不同分期痛风性关节炎患者NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平观察

目的观察不同分期痛风性关节炎(GA)患者NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平。方法回顾性选取2022年7月至2023年7月在河北省沧州中西医结合医院接受治疗的96例GA患者作为研究对象。依据GA临床分期,分为急性关节炎期组(n=38)、间歇期组(n=26)、慢性关节炎期组(n=32)。另选取同期于本院体检中心体检的健康者35名设为对照组。观察各组NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平,分析各组GA患者的临床指标,包括血尿酸、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、血清C反应蛋白(CRP)水平及白细胞计数(WBC)。采用Pearson相关性分析急性关节炎期患者外周血γδT细胞及其亚型、NALP3炎性体与临床指标的关系。结果各组NALP3、γδT1细胞比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组Caspase-1、ASC、γδT细胞、γδT2细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中,急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组Caspase-1水平均高于对照组,γδT细胞和γδT2细胞比例均低于对照组,且病情程度越高,Caspase-1水平越高,γδT细胞和γδT2细胞比例越低;急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组ASC水平均高于对照组,但急性关节炎期组低于间歇期组、慢性关节炎期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组总胆固醇、甘油三酯、CRP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组血尿酸、WBC、血肌酐水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中,急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组的血尿酸、WBC、血肌酐水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且病情程度越高,血尿酸、WBC、血肌酐水平越高。相关性分析显示,γδT细胞在淋巴细胞中的比例及γδT1细胞在γδT细胞中的比例与血尿酸、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、WBC、CRP指标无明显相关性;γδT2在γδT细胞中的比例与甘油三酯、WBC呈负相关(P<0.05)。相关性分析显示,NALP3 mRNA表达与血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、WBC指标无明显相关性;与血尿酸、CRP呈正相关(P<0.05)。结论NALP3炎性体及外周血γδT细胞参与GA的发展,Caspase-1、γδT细胞和γδT2细胞可作为痛风的急性炎症标记物,而ASC不能作为痛风的急性炎症标记物,同时γδT2在γδT细胞中的比例与甘油三酯、WBC呈负相关,NALP3 mRNA表达与血尿酸、CRP呈正相关,为临床病情评估和治疗提供参考。

白虎加桂枝汤对急性痛风性关节炎大鼠TLRs和NALP3信号通路的影响

目的分析白虎加桂枝汤对急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠TLRs和NALP3信号通路的影响。方法于SD大鼠右侧踝关节处注入200μL尿酸钠溶液以构建AGA模型,本研究中最终成功构建40只AGA大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量组(0.265 g/100 g)、中剂量组(0.53 g/100 g)、高剂量组(1.06 g/100 g),每组各10只,并纳入10只健康SD大鼠为对照组,低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠分别灌胃不同剂量的白虎加桂枝汤,模型组和对照组灌胃等体积生理盐水,各组均连续灌胃7 d,并标准饲养。比较各组大鼠不同时刻踝关节周长、尿酸、血肌酐、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、步态评分和滑膜组织中NALP3、TLRs相关蛋白及其mRNA表达水平。结果灌胃1、3、7 d时对照组大鼠的踝关节周长、尿酸、血肌酐、IL-1β、TNF-α水平、步态评分最低,且呈现剂量反应(P<0.05)。灌胃1、3、7 d时对照组大鼠滑膜组织中NALP3、TLR3、TLR7蛋白表达及其mRNA表达最低,且呈现剂量反应(P<0.05)。结论白虎加桂枝汤能够改善AGA大鼠的炎症反应,改善肾功能,减轻踝关节组织病理损伤,其机制可能与抑制TLRs和NALP3信号通路相关。

miR-200a通过靶向NALP3抑制肺癌细胞的增殖的研究

目的 探讨微RNA-200a(miR-200a)对肺癌细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制。方法 应用RTqPCR检测肺癌细胞系(H1975、A549、H1299、HCC827)中miR-200a的表达水平。应用CCK-8实验检测miR-200a对肺癌细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测miR-200a对肺癌细胞凋亡的影响。生物信息学预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告实验验证miR-200a对NALP3的调控作用。Western Blot实验检测miR-200a调控NALP3及AMPK通路蛋白表达。结果 miR-200a在肺癌细胞系中表达明显降低,差异有统计学意义(P <0.05)。沉默miR-200a表达后可明显促进肺癌细胞的增殖能力,差异有统计学意义(P <0.05)。双荧光素酶报告实验证实miR-200a可直接靶向NALP3的3’-UTR区域并负性调控其表达水平。Western Blot实验证实沉默miR-200a表达后可显著增强NALP3、AMPKα、SIRT1、p-mTOR的蛋白表达水平,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 miR-200a通过直接靶向NALP3抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡,发挥抑癌基因的作用。

红景天苷调控NF-κB/NALP3信号通路对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤的保护作用

目的 探讨红景天苷(SAL)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的保护作用及其机制。方法 将32只健康SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、SAP组、SAL(4.0 mg/kg)组和阳性对照乌司他丁(ULI,2×10~4 U/kg)组,每组8只。除Sham组外,其他各组以胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液法建立SAP大鼠模型。4组于术前2 h腹腔注射相应药物。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清淀粉酶、内毒素(ET)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精-伊红(HE)染色法观察胰腺组织和回肠组织病理改变。免疫荧光染色法检测回肠组织中NF-κBp65磷酸化(p-p65)表达。Western blotting法检测回肠组织中NF-κBp65、p-p65、NALP3、ASC、caspase-1和cleaved caspase-1表达。结果 SAP组大鼠胰腺组织和肠组织较Sham组损伤严重,血清淀粉酶、ET、DAO、IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,肠组织NF-κB p-p65、NALP3、caspase-1、ASC蛋白表达升高(P<0.05);与SAP组比较,SAL组、ULI组胰腺组织和肠组织病理损伤减轻,血清淀粉酶、ET、DAO、IL-1β、IL-6、TNF-α含量及肠组织NF-κB p-p65、NALP3、caspase-1、ASC蛋白水平降低(P<0.05)。SAL组与ULI组上述指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SAL可能通过抑制NF-κB/NALP3炎性体信号通路减轻炎性反应,保护SAP大鼠肠黏膜屏障损伤。

兰连糖毒清汤对糖尿病小鼠胰岛素抵抗及NALP3炎症体的影响

目的:探讨兰连糖毒清汤对糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用,并基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NALP3)炎症体探讨其作用机制。方法:将40只6周龄雄性db/db小鼠随机分为兰连糖毒清低剂量组、兰连糖毒清高剂量组、模型组和罗格列酮组,同时设立正常db/dm小鼠10只为空白组。干预8周后,检测各组小鼠口服葡萄糖耐量曲线下面积(AUC),稳定模型测定小鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及定量胰岛素敏感性检查指数(QUICKI),ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)水平,HE染色法观察小鼠肝脏组织,免疫组化检测小鼠胰腺组织NALP3的表达,Western blot及RT-qPCR检测小鼠骨骼肌组织NALP3蛋白及mRNA表达。结果:兰连糖毒清汤可降低小鼠AUC、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR及血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平,增加QUICKI指数(均P<0.05)。兰连糖毒清汤可降低小鼠骨骼肌组织NALP3蛋白及mRNA表达,降低胰腺组织NALP3蛋白表达(均P<0.05)。兰连糖毒清汤可以改善小鼠肝脏组织的炎症损伤。结论:兰连糖毒清汤可以改善糖尿病小鼠胰岛素抵抗,抑制代谢性炎症反应,降低NALP3炎症体水平,减少肝脏组织炎症损伤,其机制可能与下调NALP3炎症体有关。

阿魏酸钠阻断NF-κB降低NALP3诱导的矽肺成纤维细胞增殖

目的探讨阿魏酸钠(SF)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NALP3)诱导的矽肺模型小鼠成纤维细胞增殖的内在分子机制。方法采用C57BL/6雄性小鼠建立矽肺模型,提取的肺成纤维细胞用于后续实验。细胞被浓度为0、0.1和0.28 mg/mL的SF分别处理48 h后,采用蛋白质印迹实验(Western blot)检测核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白表达。Control组的细胞正常培养,SF组细胞给予0.28 mg/mL SF,Prostratin组细胞给予100 nmol NF-κB激活剂(Prostratin),SF+Prostratin组细胞给予0.28 mg/mL SF和100 nmol Prostatin。处理48 h后,采用MTT、EdU、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞活力、增殖、白介素1β(IL-1β)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)的活性。通过实时荧光定量聚合酶链反应实验(QRT-PCR)确定NALP3敲减质粒(shNALP3)的转染效率后,Prostratin组细胞给予100 nmol Prostratin,Prostratin+shNALP3组细胞转染shNALP3并给予100 nmol Prostratin,Prostratin+shNC组细胞转染NALP3阴性对照(shNC)并给予100 nmol Prostratin。处理48 h后,采用上述细胞功能学实验和Western blot分析细胞功能和分子表达变化。结果0.28 mg/mL的SF抑制核转录因子p65(p65)、抑制因子κB(IkB)、NALP3、胶原蛋白-1(collagen-1)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达[p65:(0.51±0.04)比(1.00±0.08);IkB:(0.46±0.04)比(1.00±0.09);NALP3:(0.54±0.05)比(1.00±0.08);collagen-1:(0.49±0.04)比(1.00±0.09);α-SMA:(0.62±0.05)比(1.00±0.08);P均<0.05],Prostratin逆转SF抑制的细胞活力、增殖、Caspase-1和IL-1β活性[细胞活力:(80.26±5.00)%比(56.33±3.99)%;细胞增殖:(3.80±0.25)%比(1.80±0.10)%;Caspase-1:(111.02±7.00)pg/mL比(54.28±4.00)pg/mL;IL-1β:(74.05±5.01)pg/mL比(19.28±2.01)pg/mL;P均<0.05],同时逆转SF阻断的NF-κB通路蛋白表达和降低NALP3表达[p65:(1.03±0.09)比(0.22±0.03);IkB:(1.06±0.09)比(0.34±0.03);NALP3:(1.10±0.09)比(0.33±0.03);collagen-1:(1.03±0.09)比(0.36±0.03);α-SMA:(1.12±0.09)比(0.25±0.03);P均<0.05]。转染shNALP3降低细胞中NALP3的mRNA水平[NALP3:(0.34±0.03)比(0.95±0.09);P<0.05];Prostratin增强的细胞活力、增殖、Caspase-1和IL-1β的活性受到shNALP3的逆转[细胞活力:(53.33±4.99)比(98.58±6.99)%;细胞增殖:(4.30±0.58)%比(11.35±1.11)%;Caspase-1:(120.25±7.89)pg/mL比(174.87±9.99)pg/mL;IL-1β:(74.05±5.01)pg/mL比(105.25±6.47)pg/mL;P均<0.05]。shNALP3下调Prostratin诱导的细胞中collagen-1和α-SMA的表达[collagen-1:(0.66±0.05)比(1.01±0.09);α-SMA:(0.64±0.05)比(0.94±0.07);P均<0.05],且逆转Prostratin促进caspase-1、IL-1β、collagen-1和α-SMA活性的作用。结论SF通过阻断NF-κB途径降低NALP3诱导的矽肺中成纤维细胞增殖。

痛风患者外周血NALP3炎性体与炎性因子、糖脂代谢的相关性

目的探讨痛风患者外周血NALP3炎性体与炎性因子、糖脂代谢的相关性。方法分别选择102例痛风患者(痛风组)、154例高尿酸血症患者(高尿酸血症组)和107例健康体检人群(对照组)作为研究对象,收集3组受试对象年龄、体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、尿酸(UA)、空腹血糖(FPG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)等临床资料,采用RT-PCR和Western blot检测各组患者外周血NALP3mRNA和蛋白表达。另利用100μg/mL尿酸盐刺激对照组全血6h,再次检测刺激组与未刺激组外周血单个核细胞(PBMCs)NALP3mRNA和蛋白表达。结果痛风组和高尿酸血症组BMI、FPG、LDL-C、TG、TC、UA、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白(CRP)明显高于对照组,脂联素(APN)明显低于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);痛风组FPG、LDL-C、TG、TC、UA、IL-1β、CRP明显高于高尿酸血症组,APN明显低于高尿酸血症组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。NALP3mRNA在痛风组(0.846±0.130)、高尿酸血症组(0.700±0.126)的表达明显高于对照组(0.231±0.049),痛风组NALP3mRNA表达量明显高于高尿酸血症组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组外周血经尿酸盐刺激后,刺激组NALP3mRNA和蛋白表达较相应空白组显著升高(均P<0.05)。痛风组和高尿酸血症组NALP3mRNA表达与FPG、UA、TNF-α、IL-1β、CRP呈正相关,与APN呈负相关(均P<0.05)。校正BMI、FPG、TG、TC等混杂因素后,结果显示NALP3mRNA不是高尿酸血症发生的危险因素,而NALP3mRNA表达≥0.808是痛风发生的危险因素(P<0.05)。结论痛风患者NALP3表达明显升高,NALP3可能参与痛风的发病和进展。

萆薢总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎NALP3炎性体信号通路的影响

目的研究萆薢总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎的防治作用及机制。方法 Wistar大鼠,♂,72只,随机分组后,各用药组大鼠预先灌胃给予不同剂量萆薢总皂苷,随后右侧踝关节腔注射尿酸钠诱导急性痛风性关节炎。观察大鼠步态,测定关节肿胀度,HE染色进行病理学分析。ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-18表达。Western blot法检测滑膜组织中pro-IL-1β、NALP3炎性体相关蛋白变化。结果萆薢总皂苷各浓度和秋水仙碱均可改善大鼠步态。TSD高、中剂量组与秋水仙碱类似,可降低大鼠关节肿胀度,病理学检查踝关节病变好转,血清TNF-α、IL-1β、IL-18明显减少,滑膜组织pro-IL-1β、NALP3、ASC、caspase-1前体和活性形式蛋白表达降低。结论萆薢总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎具有防治作用,机制可能是抑制NALP3炎性体装配和激活,以及抑制炎性细胞因子的表达。

P2X7/NALP3在急性肾小管坏死肾组织中的表达及意义

目的观察急性肾小管坏死(acute tubular necrosis,ATN)患者肾组织中P2X7/NALP3的表达情况,探讨其与肾小管损伤程度、肾小管间质炎症、肾小管上皮细胞凋亡情况及肾功能损害之间的关系。方法选取2011-2013年在我科住院治疗,经肾活检诊断为ATN的患者肾组织;以同期外科肾肿瘤切除时远离肾肿瘤的边缘正常肾,且经光镜证实为正常的肾组织为对照。免疫组化法检测ATN患者肾小管上皮细胞中P2X7/NALP3、caspase-1、caspase-3、IL-1β、IL-18的表达,以及肾小管上皮细胞的凋亡;半定量分析肾小管损伤程度及肾小管间质炎症细胞的浸润。收集患者入院第1天24 h的尿量、血肌酐(serum creatinine,Scr)及尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)等数据,计算肾小球率过滤(estimated glomerular filtration rate,eGFR),将P2X7/NALP3的表达与肾小管损伤程度、肾间质炎症反应、肾小管上皮细胞凋亡及ATN患者肾功能指标进行相关性分析。结果与对照组比较,ATN患者肾小管上皮细胞P2X7/NALP3表达明显升高(P<0.01),其与caspase-1、caspase-3、IL-1β、IL-18表达水平显著正相关,P2X7/NALP3与ATN患者肾小管损伤(r=0.787,r=0.530)、小管间质炎症细胞浸润程度(r=0.543,r=0.419)、肾小管上皮细胞凋亡程度(r=0.719,r=0.671)、血肌酐(r=0.707,r=0.706)、尿素氮(r=0.584,r=0.623)呈正相关(P<0.01),与肌酐清除率(r=-0.622,r=-0.59)、尿量(r=-0.659,r=-0.62)呈负相关(P<0.01)。结论 ATN患者肾组织中P2X7和NALP3的表达与肾小管上皮细胞凋亡、炎症反应及肾功能损害具有明显相关性,提示P2X7/NALP3可能参与ATN患者肾小管上皮细胞凋亡、炎症反应,进而导致肾小管损伤及肾功能受损。

“火郁发之”法火针对大鼠急性痛风性关节炎NALP3炎性体的影响

目的在前期课题组成员广东省中医药局基金课题"基于NALP3的"火郁发之"法火针治疗急性痛风性关节炎的研究"(项目编号20161201)中发现,火针疗法对急性痛风性关节炎模型大鼠的NALP3炎性体有明显影响,由此进一步探讨火针疗法治疗急性痛风性关节炎的作用机制。研究火针疗法对大鼠急性痛风性关节炎的疗效及机制。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、火针组、针刺组及秋水仙碱组各12只。除正常组外,其他四组采用氧嗪酸钾联合Coderre方法[1]造模,模拟人体以高尿酸血症为基础引起的内环境变化诱发的急性痛风性关节炎,除正常组及模型组外,另3组分别予火针、针刺及秋水仙碱干预治疗,通过分析各组血尿酸及关节滑膜嗜中性粒细胞碱性磷酸酶3(NALP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平变化,评估火针治疗急性痛风性关节炎的疗效,探讨火针治疗急性痛风性关节炎的可能作用机制。结果高尿酸血症(HUA)造模后,除正常组外,其他各组血尿酸均较正常组升高(P<0.05),疗程结束后,各组血尿酸水平均与正常组相当(P>0.05),且组间比较差别不大(P>0.05)。HUA造模后,除正常组外,各组关节滑膜IL-1β、NALP3水平均升高(均P<0.05);急性痛风性关节炎(AGA)造模后,3个干预组的IL-1β、NALP3水平明显低于模型组(P<0.05),但总体来说各组的IL-1β、NALP3水平仍较高。疗程结束后,3个干预组的IL-1β水平均明显下降(P<0.05),且水平与正常组相当,而模型组的IL-1β水平仍居高不下。疗程结束后,除模型组外,3个干预组的NALP3水平均较干预治疗前明显下降,但仍高于正常组的NALP3水平(P<0.05);火针组、针刺组及秋水仙碱组3组间疗程结束后的NALP3水平比较差别不大(P>0.05)。结论火针具有抑制NALP3的活化及IL-1β分泌的作用,效果与针刺及秋水仙碱相当,对大鼠急性痛风性关节炎有一定疗效,有一定临床参考价值。

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18

目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。

NALP3/ASC/caspase-1在局灶节段性肾小球硬化肾组织中的表达变化

目的研究局灶节段性肾小球硬化(FSGS)肾病综合征(NS)患者肾组织中NALP3炎性复合体的表达变化与肾小管间质病理损害程度、炎性因子表达及临床生化指标之间的关系。方法应用免疫组化检测NS患者正常肾组织(对照组)及FSGS患者肾组织(FSGS组)肾小管上皮细胞NALP3/ASC/caspase-1及其下游效应分子IL-1β、IL-18表达变化,对肾小管间质损伤程度进行评分并检测肾小管间质活化巨噬细胞F4/80情况,收集患者血肌酐、血尿素、血浆总蛋白、清蛋白、24h尿蛋白等指标,计算肾小球滤过率(eGFR)。将NALP3/ASC/caspase-1和IL-1β、IL-18表达情况分别与肾小管间质损伤程度及各生化指标进行相关性分析。结果 FSGS组患者肾小管上皮细胞NALP3/ASC/caspase-1及下游效应分子IL-1β、IL-18的表达较对照组显著增高(P<0.01);NALP3/ASC/caspase-1表达强度与IL-1β、IL-18呈正相关(P<0.01);NALP3/ASC/caspase-1和IL-1β、IL-18的表达与肾小管间质损伤程度及F4/80的表达强度呈正相关(P<0.01),与24h尿蛋白量、血肌酐浓度呈正相关(P<0.05),与eGFR呈负相关(P<0.05),与尿素、血浆总蛋白、清蛋白浓度无明显相关性。结论 NALP3炎性复合体通过激活IL-1β、IL-18等下游炎症因子,参与FSGS的发病机制,其表达程度越高、肾组织病变程度越重,是否能作为FSGS预后的预警指标,还需进一步的临床验证。

NALP3炎性体活化对脓毒症发病过程中HMGB1释放的调节作用

失控性全身炎性反应和免疫功能障碍是脓毒症发生的主要病理生理过程。HMGB1是脓毒症致死效应的最重要的晚期炎性递质,HMGB1由病原体或早期炎性反应分子活化免疫细胞释放,在脓毒症的发生、发展过程中它不仅发挥促炎效应,而且还与细胞免疫功能障碍密切相关。脓毒症和内毒素血症中HMGB1的分泌和释放继发于NALP3炎性体的活化。越来越多的证据表明,炎性体(尤其是NALP3炎性体)对单核/巨噬细胞释放HMGB1起着重要的调节作用。在炎性反应过程中,免疫细胞主动释放HMGB1的过程主要以一种炎性反应小体参与的、依赖caspase活化的方式进行。通过调节NALP3炎性体活化,抑制HMGB1释放,调节免疫功能紊乱状态,为脓毒症等免疫紊乱相关疾病的治疗提供了新的策略。

苗药痛风汤方剂对痛风性关节炎大鼠炎症反应及NALP3炎性体信号的影响

目的探讨苗药痛风汤方剂对痛风性关节炎(GA)大鼠炎症反应及NALP3炎性体信号的影响。方法40只健康雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、双氯芬酸钠肠溶片组、苗药痛风汤方剂低、高剂量组,每组8只。采用踝关节腔内一次性注射尿酸钠构建急性GA大鼠模型,造模成功后,空白组、模型组给予生理盐水,双氯芬酸钠肠溶片组及苗药痛风汤方剂低、高剂量组分别按相应剂量给予双氧芬酸钠肠溶片及苗药痛风汤方剂连续灌胃5 d,处死大鼠,取膝关节滑膜组织。采用HE染色观察滑膜组织病理变化;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-8、β-gal、NAG、SOD、MDA水平;qRT-PCR检测滑膜组织NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达;Western Blot检测滑膜组织NALP3、Caspase-1、pro-IL-1β蛋白表达。结果与空白组相比,模型组滑膜组织衬里下层大量炎性细胞浸润,关节肿胀指数明显增加,TNF-α、IL-1β、IL-8、β-gal、NAG、MDA、NALP3、Caspase-1、ASC、pro-IL-1β水平明显升高,SOD水平明显降低(均P<0.05);与模型组比较,苗药痛风汤方剂高剂量组TNF-α、IL-1β、IL-8、β-gal、NAG、MDA、NALP3、Caspase-1、ASC、pro-IL-1β水平明显降低,SOD水平明显升高(均P<0.05)。结论苗药痛风汤方剂可减轻GA大鼠组织炎症程度,下调NALP3及炎性细胞因子的表达,可能有抑制急性痛风性关节炎发作的重要作用。

NALP3炎性体在结直肠腺瘤样息肉与结直肠癌中的表达及意义

目的研究检测NALP3炎性体在癌旁正常组织、结直肠腺瘤样息肉及结直肠癌中的表达差异,揭示NALP3炎性体在慢性炎症向恶性肿瘤发展过程中的意义。方法 Real-time PCR及Western blot对人结直肠腺瘤样息肉、结直肠癌及癌旁正常组织炎性体成分NALP3、ASC、caspase-1基因及蛋白进行检测。结果 NALP3、ASC、caspse-1在结直肠癌组织中表达最低,在结直肠腺瘤样息肉中表达最高,各因子在各组间差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 NALP3炎性体在正常组织—慢性炎症—恶性肿瘤发展中有着重要作用,变化可能与机体及肿瘤局部免疫状态相关。

NALP3炎性体与非感染性炎症疾病

在机体非感染性炎症疾病过程中,caspase-1的活化引起IL-1β、IL-18、IL-33等促炎细胞因子的分泌是一个重要的过程。而一个被称为NALP3炎性体的多蛋白复合物在caspase-1的活化过程中起到了重要的调节作用。各种外源或内源的刺激可通过不同的信号通路激活NALP3炎性体来活化caspase-1。本文就NALP3炎性体的结构和分布、活化和信号通路及对2型糖尿病、痛风、阿尔兹海默病和肾脏疾病等非感染性炎症疾病的近期研究作一综述。

清远麻鸡NALP3基因部分cDNA序列克隆及组织表达差异分析

为了克隆NALP3基因的部分序列及检测其在鸡体内各组织中的表达情况,本试验选择12周龄的公、母清远麻鸡各3只,分别采集其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、小肠、输卵管、卵巢、睾丸和脑12种器官,通过RT-PCR(Reverse transcription PCR)技术克隆NALP3部分cDNA序列,并采用Real time-PCR方法检测NALP3 mRNA的表达水平。结果显示,获得了清远麻鸡NALP3部分cDNA序列,序列长度为210 bp。在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、小肠、输卵管、卵巢、睾丸和脑中均有NALP3 mRNA表达,其中在心脏中表达量最高,在小肠中表达量最低。

NALP3炎性体、骨形态发生蛋白在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及意义

目的探究退变腰椎间盘髓核组织中NALP3炎性体、骨形态发生蛋白(BMP)的表达及意义。方法在我院选取2017年6-2018年6月接受治疗的80例腰椎间盘突出症患者,患者手术切除标本中取出退变椎间盘髓核组织块,另外选取在我院行前路减压内固定切除的脊柱骨折患者椎间盘的正常椎间盘髓核组织块制作标本待用。对待测标本进行免疫组化染色,使用Western Blot检测NALP3、BMP-2表达。分析NALP3、BMP-2与腰椎间盘突出症患者腰椎间盘退变等级、腰部负荷程度的关系,并分析NALP3、BMP-2之间相关性。结果腰椎间盘组患者中NALP3表达显著高于正常组(P<0.05),BMP-2表达低于正常组(P<0.05);Ⅴ级患者NALP3水平高于Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级(P<0.05),BMP-2水平低于Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级(P<0.05);重程度患者NALP3水平高于很轻、轻、中程度(P<0.05),BMP-2水平低于很轻、轻、中程(P<0.05);NALP3、BMP-2之间进行Pearson相关性分析,NALP3、BMP-2之间呈负相关(r=-0.269,P=0.016)。结论退变腰椎间盘髓核组织中NALP3升高,BMP-2降低,且与患者退变等级、病情严重程度密切相关,为临床上腰椎间盘突出症的诊治提供理论参考。

糖尿病肾病肾间质炎症损伤程度与P2X4、NALP3表达的相关性研究

目的观察糖尿病肾病患者肾间质损伤程度与P2X4、NALP3表达水平变化的相关性。方法将45例糖尿病肾病患者设为观察组，40例肾错构瘤行切除术患者设为对照组。比较两组生化指标水平及肾小管上皮细胞P2X4、NALP3、白细胞介素-1β、白细胞介素18的表达水平。结果观察组尿素氮、血清肌苷、尿蛋白水平显著高于对照组（P〈0．01），血浆总蛋白、血浆清蛋白、肾小球滤过率水平显著低于对照组（P〈0．01）。免疫组化荧光结果显示观察组P2X4、NALP3、白细胞介素-1G、白细胞介素-1β均为高表达；激光共聚焦结果显示观察组P2X4、NALP3、白细胞介素-18、白细胞介素-18表达均显著增强。观察组P2X4和NALP3分别与尿素氮、血清肌苷、尿蛋白、肾间质炎症、。肾间质纤维化、肾小管萎缩、白细胞介素-1β和白细胞介素-18呈显著正相关（P〈0．05），与肾小球滤过率呈显著负相关（P〈0．05）。结论P2X4和NALP3的表达水平与肾间质炎症损伤程度存在显著正相关，可以作为-种新的监测指标，为临床诊断、治疗与预后评价提供参考依据。

NALP3在痛风炎症反应中的作用

痛风性关节炎是一种炎性关节炎,并以高尿酸血症为主要生化特征。随着痛风的发病率在我国不断地升高,研究者对痛风在免疫和炎症之间的关系颇为关注。NALP3(cryopyrin)是一种模式识别受体,与ASC、caspase-1组成了炎性体信号转导通路,该炎性转导通路激活后会导致IL-1β等大量炎性因子的成熟和释放,进一步导致痛风的发作。本文将就炎性体在痛风发病中的作用进行简述。