NAG7基因转染对鼻咽癌细胞生长的影响

为了探讨鼻咽癌表达下调基因NAG7对鼻咽癌细胞系HNE1生长的影响 ,构建了NAG7基因的真核表达载体pcDNA3 1(+) /NAG7,并采用脂质体转染技术将真核重组体pcDNA3 1(+) /NAG7质粒和真核空载体pcDNA3 1(+)质粒分别导入HNE1细胞 ,经G4 18筛选后获得稳定转染细胞克隆 ,RT PCR和RNA印迹检测NAG7基因的表达 ,并通过细胞生长曲线、裸鼠接种和流式细胞等方法对转染细胞的生物学行为进行检测 .结果显示 :转染NAG7基因后 ,基因表达增加 ,细胞生长倍增时间较空载体转染和HNE1明显延长 ,流式细胞技术检测表明 ,NAG7可延缓细胞由G0～G1期进入S期 ;裸鼠接种实验显示转染NAG7基因后的HNE1细胞致瘤性受到抑制 .上述结果表明 :NAG7基因转染后鼻咽癌细胞生长受到抑制 。

cDNA微阵列技术分析NAG7基因对鼻咽癌细胞基因表达谱的影响

运用cDNA微阵列技术分析NAG7基因重表达对HNE1细胞基因表达谱的影响 .抽提HNE1细胞和pcDNA3 1(+) /NAG7/HNE1细胞总RNA ,分离 polyAmRNA ,将mRNA逆转录为cDNA ,并在逆转录过程中用33P dATP进行标记 ,与含有 16 15 0个基因和表达序列标签 (EST)的cDNA表达阵列膜杂交 ,获得基因表达图谱 .ArrayGauge软件分析NAG7基因的重表达所导致的鼻咽癌细胞HNE1基因表达谱改变 ,并用RNA印迹对微阵列杂交结果进行验证 .结果分析表明 ,2倍以上的差异表达基因或EST 179个 ,其中表达上调的 91个 ,表达下调的 88个 ;已明确基因表达产物的上调基因 2 9个 ,下调基因 37个 .在差异表达基因中 ,涉及基因转录调控、信号转导、细胞生长、细胞代谢和细胞凋亡等基因 .RNA印迹证实生长阻滞特异蛋白 1(gas 1)基因表达上调 .特别值得关注的是 ,先前的蛋白质组研究结果亦发现NAG7基因可导致生长阻滞特异蛋白 1表达上调 ,说明gas 1基因在NAG7重表达的HNE1细胞中具有重要作用 ,这为深入研究NAG7基因的作用环节和机理提供了重要的线索 .

鼻咽癌相关基因NAG7编码产物的表达和定位分析

为了研究NAG7基因编码产物的特性和在活细胞内定位与表达 ,首先利用生物信息学分析NAG7编码蛋白的一般性质并预测其定位 ,再通过构建增强型绿色荧光蛋白 (Enhancegreenfluorescentprotein ,EGFP)与NAG7融合基因的真核表达载体pEGFP C2 NAG7,通过脂质体介导分别转染非洲绿猴肾细胞系COS7和人鼻咽癌细胞系HNE1 ,瞬时表达后荧光显微镜观察NAG7基因编码蛋白的活细胞内定位及表达 .研究结果表明NAG7的编码产物可在COS7细胞中高表达并定位于细胞浆 ,而在HNE1细胞中虽也定位于胞浆 ,但仅有极少数细胞存在表达 。