LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。

抑制肌球蛋白轻链激酶活性对内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡失衡的影响

目的:观察抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖与凋亡失衡的影响。方法:细胞分成3组:对照组;内皮素-1组;内皮素-1+肌球蛋白轻链激酶抑制剂组(ET-1+M组)。干预72 h后,免疫印迹法测定细胞内MLCK表达水平;甘油凝胶电泳和免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平,MTT比色法及[3H]-TdR掺入法检测PASMCs的增殖情况,流式细胞仪检测PASMCs的细胞周期变化及凋亡率。结果:同对照组比较,ET-1刺激后肺动脉平滑肌细胞MLCK蛋白表达显著增强、MLC磷酸化上调、增殖增多、凋亡率明显降低(均P<0.05);加入MLCK抑制剂干预后,MLCK表达明显下降(P<0.05)、MLC去磷酸化显著增强、逆转了ET-1对PASMCs增殖及凋亡的影响。结论:抑制MLCK能显著逆转内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的失衡。

人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化

通过聚合酶链式反应方法扩增人心室肌球蛋白轻链1的基因片段,并将其克隆到pET-22b质粒,构建表达重组体,转化大肠杆菌BL21细胞,转化子细胞经IPTG诱导,目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,凝胶成像扫描检测,其表达量接近细胞总蛋白的40%,经Ni2+亲和层析使目的蛋白得到纯化。

柞蚕肌球蛋白轻链1基因(MLC-1)的序列特征及表达谱与系统进化分析

从柞蚕蛹全长cDNA文库中分离和鉴定了柞蚕肌球蛋白轻链1(myosin light chain 1,MLC-1)基因。柞蚕MLC-1基因全长863 bp,包含一个453 bp的开放阅读框,编码150个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为16.75 kD,等电点为4.62。柞蚕MLC-1基因在4个发育阶段(卵、幼虫、蛹、成虫)和幼虫的10种组织(血液、脂肪体、中肠、丝腺、体壁、马氏管、精巢、卵巢、大脑和肌肉)中均有表达,表明该基因在柞蚕生长发育过程中起着重要作用。柞蚕MLC-1与已知鳞翅目昆虫MLC-1的序列相似度为88%～98%,与其它昆虫MLC-1的序列相似度为60%～74%,表明MLC-1在昆虫的进化过程中高度保守。利用MLC-1蛋白质序列构建的系统进化树中,无脊椎动物和脊椎动物明显地聚成2个类群,且鳞翅目、膜翅目、半翅目、双翅目等昆虫的聚类也与传统形态学分类相一致。

斑鳜肌球蛋白轻链1基因cDNA的克隆及其分析

为提取斑鳜肌肉组织的总RNA,应用PCR法扩增肌球蛋白轻链1基因(MLC1)。结果获得斑鳜MLC1(基因库登录序列号为:GQ282999),cDNA序列的全长为579 bp,编码192个氨基酸,理论相对分子质量为20 778.57,等电点为4.51,该序列具有2个EF-手相结构。氨基酸序列比对结果表明,第2个EF-手相结构中的Ca2+结合域非常保守,氨基酸序列同源性为100%。

MLC-1对冠心病的诊断和院内预后评估的作用

目的:探讨血清肌球蛋白轻链-1(MLC-1)水平与冠心病(CHD)的相关性。方法:将72例患者分为正常对照组、稳定型CHD组及急性冠脉综合征(ACS)组。采集正常对照组入院24 h内及造影后24h内血样,采集稳定型CHD组和ACS组入院24 h内、冠状动脉造影后24 h内及入院第5 d血样。双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清MLC-1水平。结果:入院24 h内ACS组的血清MLC-1水平显著高于正常对照组及稳定型CHD组,正常对照组与稳定型CHD组相比无显著差异。造影后术后24 h内,3组血清MLC-1水平无显著差异,各组术前和术后血清MLC-1水平亦无显著差异。入院第5天,ACS组的血清MLC-1水平显著高于稳定型CHD组。ROC曲线分析提示,血清MLC-1水平诊断ACS的AUC为0.90。发生院内不良事件的冠心病患者,其入院24 h内血清MLC-1水平有高于未发生院内不良事件的冠心病患者的趋势,但无统计学差异。结论:检测血清MLC-1水平对诊断ACS有一定的价值。

肌纤生成调节因子-1促肌节F-actin组装引起新生乳大鼠心肌细胞肥大

目的探索肌纤生成调节因子-1(myofibrillogenesis regulator-1,MR-1)通过调节肌原纤维生成引起心肌肥大的机制。方法干预MR-1在体外培养的新生乳大鼠心肌细胞中的表达,检测心肌细胞表面积、心房利钠因子和脑钠肽水平及蛋白合成速率3种心肌肥大指标的变化,以鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素标志并观察肌节F-actin组装,以半定量反转录-聚合酶链反应、免疫印迹和细胞免疫荧光术检测重要肌节分子myomesin-1、肌球蛋白调节轻链-2(myosin light chain-2,MLC-2)含量及亚细胞定位。结果 MR-1过表达引起心肌细胞肥大、肌节F-actin组装明显促进、MLC-2与myomesin-1表达上调(P<0.05)以及myomesin-1的细胞核-细胞质转位;MR-1沉默后小泛素样调节因子-1过表达引起的转位和肌节F-actin组装明显抑制。结论 MR-1通过促进myomesin-1和MLC-2调节肌原纤维生成引起心肌细胞肥大。

先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因的RFLP分析

本研究利用人心室肌球蛋白轻链1cDNA探针对先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因进行了RFLP分析。从患有四种不同先天性心脏病的9个家系40名成员和13名无血缘关系患者的RFLP分析结果发现,有两个家系呈现限制酶切片段多态性,但这种限制性酶切片段多态性似与先天性心脏病的发生没有联系。

大鼠烧伤后立即切痂对心肌损伤的保护作用

目的：探讨烧伤后即行切痂对心肌损伤的防治作用。方法：建立３０％ＴＢＳＡⅢ°烧伤大鼠伤后立即一次性切痂模型，动物随机分为对照组（ｎ＝１０），未切痂组（ｎ＝５０）和切痂组（ｎ＝５０），于伤后１、３、６、１２和２４ｈ检测血浆肌球蛋白轻链１（ＭＬＣ１）、血浆及心肌组织ＴＮＦ等指标。结果：烧伤后６ｈ血浆ＭＬＣ１、ＴＮＦ即显著升高，心肌组织中ＴＮＦ也在伤后１２ｈ显著升高。未切痂组与切痂组比较，伤后１～６ｈ未切痂组ＭＬＣ１略低于切痂组，至伤后１２ｈ，未切痂组ＭＬＣ１、ＴＮＦ显著高于切痂组。ＭＬＣ１与ＴＮＦ存在显著正相关。结论：伤后即行一次性切痂可以降低血浆ＭＬＣ１和ＴＮＦ水平。

快速补液对烧伤延迟复苏并发心肌损害的防治

目的探讨快速补液对烧伤延迟复苏血液流变学特性和心肌局部血流量的改善作用。方法采用大鼠30％TBSA烧伤模型，动态观察烧伤延迟复苏快速补液和均匀补液后，大鼠血液流变学特性和心肌局部血流量及血浆中心肌肌球蛋白轻链一1浓度的改变。结果伤后1h，全血粘度即显著升高，6h达高峰，补液后，全血粘度均降低，快速补液组的降低幅度显著大于均匀补液组，血浆粘度、红细胞比积、血浆纤维蛋白原含量和红细胞膜带电性质等血液流变学参数也发生改变；心肌局部血流量和血浆中心肌肌球蛋白轻链一1的浓度也相应发生改变，其变化趋势与全血粘度改变密切相关。结论烧伤延迟复苏快速补液能够改善血液流变学特性，提高心肌局部血液灌注量，使心肌损害程度减轻，因此，对烧伤延迟复苏是有益的。

快速补液对烧伤延迟复苏并发心肌损害的防治

目的 探讨快速补液对烧伤延迟复苏血液流变学特性和心肌局部血流量的改善作用。方法 采用大鼠 30 %TBSA烧伤模型 ,动态观察烧伤延迟复苏快速补液和均匀补液后 ,大鼠血液流变学特性和心肌局部血流量及血浆中心肌肌球蛋白轻链 - 1浓度的改变。结果 伤后 1h ,全血粘度即显著升高 ,6h达高峰 ,补液后 ,全血粘度均降低 ,快速补液组的降低幅度显著大于均匀补液组 ,血浆粘度、红细胞比积、血浆纤维蛋白原含量和红细胞膜带电性质等血液流变学参数也发生改变 ;心肌局部血流量和血浆中心肌肌球蛋白轻链 - 1的浓度也相应发生改变 ,其变化趋势与全血粘度改变密切相关。结论 烧伤延迟复苏快速补液能够改善血液流变学特性 ,提高心肌局部血液灌注量 ,使心肌损害程度减轻 ,因此 。

调节轻链在平滑肌肌球蛋白分子上的定位

应用凝胶电泳覆盖技术和放射自显影法研究了32~P-标记的平滑肌肌球蛋白调节轻链在肌球蛋白分子上的定位。实验结果表明调节轻链(LC_(20))可重新结合于平滑肌肌球蛋白重链(200kD),重酶解肌球蛋白(130kD)及其62kD和26kD肽段上。这提示调节轻链的结合点位于平滑肌肌球蛋白亚段-1羧基端的26kD肽段上。

复合膳食纤维对急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白和肌球蛋白轻链激酶的影响

目的探讨含复合膳食纤维(DFC)肠内营养(EN)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障功能的影响。方法采用5%的牛黄胆酸钠(0.1 mL/100 mg)逆行注射入胰胆管法制备大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型。60只随机分为三组:SAP+肠内营养乳剂(瑞素)组(A组),SAP+瑞素加复合膳食纤维(20 g/L)1组[可溶性膳食纤维(SDF)∶不可溶性膳食纤维(IDF)=2∶1,B组],SAP+瑞素加膳食纤维(20 g/L)2组(SDF∶IDF=1∶2,C组),于术后48 h处死动物,比较各组肠黏膜病理改变,紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的变化。结果 B组与C组大鼠肠黏膜损伤相对于A组较轻(P<0.05),C组大鼠肠黏膜损伤相对于B组较轻(P<0.05)。B组与C组大鼠肠黏膜紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的分布表达相对于A组增高(P<0.05),且C组oc-cludin及ZO-1的分布和表达高于B组(P<0.05)。而C组MLCK的分布和表达高于B组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论添加DFC的肠内营养在SAP大鼠肠黏膜屏障功能中起重要的保护作用,且适当加大不可溶性膳食纤维(IDF)的比例更有助于肠道黏膜屏障的保护,改善受损的肠屏障功能。这一作用可能是通过调控紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的分布和表达来实现的。

LncRNA SNHG1通过miR-101-3p/MYLIP轴调节宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的研究

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)对宫颈癌(cervical cancer, CC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测人正常宫颈上皮细胞(H8)和人CC细胞(Hela、Caski、C-33A、SiHa)中SNHG1、microRNA-101-3p(miR-101-3p)、肌球蛋白调节轻链相互作用蛋白(MYLIP)的mRNA和蛋白表达。体外培养Hela细胞,使用Lipofectamine 3000试剂将si-SNHG1、anti-miR-101-3p及其阴性对照si-NC、inhibitor-NC转染到Hela细胞中,分为对照(Control)组、si-NC组、si-SNHG1组、si-SNHG1+anti-NC组、si-SNHG1+anti-miR-101-3p组。转染48 h后,qRT-PCR检测细胞中SNHG1、miR-101-3p和MYLIP mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中MYLIP蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;通过双荧光素酶报告(DLRA)和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证Hela细胞中SNHG1、miR-101-3p和MYLIP的调控作用。结果 CC细胞系(Hela、Caski、C-33A、SiHa)中SNHG1、MYLIP mRNA和蛋白水平升高,miR-101-3p表达水平降低(P<0.05)。敲低SNHG1可显著上调miR-101-3p表达,降低MYLIP表达,抑制Hela细胞增殖、迁移和侵袭,并促进Hela细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-101-3p可显著减弱SNHG1敲低的促凋亡和抗迁移、侵袭作用(均P<0.05)。DLRA和RIP实验证实SNHG1可以靶向并结合Hela细胞中的miR-101-3p, MYLIP是miR-101-3p的靶标。结论 SNHG1敲低可能是通过上调miR-101-3p来抑制MYLIP表达,进而抑制CC细胞增殖、迁移和侵袭,并促进CC细胞凋亡。

冠状动脉痉挛发病机制的研究进展及法医学应用

冠状动脉痉挛是指局部冠状动脉对各类刺激的过收缩反应。目前缺乏对冠状动脉痉挛导致心脏性猝死的特异性诊断指标。本文总结了目前国内外对冠状动脉痉挛发病机制的研究进展,介绍血管内皮功能障碍和血管平滑肌兴奋性增高在冠状动脉痉挛过程中的作用,并对引起血管内皮功能障碍的内源性一氧化氮、内皮素-1,与血管平滑肌兴奋性增高有关的MLC2磷酸化、Rho激酶及内质网应激的分子作用机制展开阐述,探讨相关分子在诊断冠状动脉痉挛导致心脏性猝死法医鉴定中的可能性。

缺氧诱导因子1α对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组,每组3孔。阴性对照组和HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒和含HIF-1α干扰序列1、干扰序列2、干扰序列3的GV248重组质粒,空白对照组细胞仅加入脂质体2000。转染24h后,采用实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法(检测方法下同)分别检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白的表达,选取干扰效率最高的序列。(2)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组和HIF-1α低表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组和HIF-1α低表达组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒及实验(1)中筛选的低表达HIF-1α重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(3)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α高表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组、HIF-1α高表达组细胞经脂质体2000分别转染GV230空质粒和HIF-1α高表达重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(4)取实验(1)中3组、实验(2)中3组细胞,检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和带状闭合蛋白1(ZO-1)的mRNA和蛋白表达水平。对数据行单因素方差分析、t检验。结果培养4d,细胞呈梭形,成功培养出大鼠血管内皮细胞。(1)HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的干扰效率分别为47.66%、45.79%、62.62%,干扰序列3组细胞干扰效率最高。转染24h后,HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组(t=18.404、9.140,P<0.01)及阴性对照组(t=15.099、7.096,P<0.01)。(2)培养14d后,HIF-1α低表达组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组(t=21.140、5.440,P<0.01)和阴性对照组(t=14.310、5.210,P<0.01)。(3)培养14d后,HIF-1α高表达组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平明显高于空白对照组(t=19.160,7.710,P<0.01)及阴性对照组(t=19.890、7.500,P<0.01)。(4)转染24h后,HIF-1α低表达组细胞MLCK、p-MLC的mRNA表达水平显著低于空白对照组(t=2.709、4.011,P<0.05或P<0.01)和阴性对照组(t=2.373、3.744,P<0.05或P<0.01),HIF-1α低表达组细胞ZO-1的mRNA表达水平显著高于空白对照组和阴性对照组(t=4.285、5.050,P<0.01)。HIF-1α高表达组细胞MLCK、p-MLC的mRNA表达水平显著高于空白对照组(t=9.118、11.313,P<0.01)和阴性对照组(t=9.073、11.280,P<0.01),HIF-1α高表达组细胞ZO-1的mRNA表达水平显著低于空白对照组和阴性对照组(t=2.889、2.640,P<0.05)。(5)转染24h后,HIF-1α低表达组细胞MLCK、p-MLC的蛋白表达水平显著低于空白对照组(t=2.652、3.983,P<0.05或P<0.01)和阴性对照组(t=2.792、4.065,P<0.05或P<0.01),HIF-1α低表达组细胞ZO-1的蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组(t=3.881、3.570,P<0.01)。HIF-1α高表达组细胞MLCK、p-MLC的蛋白表达水平为1.18±0.24、0.68±0.22,显著高于空白对照组的0.41±0.21、0.35±0.14(t=5.011、3.982,P<0.05或P<0.01)和阴性对照组的0.43±0.20、0.36±0.12(t=4.880、3.862,P<0.05或P<0.01)。HIF-1α高表达组细胞ZO-1的蛋白表达水平为0.08±0.06,显著低于空白对照组的0.20±0.09和阴性对照组的0.19±0.09(t=4.178、3.830,P<0.05或P<0.01)。结论HIF-1α通过上调MLCK、p-MLC,下调ZO-1的表达,从而增加大鼠血管内皮细胞通透性。

脾虚型功能性消化不良大鼠胃组织肌球蛋白轻链激酶蛋白及基因表达及脾虚1号方干预研究

目的:探讨脾虚型FD大鼠胃组织MLCK蛋白及基因表达及脾虚1号方干预。方法:60只10d龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、脾虚型FD模型组(n=50)。正常组给予2%蔗糖溶液灌胃,脾虚型FD模型组给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃,每天0.2mL/只,连续6d。脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14d。造模结束后随机分为模型组、多潘立酮组、脾虚1号低、中、高剂量组,每组各10只,连同正常组,分别给予蒸馏水1mL·100g^(-1)·d^(-1)、多潘立酮0.3125mg·100g^(-1)·d^(-1)、脾虚1号方0.1275、0.2550、0.5100g·100g^(-1)·d^(-1),灌胃14d。采用免疫组化、Western blot和RT-PCR方法检测胃体组织MLCK蛋白及mRNA表达量。结果:与正常组比较,模型大鼠胃体组织MLCK蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.01);与模型组比较,脾虚1号方高剂量组MLCK蛋白和mRNA表达量显著升高(P<0.01)。结论:脾虚型FD模型大鼠存在胃体组织MLCK蛋白及基因表达的降低,脾虚1号方健脾促动力的分子机制可能是通过上调MLCK蛋白及基因的表达。

非酒精性脂肪性肝病大鼠肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及肌球蛋白轻链激酶的变化

目的:研究不同阶段非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的变化。方法:将60只雄性清洁级SD大鼠随机分为两组:正常饮食组(NDG)和高脂饮食组(FDG)。于4周、8周、12周时观察各组大鼠肝脏病理学改变;应用ELISA方法测定各阶段大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)的变化;应用鲎实验测定各阶段大鼠门静脉血中内毒素(ET)水平;应用免疫组化方法检测肠道粘膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及紧密连接蛋白(ZO-1)的表达及分布情况。结果:随着高脂饮食时间增长,高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变性程度逐渐加重;血清ALT、AST、TG、CHOL水平逐渐升高(4周时,P>0.05,8周和12周时P<0.05);大鼠血浆内毒素的水平逐渐上升(0.11±0.01比0.11±0.01,P>0.05;0.36±0.01比0.11±0.01,P<0.05;0.44±0.15比0.18±0.03,P<0.05);高质饮食组较正常饮食组大鼠紧密连接蛋白ZO-1表达逐渐下降(3.6±0.7比3.9±0.32,P>0.05;2.8±0.63比3.8±0.42,P<0.05;1.8±0.79比3.7±0.48,P<0.05),MLCK表达逐渐增多(0.5±0.53比0.3±0.48,P>0.05;1.3±0.48比0.4±0.52,P<0.05;1.9±0.74比0.5±0.53,P<0.05)。结论:肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及MLCK可通过影响肠粘膜屏障功能,改变肠粘膜的通透性,促进非酒精性脂肪肝病发生发展。

肿瘤坏死因子-α对急性肝功能衰竭大鼠肠黏膜Claudin-1、Zonula Occludens-1和肌球蛋白轻链激酶表达的影响及肿瘤坏死因子α拮抗剂的干预效果

目的研究TNF-α对急性肝功能衰竭（ALF）大鼠肠黏膜Claudin-1、Zonula Occludens（ZO）-1蛋白和肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达的影响及TNF-α拮抗剂干预效果。方法健康雄性SD大鼠270只，重复造模5次，每次54只，按照随机数字表法将54只大鼠分为正常对照组、模型组和干预组。正常对照组6只仅腹腔注射0．9％氯化钠溶液12mL／kg；模型组和干预组各24只，均腹腔注射口GalN 1200mg／kg，建立ALF模型；干预组在给予D～GalN 24h前腹腔注射TNF-α拮抗剂（rhTNFR：Fc）12．5mg／kg。模型组与干预组于造模后8、24、48、72h各时间点处死6只大鼠，正常对照组于72h同时处死动物。应用生物化学方法检测肝功能；ELISA法检测血清TNF-α水平；肝组织和末段回肠组织经HE染色检测；免疫组织化学和Western印迹法检测各组末段回肠Claudin-1、ZO-1蛋白和MLCK的表达。组内两两比较采用t检验。结果用D-GalN成功诱导ALF模型。模型组72h转氨酶开始下降时，TBil继续上升，出现胆酶分离现象，而干预组未出现该现象。模型组72h末段回肠可见绒毛倒伏，部分绒毛尖端脱落，黏膜层可见大量中性粒细胞浸润；干预组末段回肠结构完整，黏膜层可见少量中性粒细胞浸润。模型组、干预组血清TNF-α水平均在24h升至高峰，分别为（239．83±15．81）、（182．71±17．08）ng／L；均较正常对照组[（24．19±3．57）ng／L]显著升高，差异均有统计学意义（t值分别为22．68、15．73，均P〈0．01）；而干预组显著低于模型组，差异有统计学意义（t=4．58，P〈0．01）。模型组大鼠回肠黏膜Claudin-1、ZO-1相对表达量在早期均逐渐降低，24h下降至最低，分别为0．355±0．068、0．387±0．091，均显著低于正常对照组（1．640±0．188、1．015±0．150），差异有统计学意义（t值分别为12．87、7．14，均P〈0．01）；干预组大鼠回肠黏膜Claudin-1、ZO-1蛋白相对表达量亦于24h下降至最低，分别为1．051±0．370、0．642±0．082，明显低于正常对照组（t值分别为2．84、4．36，均P〈0．05），但均高于模型组，差异有统计学意义（t值分别为3．70、4．15，均P〈0．01）。模型组、干预组大鼠回肠MLCK相对表达量在早期均逐渐升高，24h均上升至高峰，分别为1．298±0．194、1．033±0．073，明显高于对照组的0．460±0．069，差异有统计学意义（t值分别为8．16、11．44，均P〈0．01），但干预组低于模型组，两者差异有统计学意义（t=2．56，P〈0．05）。结论ALF大鼠模型的血清TNF-α水平升高，Claudin-1和ZO-1蛋白表达下降、MLCK含量增加，使得细胞收缩加剧及细胞间隙增大。而TNF—α拮抗剂通过抑制MLCK含量的增加、阻止Claudin-1和ZO-1蛋白表达的下降，使肝功能明显改善、降低细胞炎性反应和肝细胞凋亡。

RhoA/Rho激酶1及肌球蛋白轻链磷酸化下调诱发主动脉夹层

目的:探讨RhoA/Rho激酶1(ROCK1)下调抑制肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化在主动脉夹层(AD)形成过程中的作用。方法:检测正常(NA)和AD主动脉原代平滑肌细胞(SMC)中RhoA/ROCK1的表达与MLC的磷酸化程度。免疫荧光观察SMC中MLC磷酸化程度和结构。β-氨基丙腈(BAPN)联合应用ROCK1抑制剂Fasudil,验证RhoA/ROCK1下调在AD形成中的作用。组间比较采用 t检验或 χ2检验,Kaplan-Meier生存曲线采用非参数检验。 结果:NA组和AD组年龄( t=-1.439, P>0.05)、性别( χ2=0.900, P>0.05)差异无统计学意义,AD组高血压患者多于正常组( χ2=5.562, P<0.05)。AD主动脉SMC中RhoA(NA:42 782±31 339,AD:6 975±3 130, t=2.585, P<0.05)和ROCK1表达下调(NA:64 626±38 822,AD:13 851±961, t=2.977, P<0.05),MLC磷酸化减少(NA:230 193±27 749,AD:51 142±48 151, t=6.561, P<0.01)。免疫荧光显示AD组SMC和Fasudil处理的SMC中MLC磷酸化降低,结构受损。Fasudil联合BAPN的夹层形成率(100%)高于BAPN的夹层形成率(50%, χ2=22.780, P<0.01)。 结论:RhoA/ROCK1下调抑制MLC磷酸化促进了AD的发生。