高压静电场解冻对凡纳滨对虾肌球蛋白结构特征的影响

该研究以去头凡纳滨对虾为材料,以羰基与总巯基含量、表面疏水性与粒径大小、内源荧光光谱与傅里叶变换红外光谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳的特征等作为考察指标,以自然解冻(nature thawing,NT)作为对照,研究了高压静电场解冻(high voltage electrostatic field thawing,HVEFT)的场强(1.8、3.8、4.3 kV)和温度(5、15、25℃)对去头虾肌球蛋白结构的影响。结果表明,当场强为3.8 kV时,随着温度的升高,总巯基、粒径、α-螺旋的含量呈先增后减的趋势,表面疏水性呈先下降后上升的趋势,羰基和内源荧光强度逐渐增加。当温度在15℃时,随着场强的增加,总巯基、α-螺旋表现为先增后减的趋势,羰基逐渐增加,表面疏水性则呈现出先下降后上升的趋势。综上所述,当场强为3.8 kV,温度为15℃时,高压静电场解冻对去头肌球蛋白结构影响最小。在此条件下,与NT处理组相比,HVEFT处理组样品的总巯基(3.35 mol/104g)和α-螺旋的占比(30.7%)分别是NT的1.15倍和1.17倍,表面疏水性是NT(22.54μg/mL)的0.42倍。结果表明,HVEFT能较好地维持虾肌球蛋白结构稳定性,有利于去头虾解冻后品质的保持。研究结果为高压静电场技术在水产制品解冻中的应用提供科学依据。

在Atelocollagen胶原支架上体外三维培养乳大鼠心肌

目的在Atelocollagen胶原支架上三维培养具有收缩功能的乳鼠心肌细胞块,为进一步开展心肌组织工程奠定基础。方法乳鼠心肌消化培养、纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollagen胶原支架上的生长情况。对三维培养不同时间的心肌细胞块进行石蜡包埋、切片,分别进行HE染色、肌球蛋白免疫组织化学染色、肌球蛋白免疫荧光染色、透射电镜观察,对三维培养的细胞进行全面鉴定。结果心肌细胞种植到Atelocollagen胶原支架上6h开始贴支架生长,培养2d心肌细胞相互融合,并与Atelocollagen胶原支架形成复合体,连同支架一起搏动。培养6d细胞与细胞间结合较前更紧密。培养10d细胞在Atelocollagen胶原支架孔中交织成网状,18～20d细胞充满大部分支架网孔,进一步形成紧密的心肌细胞块。在整个培养过程中,心肌细胞始终保持良好的自律性收缩。形态学鉴定证明,支架网孔中生长的主要是心肌细胞,极少数为纤维样细胞。结论利用Atelocollagen胶原支架能够培养出较为理想的、具有收缩功能的三维心肌细胞块。

IGF-1基因转染促进胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的表达

目的观察胰岛素样生长因子-T(IGF-1)基因转染对胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白(myoglobulin)、肌动蛋白(actin)及心肌特异性肌钙蛋白-T(Troponin-T)表达的影响。方法将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中,采用免疫组织化学方法对心肌细胞内上述4种蛋白的表达进行检测。利用HPIAS-2000图像分析系统测定4种蛋白在各组中表达的平均吸光度值和平均阳性面积率。结果IGF-1基因转染后的心肌细胞内上述4种蛋白的表达明显高于未转染的对照组(P<0.05)。结论IGF-1基因转染的心肌细胞较未转染的心肌细胞合成IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的能力增强,为IGF-1基因治疗心肌梗死提供了实验依据。

肌酸激酶同工酶质量判定肌病心肌损害的局限性

目的通过对比小儿心肌炎、肌病时血清中肌酸激酶同工酶（CK～MB）质量与肌钙蛋白I（cTnI）和肌红蛋白（Mb）的动态变化，观察CK—MB质量在判定心肌损伤中的意义。方法测定40例心肌炎患儿（其中有20例为暴发性心肌炎）和38例肌病患儿的肌酸激酶（CK）、CK—MB活性、CK—MB质量、cTnI、Mb、心电图以及脉冲多普勒超声心动图；肌病组同时进行肌电图、遗传代谢病筛查以及基因检测。以同期本院发育儿科门诊除外甲状腺功能减低症的10例身矮待查儿童为对照。结果①健康对照组儿童CK（U／L）为95．0±27．0，CK—MB活性（U／L）为22．6±1．3，CK—MB质量（μg／L）为2．4±0．3，cTnI（μg／L）为0．012±0．001。②心肌炎组患儿治疗前CK（1033．0±408．0）、CK—ME活性（101．2±31．5）、CK～MB质量（38．2±13．2）、cTnI（5．544±1．554）均较健康对照组明显升高（均P〈O．01）；随着治疗时间延长，各项指标逐渐下降；治疗2周后CK（59．3±25．1）、CK—MB活性（24．6±13．2）、CK～MB质量（3．3±2．9）、cTnI（0．125±0．128）均恢复至正常水平（均P〉O．05）。治疗1周后CK、CK—MB质量增高率即较治疗前明显下降[CK：5．9％（1／17）比56．4％（22／39）；CK—MB质量：8．3％（1／12）比61．1％（22／36），均P〈0．01]，CK—MB质量恢复先于cTnI，增高率出现明显差异（8．3％（1／12）比73．7％（14／19），P〈O．05]。③肌病组治疗前CK（10193．0±1447．0）、CK—MB活性（311．7±44．4）以及CK—MB质量（229．2±47．9）均较健康对照组明显升高（均P〈0．01），但cTnI不高（0．021±0．002）；治疗2周后CK（5735．6±6187．8）、CK—MB活性（170．7±143．0）、CK—MB质量（207．4±136．6）仍维持在高水平，cTnI（0．230±0．150）则维持在正常水平；各项指标的增高率与治疗前均无显著差异[CK：85．7％（6／7）比97．4％（37／38）；CK—MB活性：85．7％（6／7）比97．4％（37／38）；CK—MB质量：100．0%（2／2）比94．1％（32／34）；cTnI：0（0／1）比6．4％（2／31），均P〉0．053。结论①在心肌炎时，CK—MB质量与cTnI一致，急性期升高，恢复期降至正常，但CK—MB质量观察窗短于cTnI。②在肌病时，CK—MB质量与cTnl分离，前者治疗前后均升高，后者正常，故用测定CK—ME质量来判定肌病患儿是否有心肌损害意义有限。

劳力性热射病横纹肌损伤和内毒素变化

目的:探讨劳力性热射病肌酸激酶、肌球蛋白、内毒素水平变化和相互关系及其对预后的影响。方法:检测13例劳力性热射病和9名健康体检者(对照组)血清肌酸激酶、肌球蛋白和内毒素水平,并进行比较,分析劳力性热射病患者各指标相关性及其对预后的影响。结果:劳力性热射病组入院时血清肌酸激酶、肌球蛋白和内毒素水平高于对照组(P<0.05);劳力行热射病组血清肌酸激酶、肌球蛋白与内毒素呈正相关(P<0.05);三项指标与预后均呈正相关(P<0.05)。结论:劳力性热射病患者横纹肌损伤,血清肌酸激酶、肌球蛋白和内毒素具有相关性,并影响患者预后。

miR-145对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究miR-145对人宫颈癌细胞系SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法体外培养子宫颈癌细胞和正常宫颈上皮细胞,检测细胞中miR-145表达水平;将SiHa细胞分为miR-145过表达(mimics)组和阴性对照(NC)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;应用TargetScan数据库预测miR-145的靶基因并用荧光素酶报告基因实验验证,蛋白免疫印记(WB)检测miR-145过表达对肌球蛋白Ⅵ(MY06)蛋白表达的影响。结果 SiHa、Hela、MS751人子宫颈癌细胞中miR-145表达水平均显著低于正常子宫颈上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-145 mimics后,SiHa细胞中miR-145表达水平显著上调(P<0.05);与NC组比较,mimics组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力均显著下降(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示MY06是miR-145潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。WB结果显示miR-145过表达后,MY06蛋白表达水平显著下调。结论 miR-145能通过下调MY06表达抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。