牛MED28基因编码区克隆、生物信息学分析及组织表达谱研究

[目的]克隆牛介体复合物亚单位28(mediator complex subunit 28,MED28)基因CDS区,预测MED28蛋白的结构功能,并分析MED 28基因在牛各组织中的表达水平,为后续研究MED 28基因的功能奠定基础。[方法]以牛成肌细胞RNA反转录的cDNA为模板,利用PCR方法扩增并克隆牛MED 28基因CDS区。运用MegAlign、Mega 11.0软件进行MED28蛋白的相似性比对和系统进化树构建,利用ProtParam、ProtScale、SOPMA、SWISS-MODEL、MEME、STRING等在线软件分析MED28蛋白的理化性质及结构功能,并通过实时荧光定量PCR检测MED 28基因在牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、肌肉组织中的表达量。[结果]试验成功克隆MED 28基因CDS区,长度为537 bp,编码178个氨基酸。相似性比对结果表明,牛MED28蛋白与山羊、绵羊的相似性最高;系统进化树显示,牛与山羊、绵羊的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。MED28蛋白属于不稳定的亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,主要在细胞外发挥作用,含有2个N-糖基化位点和21个磷酸化位点。MED28蛋白二级结构由α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲组成,其中α-螺旋占比最大,蛋白结构稳定,与三级结构预测结果一致。蛋白互作网络分析表明,MED28蛋白与其家族的多种蛋白之间存在互作,且主要在转录途径和甲状腺信号通路中发挥作用。MEME预测结果表明,MED28蛋白的保守基序在牛、人、猪、小鼠、马、兔、山羊、绵羊之间是相同的;MED28蛋白结构域有低复杂度和卷曲螺旋序列。实时荧光定量PCR结果表明,MED 28基因在牛肌肉组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05)。[结论]牛和羊的亲缘关系最近、蛋白相似性高。MED28蛋白亲水且结构稳定,存在N-糖基化位点和磷酸化位点,无跨膜区和信号肽,主要分布在细胞外,并参与转录途径和甲状腺信号通路。MED 28基因在牛肌肉组织中高表达。以上结果可为进一步研究牛MED 28基因的功能提供参考。

MED15-TFE3易位肾细胞癌1例

患者女性,27岁,体检发现右肾囊性占位2周余。泌尿系统CTU示右肾囊实性占位(图1),Bosniak分级Ⅳ级,囊性肾瘤可能,肾癌不排除;左肾囊肿。肾脏彩超示右肾囊性占位,MRI-肾脏平扫+增强示右肾囊实性占位,考虑肾癌可能。临床以右肾囊性占位入院,临床行腹腔镜下肾部分切除术送检。

MED8表达与肝癌临床病理特征及其预后的相关性分析

目的检测中介体复合物亚基8(mediator complex subunit 8,MED8)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探讨MED8对HCC的诊断、预后价值及其调控HCC的可能机制。方法从TCGA数据库下载HCC RNAseq数据以及临床数据,比较HCC癌旁组织和癌组织中MED8的表达差异;Western blot检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞QSG-7701中MED8的表达情况;通过DESeq2包和clusterProfiler包对含有MED8高、低表达组的数据进行表达差异分析及gene ontology(GO)富集分析;免疫组化检测补体经典途径相关蛋白C1qc的表达情况及其与MED8的关系。生存曲线、ROC曲线分析MED8表达与肝癌临床病理特征的相关性与预后价值。结果MED8在HCC癌组织及肝癌细胞中呈高表达。富集分析显示与MED8相互作用的蛋白主要参与补体的激活和离子反应等生物过程;而补体经典途径相关蛋白C1qc在肝癌组织中上调且与MED8表达呈正相关。临床相关性分析显示:MED8高表达与HCCT分期、病理分期、组织学分级密切相关;生存曲线结果显示:HCC高表达MED8患者总生存率及疾病相关存活率低;ROC曲线结果标明MED8的曲线下面积为0.817,提示MED8可能作为HCC潜在的诊断分子标志物。结论MED8与肝癌患者的临床分期及预后密切相关,其可能通过补体激活途径影响患者预后。

TVC-MED海水淡化系统运行优化试验研究

文章针对低温多效海水淡化(MED)与蒸汽抽射压缩器(TVC)耦合系统的工作特征,建立TVC-MED影响方式模型,分析TVC不同抽气运行模式对于MED造水比(GOR)的影响,通过优化设置TVC位置及调节蒸发器二次蒸汽量,对TVC-MED系统进行了优化改造,并通过现场运行试验,综合评价了改造后TVC-MED系统性能的提升效果。结果显示,TVC-MED系统优化改造后,海淡造水比平均提升1.06,产品水产量增加147 t/h,可累计增产淡水产值1545.24万元/a。

Club Med北戴河黄金海岸度假村设计思考

Club Med北戴河黄金海岸度假村项目的设计理念源于基地本身,将Club Med简单、快乐、阳光的品牌文化和多元文化的特别度假理念融入设计中,倡导人与自然和谐共处的生活方式,体现京津冀独特的人文情怀,同时采用与环境相协调的建筑材料,融入环境的色彩,打造有特色、高品质、全新的度假产品,酒店的开业将引领秦皇岛黄金海岸进入全球高端度假人群之视野。

基于Med Model的门诊输液中心流程仿真与优化

目的为了优化门诊输液中心的工作流程,提高服务质量。方法对某医院门诊输液中心的工作流程进行调查,运用Med Model专业软件建立该院门诊输液中心流程的仿真模型,分别模拟现行的工作流程和改进方案。结果行的工作流程模式下,病人的平均候诊时间较长。通过优化输液流程,患者的平均候诊时间和最大候诊时间可分别从9.97 min和17.34 min缩短为6.01 min和12.32 min。结论仿真结果显示优化后的输液流程在病人候诊时间和服务质量方面比较合理,是目前门诊输液中心较好的运行方案。

烟粉虱MED隐种对不同烟草品种的适合度比较

烟粉虱MED隐种是近年来烟草上的重要害虫,为明确不同烟草品种对烟粉虱的抗性水平,应用微虫笼研究了烟粉虱在6个烟草品种上的寿命、产卵量、卵-成虫存活率、发育历期等重要生物学参数,比较了烟粉虱对不同烟草品种的适合度差异。结果表明:除卵孵化率外,烟粉虱MED隐种在供试烟草品种上的寿命、产卵量、卵-成虫存活率、发育历期均存在显著差异。雌成虫寿命和产卵量均以在翠碧1号上最高(35.9 d,236.5粒),在NC89上最低(9.6 d,27.8粒);雄成虫寿命在K326上最长(7.2 d),在云烟87上最短(1.8 d);卵-成虫存活率在红花大金元上最高(91.6%),在云烟87上最低(81.4%);发育历期在红花大金元上最短(19.5 d),在云烟99上最长(21.1 d)。烟粉虱MED隐种对不同烟草品种的适合度高低顺序为翠碧1号、K326>红花大金元>云烟99、云烟87>NC89。

MED与传统手术治疗腰椎间盘突出症的比较分析

目的:比较分析内窥镜与开窗手术治疗腰椎间盘突出症的疗效及优缺点。方法:46例腰椎间盘突出症采用显微内窥镜腰椎间盘切除系统（microendoscony discectomv,MED Ⅱ）手术治疗;常规开窗法手术治疗的50例作对照组,根据Macnab标准评价疗效,并比较两组出血量、手术时间、住院时间、恢复正常生活/工作时间。结果:观察组优良率为93.5％,对照组优良率为90％,差别无统计学意义（P>0.05）。两组出血量、手术时间、住院时间、恢复正常生活、工作时间差别有统计学意义。结论:两种方法疗效相近,但后路经椎板间隙途径显微椎间盘镜手术创伤小、恢复快,是治疗腰椎间盘突出症的较好方法。

烟粉虱MED隐种保幼激素酯酶cDNA片段克隆、序列分析及在不同发育阶段的表达

昆虫卵黄发生及其内分泌调控机理一直是昆虫生殖生理学的研究热点。由保幼激素代谢通路关键分子介导的调控系统是影响昆虫卵黄发生的关键途径。研究激素代谢通路关键调控因子的功能将为明确生殖调控机理提供理论依据。保幼激素酯酶(juvenile hormone esterase,JHE)是降解昆虫体内保幼激素的关键酶之一,具有调控昆虫发育、变态和生殖等功能。本实验以烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种为研究对象,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增PCR(rapid amplification of cDNA ends PCR,RACE-PCR)技术克隆获得编码552个氨基酸的烟粉虱MED隐种保幼激素酯酶基因的部分cDNA序列,将其命名为Btjhe(GenBank登录号为KC422259)。同源序列比对发现,该基因与菜叶蜂Athalia rosae、西方蜜蜂Apis mellifera的保幼激素酯酶基因推导的氨基酸一致性较高,且具有昆虫保幼激素酯酶共有的5个氨基酸保守模块,其中包括对保幼激素酯酶活性起关键作用的长疏水结合域GxSxG。由此推测,Btjhe为烟粉虱MED隐种的保幼激素酯酶基因,其编码蛋白参与烟粉虱体内保幼激素的特异性降解。实时荧光定量PCR检测结果表明,Btjhe在烟粉虱若虫、成虫阶段都有表达,在成虫阶段表达量较高,且在羽化后11d达到峰值,其表达模式与卵黄原蛋白基因(vg)类似。本研究结果为明确烟粉虱的生殖调控机理奠定基础。

MED治疗腰椎间盘突出症91例临床分析

目的 探讨显微内窥镜腰椎间盘切除术 (Micro.Endoscopilc.Discectom y.MED)治疗腰椎间盘突出症的手术操作特点。手术适应症 ,并发症及临床效果 ,旨在正确认识这一新技术 ,提高手术疗效。方法 采用 MED治疗腰椎间盘突出症 91例 ,取后正中切口约 1.6 CM,操作间隙在 C臂 X光机准确定位后 ,按操作程序置入内窥镜 ,镜下行椎板间开窗切除椎间盘组织 ,对于伴有骨化及狭窄者 ,在特殊器械帮助下完成 ,对于进入椎管或止血十分困难者 ,选用自制的器械 ,行内窥镜下有限开窗术。结果 91例均获得临床随访 ,时间 3个月— 1年 ,按陆裕朴疗效评定标准 ,优 80例 ,良 6例 ,可 3例 ,差 2例 ,优良率 94 .5 %。结论 MED是一项发展中的技术。在发挥其优势的前提下 ,适应症的选择十分重要 ,预防手术并发症亦不可忽视。MED手术器械亟待改进 。

siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19转录、表达的影响

目的研究siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19的影响。方法利用前期已合成的siRNA-Med19慢病毒载体,感染A549细胞,并以无病毒感染组作为空白对照组,以慢病毒载体感染组作为阴性对照组。采用荧光图片和白光图片对比方法判断细胞的感染率;RT-PCR法检测细胞Med19mRNA的转录水平;Western印迹法检测细胞Med19蛋白表达水平。结果慢病毒载体对人肺癌A549细胞的感染率在80%以上,siR-NA-Med19慢病毒感染组Med19mRNA转录水平明显降低,敲减效率大于70%,Med19蛋白表达量也明显降低。结论siRNA-Med19慢病毒载体可以高效感染人肺癌A549细胞,siRNA-Med19对A549细胞Med19的转录和表达具有明显的抑制和消减作用。

Med19在人胃癌中的表达及其临床意义

目的研究Med19基因在人胃癌组织中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组化和RT-PCR方法检测Med19基因在胃癌组织、癌旁胃组织及正常胃组织中的表达。结果胃癌组织中Med19表达阳性率为71.7%(43/60),显著高于癌旁胃组织和正常胃组织(P<0.01)。癌旁胃组织和正常胃组织中Med19多为阴性表达,少数为弱阳性表达,二者间差异无显著性(P>0.05)。Med19的表达与胃癌的细胞分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期相关(P<0.05),而在不同年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度的胃癌样本中表达差异无显著性(P>0.05)。结论Med19参与了胃癌的发生、发展过程,有望成为一个新的肿瘤治疗靶向因子。

Med19基因沉默对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究Med19基因在胃癌MGC-803细胞中沉默后对细胞增殖和周期的影响。方法应用shRNA慢病毒载体感染胃癌MGC-803细胞沉默Med19基因,通过MTT和克隆形成实验观察Med19基因在胃癌细胞增殖中的作用,并用流式细胞术验证抑制Med19基因对细胞周期的影响。结果构建的shRNA慢病毒载体感染MGC-803细胞后细胞增殖能力显著降低、细胞克隆形成能力明显减弱,同时,细胞周期阻滞于G1期。结论Med19基因沉默后胃癌细胞的增殖能力和细胞周期均受到显著影响,提示Med19在肿瘤形成过程中具有重要作用。

基于MED-EMD和切片双谱的滚动轴承故障特征提取

针对风电齿轮箱中轴承故障信号非线性、非平稳的特点,提出了基于最小熵反褶积(MED)、经验模态分解(EMD)和切片双谱相结合的方法来提取轴承的微弱故障特征。通过MED-EMD将原始信号降噪分解为多个本征模态函数(IMF),对与原始信号相关性强的IMF分量进行切片双谱分析,从而提取微弱故障特征频率。对仿真信号和风电齿轮箱轴承实测信号的分析表明:选取MED作为EMD的前置滤波器能够弥补强背景噪声下EMD分解的不足,切片双谱分析能够抑制高斯噪声,提高信噪比,得到了风电齿轮箱故障产生于中间齿轮轴电动机侧轴承内圈点蚀的正确判断。

MED与开窗髓核摘除术治疗腰椎间盘突出症的疗效对比分析

目的探讨后路椎间盘镜髓核摘除术(MED,A组)与开窗髓核摘除术(B组)治疗腰椎间盘突出症(LDH)的临床疗效对比。方法回顾性分析我院2013年1月至2014年1月期间24例手术治疗LDH患者临床资料,按手术方式不同分为A组(12例)和B组(同期同组医师完成12例),比较2组术中出血量、手术时间、术后下床时间、住院时间及近期临床疗效。结果 A组和B组术中出血量、手术时间、术后卧床时间、住院时间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);2组患者术前、术后1周、3个月、6个月的临床疗效比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MED与开窗髓核摘除术治疗LDH近期临床疗效相似,但其在术中出血量、术后下床时间、住院时间方面更具优势,从而提高患者生活质量。

MED术及椎管内出血处理的初步探讨

目的探讨显微内镜椎间盘摘除术(microendoscopic discectomy,MED)术中椎管内出血的应对措施. 方法针对MED术中椎管内不同情况的出血,用电凝、压迫、冲洗、止血药等各种相应的方法应对处理. 结果本组共287例,无一例因椎管内出血中转开放手术.随访4个月～2.5年,平均1年5个月,按MacNab标准近期疗效:优219例,良59例,可7例,差2例. 结论 MED术中,减少腹压、每个步骤均需严格止血、避开曲张静脉处剥离突出椎间盘、用明胶海绵及小脑棉压迫止血、术前术中分别静推'立止血'等,能较好地处理术中椎管内出血,有效的提高手术安全性及治疗效果.

腰椎MED手术发生脑脊液漏的原因分析及对策

目的 分析显微椎间盘镜下髓核摘除手术 (Micro Endoscopic Discectom y,MED)并发硬脊膜损伤或脑脊液漏的原因特点 ,探讨其预防办法。方法 通过回顾性的方法对 1999年 12月至 2 0 0 3年 12月期间 4 5 2例 MED手术发生硬脊膜损伤或脑脊液漏的 15例患者临床资料进行分析总结。结果 术中发现硬脊膜损伤的 13例患者 ,有 9例术后出现脑脊液漏 ;2例术中未发现硬脊膜损伤的患者术后也出现了脑脊液漏 ;11例脑脊液漏患者经术后正规的保守治疗于 3～ 7d内治愈 ,无 1例脑脊髓膜炎 ,无继发的深部感染。结论 MED手术因其自身的特点 ,易发生硬脊膜损伤 ;但通过术前对病例仔细分析 ,术中具备一定的手术技巧 ,可以减少硬脊膜损伤的发生 ;术中对损伤硬脊膜及时堵塞或修补 ,术后采取正规的保守治疗措施 。

基于MED及FSK的滚动轴承微弱故障特征提取

针对强噪声情况滚动轴承故障特征较微弱、其故障特征较难提取问题,提出将最小熵反褶积(Minimum Entropy Deconvolution,MED)与快速谱峭度算法(Fast Spectral Kurtosis,FSK)结合用于滚动轴承微弱故障提取。用MED对强噪声滚动轴承振动信号降噪,对降噪后信号进行快速谱峭度计算,确定故障信号共振解调带通滤波器参数,结合能量算子解调包络谱提取故障特征。通过仿真与实验数据验证该方法的有效性。

MED治疗腰椎间盘突出症术后近期MRI的改变

目的:观察显微内窥镜椎间盘手术（microendoscopic discectomy,MED）治疗腰椎间盘突出症术后早期 MRI改变,探讨其与临床效果的关系。方法:对15例单节段或多节段腰椎间盘突出症患者行MED治疗后3个月复查腰椎MRI,并记录手术后症状改善情况。结果:MED术后患者的症状都有明显的缓解,复查MRI显示原来突出的椎间盘消失或突出减小,椎管内未见明显疤痕形成,原手术通道仍清晰可辨,通过椎旁肌的部分有纤维化和轻度组织水肿。结论:MED治疗腰椎间盘突出症近期疗效肯定,手术创伤小,能减少硬膜外粘连疤痕形成。但也有髓核摘除不彻底时从破裂纤维环处脱出的危险。