变溶菌素(Mutanolysin)酶解单核细胞增多性李斯特菌细胞壁条件的优化

为了最大效率提取单核细胞增多性李斯特菌LB90SB2细胞壁表面蛋白,本研究对变溶菌素浓度和酶解时间进行了优化。选择20、60μg/m L的变溶菌素浓度进行30 min-4 h,37℃酶解以及37和4℃低温联合酶解,通过测定酶解前后OD600和CFU,判断细胞膜完整性和计算原生质体形成率,筛选最佳酶解浓度和酶解时间。在最佳酶浓度的条件下,测定不同酶解时间细胞壁蛋白提取物浓度。结果表明:在酶解30 min-4 h,原生质体形成率从0提高至91.00%,细胞壁蛋白浓度从0.272增加至1.735 mg/m L。△OD600在1.86%-14.50%变动,但△OD600的统计学处理差异不显著。60μg/m L变溶菌素作用4 h的原生质体形成率达到91.00%,远高于20μg/m L变溶菌素作用4 h的78%。最终确定变溶菌素浓度为60μg/m L,酶解时间4 h为酶解LM90SB2细胞壁的最佳条件。本研究为下一步研究细胞壁表面蛋白奠定基础。

变溶菌素发酵条件的优化研究(Ⅱ)

研究了不同Ｃ／Ｎ比、表面活性剂、不同类型诱导物、种龄和发酵时间等多项操作条件对球孢链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ）Ｓ１８６产生变溶菌素（ｍｕｔａｎｏｌｙｓｉｎ）的影响。结果表明，最适Ｃ／Ｎ比为１３∶１，培养基中加入诱导物变形链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓｍｕｔａｎｓ）菌体细胞，变溶菌素的产量可提高２．４５倍，表面活性剂及消泡剂等的加入对变溶菌素的产生都有不同程度的影响，Ｔｗｅｅｎ２０和植物油均可促进酶的产生。

溶氧对变溶菌素发酵的影响

变溶菌素是由球孢链霉菌产生的一种胞外溶菌酶群。它包括几种不同类型的溶菌酶,有着广阔的用途和良好的应用前景。许多研究结果[1,2]表明,它比卵清溶菌酶有更为广泛的溶菌谱,应用范围更广,尤其是在预防和治疗龋齿[3]方面有其独特的优点。在医药上可用作灭菌剂,也可用其作?..

双歧杆菌原生质体的制备及其转化系统的建立

考察了长双歧杆菌WBL001菌体生长状态、酶解浓度、时长、温度以及不同渗透压稳定剂等因素,获得长双歧杆菌WBL001原生质体制备及再生的优化条件:长双歧杆菌以3%接种量活化至MRS培养基,培养至对数中期(OD600∶1),5μg/mL变溶菌素,37℃孵育30 min,以原生质体稳定液SMM为反应缓冲液,原生质体生成率达到81%,其再生率达到48%;在此基础上,通过聚乙二醇PEG融合,将穿梭表达载体pBAX转入双歧杆菌原生质体,成功建立双歧杆菌转化体系。

利用球孢链霉菌发酵液消化双歧杆菌细胞壁提取质粒的研究

目的寻找一种经济适用的提取双歧杆菌质粒的方法。方法利用球孢链霉菌发酵产生的变溶菌素来消化双歧杆菌细胞壁,提取质粒,并与商业化溶菌酶法比较。结果球孢链霉菌发酵液与溶菌酶均成功提取到质粒。结论利用球孢链霉菌发酵液提取质粒经济简便。

M6型A群链球菌表面烯醇化酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶特性的研究

表面烯醇化酶(surface enolase,SEN)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(surface glyceraldehydes-3-phosphate dehydro-genase,sGAPDH)都是A群链球菌(group A Streptococcus,GAS)没有跨膜结构的膜表面蛋白,它们可能在GAS感染中起到重要的作用。在本研究中,对SEN和sGAPDH在M6型GAS不同生长阶段(即在对数期和稳定期)的表达情况进行检测分析。取对数期(OD600=0.5-0.6)和稳定期(OD600=1.5-1.6)的GAS,分别测定SEN和sGAPDH活性。同时用变溶菌素(mutanolysin)提取这2个生长阶段细胞壁结合蛋白,用Western blot检测该提取物中的SEN和sGAPDH。结果表明在相同菌细胞浊度的条件下,SEN在M6型GAS对数期时的表达量及活性比其稳定期时的高45%左右。虽然sGAPDH的表达量较高但活性很低(<0.07mM NADH/min),并且在这2个生长阶段没有明显的差异。