Study on Processing Technology for Aconiti Kusnezoffii Radix by Bean Curd

[Objectives] The aim was to explore the best parameters for processing Aconiti Kusnezoffii Radix by bean curd. [Methods] Orthogonal test( L_(16)(4~3)) was designed to investigate the optimal soaking time,decocting time and bean curd proportion for processing Aconiti Kusnezoffii Radix by bean curd. The contents of monoester alkaloids and diester-alkaloids were measured as the evaluation indexes. [Results]The contents of monoester alkaloids were 0. 11%,0. 07%,0. 062% and 0. 048% respectively under the four levels of soaking time,were0. 081%,0. 066%,0. 074% and 0. 067% respectively under the four levels of decocting time,and were 0. 070%,0. 072%,0. 080% and0. 073% respectively under the four levels of bean curd proportion. The content of diester-alkaloids was all below 0. 034%. The influence intensity of the three factors on the content of monoester alkaloids ranked as soaking time > decocting time > bean curd proportion. Under any of the above conditions,the content of diester-alkaloids was below the limit of Chinese Pharmacopoeia. The content of diester-alkaloids was reduced obviously with the increased use of bean curd. [Conclusions] The optimum processing conditions for Aconiti Kusnezoffii Radix were A_3B_3C_2,i. e.,soaking time of 6 d,decocting time of 5 h and bean curd proportion of 25%.

诃子在藏药炮制中的应用

通过查阅近年来国内外文献,归纳、分析了诃子在藏药炮制中的应用以及诃子炮制一些矿物药和有毒植物药过程的研究进展,根据诃子化学成分推测诃子炮制铁粉、草乌的原理及减毒机制,为进一步深入探讨藏药诃子炮制矿物药、有毒植物药的机制提供参考。

草乌现代炮制工艺研究

目的：比较草乌不同炮制工艺,为草乌优选出一种＂低毒高效＂、简单可行的炮制工艺。方法：采用HPLC法测定草乌现代炮制品中6种生物碱含量,采用滴定法测定其总生物碱含量,以此含量为指标,结合饮片生产情况,评价草乌现代炮制工艺。结果：草乌经浸泡处理后生物碱流失严重,其总单、双酯型生物碱和总生物碱的损失率分别为20.97%、31.13%、14.57%,润湿法能最大限度保留生物碱含量;常压蒸煮法和高压蒸制法的去毒效果最好,其总双酯型生物碱未能检测到,两种高温烘制法含量分别为0.6903 mg/g和0.5575 mg/g,均高于中国药典的限量要求。10种炮制工艺中总单酯型生物碱的含量在0.6336~2.2721 mg/g之间,其中有9种工艺含量均高于中国药典限量要求的0.7 mg/g,而总生物碱的含量在7.8019~11.2078 mg/g之间。结论：草乌经润湿法处理后,其高压蒸制品双酯型生物碱含量符合中国药典要求,总生物碱的含量高,且操作省时可控,是一种较为理想的炮制工艺。

醋的种类对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的:探讨醋的种类对醋制草乌生物碱类成分的影响,为筛选炮制辅料用醋提供依据。方法:采用不同类型的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较采用不同类型的醋制备的草乌炮制品中生物碱的含量差异。结果:各炮制品中双酯型生物碱的含量:生草乌>食用乙酸制草乌>工业乙酸制草乌>陈醋制草乌≈龙门米醋制草乌>玫瑰醋制草乌>药典法制草乌;单酯型生物碱的含量:药典法制草乌>食用乙酸制草乌>龙门米醋制草乌≈工业乙酸制草乌>陈醋制草乌≈玫瑰醋制草乌>生草乌。结论:醋制草乌可以达到炮制减毒的效果,食用醋比乙酸的减毒效果更佳。

草乌几种炮制品的毒性实验比较

比较性地研究了草乌润后加压蒸新炮制品和药典炮制品、生品的急性毒性及对心律和呼吸的影响。结果证明新法１炮制品（润４８ｈ，６８．６５ｋＰａ，１１５℃蒸２ｈ）具有毒性低，对心律影响小，抑制呼吸作用弱等优点。

草乌及其炮制品的急性毒性实验研究

目的比较生草乌、药典法制草乌、诃子制草乌的粉末和水煎液及诃子草乌配伍煎煮液7种样品急性毒性大小,探讨草乌炮制减毒原理。方法采用灌胃给药的方法,分别测定7种草乌样品对小鼠半数致死量(LD50)或最大给药量。结果生草乌粉末、诃子制草乌粉末、诃子草乌配伍煎液、诃子制草乌煎液、生草乌煎液的LD50分别为0.7009、1.1690、2.5600、4.0000、15.3200 g·kg-1;药典法制草乌粉末、药典法制草乌水煎液最大给药量分为20 g·kg-1和64 g·kg-1。结论生草乌毒性较大,生品经炮制或水煎煮后毒性均有不同程度降低。药典法制草乌无论粉末还是水煎液均无明显毒性。

草乌不同炮制品对“寒凝血瘀”证动物模型血液流变学影响的研究

研究了润蒸结合法炮制品、药典法炮制品、生品草乌对“寒凝血瘀”证大鼠模型的血液流变性、血浆纤维蛋白原含量的影响，其中以润蒸结合法草乌炮制品效果为好。

醋的用量对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的:探讨醋的用量对醋制草乌生物碱类成分的影响。方法:采用不同用量的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较生草乌、药典法制草乌、不同用量醋制草乌中生物碱的含量差异。结果:醋制草乌可以使双酯型生物碱水解,生物碱含量的变化与醋的用量有一定相关性;醋制草乌中单酯型生物碱的含量明显高于药典法制草乌。结论:醋制草乌可以作为一种新的草乌炮制方法,但应减少临床用量。

草乌的研究进展

草乌是一种常用中药材,其味辛、苦,性热;有大毒。归心、肝、脾、肾经,含有多种生物活性物质,具有很好的药用价值。因此被广泛地应用于风寒湿痹,关节疼痛,心腹冷痛,寒疝作痛及麻醉止痛等疾病的治疗中。然而草乌有大毒,其主要有效成分乌头碱、新乌头碱、次乌头碱,它们同时也是其毒性成分。因此对其潜在的毒副作用与不良反应应进行更深入的研究,其安全性也应受到广泛关注。本文通过查阅国内外相关资料对近几年来草乌的化学成分、炮制方法、药理作用、毒理作用和安全性研究进展进行综述。

蒙药草乌及其炮制品的六种生物碱类成分血浆中含量测定

目的:建立血浆中,草乌及其诃子汤炮制品的6种生物碱类成分LC-MS含量测定的方法。方法:血浆样品用加25%氨水、乙醚萃取后,采用ZORbax-Extend-C18 4.6×250mm 5-Micron 80A柱子检测,流动相水相为10mmol醋酸铵水溶液(氨水调ph=9.0)有机相为乙腈,选择离子检测m/z 604(苯甲酰乌头原碱)、m/z 590(苯甲酰新乌头原碱)、m/z 574(苯甲酰次乌头原碱)m/z 632(新乌头碱)、m/z 646(乌头碱)、m/z 616(次乌头碱)。结果:本方法 6种成分线性关系均良好,精密度、稳定性、基质效应RSD都低于10%,加样回收率为59.11%~96.57%。结论:此样品处理快速简便、检测方法精密度高,适用于血浆中新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱检测,以其为草乌及诃子汤炮制草乌的进一步药代毒代动力学研究提供参考。

草乌炮制品的药理毒理及药效学实验研究

目的:利用实验研究方法,对蒙药草乌炮制品进行药理毒理及药效学研究,评价炮制作用,为炮制工艺规范化提供依据。方法:通过测定LD50研究草乌炮制品的毒性;利用体外抑菌试验,醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进试验,大鼠纸片肉芽肿和扭体法实验等研究草乌的主要药效。结果:①烘制炮制和童尿泡制均能降低草乌的毒性,与生草乌比炮制品毒性降低显著;相比诃子汤泡制草乌毒性未减。②经体外抑菌试验证明:烘制草乌的抑菌作用较生品增强;对醋酸引起的小鼠疼痛有显著镇痛作用(P<0.05);尚能明显抑制醋酸所致的毛细血管通透性和纸片肉芽肿及炎性渗出物(P<0.05)。结论:烘制草乌毒性低,且抑菌作用增强,依然保留抗炎、镇痛等作用。草乌不宜用诃子汤炮制。

草乌蒙医烘制工艺的优化研究

目的:阐明草乌蒙医烘制原理,进一步优化烘制工艺,以保证草乌的临床用药安全有效性。方法:遵循蒙医药理论,按照原始传统方法烘制草乌药材,采用HPLC检测其单、双酯型生物碱类化合物,并以此为指标性成分,观察比较与烘制前后变化和烘制时间、温度等影响因素的相关性,平行试验比较,确定烘制工艺最佳条件。结果:蒙医烘制工艺最佳条为将草乌药材润透至内无干心,在110℃下烘制10 h。结论:此法简便易行,效果可靠,方法可控,不使用辅料,适合于规模化生产,可作为蒙药草乌炮制规范来推广。

诃子制草乌对蒙药嘎日迪-5镇痛抗炎作用的影响

目的研究诃子制草乌对蒙药嘎日迪-5(以下简称嘎日迪-5)镇痛抗炎作用的影响。方法比较不同诃子制草乌方法以及不同剂量的嘎日迪-5对小鼠热板镇痛效果和耳廓肿胀消炎效果。结果 12h低剂量组30min痛阈值为(48.31±11.81)s、60min为(45.10±14.01)s,12h高剂量30min痛阈值为(50.31±14.09)s、60min为(47.17±7.34)s均显著高于对照组的(37.41±4.37)s、(31.78±15.21)s,差异均具统计学意义(均P<0.05)。24h低剂量组60min后痛阈值为(24.65±5.43)s、24h高剂量组为(21.34±5.57)s、4d低剂量组为(26.14±5.81)s、4d高剂量组为(23.40±6.51)s,均显著低于对照组的(31.78±15.21)s,12h低剂量小鼠耳朵肿胀程度为(9.324±4.167)mg、12h高剂量的为(9.528±2.389)mg、24h高剂量组为(8.876±3.320)mg,均显著低于对照组的(13.258±3.751)mg。差异均具统计学意义(均P<0.05)。结论研究表明使用浸泡12h,蒸煮2h的制草乌配置而成的嘎日迪-5镇痛抗炎相对更好。

草乌炮制的研究概况

草乌为蒙药常用品种,临床应用广泛,因其大毒,极易造成中毒甚至死亡,通过炮制减毒存效成为草乌应用研究的重点。本文就草乌炮制的研究进展予以综述。

诃子草乌配伍与诃子制草乌水煎液中生物碱含量的比较——诃子制草乌炮制原理探讨Ⅱ

目的:对生草乌、诃子制草乌水煎液及草乌诃子共煎液中生物碱含量进行比较验证蒙医理论"诃子可解乌头毒"。方法:采用HPLC测定生草乌水煎液、诃子制草乌水煎液及诃子草乌共煎液中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱以及苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱的含量。色谱条件以乙腈-四氢呋喃(25∶15)为流动相A,以0.1 mol.L-1醋酸铵溶液(每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL)为流动相B。结果:双酯型生物碱的含量为诃子草乌共煎液>诃子汤制草乌煎液>生草乌煎液;单酯型生物碱的含量为生草乌煎液>诃子草乌共煎液>诃子汤制草乌煎液。结论:诃子可以使草乌中双酯型生物碱缓慢水解,诃子制草乌的毒性低于诃子草乌配伍。

诃子中的鞣质成分对诃子汤制草乌的影响——诃子制草乌炮制原理探讨Ⅰ

目的:探讨诃子中的鞣质成分对诃子汤制草乌中生物碱类成分的影响,解析蒙药诃子制草乌的炮制原理。方法:采用HPLC测定诃子汤制草乌、清水制草乌、去鞣诃子汤制草乌中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱以及苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱的含量。结果:各炮制品中双酯型生物碱的含量:诃子汤制草乌(0.692 5%)>清水制草乌(0.565 7%)>去鞣诃子汤制草乌(0.493 8%);单酯型生物碱的含量:诃子汤制草乌(0.110 1%)>去鞣诃子汤制草乌(0.0833%)>清水制草乌(0.076 8%)。结论:鞣质可抑制生物碱类成分的溶出,使其缓慢水解进而达到降低毒性的作用。

诃子制草乌HPLC特征图谱研究及指标性成分定量测定

目的建立诃子制草乌的HPLC特征图谱及指标性成分的定量分析方法,分析辅料炮制对草乌物质基础的影响。方法采用HPLC色谱法,色谱柱Waters SunFire C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.1%甲酸乙腈-10 mmol/L的乙酸铵溶液(含0.1%甲酸),梯度洗脱,体积流量1mL/min;柱温为35℃,进样量10μL。特征图谱检测波长为254 nm,定量检测波长分别为271 nm和235 nm,对诃子制草乌进行特征图谱分析及指标性成分的定量研究。结果建立了诃子制草乌的HPLC特征图谱,确定了28个共有峰,其中17个峰来自生草乌,11个峰来自炮制辅料诃子。对照品指认了新增加的6号峰和18号峰分别为没食子酸和诃子鞣酸。本试验建立的HPLC特征图谱分析方法可同时定量检测诃子制草乌中没食子酸、诃子鞣酸、苯甲酰新乌头原碱和新乌头碱的含量。结论建立的草乌及其炮制品的HPLC特征图谱方法简便、可靠,可对生草乌、制草乌及诃子制草乌进行快速鉴别区分,较为全面的反映草乌及不同炮制品的物质组成差异。

辅料因素对炮制蒙药诃子制草乌质量的影响

目的探讨辅料因素对蒙药诃子制草乌质量的影响,阐明辅料发挥炮制减毒作用的原理,优选出最佳炮制工艺。方法煎煮制备不同比例的诃子汤作为炮制辅料,分别测定其p H值、总鞣质含量。并用不同比例的诃子汤分别炮制草乌,采用反相高效液相色谱法检测各炮制品中代表毒效成分的6种生物碱含量。结果随诃子用量增加,诃子汤中总鞣质含量不断升高;诃子汤p H值先减小,后基本维持稳定;诃子制草乌中6种生物碱总量先逐渐升高后变化不规律。其中草乌、诃子比例为2∶1时,诃子制草乌中生物碱含量达到最低,该比例与1986年《内蒙古蒙药材标准》中对诃子、草乌炮制用量的比例一致。结论诃子用量及炮制辅料是否新鲜均会影响诃子制草乌中生物碱含量大小,《内蒙古蒙药材标准》对诃子、草乌炮制用量比2∶1具有一定的科学性,建议继续沿用。

炮制对草乌中乌头类生物碱经皮吸收的影响及其贴剂的设计与评价

目的探究炮制对草乌Aconiti Kusnezoffii Radix(AKR)中6种乌头类生物碱(aconitine alkaloids,AAs)经皮吸收的影响,并研制含生草乌和制草乌Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta(AKRC)提取物的压敏胶分散型贴片,考察其药效差异。方法分别从生、制草乌中提取AAs,质量分数分别为59.3%和59.1%。提取出的AAs由乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱(BAC)、苯甲酰新乌头原碱(BMA)和苯甲酰次乌头原碱(BHA)6种生物碱组成。经过炮制,BAC、BMA和BHA的质量分数分别由3.8%、9.2%、0.4%提高至22.7%、32.9%、2.1%,而乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的质量分数分别由19.6%、24.3%、2.0%降低至0.5%、0.6%、0.3%。采用溶剂挥发法分别制备含有生、制草乌提取物的透皮贴片。在体外透皮实验中,考察了生、制草乌中AAs的经皮渗透性的差异,并优化贴片处方。最后,采用弗氏完全佐剂诱导的大鼠慢性炎症模型和醋酸诱导的小鼠扭体模型评价含生、制草乌最佳贴片的抗炎镇痛活性。结果BMA在6种AAs中表现出最强的经皮渗透性。经过炮制,制草乌提取物中的BMA质量分数由9.2%增加到了32.9%。因此制草乌供给液中BMA的Q24由(2.53±0.31)μg/cm2提高到了(5.51±0.69)μg/cm2(P<0.05)。油酸的渗透增强效果最大,渗透增强比分别为4.57(生草乌)和9.93(制草乌)。最佳配方为生或制草乌提取物(10%)、油酸(10%)、DURO-TAK?87-4098(压敏胶基质)和Scotchpak?9707(背衬层)。最优制草乌贴片的AAs累积渗透量约为最优生草乌贴片的2倍。最佳制草乌透皮贴片较最佳生草乌贴片能显著降低大鼠类风湿性关节炎模型后爪肿胀度和小鼠扭体模型的扭体次数。结论炮制草乌可提高其中AAs的皮肤渗透量,从而提高草乌透皮贴片的镇痛和抗炎作用,为采用炮制方法提高含草乌透皮贴片功效提供科学依据。

基于TRPV1通道分析诃子制草乌减轻H9c2心肌细胞毒性的作用机制

目的:探究瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道在诃子制草乌减轻心肌细胞毒性中的作用机制。方法:以体外培养的H9c2心肌细胞为模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞中TRPV1 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,细胞核,活性氧(ROS),线粒体膜电位及钙离子(Ca^(2+))含量的变化。结果:与空白组比较,当质量浓度≥0.5 g·L^(-1)时,生草乌、诃子制草乌均可显著降低细胞活力(P<0.01),细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量增加,线粒体膜电位降低,细胞核固缩甚至是破碎。当质量浓度≥0.5 g·L^(-1)时,与同质量浓度生草乌组相比,诃子制草乌组细胞活力显著上升(P<0.01),细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量减少,线粒体膜电位升高,细胞核形态有所改善。与作用于未经处理的H9c2心肌细胞比较,同质量浓度的生草乌作用于TRPV1抑制剂BCTC预处理后的H9c2心肌细胞后,其细胞活力明显上升,细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量减少,线粒体膜电位升高,细胞核固缩程度得到改善;而同质量浓度的诃子制草乌作用于BCTC预处理后的H9c2心肌细胞,其细胞活力下降,细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量增加,线粒体膜电位降低。Real-time PCR结果表明,草乌和辅料诃子汤均能使心肌细胞中TRPV1 mRNA表达量增多,且呈现浓度依赖性。结论:生草乌可通过激活TRPV1通道诱导心肌细胞凋亡,引发心脏毒性;而诃子制草乌可通过TRPV1通道介导起到减毒作用,其减毒作用的发挥可能与诃子中的酸性成分和草乌中的生物碱协同作用于TRPV1通道有关。