1889例结直肠癌MSI、K-ras、N-ras和B-raf基因状态以及临床病理特征分析

目的通过对1889例结直肠癌微卫星不稳定(MSI)、K-ras、N-ras和B-raf基因检测,分析其基因状态与临床病理特征之间的关联性。方法收集东部战区总医院病理科结直肠癌患者手术切除大标本共计1889例,通过PCR荧光法联合毛细管电泳法对1889例结直肠癌进行MSI、K-ras、N-ras和B-raf检测,分析其基因状态与临床病理特征之间的关系,以及MSI与K-ras、N-ras和B-raf之间的关联性分析,并且对MSI自身位点的相关性分析。结果1889例结直肠癌患者中,微卫星高度不稳定(MSI-H)更易发生于右侧结肠(16.4%)、黏液腺癌(14.9%)、分化程度较低(18.7%)、年龄偏低(8.3%)、淋巴结未转移(9.1%)以及B-raf突变(5.2%)的患者中,K-ras突变更易发生于右侧结肠(50.7%)、黏液腺癌(50.7%)、分化程度较高(52.1%)、微卫星低度不稳定或稳定型(42.2%)的患者中,而B-raf突变更易发生在MSI-H(6.9%)的患者中,而N-ras基因则与临床病特征关联性不强。结论结直肠癌患者的MSI、K-ras和B-raf基因状态与临床病理特征存在着高度的关联性,因此通过分析其基因状态与临床病理特征之间的关系可以为临床靶向治疗以及预后提供更加可靠的依据。

含人N-ras反意基因的假型逆转录病毒对裸小鼠体内人肝癌移植瘤生长和N-ras表达的作用

含人反意基因的假型逆转录病毒已在许多实验室构建,并用于抑制病毒的或细胞的基因表达。抑制基因活性是一个新的遗传分析方法,其机制是通过一条互补于正常RNA的反意链与有意义链的结合而影响其功能,它的优点是能根据目的基因的转录产物设制有效的反意RNA,研究该基因在细胞中的生物学作用。RNA逆转录病毒因其独特性结构和繁衍形式,已成为理想的基因转移载体。

益气养阴方及其拆方影响急性髓细胞白血病细胞Flt3和N-ras表达研究

目的研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对Flt3和N-ras在人急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的作用机制。方法收集60例AML患者骨髓单个核细胞,将所提取每例患者的细胞混悬液分成4组:对照组不加药物,实验组分别加入益气养阴方、扶正方、祛邪方中药制剂。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫印迹法(Western bloting)观察益气养阴组、扶正组、祛邪组及对照组对Flt3、N-ras基因及FLT3蛋白表达的影响。结果 RT-PCR法检测:对照组、益气养阴组、扶正组、祛邪组Flt3基因表达率分别为(90.78±6.92)%、(38.18±4.50)%、(65.57±5.55)%、(61.35±6.39)%,N-ras基因表达率分别为(93.28±5.54)%、(34.38±6.69)%、(59.42±7.35)%、(65.28±7.64)%,益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Westernbloting检测:对照组、益气养阴组、扶正组、祛邪组FLT3蛋白灰度值分别为0.8127±0.0284、0.4265±0.0353、0.5396±0.0274、0.5473±0.0282,对照组与益气养阴组、扶正组、祛邪组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论中药益气养阴方可抑制AML细胞的克隆性增殖,可降低Flt3和N-ras在AML细胞的表达水平,对AML治疗具有作用。

IGF-Ⅱ对肝癌细胞MHCC97-H癌基因C-myc和N-ras表达的影响

目的观察胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)对肝癌细胞MHCC97-H中癌基因C-myc和N-ras表达的影响。方法培养肝癌细胞株MHCC97-H,用IGF-Ⅱ(50ng/mL)作用48h后,分别采用细胞免疫荧光、Western blot法及Real-time PCR法检测细胞中C-myc和N-ras的表达情况,并与对照组比较,进行定量分析。结果 C-myc及N-ras蛋白阳性表达主要位于细胞核。对照组、IGF-Ⅱ组MHCC97-H细胞中C-myc荧光表达量分别为(100.00±2.89)%、(254.00±35.57)%,N-ras荧光表达量分别为(100.00±14.43)%、(257.30±22.43)%。与对照组相比,IGF-Ⅱ组MHCC97-H细胞中C-myc及N-ras蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,IGF-Ⅱ组MHCC97-H细胞中C-myc和N-ras的mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IGF-Ⅱ可上调肝癌细胞MHCC97-H中癌基因C-myc和N-ras的蛋白及mRNA表达,这可能是IGF-Ⅱ促进肝癌细胞增殖的分子机制之一,这为临床上肝癌防治提供了新线索。

中药复方对急性髓细胞性白血病干细胞Flt3和N-ras基因表达的影响(英文)

背景:在白血病患者体内存在一群白血病干细胞,这些恶性干细胞是白血病细胞存在和不断增殖的根源,针对干预白血病干细胞的特异性靶向治疗药物已成为近年来研究热点。目的:探讨中药复方对急性髓细胞性白血病干细胞Flt3和N-ras基因表达的影响。设计、时间及地点:随机区组实验,于2007-09/2008-12在山东中医药大学附属医院完成。对象:2006-2007年山东中医药大学附属医院、山东大学齐鲁医院血液科就诊的急性髓细胞性白血病初治患者50例,FAB分型M15例,M215例,M49例,M521例。方法:原方:黄芪、白花蛇舌草、小蓟、太子参、半枝莲、蒲公英、生地、黄精、女贞子、旱莲草、天冬、麦冬、白术、茯苓、甘草。扶正方:黄芪、太子参、生地、黄精、女贞子、天冬、麦冬、白术、茯苓、甘草。祛邪方:白花蛇舌草、小蓟、半枝莲、蒲公英、旱莲草。制剂:上述3组组方药物由山东中医药大学附属医院中药制剂实验室(国家三级重要制剂实验室)配制成1g/mL的药液,无菌试验阴性后过滤除菌备用。常规无菌采集急性髓细胞性白血病M1,M2,M4,M5型患者骨髓各5mL,稀释后加入淋巴细胞分离液,联合应用免疫磁珠分选系统和流式细胞仪分离纯化白血病干细胞。调整细胞浓度至2×108L-1,均分成4组:对照组不加药物,实验组分别加入原方、扶正方、祛邪方的对应中药制剂,终浓度为100mg/L,继续培养48h后进行指标检测。主要观察指标:RT-PCR法检测Flt3、N-ras基因的表达。结果:与对照组比较,原方组、扶正方组、祛邪方组Flt3表达阳性率均明显降低(P<0.05),但原方组降低幅度明显大于扶正方组、祛邪方组(P<0.05);扶正方组与祛邪方组Flt3表达阳性率比较无明显差异(P>0.05)。4组N-ras表达阳性率与Flt3表达情况基本一致。结论:Flt3和N-ras基因在白血病干细胞中存在过度表达,中药原方及其拆方后的扶正方、祛邪方均能够降低白血病干细胞中Flt3和N-ras基因的表达水平。

PCR-SSCP检测急性白血病患者N-ras基因突变及临床意义初探

目的 探讨N ras基因突变与急性白血病发生的关系。方法 采取骨髓和外周血白细胞提取DNA ,用PCR SSCP分析技术分别对急性白血病患者、正常对照组的N ras基因突变进行检测。结果 84例急性白血病患者中 2 5例发生N ras基因突变 ,基因变异频率为 2 9 8% ,其中急性淋巴细胞白血病为 18 6% ,急性髓细胞白血病为 41 4% ;11例随访 6个月 ,7例N ras基因突变消失 ,4例N ras基因突变持续存在 ;正常对照组未发现N ras基因突变。结论 N

DDPH 对实验性心肌肥厚大鼠左心室 N-ras mRNA 及蛋白质表达的影响

目的：研究１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙氨基）－丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对心肌肥厚大鼠左室Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ及蛋白质表达的影响。方法：用部分狭窄腹主动脉方法造成大鼠心肌肥厚模型，从术后第４周开始，ｉｇ不同剂量的ＤＤＰＨ（２５和５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），持续８ｗｋ。用ＲＮＡ狭缝杂交及免疫组化的方法检测Ｎ－ｒａｓｍＲ－ＮＡ及蛋白质表达的变化。结果：术后１２ｗｋ，发现肥厚组心肌组织Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ表达是对照组的３．１倍，蛋白质表达是对照组的２．９倍，而二个给药组ｍＲＮＡ及蛋白质的表达明显低于肥厚组，但仍高于对照组。结论：ＤＤＰＨ对大鼠腹主动脉部分狭窄所致心肌肥厚时Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ及蛋白质表达的增加有一定的逆转作用。

甲胎蛋白对HeLa细胞N-ras、p53和p21^(ras)表达的促进作用

大量研究已证明甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞的增殖具有调节作用 .为探讨AFP对细胞生长促进作用的分子机理 ,采用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,用Northern印迹分析法分析不同作用时间时细胞N rasmRNA的表达以及用Western印迹分析法分析p5 3、p2 1ras的表达 .结果发现 ,在AFP(2 0mg L)作用后 ,HeLa细胞的N rasmRNA、p5 3蛋白质和p2 1ras蛋白质的表达量与对照组比较在 12h和 2 4h时都有明显增加 .AFP的作用均可被抗AFP单克隆抗体所拮抗 .实验结果提示 ,AFP对细胞生长的调节作用可能通过促进这些原癌基因的表达来实现 .

肝癌中医证型与野生型p53mRNA、N-ras蛋白表达相关性研究

目的:观察肝癌中医证型与野生型p53mRNA、N-ras表达相关性。方法:选择肝癌脾虚证36例和湿热证患者24例,应用原位杂交和免疫组化方法分别检测其肝癌组织野生型p53mRNA和N-ras蛋白表达,比较2组之间的差异。结果:脾虚证组野生型p53mRNA表达水平显著低于湿热证组(P<0．05);脾虚证组N-ras蛋白表达水平略低于湿热证组(P>0．05)。结论:野生型p53mRNA表达与旰癌中医证型有关,野生型p53 mRNA低表达是区别脾虚证和湿热证的特征之一。

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因表达的影响

目的为探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、C-myc基因表达的影响。方法运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量。结果树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。

CCL18通过N-Ras/c-myc/lin28下调乳腺癌细胞miR98的表达

目的探讨CCL18是否参与了乳腺癌miRNAs的表达调控。方法采用miRNAs芯片筛查CCL18处理前后乳腺癌细胞miRNAs的表达差异,QRT-PCR和Luciferase Reporter Assay对芯片结果进行验证。瞬时转染法分别改变乳腺癌细胞miR98和c-myc的表达,应用QRT-PCR和Western blot检测c-myc和lin28 mRNA和蛋白的表达。结果 miRNAs芯片结果显示CCL18处理后乳腺癌细胞共20种miRNAs发生变化,QRT-PCR和Luciferase Reporter Assay证实CCL18下调乳腺癌细胞miR98的表达。CCL18可上调乳腺癌细胞c-myc和lin28mRNA和蛋白的表达,转染c-myc siRNAs可逆转CCL18调控lin28和miR98表达的功能。CCL18通过miR98转录后调控乳腺癌细胞N-Ras蛋白的表达。结论CCL18通过N-Ras/c-myc/lin28通路下调miR98,下调的miR98通过转录后调控增加N-Ras蛋白的表达,从而进一步激活c-myc/lin28通路,维持miR98的持续降低,形成了一个正反馈环路。

人红白血病细胞株c-myc/N-ras/P_(53)mRNA的表达及其与细胞生物学特性的关系

本实验用一定浓度的苦参碱作用Ｋ５６２细胞１６ｈ， ２４ｈ，４８ｈ，采用分子生物学Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术分析ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ及Ｐ５３ ｍＲＮＡ在Ｋ５６２细胞诱导分化过程中表达水平改变，以探讨其表达水平与细胞生物学特性的关系。结果显示苦参碱作用Ｋ５６２细胞２４ｈ时，Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ表达活化；Ｐ５３－基因表达增强：作用４８ｈ时，ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ水平表达明显受抑。说明苦参碱在诱导Ｋ５６２细胞分化启动时，能明显改变早期相关癌基因的表达。提示ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ和Ｐ５３等癌基因是一类重要的细胞增殖、分化调控因素。

癌基因c-myc和n-ras在妊娠滋养细胞疾病中表达的研究

为研究癌基因 c- m yc和 n- ras在妊娠滋养细胞疾病 (GTD)发生、发展中的作用 ,用地高辛标记的 c- myc、n- ras裸核探针与 5 4例石蜡包埋的 GTD组织进行原位杂交。结果显示 :c- m yc m RNA在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌组织中阳性表达率分别为 44 .4%、 5 5 .6 %和 83.3% ,绒癌 c- myc阳性表达率高于葡萄胎 (P<0 .0 5 )。n- ras m RNA在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌组织中阳性表达率分别为 88.9%、 77.8%和 44 .4% ,绒癌 n- ras阳性表达率显著低于葡萄胎(P<0 .0 1)和侵蚀性葡萄胎 (P<0 .0 5 )。 ～ 期妊娠滋养细胞瘤 (GTT)组织中 c- m yc阳性表达率为 90 .9% ,高于 期的 45 .5 % (P<0 .0 5 )。c- m yc和 n- ras基因在 GTT组织中共同表达率为 47.2 %。结果提示 :c- myc基因与 GTD病变的发展及 GTT临床分期有关 ,N- ras基因可能为 GTT发生的早期事件 ,c- myc和 n- ras基因在

二羟环氧苯并芘对人支气管上皮细胞N-Ras基因表达的影响

目的探讨环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞N-Ras基因表达的影响。方法利用RT-PCR和Western blot方法,分别检测N-Ras基因在经BPDE恶性转化细胞中mRNA和蛋白表达水平的变化。利用免疫细胞化学方法检测N-Ras基因在经BPDE恶性转化细胞中定位和蛋白表达量的变化。结果RT-PCR和Western blot实验表明,BPDE恶性转化细胞N-Ras基因的mRNA和蛋白水平分别是正常细胞的3.616和1.600倍。免疫细胞化学实验显示,在BPDE恶性转化细胞和正常细胞中,N-Ras基因在细胞膜和细胞浆中均有表达,且两者相比,前者中的N-Ras蛋白表达明显强于后者。结论N-Ras基因可能在BPDE的致癌机制中起着重要作用。

RT-PCR法检测白血病干细胞Flt3和N-ras基因的表达

目的:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测益气养阴方及其拆方后的扶正方组、祛邪方组急性白血病干细胞Flt3和N-ras基因的表达,以期阐明Flt3和N-ras基因表达与疾病发生、发展的关系。方法:RT-PCR法检测中药益气养阴方组、扶正方组、祛邪方组及对照组AML患者骨髓单个核细胞Flt3和N-ras基因表达的情况。结果:Flt3和N-ras基因表达阳性率益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异有显著性意义(P均<0.01);益气养阴组与扶正组和祛邪组比较,差异有显著性意义(P均<0.01);扶正组与祛邪组比较,差异无显著性意义(P>0.05);各FAB亚型AML间Flt3与N-ras表达阳性率比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:中药益气养阴方可降低Flt3和N-ras基因在AML细胞的表达水平,抑制AML细胞的克隆性增殖,对AML具有治疗作用。

骨肉瘤N-ras、c-myc基因异常及其蛋白产物的表达

目的：探讨癌基因Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ及其蛋白表达与骨肉瘤的关系。方法：Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和免疫组织化学（ＬＳＡＢ法）同步检测９例人骨肉瘤Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ癌基因和其ｐ２１ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白产物表达。结果：Ｎ－ｒａｓ基因有１例为缺失改变，检出率１１％（１／９），ｃ－ｍｙｃ基因有３例为扩增改变，检出率３３％（３／９）。ｐ２１ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达阳性率分别为７８％（７例）、８９％（８例）。ｃ－ｍｙｃ基因蛋白在骨肉瘤的表达强度为最高。在９例骨肉瘤中，两种原癌基因蛋白共同表达６例，占７０％。结论：癌基因蛋白过度表达在骨肉瘤是一个常见现象，并从癌基因和其蛋白水平上提示癌基因Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ和ｐ２１ｒａｓ。

miRNA-326及N-ras基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的研究

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓中miRNA-326的表达及其临床意义。研究N-ras基因在儿童ALL微小残留病(MRD)中的表达,以期为儿童ALL的复发提供生物学检测标志。方法本研究选取35例儿童ALL和35例非白血病儿童作为对照组,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miRNA-326在儿童ALL中相对表达量,使用单链构象多态性PCR(PCR-SSCP)检测N-ras基因在治疗1年后的微小残留病(MRD)中的变化。结果miRNA-326在儿童ALL中的相对表达量(2.22±0.72)较对照组(6.35±1.23)明显下降;SSCP的电泳结果显示MRD组患者N-ras基因的电泳速度较对照组快,基因突变率为44.44%。结论miRNA-326和N-ras基因的检测可作为儿童ALL的诊断及复发生物学标志,也可为白血病的耐药性监测和治疗提供新的靶点。

RNA干扰抑制人肝癌细胞N-ras基因表达的研究

目的研究RNA干扰(RNAi)对BEL7402细胞的N-ras基因表达的干扰效应。方法建立装载靶向N-ras基因小干扰性RNA(siRNA)的表达载体;用脂质体法将此表达载体转染BEL7402细胞株,以转染空载细胞作为对照;采用RT-PCR和Western blot检测N-ras基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果转染siRNA的表达载体可以抑制内源N-ras基因在转录和转译上的表达。N-ras基因的表达抑制与BEL7402细胞的凋亡相关联。结论转染siR-NA的表达载体可明显抑制肝癌细胞株BEL7402N-ras基因的表达,并伴有细胞的凋亡。其工作的开展将为RNAi治疗、肝癌N-ras基因功能研究、新药开发提供研究基础。

抑制肝癌HepG2细胞N-Ras基因表达对放射敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)N-Ras基因增强人肝癌HepG2细胞的放射敏感性。方法:通过构建干扰N-Ras基因siRNA,采用免疫组织化学、荧光定量RT-PCR、Western blot、MTT法等观察干扰前后的肝癌HepG2细胞RNA水平、蛋白水平、生长情况等变化。用细胞克隆计数实验检测放射敏感性变化。结果:肝癌HepG2细胞株干扰后mRNA、蛋白、免疫组织化学、生长情况均显著改变,HepG2细胞RNAi前后增敏比SER=1.10。结论:RNAi肝癌HepG2细胞N-Ras基因可以达到放射增敏的目的。