人体白细胞NADPHoxidase的定位及多霉黏毒的抑制作用

目的 研究还原型尼克安腺嘌呤二核苷酸氧化酶 (reducednicotinamideadeninedinucleotidephosphateoxidase,NADPHoxidase)在人体白细胞中的细胞化学定及多霉黏毒 (gliotoxin)对其活性的抑制作用。方法 用phorbol 12 myristate 13 acetate(PMA)和 gliotoxin对白细胞预处理 ,然后用Ce3 + 作捕促剂检测活性氧 ,作为电镜下NADPHoxidase的活性标志。结果 PMA组 :在白细胞内大小形态各异的囊泡膜腔面有很多显示NADPHoxidase活性的致密颗粒。PMA +gliotoxin组 :嗜中性和嗜酸性白细胞内显示该酶活性的颗粒都明显减少 ,但后者减少程度较轻。结论 白细胞经刺激后NADPHoxidase位于细胞内囊泡膜的腔面 ,参与机体的防御机能。gliotoxin对NADPHoxidase产生的过量O-2 有明显的抑制作用 ,在抗氧化方面有一定的应用前景。

茶多酚降低血管紧张素Ⅱ诱导的内皮高渗透性

目的 观察茶多酚对血管紧张素 (AngⅡ )诱导的内皮细胞渗透性的影响 ,并探讨其作用机制。 方法 用绿茶茶多酚或红茶茶多酚 (0 4mg/L)预培养牛颈动脉内皮细胞 (BCAECs) 2 4h后 ,加入AngⅡ (1 0mg/L)刺激 ,观察细胞内超氧阴离子 (O-·2 )的水平及细胞外过氧化氢浓度的变化。另在培养单层细胞中用FITC -dextran(2 5 μmol/L)观察漏过荧光量的变化 ,评价茶多酚对AngⅡ刺激的内皮细胞渗透性的影响。结果 绿茶茶多酚或红茶茶多酚均明显降低AngⅡ刺激的O-·2 水平 (P <0 0 5 ) ,并降低由AngⅡ刺激的渗透性增加 (P <0 0 5 ) ,这种作用可以用还原型辅酶Ⅱ (NADPH)氧化酶抑制剂DPI和抗氧化物VE预培养来实现。结论 茶多酚主要通过抑制AngⅡ -NADPH氧化酶 -O-·2 信号途径 ,降低细胞的渗透性。

转录因子CHOP参与了同型半胱氨酸诱导的活性氧物质产生

目的探讨在血管平滑肌细胞(VSMC)中,同型半胱氨酸诱导活性氧物质(ROS)产生的途径.方法用[3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定细胞DNA合成率;用DCF-DA荧光探针测定细胞内ROS;CHOP基因表达升高测定采用RT-RCR.结果(1)同型半胱氨酸诱导VSMC的DNA合成增加,这与和ROS水平升高有关;(2)同型半胱氨酸激活的NADPH氧化酶;抑制该酶活性可以显著地抑制细胞内ROS产生;(3)同型半胱氨酸上调VSMC的CHOP基因表达;(4)在没有同型半胱氨酸存在下,通过转染过表达CHOP基因可诱导细胞内ROS水平升高.结论NADPH氧化酶激活和CHOP基因表达上调都参与了同型半胱氨酸诱导的ROS产生.

硫化氢对SHR大鼠的中枢心血管效应及其机制探讨

目的中枢给予硫化氢(H2S)的供体硫氢化钠(NaHS)观察自发性高血压大鼠血压和心率的变化,以明确中枢H2S的心血管效应,并探讨其可能的作用机制。方法雄性WKY大鼠作为SHR大鼠同种系正常对照组;雄性SHR大鼠,随机分为SHR大鼠对照组、NaHS实验组,Apocynin实验组。免疫组织化学方法观察胱硫醚-β-合酶(CBS)在SHR大鼠和WKY大鼠延髓头端腹外侧核区(RVLM)的分布及含量差异。对照组SHR大鼠和NaHS实验组SHR大鼠分别给予侧脑室注射人工脑脊液和不同剂量的NaHS(1,2,4,8nmol/10μl)并观察其血压和心率的变化,Apocynin实验组SHR大鼠侧脑室注射Apocynin后观察其血压和心率的改变情况。酶标法测定四组大鼠RVLM区活性氧(主要为超氧阴离子,O2-)的水平及NADPH氧化酶的活性。结果 CBS在WKY和SHR大鼠RVLM区都有分布,且SHR大鼠RVLM区CBS的含量明显低于WKY大鼠(P<0.05)。与对照组SHR大鼠相比,NaHS实验组SHR大鼠侧脑室注射NaHS(4nmol/10μl)可产生降低血压和减慢心率的心血管效应(P<0.05),侧脑室注射Apocynin(100nmol/10μl)也可降低SHR大鼠的血压和心率(P<0.05)。对照组SHR大鼠RVLM区活性氧的水平和NADPH氧化酶的活性均比WKY大鼠高(P<0.05),NaHS实验组SHR大鼠其RVLM区活性氧的水平较对照组SHR大鼠明显减少且NADPH氧化酶的活性也显著降低(P<0.05),Apocynin实验组SHR大鼠其RVLM区活性氧水平及NADPH氧化酶活性也较对照组SHR大鼠明显降低(P<0.05)。结论 H2S可以抑制SHR大鼠RVLM区NADPH氧化酶的活性,从而减少活性氧的生成,产生降低血压和减慢心率的心血管效应。

外周血单个核细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶与急性心肌梗死左室重构的关系研究

目的探讨急性心肌梗死（AMI）患者外周血单个核细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性与左室重构的关系。方法选择2010年12月至2011年6月住院治疗的52例AMI患者作为AMI组，选择同期住院的25例阵发性室上性心动过速患者作为对照组。行超声心动图检查并计算左室质量指数（LVMI）。人院第2天采空腹静脉血检测生化指标、丙二醛（MDA）水平及NADPH氧化酶活性，并分析MDA水平、NADPH氧化酶活性与LYMI的相关性。结果AMI组MDA水平[（6．14±2．80）μmol／L]较对照组[（2．95±1．82）μmo]]L]显著增高（P〈0．01），AMI组O2-水平[（21．61±10．66）RLU／mg蛋白]较对照组[（7．12±4．48）RLU／mg蛋白]显著增高（P〈0．01），AMI组NADPH氧化酶活性[（2．84±1．05）RLU／mg蛋白]较对照组[（1．97±0．80）RLU／mg蛋白]显著增高（P〈0．01），MDA水平与LVMI呈正相关（r=0．57，P〈0．01），NADPH氧化酶活性与LVMI亦呈正相关（r=0．71，P〈0．01）。结论AMI患者外周血单个核细胞NADPH氧化酶活性增加，在AMI后左室重构中起重要作用。