Application of UPLC-QTOF-MS Technology in Quality Stability Evaluation of Moluodan Concentrated Pills

[Objectives]To use liquid chromatography-mass spectrometry technology to analyze the chemical composition of traditional Chinese medicine and explore its application in the evaluation of quality stability of traditional Chinese medicine.[Methods]Ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry(UPLC-QTOF-MS)was used to detect the samples of Moluodan concentrated pills.By comparing and analyzing the detection results of 10 different batches of Moluodan concentrated pills,combined with principal component analysis(PCA),the quality stability of Moluodan concentrated pills was evaluated.[Results]A total of 367 chemical components were identified in Moluodan concentrated pills.The average repetition rate of the chemical components contained in the 10 different batches of samples reached 92%.The overall quality stability of the Moluodan concentrated pills was good.[Conclusions]The UPLC-QTOF-MS technology combined with PCA provides a reference for the overall quality evaluation of Moluodan concentrated pills,and provides new detection methods and ideas for the analysis of the components of Chinese medicine.

炮制对加味拱辰浓缩丸化学成分的影响

目的 考察炮制对加味拱辰浓缩丸化学成分的影响。方法 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)法对生品组(山萸肉+当归)、炮制品组(酒萸肉+酒当归)、酒当归组(酒当归+山萸肉)、酒萸肉组(酒萸肉+当归)样品进行定性鉴别,主成分分析、正交偏最小二乘判别分析筛选差异成分,HPLC法测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、没食子酸、阿魏酸、马钱苷酸、绿原酸、藁本内酯、5-羟甲基糠醛的含量。结果 共鉴定出97种成分,包括有机酸、环烯醚萜、苯肽、皂苷、核苷、氨基酸,生品组、炮制品组、酒当归组、酒萸肉组中分别鉴定出90、88、89、86种成分。与生品组和酒当归组比较,酒萸肉组和炮制品组中有机酸总含量升高,环烯醚萜苷总含量接近;酒萸肉组中藁本内酯含量最高。结论 酒萸肉的加入可增加加味拱辰浓缩丸组方配伍合理性,酒当归的加入也具有一定协同增效作用。

摩罗丹浓缩丸治疗慢性萎缩性胃炎的药效及作用机制

目的 探讨摩罗丹浓缩丸对患慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis, CAG)大鼠的治疗效果及可能的作用机制。方法 采用五因素造模法成功建立CAG大鼠模型,随机分成模型组、维酶素组和摩罗丹浓缩丸组,连续给药8 w,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水。比较各组大鼠状态和体重变化,记录各组胃液pH,通过HE染色对各组胃组织做病理学评分,并用ELISA试剂盒检测各组胃泌素(GAS-17)、生长抑素(SS)、胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)/胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 造模16 w后,形成稳定的CAG大鼠模型,与正常组比较,模型组大鼠状态萎靡,体重极显著降低,胃液pH显著上升,萎缩积分显著升高(P<0.01);模型组黏膜层可见少量上皮细胞脱落,固有层底部可见少量的壁细胞数量减少,伴有轻度结缔组织增生,固有层与黏膜下层可见少量淋巴细胞浸润,组织中可见中度出血;AB-PAS染色分析可以看出,黏膜层可见分泌细胞数量明显增多;血清中GAS-17和PGⅠ/PGⅡ均显著降低,而SS、IL-6和TNF-α均显著上升。与模型组相比,维酶素组和摩罗丹浓缩丸组均可显著改善上述指标的变化,但在IL-6和TNF-α水平上,摩罗丹浓缩丸具有更显著的抗炎效果。从HE染色结果可以看出摩罗丹浓缩丸组黏膜层胃上皮结构完整,胃小凹结构清晰,上皮细胞排列紧密,固有层胃腺丰富,主细胞、壁细胞形态结构正常,并且未见明显炎症,维酶素组黏膜层局部可见少量上皮细胞坏死,核碎裂,黏膜下层局部可见明显水肿,结缔组织排列疏松。由此可见,摩罗丹浓缩丸对于改善CAG的效果更优。免疫组化结果显示,给药8 w后,维酶素组和摩罗丹浓缩丸组可使CAG模型大鼠的G、D细胞数量极显著的上升,大鼠胃黏膜萎缩得到好转。结论 摩罗丹浓缩丸可显著减轻CAG大鼠胃萎缩程度,通过调节血清GAS-17、SS、PGⅠ/PGⅡ水平,降低炎症因子IL-6和TNF-α水平,从而起到治疗CAG的作用。

人参再造丸中6种乌头类生物碱的含量测定方法研究

建立人参再造丸(浓缩丸)中6种乌头类生物碱含量的检测方法。采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)对人参再造丸(浓缩丸)中双酯型生物和单酯型生物碱的含量进行测定,梯度洗脱模式下,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相,电喷雾离子源(正离子模式),监测模式为多反应监测。结果表明,6种生物碱均有良好的线性关系,精密度试验、稳定性试验、重复性试验中RSD均低于5%,平均回收率和RSD分别为97.27%~108.29%和1.99%~4.01%。所建立的方法能同时准确、快速地测定人参再造丸(浓缩丸)中6种乌头类生物碱成分的含量,专属性强、灵敏度高、重复性好,能为全面有效管控人参再造丸(浓缩丸)质量提供参考。

桑枝通络丸的提取及制备工艺研究

目的优选桑枝通络丸的提取及制备工艺。方法采用L9(34)正交试验设计法,以橙皮苷含量及干浸膏得率为评价指标,对加水量、煎煮时间、煎煮次数等因素进行考察,优化水煎煮提取工艺;以成型性、溶散时限、吸湿性综合评分为评价指标,对稠膏相对密度进行考察,优选最佳成型工艺。结果最佳提取工艺为10倍量水,加热回流提取3次,每次1 h;最佳成型工艺为稠膏相对密度1.21~1.23(60℃)。结论优选的工艺稳定,合理可行。

一测多评法同时测定沙芪浓缩丸中5种黄酮

目的 建立一测多评法同时测定沙芪浓缩丸中毛蕊异黄酮苷、水仙苷、银锻苷、异鼠李素、芒柄花素的含量。方法 该药物90%甲醇(含1%甲酸)提取液的分析采用Welch LP-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相乙腈-0.4%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长260 nm。以毛蕊异黄酮苷为内标,计算其他4种黄酮的相对校正因子,计算其含量。结果 5种黄酮在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 9),平均加样回收率91.90%~99.82%,RSD 0.26%~0.64%。一测多评法所得结果与外标法接近(RAD<2%)。结论 该方法准确可行,可用于沙芪浓缩丸的质量控制。

活心丸(浓缩丸)治疗阳虚血瘀型经皮冠状动脉介入术后心绞痛的临床研究

目的:观察温阳化瘀代表方活心丸(浓缩丸)治疗阳虚血瘀型经皮冠状动脉介入术(PCI)后心绞痛的临床疗效。方法:选取2019年1月-2021年12月上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院收治的阳虚血瘀型PCI术后心绞痛病人126例,6例脱失,最终纳入120例,随机分为试验组和对照组,每组60例。在规范化西药治疗基础上,试验组给予活心丸(浓缩丸),每次2粒,每日3次,对照组给予活心丸(浓缩丸)安慰剂,每次2粒,每日3次,两组疗程均为12周。观察两组治疗前后中医证候积分、西雅图心绞痛量表评分、心绞痛评分、硝酸甘油减停率、炎性因子水平。结果:试验组治疗后中医证候积分低于对照组,西雅图心绞痛量表评分高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);试验组硝酸甘油停减率优于对照组(P<0.05)。试验组治疗后血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),两组治疗后超敏C反应蛋白(hs-CRP)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活心丸(浓缩丸)能有效改善病人阳虚血瘀型PCI术后心绞痛的临床症状,改善中医证候积分,减少硝酸甘油使用量,降低血清炎性因子水平。

不确定度评定在六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚含量测定中的应用

目的:评定HPLC法测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚含量的不确定度。方法:采用HPLC法测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚含量,对不确定度来源进行分析,建立相应的数学模型,计算各个不确定度分量,最后得出扩展不确定度。结果:六味地黄丸(浓缩丸)每丸含丹皮酚0.412 mg,扩展不确定度为0.017 mg,丹皮酚的含量结果应表述为(0.412±0.017)mg/丸。结论:六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚含量测定的不确定度主要来源于平均丸重和溶液配制过程,严格控制这些过程可以提高药品质量和检验结果的准确性。

六神丸在体内外的抗隐球菌活性研究

目的:探究六神丸体内外抗隐球菌的活性,并考察其与氟康唑、两性霉素B联用抗隐球菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。方法:采用体外测定六神丸对隐球菌的MIC,以及与氟康唑、两性霉素B联用抗隐球菌的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI);随后,通过时间-杀菌曲线动态监测六神丸对隐球菌的体外抗菌特征;并通过肺隐球菌病小鼠模型验证其药效。结果:六神丸对44株隐球菌的MIC为8~128μg/mL,与两性霉素B联用为相加作用,与氟康唑联用为无关作用;经时间杀菌绘制的曲线表明4 MIC及8 MIC的六神丸对隐球菌具有杀菌作用;经体内实验发现六神丸以剂量依赖性方式提高小鼠体质量、降低肺指数与肺隐球菌载量,并改善小鼠肺组织病理损伤。结论:六神丸以剂量依赖性方式发挥体内外抗隐球菌活性,且其在体外与两性霉素B联用时具有相加作用。

基于溶出-液相在线联用系统研究藿香正气丸(浓缩丸)中两种成分体外释放行为

目的:探讨研究并建立藿香正气丸(浓缩丸)体外溶出测定方法,并对其溶出情况进行评价,为该品种的体外溶出评价提供依据。方法:采用溶出-液相联用方法测定藿香正气丸(浓缩丸)中橙皮苷和甘草酸铵两种目标成分的累积溶出量并绘制溶出曲线图,利用不同的数据模型对溶出数据进行模型拟合,确定藿香正气丸(浓缩丸)的最佳溶出模型。结果:在人工肠液和pH 6.8磷酸盐缓冲液中,不同批次的藿香正气丸(浓缩丸)两种目标标成分溶出行为差异性较小,藿香正气丸(浓缩丸)中两种目标成分的溶出数据拟合结果略有不同,主要以Weibull模型最佳。结论:藿香正气丸(浓缩丸)在pH 6.8磷酸盐缓冲液中更有利于考察目标成分的溶出情况,该研究准确可靠,可用于藿香正气丸(浓缩丸)的质量控制,同时也为其质量一致性评价研究及工艺的分析改进提供了数据支撑。

HPLC测定六味地黄浓缩丸及药材的指纹图谱

目的:建立六味地黄浓缩丸的高效液相指纹图谱的测定方法,评价熟地黄、牡丹皮、山药和山茱萸(未包括泽泻和茯苓)对六味地黄浓缩丸内在质量的影响。方法:建立高效液相指纹图谱分析方法,色谱柱为Alltima C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-0.1甲酸溶液梯度洗脱;流速为0.5mL/min;检测波长:242nm;进样量5μL;柱温为30℃。实验比较了不同厂家六味地黄浓缩丸的高效液相指纹图谱,并考察分析了单味药材的高效液相指纹图谱。结果:该方法在39.8～796μg/mL范围内线性关系良好,y=7210.6x+0.6353,r=0.9998;精密度、稳定性、重复性考察相对保留时间均RSD<1,相对峰面积均RSD<3;成药图谱能够体现4味药材的成分峰;不同厂家六味地黄浓缩丸液相指纹图谱各色谱峰峰面积存在不同程度的差异。结论:不同厂家六味地黄丸质量有差异,药材是影响六味地黄浓缩丸质量差异的原因之一。

血府逐瘀浓缩丸抗血小板活化的临床疗效与体外血清药理作用的相关性研究

目的 :探讨血小板活化在不稳定性心绞痛 (unstableanginapectoris ,UA)和急性心肌梗死 (a cutemyocardialinfarction ,AMI)中的意义以及血府逐瘀浓缩丸抗血小板活化的临床疗效与其体外血清药理作用的相关性。方法 :采用流式细胞技术和特异性标记抗体 ,检测口服血府逐瘀浓缩丸前后UA患者全血血小板膜糖蛋白CD6 2P和CD4 1/ 4 5的表达 ,并以UA患者的含药血清与AMI模型大鼠的外周血体外共温育后 ,检测大鼠CD6 2P水平。结果 :UA患者CD6 2P及CD4 1/ 4 5表达量增高 ,分别为 (2 4 36± 7 91) %和(2 9 5 1± 12 2 1) % ,经有效治疗后降至 (19 5 7± 7 2 2 ) % (与治疗前比较 ,P <0 0 5 )和 (2 0 87± 8 73) % ;同时血小板粘附和聚集率增高。AMI大鼠CD6 2P为 (39 73± 12 36 ) % ,与有效病例的含药血清作用后降至(30 4 1± 10 36 ) % (与温育前比较 ,P <0 0 5 ) ,而疗效不佳患者的药后血清干预作用则较差 (P >0 0 5 )。结论 :UA患者和AMI大鼠的血小板活化增强。血府逐瘀浓缩丸含药血清药理与临床整体药效在抑制血小板活化作用上的一致性 ,反映出中药血清药理作用与临床整体药效的良好相关性。

气相色谱法测定健康人含服速效救心丸后冰片的血药浓度

目的 :用气相色谱法测定健康人含服速效救心丸后冰片 (龙脑、异龙脑)的血药浓度。方法 :采用HP -5石英弹性毛细管柱 ,柱温为85℃ ,汽化室温度为180℃ ,检测器温度为200℃ ,载气为氮气 ,萘为内标。结果 :冰片进样量在50～1000ng/ml范围内其峰面积与进样量呈良好线性关系 ,Y=—0 1273+0 0015X ,回收率为 (98 7±2 31) % ,RSD=2 76% (n=6)。健康人血清中冰片含量在15min左右达血药浓度高峰。结论 :建立的气相色谱法可靠、灵敏、简便 。

血府逐瘀浓缩丸防治43例冠心病冠脉内支架植入术后再狭窄的临床研究

目的 :探讨血府逐瘀浓缩丸防治冠心病冠脉内支架植入术后再狭窄的临床疗效。方法 :将 84例冠脉内支架植入术成功的冠心病患者随机分为西药常规治疗加血府逐瘀浓缩丸组 (治疗组 ,43例 )和西药常规治疗组 (对照组 ,41例 ) ,疗程均为 6个月。追踪观察患者有无心绞痛复发 ,以及患者的血瘀症状和血瘀证候积分的变化 ,并通过心电图活动平板运动试验、运动 -静息心肌断层显像追踪、冠状动脉造影复查评价再狭窄的发生。结果 :治疗组患者在随访中各项血瘀症状均有明显改善 (P <0 0 1 ) ,6个月后血瘀证候积分值明显下降 (P <0 0 1 ) ,且与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1 ) ;治疗组心绞痛复发率显著低于对照组 (P <0 0 5 ) ;84例患者总冠脉造影复查率为 61 9% ,治疗组再狭窄率为 2 5 8% ,对照组再狭窄率为3 2 1 % (P >0 0 5 )。结论 :血府逐瘀浓缩丸防治冠脉内支架植入术后再狭窄有一定作用 ,值得进一步扩大临床研究。

逍遥丸(浓缩丸)质量标准的研究

目的建立和完善逍遥丸(浓缩丸)的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法鉴别当归、甘草、白芍;采用高效液相色谱(HPLC)法测定芍药苷的含量。结果芍药苷的平均回收率为100.2%,RSD=1.26%(n=6)。结论该法简便准确,可作为该制剂质量控制标准。

左归浓缩丸质量标准的研究

目的：建立左归浓缩丸（熟地黄、菟丝子、牛膝、枸杞子等）的质量标准。方法：采用TLC法对左归浓缩丸中枸杞子、牛膝、山茱萸、菟丝子进行定性鉴别,并用HPLC法测定左归浓缩丸中的毛蕊花糖苷、马钱苷、金丝桃苷。结果：TLC能定性检出枸杞子、牛膝、山茱萸、菟丝子,斑点清晰,分离度好,且阴性对照无干扰;毛蕊花糖苷、马钱苷和金丝桃苷分别在2.955-17.73μg（r=0.999 8）、4.697-150.3μg（r=1）、3.492-27.94μg（r=0.999 3）范围内与峰面积均呈现良好的线性关系,平均回收率分别为97.8%、100.8%和102.7%,RSD（n=9）分别为2.4%、2.6%和2.2%。结论：所建立的定性、定量检测方法操作简便,专属性强、重复性好、结果准确可靠,可作为左归浓缩丸的质量控制方法。

浓缩六味地黄丸中马钱苷的药代动力学研究

目的:建立高效液相色谱法测定大鼠血清中马钱苷的浓度,研究大鼠灌胃给药后体内药代动力学特点。方法:采用KromasilC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:0.05%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),流速1.0mL/min,检测波长:236nm。结果:马钱苷回归方程:Y=1.0921X+27.064,r=0.9991,线性范围为26～420ng;平均回收率为94.20%,RSD=4.01%;样品24h内稳定,RSD=0.55%。大鼠灌胃后,药动学行为符合一室模型,主要药动学参数Ka、Ke、t1/2Ka、t1/2Ke、Tpeak、Cmax、AUC分别为0.0085/min、0.025/min、27.95min、81.23min、65.59min,6970.40ng/mL,1429620.62ng/(mL·min)。结论:首次建立了浓缩六味地黄丸中马钱苷血药浓度的HPLC测定方法,阐明了六味地黄丸中马钱苷的药代动力学参数,方法专属性强,结果可靠。

用血清药理学方法观察血府逐瘀浓缩丸对实验性动脉粥样硬化家兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

采用两种离体实验方法对比观察血府逐瘀浓缩丸对实验性动脉粥样硬化家兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的影响。第一种采用给家兔灌服血府逐瘀浓缩丸后取其血清加至细胞培养基中进行实验即血清药理学方法；第二种直接加血府逐瘀煎剂浓缩液至培养基中。结果发现含血府逐瘀浓缩丸血清和血府逐瘀煎剂浓缩液均对ＳＭＣ增殖有抑制作用，并呈剂量依赖性，且煎剂浓缩液作用强于含药血清。表明血府逐瘀浓缩丸在体内外确均有抑制ＳＭＣ增殖作用，血府逐瘀浓缩丸确含抗ＳＭＣ增殖的有效成分，并且此成分口服有效。血府逐瘀煎剂浓缩液的抑制作用比含药血清强，可能与某些有效成分未能从消化道吸收或经体内代谢失活有关。

HPLC同时测定六味地黄浓缩丸中4种主要成分的含量

目的:建立一种同时测定六味地黄浓缩丸中丹皮酚、芍药苷、马钱苷、没食子酸4种活性成分含量的方法。方法:应用高效液相法进行测定活性成分的含量,色谱柱为Alltima C18柱(250 mm×4.6 mm);流动相为乙腈-0.1%甲酸梯度洗脱;流速为0.5 mL/min;检测波长为242 nm;进样量5μL;柱温为30℃。结果:丹皮酚、芍药苷、马钱苷、没食子酸线性范围分别为0.199～3.98μg(r=0.999 8)、0.073～1.172μg(r=0.999 5)、0.145～2.316μg(r=0.999 5)、0.103～1.648μg(r=0.999 4);平均加样回收率分别为99.35%(RSD=1.22%)、98.16%(RSD=1.57%)、97.30%(RSD=1.77%)、98.96%(RSD=1.16%)。结论:本法方便、稳定、可靠,可用于六味地黄浓缩丸的质量控制。

归芍浓缩丸中芍药内酯苷和芍药苷的含量测定

目的建立归芍浓缩丸中芍药内酯苷和芍药苷的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱（RP—HPLC）法测定归芍浓缩丸中芍药内酯苷和芍药苷的含量。色谱条件：用C18分析柱，以乙腈0．05％冰醋酸溶液（17：83）为流动相，检测波长为230nm，选样量为20斗l。结果高效液相色谱法测定芍药内酯苷在0．67—2．02μg范围内线性关系良好（r=0、9998），平均回收率为100、5％，RSD=0．29％（n=7）；芍药苷在0．41—1．63μg范围内线性关系良好（r=0．9999），平均回收率为101．2％，RSDO．37％（n=7）。结论该方法简便快速、精密度高、准确度好，可作为该制剂的质量控制方法。