基于RAA-CRISPR/Cas12a的鸡毒支原体核酸检测方法的建立

将重组酶介导的扩增技术(RAA)、CRISPR/Cas12a的切割反应及酶标仪或试纸条相结合,建立设备依赖度低的鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)核酸检测方法。以MG基因mgc2为靶标,设计CRISPR RNA及RAA引物,并优化检测体系、评价新建核酸检测方法性能。结果表明,该方法特异性和灵敏性均较好,对除MG外其他常见病原体检测结果均为阴性,检测下限可达10 copies·μL^(-1)。与商业化荧光定量PCR试剂盒对比检测45份临床样品符合率超过93%。综上,通过将RAA与CRISPR/Cas12a相结合,建立一种不依赖昂贵仪器的MG核酸检测方法,具有良好应用前景。

复方中草药对鸡败血霉形体和大肠杆菌混合感染的治疗效果

以试管2倍稀释法测得中草药对鸡败血霉形体和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为57.6和33.5 g/L。中草药含量在4.8～421.1 g/L时,对感染具有一定的抗性,对感染鸡的治愈率分别是38.1%、66.7%;感染鸡死亡率分别为28.6%、4.8%;对感染鸡的总有效率分别是71.4%、95.2%,临床治愈率为74%,明显好于恩诺沙星对照组。

抗鸡败血支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用杂交瘤技术获得了４株抗鸡败血支原体单克隆抗体。４株单克隆抗体与鸡滑液支原体、传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、鸡白痢沙门氏菌和大肠杆菌抗原均无交叉反应。１株单克隆抗体为ＩｇＧ２ａ，其余３株单克隆抗体均为ＩｇＭ。４株杂交瘤细胞染色体均有少量中部或亚中部着丝点染色体。

应用多重套式PCR检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体

根据已发表的鸡毒和鸡滑液支原体血凝素基因序列pMGA和vlhA各设计两对引物,建立鉴别诊断两种支原体的多重套式PCR方法,对其进行温度条件、Ⅱ步模板浓度优化及特异性、敏感性实验。该方法在两步PCR后能特异性地扩增出MG(408 bp)和MS(688 bp)两个目的片段。应用于临床样品检测,与支原体分离、SPA检测比较结果PCR灵敏度高于病原分离。