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Development and Characterization of Monoclonal Antibody Specific to Nuclear Protein of Avian Influenza Virus Type A 被引量:7
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作者 李娜 秦爱建 +2 位作者 邵红霞 金文杰 刘岳龙 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第1期60-63,66,共5页
Five monoclonal antibodies(Mabs) to nuclear protein of avain influenza virus(AIV) were developed by syncretizing SP 2/0 and the spleen cells from BALB of mice immuized with H9 subtype AIV. Specificity of these Mab... Five monoclonal antibodies(Mabs) to nuclear protein of avain influenza virus(AIV) were developed by syncretizing SP 2/0 and the spleen cells from BALB of mice immuized with H9 subtype AIV. Specificity of these Mabs were identified by immunofluorescent assay(IFA) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). These five Mabs which were named as AIV-NP-2C3, AIV-NP-6A5, AIV-NP-3 H9, AIV-NP-7B4, AIV-NP-2H4 could react with all viruses of AIV-H9 strains in tests. The result of Western blotting showed that only the 60 ku protein antigen of AIV-H9 could be recognized by the Mabs but never recognized by New castle disease virus, REV and infectious bursa disease virus. The result of preliminary application showed that avian influenza viruses could be deetected bv Mabs in IFA and ELISA. All these Mabs will probably play important roles in preventing and monitoring avian influenza viruses. 展开更多
关键词 Avian influenza virus NP monoclonal antibody immunofluorescent assay (IFA) ELISA
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Preparation and Preliminary Identification of Fluorescein Labeled Monoclonal Antibody against Canine Distemper Virus 被引量:3
2
作者 苏建青 褚秀玲 +2 位作者 杨松涛 夏咸柱 岳妙姝 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第1期115-118,144,共5页
[Objective] The aim of the present study was to develop a direct immunofluorescence method for the diagnosis of canine distemper (CD) with FITC-conjugated monoclonal antibodies (FITC-McAb).[ Metbod] The McAb again... [Objective] The aim of the present study was to develop a direct immunofluorescence method for the diagnosis of canine distemper (CD) with FITC-conjugated monoclonal antibodies (FITC-McAb).[ Metbod] The McAb against CDV, designated as CE3, was purified with protein G and labeled with FITC through agitation method. After purification and identification, the optimal working concentration of FITC-labeled CE3 was determined. Then 61 clinical samples of suspected canine distemper were detected by direct immunofluorescence assay. [ Result] The absorption test, blocking test and specificity test showed that the labeled antibody had high specificity and sensitivity, but didn't have cross reaction with canine parvovirus (CPV), canine parainfluenza virus (CPIV), canine adenovirus (CAV) and rabies virus (RV). The optimal working concentration was 1:80. The positive rate of clinical suspected samples was 48%. [ Conclusion] The direct immunofluorescence assay developed in this study was rapid, specific and convenient, and had great significance for the early diagnosis of canine distemper. 展开更多
关键词 Canine distemper virus Direct immunofluorescence assay monoclonal antibody
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Characterization and potential diagnostic application of monoclonal antibodies specific to rabies virus 被引量:5
3
作者 Xinjian Liu Xiaomin Feng +7 位作者 Qi Tang Zhongcan Wang Zhenning Qiu Yuhua Li Changjun Wang Zhenqing Feng Jin Zhu Xiaohong Guan 《The Journal of Biomedical Research》 CAS 2010年第5期395-403,共9页
Objective:Rabies is invariably a fatal encephalomyelitis that is considered to be a serious public health problem.It is necessary to develop standard rabies virus diagnostic tools,especially for diagnosing the strain... Objective:Rabies is invariably a fatal encephalomyelitis that is considered to be a serious public health problem.It is necessary to develop standard rabies virus diagnostic tools,especially for diagnosing the strains prevalent in China.Methods:Monoclonal antibodies(MAbs)specific to rabies virus were produced and characterized by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA),isotyping,affinity assay,immunofluorescence assay(IFA),and immunocytochemistry.The MAb,whose affinity was higher for antigen,was used to establish an antigen captureELISA(AC-ELISA)detection system and test the efficiency by using clinical samples.Results:The heavy chain subclasses of two MAbs were all determined to be IgG2a.The 3C7 MAb showed stronger reactivity with rabies virus protein than the 2C5 MAb in an ELISA analysis,whereas the 3C7 MAb showed the highest affinity for antigen.IFA and immunocytochemistry results also indicated that the two MAbs could recognize rabies virus protein in its native form in cell samples.Data obtained using clinical samples showed that rabies virus could be detected by AC-ELISA detection system using the 3C7 MAb.Conclusion:It was potentially useful for the further development of highly sensitive,easily handled,and relatively rapid detection kits/tools for rabies surveillance in those areas where rabies is endemic,especially in China. 展开更多
关键词 rabies monoclonal antibody purified antibody immunofluorescence immunocytochemistry antigen capture-ELISA
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Recognition with monoclonal antibodies of a Mr 71000 surface antigen of Plasmodium falciparum merozoites
4
作者 蒋春雷 徐荻 +3 位作者 管惟滨 王笑利 孔宪涛 颜永碧 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1993年第1期65-70,74,共7页
Merozoite surface antigens can induce protective immune responses and may becandidate antigens for malaria vaccine.Four hybridoma cell lines secreting monoclonalantibodies against Plasmodium falciparum Fcc7801/HN were... Merozoite surface antigens can induce protective immune responses and may becandidate antigens for malaria vaccine.Four hybridoma cell lines secreting monoclonalantibodies against Plasmodium falciparum Fcc7801/HN were produced.Antibodies fromthree of the four lines showed significant growth-inhibiting effect on P.falciparum invitro.One monoclonal antibody,known as C6,conjugated the antigen located exclusivelyon the merozoite surface and distributed evenly over the entire surface,as wasdemonstrated by immunoelectron microscopy.C6 also precipitated a single protein of Mr71000. 展开更多
关键词 Plasmodium FALCIPARUM ANTIBODIES monoclonal MEROZOITE antigens protczoan immunofluorescence assay immunoblotting microscopy electron
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小鼠抗NLRP3单克隆抗体的制备及鉴定
5
作者 姚羽慧 崔蒙蒙 孟广勋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期354-361,共8页
目的 制备小鼠抗含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)的单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法 将编码小鼠NLRP3基因外显子3(Ms-N3)的基因片段插入载体p36-G3-throhFc中构建重组质粒Ms-N3-throhFc,然后将该质粒转染... 目的 制备小鼠抗含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)的单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法 将编码小鼠NLRP3基因外显子3(Ms-N3)的基因片段插入载体p36-G3-throhFc中构建重组质粒Ms-N3-throhFc,然后将该质粒转染到HEK293F细胞中,进行真核蛋白表达。进一步利用蛋白A亲和层析柱纯化得到Ms-N3蛋白并免疫NLRP3基因敲除(NLRP3^(-/-))小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞。进而通过ELISA和免疫荧光方法筛选能够分泌特异性识别小鼠NLRP3的mAb的杂交瘤细胞。结果 成功构建Ms-N3-throhFc重组质粒并证明该质粒能在HEK293F细胞中稳定表达。ELISA初步筛选获得12株杂交瘤细胞,经过免疫荧光实验检测发现其中的9-B8-3-2-C5分泌的mAb能够特异性识别非变性的小鼠NLRP3蛋白,该mAb的重链亚型为IgM,轻链亚型为κ。结论 成功获得小鼠抗NLRP3 mAb。 展开更多
关键词 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 真核表达 蛋白纯化 单克隆抗体(mAb) 免疫荧光
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鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72单克隆抗体的制备及应用
6
作者 徐超楠 孙雨雨 +3 位作者 王佳 郭宝琴 魏畅 李强 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期598-605,共8页
鲤疱疹病毒Ⅱ型是引起鲫造血器官坏死病的重要病原。为建立基于抗原水平的免疫检测方法,通过原核表达方法制备鲤疱疹病毒Ⅱ型核衣壳蛋白ORF72,将纯化的ORF72蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术筛选获得单克隆抗体1B3、4B1、4C2、5F4和5H... 鲤疱疹病毒Ⅱ型是引起鲫造血器官坏死病的重要病原。为建立基于抗原水平的免疫检测方法,通过原核表达方法制备鲤疱疹病毒Ⅱ型核衣壳蛋白ORF72,将纯化的ORF72蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术筛选获得单克隆抗体1B3、4B1、4C2、5F4和5H9。免疫印迹分析显示,上述5株单抗均可特异性识别重组蛋白ORF72;免疫荧光分析显示,仅单抗4C2可与感染鲤疱疹病毒Ⅱ型的鲫脾脏发生阳性反应。利用单抗4C2通过间接免疫荧光技术对鲤疱疹病毒Ⅱ型感染鎏金金鱼鳍条细胞系(RyuF-2)后ORF72蛋白表达情况进行检测,结果显示,感染后36 h可检测到阳性信号,并且随着感染时间的延长,细胞中ORF72的表达量明显增加。本试验制备的单克隆抗体4C2为体外进一步探究鲤疱疹病毒Ⅱ型在细胞内的复制机制及建立病鱼免疫检测手段奠定了基础。 展开更多
关键词 异育银鲫 鲤疱疹病毒Ⅱ型 ORF72 单克隆抗体 间接免疫荧光
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鸡源EphrinA2基因的克隆表达及其单克隆抗体研制
7
作者 相汝苹 姚晓慧 +5 位作者 谢泉 万志敏 邵红霞 秦爱建 叶建强 李拓凡 《中国家禽》 北大核心 2023年第9期25-30,共6页
研究旨在研制抗鸡EphrinA2蛋白的特异性单克隆抗体。试验用PCR和同源重组技术构建了鸡EphrinA2真核及原核表达载体,以纯化的EphrinA2原核表达产物免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA方法筛选出阳性细胞克隆;用SDS-... 研究旨在研制抗鸡EphrinA2蛋白的特异性单克隆抗体。试验用PCR和同源重组技术构建了鸡EphrinA2真核及原核表达载体,以纯化的EphrinA2原核表达产物免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA方法筛选出阳性细胞克隆;用SDS-PAGE、间接免疫荧光试验和Western blot验证表达产物及单抗的特性。结果显示:原核表达的重组蛋白His-EphrinA2-RBD主要位于细菌包涵体中;获得2株能稳定分泌抗EphrinA2蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4H6和1G9;单克隆抗体4H6不仅能特异性识别真核表达载体pcDNA3.1-EphrinA2在DF-1细胞中表达的EphrinA2蛋白,而且能有效识别LMH和DF-1细胞中内源性的EphrinA2蛋白。结果表明,单克隆抗体4H6与鸡EphrinA2蛋白反应性和特异性均良好,能够应用于鸡EphrinA2相关基础研究。 展开更多
关键词 鸡源EphrinA2 蛋白表达 单克隆抗体 间接免疫荧光试验 Western blot
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嗜水气单胞菌单克隆抗体的制备及特性分析 被引量:11
8
作者 陈红燕 林天龙 +2 位作者 陈日升 杨金先 陈强 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-125,共5页
利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT 1和AH105012株嗜水气单胞菌的菌体单抗,筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株,并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定,这些单抗分属IgM、IgG2α2个亚类,且均具有ELISA反应特... 利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT 1和AH105012株嗜水气单胞菌的菌体单抗,筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株,并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定,这些单抗分属IgM、IgG2α2个亚类,且均具有ELISA反应特性,腹水抗体效价在1∶104~1∶106,其中单抗4G4、2H4、GH9具有免疫荧光特性。ELISA特异性分析结果表明,4G4、2H4、FA4、GH9、CF2为嗜水气单胞菌血清型特异性单抗,4G4、2H4识别同一种血清型的嗜水气单胞菌分离株,而FA4、GH9、CF2却识别另外一种血清型的嗜水气单胞菌,并且与其他血清型的嗜水气单胞菌、温和气单胞菌以及鳗弧菌、爱德华氏菌、克鲁氏耶尔森菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌均不反应。Western blot结果表明,单抗4G4、2H4、FA4所针对的抗原是菌体脂多糖(LPS),且它们所识别的LPS抗原表位不同。菌体单抗研究结果表明,4G4、2H4和GH93株单抗可应用于嗜水气单胞菌的诊断和血清分型。本研究目的旨为建立一种快速诊断鱼类嗜水气单胞菌病的方法和血清分型方法。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 单克隆抗体 制备 特性分析 抗体效价 诊断 血清分型 鱼类
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用单抗介导的免疫荧光试验检测组织切片中的禽网状内皮组织增生病病毒 被引量:20
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作者 张志 王锡乐 +1 位作者 庄国庆 崔治中 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期122-124,共3页
以禽网状内皮组织增生病病毒 (Reticuloendotheliosis virus,REV)的单克隆抗体 1 1B1 5 4作为一抗 ,建立了从组织病理切片中检测 REV的免疫荧光技术 (Mc- IFA)。运用该技术对人工接种 REV的肉鸡和疑似 REV病鸡的肝脏、脾脏、心脏和肾脏... 以禽网状内皮组织增生病病毒 (Reticuloendotheliosis virus,REV)的单克隆抗体 1 1B1 5 4作为一抗 ,建立了从组织病理切片中检测 REV的免疫荧光技术 (Mc- IFA)。运用该技术对人工接种 REV的肉鸡和疑似 REV病鸡的肝脏、脾脏、心脏和肾脏等器官的组织切片进行了检测 ,并与病毒分离和斑点杂交试验的敏感性和特异性进行了比较。结果表明 ,在人工接种的感染肉鸡中 ,3种方法均为阳性 ;在 30份疑似 REV的病料中 ,用 Mc- IFA可以检测出 1 0份阳性 ,而病毒分离只有 8份样品为阳性。由此表明 ,Mc- IFA的特异性和敏感性均较高 ,完全可以用于 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 单克隆抗体 免疫荧光试验 组织切片
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J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果 被引量:22
10
作者 秦爱建 刘岳龙 +1 位作者 周绮雯 黄维嘉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期214-216,共3页
应用特异性抗J亚群禽白血病病毒 (ALV_J)的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV_J抗原和抗体的方法。结果表明 ,在ALV_JADOL_Hcl感染鸡胚成纤维细胞 (CEF) 2 4小时后 ,可以用 1FA检测出阳性细胞 ,感染 72小时后 ,可以检测出最小病毒感... 应用特异性抗J亚群禽白血病病毒 (ALV_J)的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV_J抗原和抗体的方法。结果表明 ,在ALV_JADOL_Hcl感染鸡胚成纤维细胞 (CEF) 2 4小时后 ,可以用 1FA检测出阳性细胞 ,感染 72小时后 ,可以检测出最小病毒感染量为≥ 1.2 5TCID50 /孔。对人工感染ALV_J鸡肾脏冰冻切片检测结果证明 ,免疫荧光法可以检测出组织中的ALV_J抗原 ,表现强阳性反应。用重组病毒rBac4817_env感染的Sf9细胞作抗原 ,可以检测出鸡血清中抗ALV_J的特异性抗体。该方法在ALV_J的控制中必将产生重要作用。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 单克隆抗体 免疫荧光试验
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抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究 被引量:10
11
作者 李娜 秦爱建 +2 位作者 邵红霞 金文杰 刘岳龙 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期9-12,共4页
利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经免疫荧光试验(IFA)检测,以研制抗禽流感病毒(AIV)单克隆抗体。结果获得了5株特异性抗AIV核蛋白(NP)的单克隆抗体细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A... 利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经免疫荧光试验(IFA)检测,以研制抗禽流感病毒(AIV)单克隆抗体。结果获得了5株特异性抗AIV核蛋白(NP)的单克隆抗体细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A5、AIV-NP-3H9、AIV-NP-7B4、AIV-NP-2H4。这5株单克隆抗体能与所有试验的AIV-H9病毒反应,Western blotting方法鉴定结果表明,单克隆抗体仅识别60 ku的蛋白抗原,而不与新城疫病毒、禽网状内皮组织增殖症病毒、传染性法氏囊病毒等反应。初步应用结果显示,以这些单克隆抗体建立的间接免疫荧光试验或ELISA方法可迅速检测出禽流感病毒,这些单克隆抗体在禽流感的预防监测中将发挥重要的作用。 展开更多
关键词 禽流感病毒 核蛋白 单克隆抗体 间接免疫荧光试验 ELISA
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肠出血性大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:7
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作者 孙洋 冯书章 +4 位作者 祝令伟 郭学军 尹铁勇 刘军 周博 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期971-973,977,共4页
目的建立能够分泌针对肠出血性大肠杆菌O157∶H7表面抗原的特异性单克隆抗体,以期用于该病原菌的检测。方法以敲除毒力基因的O157突变株F25全菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,分别以全菌抗原和热酚水法纯化的O157 ... 目的建立能够分泌针对肠出血性大肠杆菌O157∶H7表面抗原的特异性单克隆抗体,以期用于该病原菌的检测。方法以敲除毒力基因的O157突变株F25全菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,分别以全菌抗原和热酚水法纯化的O157 LPS抗原用间接ELISA筛选能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定。结果建立了稳定分泌抗O157 LPS抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D6,分泌抗体属IgG3亚类,轻链为κ型。腹水抗体ELISA效价达1∶3.2×106。以辛酸/饱和硫酸铵法纯化后抗体效价为1∶1.6×106,亲和常数Ka大于6.14×10-11mol/L。用于协同凝集和间接荧光抗体试验具有良好的特异性。结论该单克隆抗体针对O157的LPS抗原,特异性强,亲和力高,可用于O157的检测或分离鉴定。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LPS 单克隆抗体 免疫荧光 协同凝集
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抗牛安氏隐孢子虫单克隆抗体的研制与初步鉴定 被引量:5
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作者 菅复春 张龙现 +2 位作者 苏敬良 宁长申 梁楠 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第3期134-138,共5页
通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性... 通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经间接ELISA方法筛选,有限稀释法3~4次克隆,获得5株分泌抗牛安氏隐孢子虫(C.andersoni)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3,3B10,3F4,4B3,4F11).5株单抗的染色体数目平均在96~98条之间,上清效价分别在1:100和1:12 800之间,腹水效价分别在1:12 800和1:204 800之间.采用免疫荧光法对各株的单抗腹水进行初步鉴定,发现其中4株为抗卵囊壁单抗,1株为抗子孢子单抗.对其中3株单抗的腹水提纯后进行SDS-PAGE电泳分析,其重链分子量约为52.7kDa,轻链分子量约为24kDa. 展开更多
关键词 牛安氏隐孢子虫 单克隆抗体 ELISA 免疫荧光 单克隆抗体 实验室鉴定 隐孢子虫 奶牛 蔗糖密度梯度离心 BALB/C小鼠 间接ELISA方法 SDS-PAGE 流行病学调查
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日本血吸虫信号蛋白14-3-3的虫体免疫定位 被引量:20
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作者 刘庆中 沈继龙 汪学龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期330-332,共3页
目的 研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。 方法 从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和... 目的 研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。 方法 从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和成虫制备冰冻切片。利用rSj1 4 3 3单克隆抗体 ,间接免疫荧光法探讨信号蛋白 1 4 3 3虫体内的分布。 结果 免疫荧光染色结果显示 ,rSj1 4 3 3单克隆抗体可特异性地结合天然Sj1 4 3 3抗原表位 ,背景清晰 ,Sj1 4 3 3广泛分布在雌、雄成虫的皮层、皮下层、肌层和实质层 ,前三种组织中特异性荧光呈线状分布 ,实质中特异性荧光弥散 ;童虫中Sj1 4 3 3也广泛的分布在皮层、皮下层、肌层和实质层。 结论 免疫荧光染色成功地确定了Sj1 4 3 3蛋白在成虫和 1 展开更多
关键词 日本血吸虫信号蛋白14-3-3 虫体 免疫定位 单克隆抗体 SJ14-3-3 成虫 童虫
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抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定 被引量:18
15
作者 苏建青 褚秀玲 +2 位作者 杨松涛 夏咸柱 岳妙姝 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3552-3554,共3页
[目的]建立利用单克隆抗体检测犬瘟热病毒的直接免疫荧光诊断方法。[方法]通过搅拌法,用异硫氰酸荧光素标记G蛋白纯化的抗犬瘟热病毒单抗CE3,对荧光抗体进行纯化、鉴定,并确定其最适工作浓度。对61份临床可疑犬瘟热病料进行直接免疫荧... [目的]建立利用单克隆抗体检测犬瘟热病毒的直接免疫荧光诊断方法。[方法]通过搅拌法,用异硫氰酸荧光素标记G蛋白纯化的抗犬瘟热病毒单抗CE3,对荧光抗体进行纯化、鉴定,并确定其最适工作浓度。对61份临床可疑犬瘟热病料进行直接免疫荧光检测。[结果]吸收试验、阻断试验和特异性试验结果显示,标记抗体具有高度的敏感性和特异性,与犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬腺病毒(CAV)、狂犬病毒(RV)无交叉反应,其最优化工作浓度为1∶80。对临床可疑犬瘟热病料的阳性检出率是48%。[结论]该研究建立的直接免疫荧光方法具有快速、特异和简便的优点,对犬瘟热疾病的早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 直接免疫荧光 单克隆抗体
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六种抗大鼠Nogo-A分子单克隆抗体的免疫荧光组织化学染色特性的比较 被引量:3
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作者 邓斌 刘芳芳 +5 位作者 赵湘辉 于才勇 卞干兰 冯睿 鞠躬 王键 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期425-427,共3页
目的:检测和比较6种针对大鼠Nogo-A分子不同表位的单克隆抗体(mAb)应用于中枢神经组织的免疫组化染色特性,从而决定它们今后可能的应用范围和方法。其中4种mAb是针对Nogo-A分子中Nogo66片段,分别命名为No-go66-1、Nogo66-2、Nogo66-3和N... 目的:检测和比较6种针对大鼠Nogo-A分子不同表位的单克隆抗体(mAb)应用于中枢神经组织的免疫组化染色特性,从而决定它们今后可能的应用范围和方法。其中4种mAb是针对Nogo-A分子中Nogo66片段,分别命名为No-go66-1、Nogo66-2、Nogo66-3和Nogo66-4;其他2种mAb是针对Nogo-A分子氨基端(570-691)肽段,分别为Nogo-N1和Nogo-N2。方法:利用免疫荧光组织化学,检测Nogo-A mAb抗体对大鼠神经组织的反应性与特异性。结果:正常SD大鼠脊髓组织的免疫荧光组织化学双标结果显示,制备的6种抗大鼠Nogo-A分子mAb均可以与商品化的兔抗大鼠Nogo-A多克隆抗体(PcAb)双标记;其中Nogo66-1、Nogo66-2、No-go66-4和NogoN-2 mAb可与MBP阳性细胞双标记,与GFAP阳性细胞不共存;而Nogo66-3和NogoN-1 mAb不仅可以与MBP阳性细胞双标,同时也可以和GFAP阳性细胞共存。结论:Nogo66-1、Nogo66-2、Nogo66-4和NogoN-2 mAb可很好的识别组织中的Nogo-A分子,用于免疫组化研究。 展开更多
关键词 NOGO-A 单克隆抗体 免疫荧光 组织化学
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高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒间接免疫荧光鉴别方法的建立 被引量:13
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作者 陈仕龙 黄梅清 +3 位作者 林天龙 江斌 庄向生 陈少莺 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期41-44,共4页
应用2株针对猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的单克隆抗体(McAb-A61,McAb-C65)建立了对PRRSV美洲株、欧洲株和高致病性毒株进行鉴别的间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与商品化的PRRSV RT-PCR鉴别试剂盒进行比较。结果显示,McAb-C65... 应用2株针对猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的单克隆抗体(McAb-A61,McAb-C65)建立了对PRRSV美洲株、欧洲株和高致病性毒株进行鉴别的间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与商品化的PRRSV RT-PCR鉴别试剂盒进行比较。结果显示,McAb-C65与PRRSV美洲株和高致病性PRRSV毒株均呈阳性反应;McAb-A61与PRRSV美洲株呈阳性反应,但不与高致病性PRRSV毒株发生反应;2株单抗都不与欧洲株反应;IFA与RT-PCR的符合率为100%。表明,建立的PRRS间接免疫荧光鉴别诊断方法可为临床高致病性PRRS的确诊提供可靠的验证手段。 展开更多
关键词 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒 单克隆抗体 间接免疫荧光试验 鉴别诊断
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甲肝病毒单克隆抗体的研制与应用 被引量:3
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作者 唐祖明 郑纪山 +2 位作者 肖中党 周宗安 陆祖宏 《东南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 2000年第5期21-24,共4页
本研究成功制备了抗甲肝病毒 (HAV)McAb ,为甲肝研究和诊断提供了大量高效价标准化抗体 .用细胞培养的NJ 3株HAV免疫Balb/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆 ,建立了 5株能稳定分泌抗HAVMcAb的杂交瘤细胞 .经鉴定 ,其上清... 本研究成功制备了抗甲肝病毒 (HAV)McAb ,为甲肝研究和诊断提供了大量高效价标准化抗体 .用细胞培养的NJ 3株HAV免疫Balb/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆 ,建立了 5株能稳定分泌抗HAVMcAb的杂交瘤细胞 .经鉴定 ,其上清和腹水的抗体效价分别为 0 5× 10 2 ~ 1× 10 3及 1× 10 3~ 2× 10 5.用免疫印迹法和间接ELISA分析 ,这 5株抗体分别能与HAV的 3个抗原位点结合 .在HAAg检测中 。 展开更多
关键词 甲肝病毒 单克隆抗体 细胞融合 免疫荧光法
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单克隆抗体间接免疫荧光试验检测生殖器单纯疱疹病毒感染 被引量:6
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作者 刘军连 徐志凯 +4 位作者 喻启桂 王红英 郑燕华 吕世超 张建中 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第8期728-729,共2页
目的 :评价间接免疫荧光试验 (IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值 .方法 :采用以单纯疱疹病毒 (HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法 ,检测了 1 2 0例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV ,并与病毒培养法进行比较 .结果 :IFA检测HSV的... 目的 :评价间接免疫荧光试验 (IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值 .方法 :采用以单纯疱疹病毒 (HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法 ,检测了 1 2 0例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV ,并与病毒培养法进行比较 .结果 :IFA检测HSV的总阳性率为 85 .8% ,高于病毒培养法的阳性率 (70 .8% ,χ2 =1 2 .0 4 ,P <0 .0 1 ) .两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为 93.3%和 90 .0 % ,无明显差异 (χ2 =1 .96 ,P >0 .0 5 ) ;而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时 ,IFA的阳性率分别为 92 .6 %和 6 9.4 % ,均分别高于病毒培养法 (75 .9% ,χ2 =5 .82 ,P <0 .0 5 ;4 7.2 % ,χ2 =1 4 .1 7,P <0 .0 1 ) .结论 :IFA法具有简单、快速、敏感性高的优点 ,适用于检测GH患者皮疹内HSV 。 展开更多
关键词 单纯病毒属 生殖器疱疹 抗体 单克隆 荧光抗体技术 间接检测
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大菱鲆血清免疫球蛋白IgM单克隆抗体的制备及其特性分析 被引量:3
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作者 张伟 唐小千 +2 位作者 绳秀珍 邢婧 战文斌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期27-32,共6页
本研究运用硫酸铵盐析法结合Protein A亲和层法从大菱鲆血清中分离、纯化免疫球蛋白IgM。SDS-PAGE分析结果显示,纯化的血清IgM主要有2条蛋白带,分子量分别为78和27kDa,分别为大菱鲆IgM的重链与轻链。以纯化的IgM免疫BALB/c小鼠,取免疫... 本研究运用硫酸铵盐析法结合Protein A亲和层法从大菱鲆血清中分离、纯化免疫球蛋白IgM。SDS-PAGE分析结果显示,纯化的血清IgM主要有2条蛋白带,分子量分别为78和27kDa,分别为大菱鲆IgM的重链与轻链。以纯化的IgM免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,将融合后的细胞置于含HAT的培养基中培养。利用ELISA和Western blotting筛选杂交瘤,并利用有限稀释法对阳性杂交瘤进行单克隆,最终共获得3株抗大菱鲆血清IgM单克隆抗体,分别命名为1B2、1G4和2A1,抗体分型结果显示3株单抗均属IgG。Western blotting结果显示,单抗1B2和1G4可特异性识别大菱鲆IgM重链蛋白,而单抗2A1则特异性识别轻链蛋白。同时,以制备的腹水单抗1G4结合免疫荧光检测显示,单抗1G4可识别大菱鲆外周血、脾及前肾组织中表面IgM阳性(sIgM^+)细胞;流式细胞术分析显示,大菱鲆外周血、脾和前肾白细胞中sIgM^+细胞比例分别为48.07%,20.05%和18.45%。研究结果显示,制备的抗大菱鲆血清IgM单抗特异性高、反应性强,可为研究大菱鲆免疫系统及免疫应答动态提供有力的工具。 展开更多
关键词 大菱鲆 血清IGM 单克隆抗体 免疫荧光 流式细胞术
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