STUDY OF RADIOIMMUNOIMAGING WITH MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST THE PATIENTS WITH SCLC

It is an Innovative way to diagnose with cancer with monoclonal antibody (MAb) in vivo. 1-3 After proving MAb 2F7 (IgG2a) had a higher affinity and better specificity to human small cell lung cancer cells in vitro, 4.5 and gave a very clear cut γ- camera pictures for the xenografts of human small cell lung cancer (SCLC) born by nude mice, 6 the possibility of clinical radioimmunoimaging was studied with the MAb 2F7 and its fragment F (ab') 2.

疏水作用FPLC一步法制备级纯化抗人肝癌单抗HAb18F(ab')_2片段

目的 制备符合人用标准的肝癌单抗 HAb1 8F(ab') 2 片段 .方法 用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,胃蛋白酶与抗体在 p H3.5 0 .1 mol· L- 1柠檬酸条件下 ,经不同反应时间 ,收集样品 ,上 FPL C(快速蛋白液相色谱 )Phenyl- Sepharose HP疏水柱纯化并进行质检 .结果 按上述条件消化 2 h,95 %以上的 Ig G裂解为 F(ab') 2 片段 ,经Phenyl- Sepharose HP疏水柱纯化后 F(ab') 2 片段纯度可达98.8% .纯化时间仅 5 0 m in,一次制备量可达 5 0 0 mg,回收率>5 0 % ,免疫活性为 1∶ 80 0 0 ,细菌、热原质检测结果为阴性 .结论 该法操作简便 ,周期短 ,易于质控 ,是大量、快速、高产率制备 F(ab') 2 片段的有效方法 .

抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2 F(ab′)_2片段的特性

目的:研究经无花果蛋白酶酶切后所得的抗总黄曲霉毒素单抗2G2F(ab′)2片段的特性,为研制开发特异性、灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型单克隆、多克隆抗体提供科学依据。方法:在制备出抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2株及其2G2F(ab′)2片段的基础上,采用非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(非还原SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)对单抗2G2及其F(ab′)2片段的特性进行研究并加以比较。结果:单抗2G2F(ab′)2片段和单抗2G2的相对分子质量分别为105000和180000。单抗2G2F(ab′)2片段和单抗2G2的比效价分别为3.33和1.25。单抗2G2F(ab′)2片段的最低检出限和达到50%竞争抑制率时的检出限分别为0.17μg/L和0.67μg/L,单抗2G2的分别为0.47μg/L和1.92μg/L。单抗2G2F(ab′)2片段的亲和力常数为2.95×10-9mol/L,单抗2G2的亲和力常数为1.52×10-10mol/L。结论:单抗2G2F(ab′)2片段灵敏度优于完整抗体,可利用其生产特异性和灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型多克隆和单克隆抗体。

单抗TIGTC-Ⅲ片段F(ab′)_2的制备及其放射免疫显像研究

目的：将抗人原发性肝癌（ＰＬＣ）单抗ＴＩＧＴＣⅢ，用胃蛋白酶法消化成Ｆ（ａｂ′）２片段，标记１３１Ｉ后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法：采用胃蛋白酶消化法，进行裸鼠体内核素显像。结果：消化产率为３１７％±２４％，经细胞结合实验证明Ｆ（ａｂ′）２具有良好的免疫活性，抗体片段进入裸鼠体内后，与完整抗体比，进入肿瘤的速度快，生物学分布特异性高，定位指数上升，血清本底下降迅速，生物半衰期明显缩短。结论：Ｆ（ａｂ′）２与全抗体比较可使成像时间提前。

鼠源性单克隆抗体F(ab′)_(2)片段制备工艺

目的 制备符合临床应用质量标准的鼠源性 m Ab F(ab′) 2 片段 .方法 采用胃蛋白酶消化小鼠腹水抗体 ,疏水作用色谱法纯化 F(ab′) 2 片段的新工艺 ,替代原有的木瓜蛋白酶消化 Ig G,阴离子交换色谱法纯化的旧工艺 .结果 新工艺所制备的 F(ab′) 2 片段经 SDS- PAGE检测纯度达 98%以上 ,ABC免疫组化法测定免疫活性为 1∶ 80 0 0 ,回收率大于 5 0 % ,核酸含量及热原均合格 ,整个工艺流程可在 48h内完成 .结论 新工艺制备人用鼠源性 m Ab F(ab′) 2 片段更简便高效、安全实用 。

肝癌单克隆抗体HAb18及其F（ab′）_2、Fab片段在小鼠体内的药代动力学研究

作者对１３１Ｉ标记的抗人肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８及Ｆ（ａｂ′）２、Ｆａｂ片段在小鼠体内的药代动力学进行研究。结果表明：（１）３种标记物的药代动力学模式有很大差异，完整抗体ＨＡｂ１８的清除过程符合开放一空模型，清除速率与注射剂量有关。按照剂量从高至低，其Ｔ１／２（整体排泄）分别为４８．０８ｈ、４２．６５ｈ、４０．５４ｈ；Ｔ１／２（血液清除）依次为６１．４２ｈ、４８．０７ｈ、４１．０３ｈ。（２）抗体片段的清除速率明显快于完整抗体，清除过程呈双相下降，符合二室模型。Ｆ（ａｂ′）。整体排泄的Ｔ１／２ａ为５．２９ｈ，Ｔ１／２β为３９．３７ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为４．２０ｈ，Ｔ１／２β为３４．６１ｈ。Ｆａｂ片段整体排泄的Ｔ１／２ａ为３．５１ｈ，Ｔ１／２β为２０．２２ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为１．３９ｈ，Ｔ１／２β为２４．３９ｈ。提示：完整抗体适用于肿瘤导向治疗，显像诊断则以抗体片段为佳。

抗人肝癌mAb HAb18F(ab′)_2半成品的制备与质量控制

目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2 片段。方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果经Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化后 ,F(ab′)2 片段的纯度可达98.8% ;回收率大于50 % ;免疫活性为1∶8000;细菌、热原质检测均呈阴性。结论本制备工艺周期短、易于质控 ,适宜进行中试放大及半成品生产。

单克隆抗体TNT-1的纯化、F(ab)_2片段化及其免疫活性的测定

TNT-1是-种鼠IgG_2a单抗,已用于肿瘤病人的临床试验。本文将介绍从腹水中进一步纯化TNT-1的方法及制备其F(ah′)_2片段的条件。经Protein A亲和柱层析从小鼠腹水中提取出的lgG,再通过阳离子交换树脂柱Mono S,用缓冲液A(20 mmol/L MES,pH6.3)和缓冲液B(lmol/L NaCI),在快速蛋白液相色层(FPLC)系统上进行梯度洗脱分离,可制得纯净的TNT-1抗体,其免疫活性可达80％～85％;经纯化的TNT-1,用胃蛋白酶消化,制备F(ah′)~2片段,其消化条件是:酶的用量为抗体的1/250,pH3.8,温度37℃,时间4～5 /小时。消化后的混合物,用protein A亲和结合法除去完整的IgG,其余的F(ab′)_2和Fab、Fc等片段,在Mono S柱上,按前述的条件分离。产物TNT-1或F(ah′)_2的免疫活性,用标记抗体和过量抗原结合的方法测定;分高纯化过程中的洗脱峰,用间接免疫荧光技术监测其活性。结果戾明,TNR-1的F(ab′)_2片段的制备是成功的,色层分离纯化的方法简便而有效,并已成功地应用于批量生产。

抗汉坦病毒单克隆抗体F(ab')_2的制备及其纯度和活性鉴定

利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）３Ｇ１和３Ｄ８Ｆ（ａｂ′）２片段。通过ＷａｔｅｒＤＥＡＥ４０ＨＲ阴离子交换色谱柱纯化后，非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ呈现单一条带，相对分子质量（Ｍｒ）约１０００００。两种Ｆ（ａｂ′）２片段均具有良好的血凝抑制活性。

结肠肿瘤性病变单克隆抗体MC_3的表达及其与异型粘液分泌的关系

本文应用抗人结肠癌单克隆抗体MC_3对32例结肠腺病性息肉。11例绒毛状腺病,18例结肠腺瘤伴不典型增生和36例结肠腺癌组织进行了PAP免疫组织化学染色,并同时采用醛复红—阿辛蓝(AF/AB)复合染色法,观察了结肠癌异型粘液分泌与MC_3表达的关系。结果表明,MC_3主要为结肠肿瘤的标记癌组织MC_3表达有三种类型即腺腔型腔缘型和细胞型、前两型表达亦见于结肠腺瘤,其中腺瘸性息肉和绒毛状腺瘤MC_3表达的阳性率存在差异。本文还观察到癌组织MC_3表达的类型与强度癌细胞分泌非硫酸粘液有一定关系。 本文提示MC_3与结肠肿瘤细胞的分泌有关,并可将其用于结肠癌细胞生物学特性研究及结肠肿瘤的辅助诊断。

抗黄曲霉毒素单克隆抗体F(ab')2片段的制备与活性

为剧毒靶标(黄曲霉毒素)绿色分析提供高效抗体,在已有抗黄曲霉毒素杂交瘤细胞株1C11的基础上,通过小鼠腹水法制备单克隆抗体,经胃蛋白酶酶解,制备F(ab')2片段,发现在优化条件37℃、pH4.1柠檬酸缓冲液中酶解4.5h,可高效制备F(ab')2片段。通过酶联免疫吸附法(ELISA)比较了抗体片段与原始抗体的识别活性,发现F(ab')2片段效价达到1∶320 000,是原抗体效价的1.5倍;灵敏度(IC50)为8.7pg/mL,保持了原抗体的抗原结合能力。

人源型抗C5单克隆抗体Eculizumab的应用

补体系统是获得性免疫系统的重要部分,补体在多种疾病的病理生理过程中发挥着主要作用。阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种获得性造血干细胞基因突变所致的难治性溶血性疾病。人源型抗补体蛋白C5单克隆抗体(Eculizumab)是于2007年被美国FDA和欧盟委员会唯一认可的定向治疗PNH的药物。本文将对其在PNH及其他补体相关疾病的治疗中的应用进行综述。

FPLC纯化单克隆抗体（Fab＇）_2片段

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱，在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了抗肝癌单克隆抗体（ＨＡｂ１８）Ｆ（ａｂ＇）２片段的快速纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ用胃蛋白酶消化１８ｈ后，上阴离子交换色谱柱纯化，用ｐＨ７．５１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ洗脱，即得到纯化的Ｆ（ａｂ＇）２．一次纯化周期仅需２５ｍｉｎ，一次上样量１２０～１６０ｎｇ蛋白，Ｆ（ａｂ＇）２得率为３４％，回收率为５１％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定纯度大于９５％，免疫荧光法测定活性为１：４０００．该法操作简单、快速、实用性强，不需要高档次的色谱仪，只要有一台核酸／蛋白检测仪便可进行纯化，是实验室纯化Ｆ（ａｂ＇）２的理想方法．

抗氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定

本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ,诱生腹水的效价可达 1× 10 8。两株单克隆抗体的亚型为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目为 84～ 96条。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。ci EL ISA检测显示其与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小 ,其灵敏度为 0 .1ng/ ml,IC50 为 2 .38ng/ m l。

乙酰胆碱酯酶抗独特型抗体的研制

目的 研制乙酰胆碱酯酶 (Acetylcholinesterase ,AchE)抗独特型抗体并测定酶活性。方法 AchE单克隆抗体是一种IgG1抗体 ,先用木瓜蛋白酶酶切 ,然后采用AchE Sepharose 4B和SPA亲和层析柱进行提取纯化 ,获得纯化的单克隆抗体Fab段。以Fab作为抗原 ,免疫小鼠 ,制备抗Fab独特型抗体 ,采用酶催化ELISA法研究该单克隆抗体的乙酰胆碱酯酶活性。结果 制备出高效价抗乙酰胆碱酯酶抗体Fab段的独特型抗体 ,该抗体具有乙酰胆碱酯酶活性。结论 AchE单克隆抗体的独特型抗体具有AchE活性。

异色瓢虫卵黄蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

【目的】为了能准确地追踪异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)的合成、转运途径和吸收方式,以及卵黄蛋白(vitellin,Vn)在卵母细胞内的积累及分布情况,本研究对异色瓢虫的Vn进行了单克隆抗体(monoclonal antibody,Mc Ab)的制备。【方法】以异色瓢虫Vn免疫BLAB/C小鼠,应用杂交瘤技术,经过3次亚克隆筛选,制备能稳定分泌抗Vn的单克隆抗体。【结果】实验获得4株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体,即5E2,5E11,1E9和5H8。其中1E9,5E11和5E2亚型均为Ig G1,5H8亚型为Ig M。Western blot免疫印迹分析显示,4株单克隆抗体可以特异性地识别Vn,而与雄虫血淋巴无反应。其中,5E2和1E9可以与异色瓢虫抗原的4个亚基发生较强的免疫反应,结合腹水制备前上清效价检测结果最终选取5E2制备单克隆抗体。5E2单克隆抗体的效价为1∶81 000,SDS-PAGE分析显示5E2重链和轻链的分子量分别为50和27 k D。【结论】本实验成功制备出一株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体,为建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定其动态变化奠定了基础。

一株A和B亚群禽白血病病毒特异性单克隆抗体的制备及其特性

目的:制备A和B亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)特异性单克隆抗体。方法:用ALV-A-SDAU09C1株的env-gp85基因的PCR产物构建重组表达性质粒pET32a-SDAU09C1-gp85,经IPTG诱导后,表达分子量为53 kD的ALV-A囊膜gp85蛋白与GST的融合蛋白,将表达产物免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,筛选杂交瘤细胞株。结果:获得了1株(A6D1株)能与A和B亚群ALV发生反应但不与J亚群ALV反应的杂交瘤细胞株。Western blot试验结果表明,单克隆抗体识别的A和B亚群ALV囊膜糖蛋白的分子量为53 kD。在IFA中,这株单克隆抗体可以与所试验的3株ALV-A和1株ALV-B毒株反应,而与4株ALV-J亚群的毒株不反应。结论:A6D1株单克隆抗体可以用于A和B亚群ALV感染的诊断和流行病学调查,弥补了目前只有J亚群ALV特异性单克隆抗体可用的不足。

抗微囊藻毒素单克隆抗体胶体金标记物的制备及鉴定

目的制备抗微囊藻毒素(MC-LR)单克隆抗体胶体金标记物,并利用光谱分析来探讨结合物的合成机理。方法用杂交瘤技术生产并纯化的抗MC-LR的单克隆抗体,利用胶体金标记技术合成20nm粒径的胶体金与抗MC-LR单克隆抗体的结合物,通过光谱分析对偶联物中单克隆抗体的构象进行分析,ELISA法检测偶联物中抗体的免疫性。结果抗MC-LR单克隆抗体的效价达108,IC50抑制浓度为3ng/ml,为IgG2a亚型,分子量为1·5×105,与MC-LW、MC-LF无明显交叉反应。胶体金与抗体偶联物的颗粒圆整,光谱分析结果显示抗体蛋白的特征官能团没有发生明显变化,与胶体金粒子作用后结构略加紧密。ELISA结果显示偶联物仍然保持免疫原性。结论抗MC-LR单克隆抗体胶体金标记偶联物中抗体蛋白结构和抗原决定簇的位点没有改变,仍具有免疫原性,偶联物的稳定性良好。

偶联单克隆抗体的聚氨酯膜在基因定位递送中的应用

目的研究偶联单克隆抗体胶原涂覆的聚氨酯膜在基因定位递送中的应用。方法将抗腺病毒纤突的单克隆F(ab)’2抗体通过巯基反应共价键偶联到胶原涂覆的聚氨酯膜上,再通过抗体-抗原特异性反应携带病毒基因载体,得到局部定位的基因运载体系。用报告基因进行平滑肌细胞(A10细胞)的体外转染实验和模拟生理条件的稳定性实验。结果体外细胞转染实验显示,该方法携带的载基因病毒在A10细胞中实现了高效、高度定位的基因表达。模仿生理条件的体外稳定性实验表明,通过抗体结合在PU膜上的载基因病毒可缓慢持续地释放出来,有效地转染A10细胞达20d左右。结论这种经抗病毒抗体连接固定于胶原涂覆聚氨酯膜的病毒能很好地局部定位递送基因,可望用于临床基因治疗。