Effect of Mythimna separata Digestive Fluid on Infectivity of Nuclear Polyhedrosis Virus

The dissolution of polyhedra of Mythimna separata nuclear polyhedrosis. virus by digestive fluid (pH11. 03) collected from the 5th instar M. separata larvae was studied in vitro. Observations were made at timed intervals using phase contrast microscopy and scanning electron microscopy. Under phase contrast microscopy, the polyhcdra lost their refrigence by 5 minute exposure to the digestive fluid. After exposure to the fluid for 30 minutes, all of the PIBs were dissolved. Chages of the PIBs were also observed under scanning electron microscopy, after 5 minute exposure to the fluid, damaged PIBs and PIB-derived debris were seen. After 30 minute exposure, only remains of PIBs were found. The effect of M. separata digestive fluid on the infectivity of Ms NPV was examined by nconatcs bioassay. The results indicated that virions from Ms NPV-PIBs were rapidly inactivated after 15 minute exposure to digestive fluid and all of virions were non-infectious.

粘虫胚胎细胞系的建立及对MsNPV敏感性的测定

用培养24h的粘虫受精卵成功地建立一株粘虫胚胎细胞后。命名为NEAU-Ms-980312。目前已传代201代,该细胞系主要含有圆形和纺锤形两种细胞,在28℃、120h的细胞群体倍增时间为47.82h。该细胞系对粘虫核型多角体病毒有较高的敏感性,用原代病毒以感染复数(m.o.i.)为0.08TCID50/细胞感染细胞,在接毒后10d,病毒感染率和每细胞产生的多角体数量分别是为62.10％和33.59PIB。

混合感染后杆状病毒间的增效作用──病毒蛋白及核酸的初步分析

AsNPV＋HasNPV、AsNPV＋HaNPV、AsNPV＋PsNPV分别感染烟青虫、棉铃虫和粘虫幼虫，对分离到的核型多角体病毒（AsNPV＋HasNPV）－Helicoverpaassulta、（AsNPV＋HaNPV）－H．armigera和（AsNPV＋PsNPV）－Pseudaletiaseparata，经电镜观察，多角体蛋白及病毒粒子蛋白SDS－PAGE电泳，病毒核酸的限制性内切酶酶解分析等研究，证明各病毒的多角体形态不规则，大小差异极大，病毒粒子为杆状，（AsNPV＋HasNPV）－H．assulta和（AsNPV＋HaNPV）－H．armigera病毒粒子有单粒和多拉包埋类型，（AsNPV＋PsNPV）－P．separata为多粒包理型。各病毒的多角体蛋白基本上只有一种多肽，分子量为25000道尔顿左右。（AsNPV＋HasNPV）－H.assulta、（AsNPV＋HaNPV）－H.armigera和（AsNPV＋PsNPV）－P．separata的病毒粒子分别有10、14、5条多肽，分子量大小在13500～98000，13000～88000，18500～52000道尔顿之间。病毒核酸经EcORI，HindIII，HindIII＋BamHI酶解，其DNA的酶切位点，大小及DNA的总分子量与AsNPV和原寄主的Has－NPV，HaNPV和PsNPVDNA的酶切图谱存在一定差异，混合病毒侵染昆虫后新复制的病毒核酸发生一定的变化，从而导致病毒蛋白和病毒形态的变化。混合感染后AsNPV对Has－NPV、HaNPV和PsNPV的侵染有明显?

粘虫核型多角体病毒感染特性的研究

对东北农业大学昆虫学教研室分离出来的粘虫核型多角体病毒Ｖ－Ｍｓ－４毒株进行初步研究，结果表明，病毒多角体呈近圆形、四角形、六角形和不规则形，大小在１．１６～２．８６μｍ之间，病毒粒子为３８９～４６７μｍ×４０～６８μｍ，为多粒包埋，病毒在粘虫消化液作用下，１０ｍｉｎ失去折光性，３０ｍｉｎ内完全被溶解，释放出病毒粒子；消化液能使释放出的病毒粒子在１５ｍｉｎ内失活；寄主的脂肪、气管基质及表皮组织为感染病毒的敏感组织，感染后脂肪和血淋巴蛋白的含量比健康幼虫明显降低，未见病毒侵染中肠的现象。

粘虫颗粒体病毒及其增效因子对粘虫核型多角体病毒的增效作用

生物测定的结果表明，粘虫颗粒体病毒ＰｕＧＶ－Ｐｓ及其增效因子对粘虫核型多角体病毒ＰｓＮＰＶ均有明显的增效作用．粘虫颗粒体病毒不仅能提高粘虫感染ＰｓＮＰＶ的死亡率，而且ＮＰＶ、ＧＶ两种病毒混合感染使粘虫幼虫代谢发育受到抑制，表现为生长缓慢、体重减少等．增效因子的增效作用表现在能显著提高粘虫幼虫的死亡率，降低核型多角体病毒的半致死浓度ＬＣ５０，并缩短半致死时间ＬＴ５０．

银染色测定粘虫核多角体病毒多角体基因序列

LsMNPV DNA用EcoRV酶切进行基因组克降,用AcMNPV的部分多角体基因顺序DNA片段作探针,菌落原位杂交法结合测序筛选到分别含LsMNPV部分多角体基因的重组质粒pLsEV1和pLsPH5。用银染色PCR线性扩增双脱氧法测序,发现LsMNPv的完整基因即位于这两个片段上。LsMNPV多角体基因长741bp,编码区碱基同源性与AcMNPV和MbMNPV分别为80.0％和97.0％,氨基酸同源性分别为89.8和97.5％。氨基酸组成中以谷氨酸(Glu)含量最高,谷氨酰胺和色氨酸含量最低。密码子选用以第三个碱基为嘧啶的密码子频率最高。多角体蛋白N端有一类似信号肽结构的26个氨基酸的疏水区。