NALP1:一种新的参与炎症和凋亡的胞内蛋白

NALP1(NACHT leucine-rich-repeat protein 1)属于NLRs(NOD-like receptors)家族中一员,主要参与炎症体(inflammasome)的组装活化以及凋亡体(apoptosome)的诱导形成,从而在炎症反应和细胞凋亡的调节机制中发挥着重要的生物学作用。此外,鉴于NALP1在神经变性性疾病、血液疾病、自身炎症性疾病以及感染性疾病中差异性表达以及致病性作用,将为NALP1相关疾病提供新的诊断和治疗依据。

Aβ_(1-42)寡聚体诱导的AD模型大鼠行为学观察与NALP1/Caspase-1表达分析

目的研究Aβ1-42寡聚体诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知功能损害,NALP1、细胞凋亡蛋白酶-1(Caspase-1)在AD模型大鼠大脑皮质和海马的表达。方法将Morris水迷宫初筛后的60只大鼠随机均分为:D-半乳糖组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组、假手术组。分别以Aβ1-42纤维和Aβ1-42寡聚体双侧海马注射建立AD大鼠模型,D-半乳糖组腹腔注射D-半乳糖,假手术组海马注射等量生理盐水。经Morris水迷宫检测其行为学变化,采用免疫组化法、RT-PCR法观察NALP1、Caspase-1在大鼠海马的表达。结果与假手术组相比,其余3组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05),以Aβ1-42寡聚体组最明显;免疫组化法显示Aβ1-42寡聚体组海马Caspase-1免疫反应阳性神经元数目显著增加,RT-PCR法显示与Aβ1-42纤维组、D-半乳糖组和假手术组比较,Aβ1-42寡聚体组海马Caspase-1和NALP1 mRNA表达增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Aβ1-42寡聚体海马注射可导致大鼠认知功能障碍,上调NALP1及Caspase1表达。NALP1及Caspase1可能在Aβ1-42寡聚体介导的大鼠认知功能障碍起重要作用,其作用机制有待进一步研究。

IPAF和NALP1在RA-FLS中的蛋白表达情况及意义

目的:研究人IL-1β转换酶蛋白激活因子(IPAF)和富含亮氨酸重复结构域蛋白(NALP)1在类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其意义。方法:收集来自4例骨关节炎、6例RA患者、3例关节创伤患者的滑膜组织标本,分为骨关节炎组、RA组、正常对照组。分离培养FLS,应用蛋白免疫印迹法检测并比较3组IPAF、NALP1蛋白表达水平,比较3组FLS中IPAF和NALP1蛋白表达。6份RA-FLS分别加入胎牛血清培养液(空白对照组)、脂多糖、脂多糖加ZVAD-FMK、TNF-α、TNF-α加ZVAD-FMK处理24 h,比较各样本IPAF和NALP1的蛋白表达水平。结果:IPAF蛋白表达水平由高至低依次为骨关节炎组、RA组、正常对照组,骨关节炎组IPAF蛋白表达水平明显高于RA组及正常对照组(P<0.05)。NALP1蛋白表达水平由高至低依次为骨关节炎组、RA组、正常对照组,但3组比较差异无统计学意义(P>0.05)。RA-FLS经不同药物干预后,TNF-α处理组IPAF蛋白表达水平均高于其他4组(P<0.01或0.05);各组NALP1蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:RA-FLS中IPAF蛋白表达水平升高,TNF-α可促进RA-FLS中IPAF表达。

IPAF和NALP1在RA滑膜中表达及其意义的探讨

目的通过检测并比较类风湿关节炎、骨关节炎及关节创伤者组滑膜中IPAF1的表达,探讨IPAF和NALP1在类风湿关节炎滑膜中的意义。方法免疫组化检测滑膜衬里层IPAF和NALP1蛋白质表达,于显微镜下观察,随机选取4个视野,连续计数100个位于滑膜衬里层的细胞及其中的阳性细胞数,取平均值,计算阳性细胞率,间接比较蛋白表达。结果滑膜组织免疫组化结果显示:RA组IPAF蛋白表达阳性率大于OA和Trauma组,差异均有统计学意义(P<0.05);NALP1仅在RA组表达,OA和Trauma组未见表达。结论 IPAF和NALP1在RA滑膜组织中有丰富表达,且其表达水平明显高于OA及Trauma组,提示IPAF和NALP1可能参与RA的慢性滑膜炎症过程。

NALP1基因与骨肉瘤细胞的相关研究

目的:探讨NALP1基因在骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的表达,以及高表达NALP1基因对于骨肉瘤细胞体外凋亡的影响。方法:使用RT-PCR、Western-blot法检测骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的mRNA及蛋白表达水平并与人成骨细胞株hFOB1.19比较。将NALP1基因转染质粒PcDNA3.1,将重组质粒转染骨肉瘤细胞,分成高表达基因组、空质粒组及对照组,加入抗肿瘤药物顺铂及甲氨蝶呤促使肿瘤细胞凋亡,使用流式细胞仪测定各组肿瘤细胞凋亡率。结果:通过统计分析,骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的mRNA及蛋白表达水平均低于人成骨细胞株hFOB1.19(P<0.05),NALP1高表达组的肿瘤细胞凋亡率明显高于空白质粒组及对照组。结论:上调骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的NALP1的表达量可以促进肿瘤细胞凋亡。

Aβ寡聚体与阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是老年性痴呆的主要类型,老年斑和神经原纤维缠结是AD的主要病理特征。随着近年来对AD研究的深入,越来越多的证据显示Aβ可能是AD发生的原发性病理因子,Aβ寡聚体比Aβ纤维具有更大的神经毒性。由于Aβ产生和清除之间的平衡逐渐改变,聚集态的Aβ累积引发连串的复杂反应,最终导致神经元死亡和认知功能障碍。结合近年来的研究成果,综述了Aβ寡聚体(Aβ-derived diffusible ligands,ADDLs)和阿尔茨海默病最新的研究进展。

清热通络方对痛风性关节炎大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路的影响

目的:研究清热通络方通过P2X7R/NALP3/IL-1β炎症信号通路干预痛风性关节炎(GA)大鼠的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,秋水仙碱组,清热通络方低、中、高剂量组(1.63、8.14、16.3 g·kg^(-1)·d~(-1))。除空白对照组、模型组外,各组大鼠预灌胃给药4 d。除空白对照组外,第4天灌胃后复制GA模型,造模后各时间段(4、6、12、24、48、72 h)检测大鼠踝关节肿胀率和热痛阈。给药7 d后取材,HE染色观察踝关节滑膜病理情况,生化法检测血清ATP水平,ELISA法测血清白细胞介素(IL)-8、IL-37、IL-1β水平,免疫组化法测滑膜组织P2X7R、NF-κB(P50、P65)、NALP3、IL-1β蛋白表达,RT-qPCR检测PBMCs P2X7R、IL-1β mRNA表达,Western Blot检测PBMCs P2X7R、IL-1β蛋白表达。结果:造模后4 h,各组大鼠踝关节肿胀率升高,24 h达高峰后下降;热痛阈下降,24 h达最低后上升。造模72 h后,与模型组比较,秋水仙碱组和清热通络方高剂量组肿胀率和热痛阈显著改善(P<0.05)。秋水仙碱及清热通络方各剂量组踝关节滑膜细胞炎症均有所改善;秋水仙碱组和清热通络方高剂量组血清ATP、IL-8、IL-37、IL-1β水平,PBMCs中P2X7R、IL-1β蛋白及mRNA表达,滑膜组织P2X7R、NALP3、NF-κB(P50、P65)、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论:清热通络方可能通过抑制GA大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路缓解炎症,发挥治疗作用。