 2 2b(+)载体 ,1mmol/L异丙基 D 硫代半乳糖 (IPTG)诱导在大肠杆菌中表达 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)图谱可见约 71ku有表达产物条带 ,与理论计算值相符 ;蛋白质印迹 (Westernblot)分析显示 ,表达产物与抗Mn SOD及破伤风毒素的多抗有免疫反应 ,而且表达产物用邻苯三酚自氧化法测定具有SOD活性 .融合蛋白可作为有效的试剂靶向性输送Mn SOD到神经元细胞 。

盐度胁迫下口虾蛄Mn-SOD基因的表达分析

利用实时定量PCR技术,分析了Z9～Z11期口虾蛄Oratosquilla oratoria Mn-SOD基因在不同盐度胁迫下的表达情况.试验共设置8组,盐度分别为12.8、16.3、19.8、23.3、26.8（对照组）、30.3、33.8、37.3,各组均在盐度胁迫后的1.5、3、6、9、12、24、36、48、72 h取样.结果表明：在盐度胁迫时间为6、9、12、48、72 h时,各盐度组口虾蛄Mn-SOD基因的表达量总体上极显著或显著低于对照组（P＜0.01或P＜0.05）,且与对照组盐度差值小的23.3、30.3两个盐度组,Mn-SOD基因表达量总体上均高于极高盐度（37.3）和极底盐度（12.8）组,在胁迫时间为24、36 h时,除12.8、16.3两个低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量总体上极显著高于对照组（P＜0.01）;除极高和极低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量均随着胁迫时间的延长总体上呈先降低再升高再逐步降低的变化趋势,盐度为12.8、16.3、19.8、23.3、30.3、33.8、37.3的各试验组,Mn-SOD基因最大表达量的时间点分别为6、12、24、24、24、24、24h.研究表明,各试验盐度组口虾蛄在72 h内对盐度胁迫的适应总趋势为不适应—最不适应—逐步适应—不适应.

五味子水提液对衰老模型小鼠肝细胞膜Na^+-K^+-ATPase、Mn-SOD和MDA的影响

目的探讨五味子水提液对衰老模型小鼠肝细胞膜Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-ATPase)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和丙二醛(MDA)的影响。方法以D-半乳糖(D-gal)建立人工致衰小鼠,观察五味子水提液对肝细胞膜Na+-K+-ATPase、Mn-SOD和MDA含量的影响。结果衰老小鼠肝细胞膜Na+-K+-ATPase和Mn-SOD活性均降低,MDA含量升高;五味子水提液可以提高肝细胞膜Na+-K+-ATPase和Mn-SOD活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01)。结论五味子水提液抗衰老机制可能与抑制脂质过氧化反应,降低MDA含量,提高Na+-K+-ATPase和Mn-SOD活性有关。

一株高产Mn-SOD菌发酵条件的优化

对一株产Mn-SOD的耐碱芽孢杆菌Bacillus sp．110-3的发酵条件进行了优化。通过对培养基碳源组成，氮源组成，碳氮比例以及培养基始初pH和金属离子对菌株Bacillussp．110-3产Mn．SOD的影响进行研究，确定了培养基的最佳组成为：玉米粉4％，蛋白胨1％，酵母膏0．5％，氯化钠1％，Mn^2＋100μmol／L，pH6．0-8．0。应用正交试验设计结合SPSS软件分析，确定了各因素对产酶影响的显著程度，为实际生产中最佳工艺的确定提供了理论基础。

龙眼Mn-SOD基因的表达及其启动子功能分析

以龙眼胚性愈伤组织为材料,研究龙眼Mn-SOD基因在应答非生物因子和外源激素处理下的转录情况,并利用烟草瞬时转化法分析其启动子的表达活性。结果表明:龙眼胚性愈伤组织中Mn-SOD基因的表达受到红光和蓝光的抑制;而在白光处理下,Mn-SOD呈现先上升再下降的趋势,在绿光中,则是先下调再上升。在盐胁迫处理下,Mn-SOD基因的表达受到抑制,在蔗糖和不同天数处理中则不受影响。在一定浓度范围内,外源激素IAA、GA3、Me JA、SA和ETH均能诱导或抑制龙眼胚性愈伤组织中Mn-SOD基因的表达,提示其参与外源激素的应答。构建4个不同启动子缺失片段驱动报告基因GUS的植物表达载体并转化烟草。结果表明,龙眼Mn-SOD基因4个不同启动子缺失片段启动GUS基因的能力均低于Ca MV35S启动子,但均可启动GUS基因的表达。瞬时表达和定量表达结果显示,3’缺失的MSD-pro4(-669^-267 bp)启动GUS基因的能力最强,其次为5’缺失的MSD-pro1(-669^-1 bp),最弱的为MSD-pro2(-432^-1bp)和MSD-pro3(-267^-1 bp),提示Mn-SOD启动子-669^-432 bp区段内含有重要的正向顺式调控元件;而-432^-1 bp区段含有负调控元件。

小麦Mn-SOD基因的克隆及其在盐胁迫下的表达分析

为了探索小麦Mn-SOD基因的克隆及表达,根据GenBank上公布的序列(AF092524)设计引物,利用Reverse-transcriptase Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)技术克隆了小麦Mn-SOD基因的cDNA全长,并发现该基因主要在根中表达,在其他组织中的表达量比较低。通过不同浓度的NaCl溶液处理,发现该基因在小麦的根中可以被诱导调控表达。随着NaCl浓度的提高,该基因的表达量持续增强;但是NaCl的浓度超过0.20 mol.L-1时,其表达量反而下降。

高氧预适应增强大鼠心肌Mn-SOD基因表达及缺血梗塞心肌SOD活力

本文报告了一种新的心脏预适应途径即高氧预适应（ｈｙｐｅｒｏｘｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ，ＨＯＰ）。为观察高氧预适应对鼠心肌抗氧化酶的影响，我们给大鼠吸入８０％～８５％氧气，１ａｔｍ，每天６ｈ，连续７ｄ（ＨＯ组），然后进行实验并与室内空气环境下喂饲７ｄ的大鼠（对照组）进行比较。３０只Ｗｉｓｔｅｒ大鼠随机分为６组，每组５只：ＨＯ－１和对照－１组，ＨＯ吸入结束后直接处死，采用Ｎｏｒｔｈｅｎ杂交法测定心肌Ｍｎ－ＳＯＤｍＲＮＡ表达；ＨＯ－２和对照－２，采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ法造成６０ｍｉｎ缺血，６０ｍｉｎ再灌注，测心肌ＳＯＤ与冠脉回流液的ＣＰＫ及ＳＯＤ活力；ＨＯ－３和对照－３，同法造成１０ｍｉｎ缺血，６０ｍｉｎ再灌注，测心肌与冠脉回流液的ＳＯＤ活力。结果显示，ＨＯ－１组心肌Ｍｎ－ＳＯＤｍＲＮＡ表达明显较对照组增强。缺血及梗塞心肌ＳＯＤ的活力分别为（％／ｇ）：ＨＯ－２８３．６±０．５；对照－２７６．７±１．７（Ｐ＜０．０１），ＨＯ－３９０．１±１．９；对照－３８５．１±１．４（Ｐ＜０．０５）。ＨＯ组冠脉回流液的ＳＯＤ活力在缺血再灌注期明显高于对照组（Ｐ＜０．００１）。冠脉回流液ＣＰＫ活力ＨＯ－２组再灌注３０及?

大肠埃希菌Mn-SOD基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

目的实现Mn-SOD基因在大肠埃希菌中的高可溶性表达,制备Mn-SOD的多克隆抗体。方法用PCR方法从一株野生型大肠埃希菌(E.coli)基因组中扩增Mn-SOD基因编码区,将它克隆到原核表达载体上进行大量表达和纯化,再用纯化的蛋白对新西兰大白兔进行背部多点注射,40d后取其血清,用Western-blot印迹实验测定抗体效果。结果SDS-PAGE分析表明SOD的表达量约为细菌总蛋白的50%;黄嘌呤氧化酶法测定表达蛋白活性,结果表明每毫克菌体可溶性总蛋白中表达产物酶比活为3921.77U/mg,是对照BL21的276.77倍;并制备了高效价的多克隆抗体。结论该研究成功地构建了大肠埃希菌Mn-SOD基因高效原核表达系统,所表达的Mn-SOD具有良好的免疫原性和免疫反应性。

玉米Mn-SOD的分离纯化与性质分析

利用金属螯合亲和层析,结合DEAE-纤维素离子交换层析,从玉米匀浆液中分离纯化到电泳纯的Mn-SOD组分.双向电泳和SDS-PAGE分析表明:玉米Mn-SOD的亚基分子质量为26.2 kD,等电点为5.3;热稳定性、酸碱稳定性高于玉米Cu/Zn-SOD.

蜡样杆菌(Bacillus cereus)M22 Mn-SOD cDNA片断的克隆

分析不同种细菌Mn SOD氨基酸序列的保守区域 ,设计一对简并引物进行RT PCR扩增 ,产物经T A载体连接转化大肠杆菌JM 1 0 9,筛选阳性克隆、测序并进行同源性分析 ,得到 4 36bpMn SODcDNA片段。根据此片段设计 5′端特异性引物 ,然后进行 5′RACE扩增 ,获得Mn SOD 5′端 387bpcDNA片断。将 2段序列进行拼接获得 5 94bpcDNA片断 ,编码 1 72个氨基酸。对推定氨基酸序列进行BLAST分析 ,结果表明其与炭疽芽孢杆菌 (Bacillusanthracis)同源性为 95 % ,且Gly77,Aly78,Phe86,Gln1 50 和Asp1 51 在已报道的Mn SOD中均存在 ,构成Mn SOD的活性中心。表明该序列为蜡样芽孢杆菌Mn

Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达

将Mn SOD与抗癌胚抗原 (CEA)单链抗体基因 (ScFvgene)融合 ,重组到含T7启动子的表达载体 pET 2 2b(+)中 ,构建表达质粒pETMn SOD ScFv ,并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,进行高效表达 ,表达物占菌体可溶性总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物分子量为 45kD与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为分泌型表达有利于纯化。RIA测定表明表达产物能特异性的与抗原CEA结合 ,同时邻苯三酚法测定也表明表达产物具有SOD酶的活性 ,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗提供新的途径。

AFP调控的携带Mn-SOD基因的腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

利用改造后的溶瘤腺病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd作为载体携带治疗基因Mn-SOD,得到目的病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd-MnSOD;通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的特异杀伤能力和对肝正常细胞的安全性;Hoechst33342染色实验观察细胞凋亡的现象。结果显示:经目的病毒感染后肝癌细胞出现明显的病变现象和生长抑制,而肝正常细胞基本无病变现象出现,表明构建的目的病毒具有较高的安全性和很好的靶向性。此外目的病毒处理能引起特异性的肝癌细胞凋亡,所携带治疗基因Mn-SOD能通过促进肿瘤细胞的凋亡达到抑制肿瘤细胞生长的效果。

maspin、Mn-SOD表达与鼻咽癌组织放疗敏感相关性研究

目的研究maspin及Mn-SOD在放射治疗鼻咽癌中的表达,探讨其在放射治疗鼻咽癌中的意义。方法取60例2006年第1次入院放射治疗鼻咽癌,运用原位杂交方法检测放射治疗鼻咽癌中maspin及Mn-SOD mRNA的表达。结果在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌中,maspin mRNA中度及强阳性表达率分别为70.00%和42.50%,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率分别为55.00%和40.00%,差异有统计学意义。在放疗抗拒鼻咽癌中,maspin及Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率均与T分期呈正相关,T3和T4期中表达率分别为63.16%和63.16%,T1和T2期中表达率分别为23.81%和19.05%。在有、无远处转移中,maspin mRNA中度及强阳性的表达率分别为72.73%和31.03%,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率分别为81.82%和24.14%,差异有统计学意义。结论 maspin、Mn-SOD参与了放射抗拒鼻咽癌的发展。

枯草芽孢杆菌Mn-SOD基因的克隆及原核表达

为了实现Mn-SOD基因在大肠杆菌(E.coli)中的可溶性表达,根据枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168 sodA核酸序列设计引物,以枯草芽孢杆菌ATCC 9372基因组为模板,PCR扩增获得了Mn-SOD基因。将此基因重组至原核表达载体pET-28a,构建含Mn-SOD基因的重组表达质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得Mn-SOD,蛋白分子量约为26 kD,占全菌蛋白的45.6%。改良的连苯三酚自氧化法测定SOD活力,菌体可溶性总蛋白SOD比活为51.09U·mg^(-1),是对照组的4.84倍。枯草芽孢杆菌ATCC 9372 Mn-SOD基因在大肠杆菌BL21(DE3)中首次成功表达,产物具有较高的可溶性和活性,为大量制备Mn-SOD奠定了基础。

卵巢癌患者红细胞Mn-SOD检测的意义

目的 :通过对卵巢癌患者红细胞中锰 超氧化物歧化酶 (Mn SOD) ,超氧化物歧化酶 (SOD)检测来探讨机体防御机制的变化。方法 :对卵巢肿瘤患者 85例 ,其中良性肿瘤 43例 ,卵巢癌 42例及健康女性 94例的外周血 ,用黄嘌呤法检测SOD活性 ,并加入氰化钾 ,破坏Cu1Zn SOD后测量Mn SOD活性。将所测结果用方差分析作比较。结果 :在正常人与卵巢良性肿瘤患者外周血的比较中 ,SOD及Mn SOD活性差异均无显著意义。卵巢癌患者外周血SOD活性明显低于正常人也低于良性肿瘤患者 ,其差异均有显著性意义 (P <0 .0 5 )。而Mn SOD活性则高于正常人与卵巢良性肿瘤者 ,其差异也有显著性意义 (P <0 .0 5 )。且Mn SOD活力随着临床期别升高而上升 ,在不同病理分化程度中 ,低分化者其Mn SOD活性高于高分化者 (P <0 .0 5 )。结论 :Mn SOD ,SOD活性变化可能与卵巢癌发生 。

GRP78和Mn-SOD表达与鼻咽癌组织放疗敏感相关性研究

目的 研究GRP78、Mn-SOD mRNA在放射治疗鼻咽癌中的表达,探讨其在放射治疗鼻咽癌中的意义.方法 取60例2006年1月13日～11月26日第1次入院放射治疗鼻咽癌,运用原位杂交方法检测放射治疗鼻咽癌中GRP78及Mn-SODmRNA的表达.结果 在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌患者中,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为20.00％和47.50％,Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率分别为55.00％和40.00％,差异有统计学意义.在放疗抗拒鼻咽癌患者中,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率与TNM分期呈正相关,Ⅲ～Ⅳ期GRP78 mRNA中度和强阳性表达率为58.62％,Ⅰ～Ⅱ期表达率为18.18％,与T分期呈正相关,T3～T4期中表达率为68.42％,T1～T2期中表达率为28.57％;Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率与T分期呈正相关,T3～T4期中表达率为63.16％,T1～T2期中表达率为19.05％;在有、无远处转移中,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为72.73％和37.93％,Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率分别为81.82％和24.14％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 GRP78、Mn-SOD参与了放疗抗拒鼻咽癌的发展.

角果木Mn-SOD基因分离及其在酵母中的功能鉴定

为明确抗氧化系统在植物抵御盐胁迫中的作用,采用RT-PCR的方法分离角果木抗氧化酶相关基因Mn-SOD,采用酶切连接法构建酵母表达载体p YES2/Mn SOD,获得含有重组质粒的酵母菌INVScⅠ(p YES2/Mn SOD)能有效表达Mn SOD特异蛋白带。高浓度盐胁迫筛选结果表明,Mn-SOD基因在酵母中的表达能明显提高酵母菌INVSCⅠ的耐盐性。

海兰褐鸡法氏囊中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及iNOS cDNA克隆及序列分析

通过对海兰褐鸡法氏囊中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及iNOS cDNA克隆及序列分析,了解海兰褐鸡法氏囊中主要氧化-抗氧化酶的分布及其基因组成,为研究传染性法氏囊病及与法氏囊相关禽病的氧化-抗氧化发病机制奠定基础。结果显示,Cu/Zn-SOD、Mn-SOD cDNA序列分别出现2个碱基的突变,iNOS cDNA序列与原始序列同源性为100%。海兰褐鸡法氏囊中存在Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及iNOS3种与氧化-抗氧化相关酶,并且Cu/Zn-SOD、Mn-SODcDNA序列具有新特征,iNOS在海兰褐鸡体内是稳定存在的;海兰褐鸡可能与康奈尔K系鸡具有相似的遗传背景。