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2-NBDG检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力的研究 被引量:6
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作者 叶林 陆凯 +1 位作者 张冬颖 覃数 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第15期1533-1537,共5页
目的评估荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl)amino]-2-deoxyglucose,2-NBDG)作为光学探针检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力。方法间接免疫荧光法测定H9c2心肌细胞葡萄糖转运... 目的评估荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl)amino]-2-deoxyglucose,2-NBDG)作为光学探针检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力。方法间接免疫荧光法测定H9c2心肌细胞葡萄糖转运体(GLUT-1、GLUT-4)的表达。用不同浓度2-NBDG和不同孵育时间处理H9c2心肌细胞,探讨其量效-时效关系,荧光酶标仪测定2-NBDG孵育H9c2细胞的最适浓度和时间。以2-NBDG最适浓度孵育H9c2心肌细胞,同时用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞内荧光强度差异,观察心肌细胞摄取2-NBDG情况。使用竞争性抑制剂D型葡萄糖(D-Glu)与2-NBDG共同孵育H9c2心肌细胞,观察D-Glu对2-NBDG的竞争性抑制情况。结果间接免疫荧光法显示H9c2心肌细胞高表达GLUT-1、GLUT-4。2-NBDG孵育H9c2心肌细胞的最适浓度和时间分别为100μmol/L和30 min。共聚焦成像和流式细胞仪均显示H9c2心肌细胞能有效摄取2-NBDG,加入D-Glu后使心肌细胞内荧光信号强度分别降低27.0%和46.7%(P<0.01)。运用2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取的方法,证实胰岛素能促进H9c2心肌细胞葡萄糖的摄取。结论 2-NBDG能迅速被高表达GLUT-1、GLUT-4的H9c2心肌细胞摄取并滞留于细胞内,且可以被D-Glu竞争性抑制,表明2-NBDG可作为一个方便且敏感的探针,用于检测细胞葡萄糖摄取的能力。 展开更多
关键词 2-nbdg H9C2心肌细胞 葡萄糖摄取
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2-NBDG用于乳腺癌MDA-MB-231细胞荧光检测研究 被引量:5
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作者 胡慧 单秀红 +3 位作者 朱伟 钱晖 许文荣 王亚非 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第3期216-219,共4页
目的:评价荧光2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,3-4羟氨基](2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino],NBD)标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG,靶向探测高表达葡萄糖转运蛋白1(Glut1)的MDA-MB-231乳腺癌细胞可行性。方法:2-N... 目的:评价荧光2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,3-4羟氨基](2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino],NBD)标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG,靶向探测高表达葡萄糖转运蛋白1(Glut1)的MDA-MB-231乳腺癌细胞可行性。方法:2-NBDG分别孵育接种在6孔板里的人乳腺癌MDA-MB-231细胞1,10,20,40 min后,荧光显微镜观察并摄像;为了进行竞争性抑制,用D型葡萄糖预先孵育细胞30 min后再加入2-NBDG孵育20 min,荧光显微镜观察并摄像。同时用流式细胞仪分析孵育不同时间及有无竞争抑制的细胞吸收2-NBDG量的差异。结果:荧光成像显示2-NBDG积聚在MDA-MB-231细胞膜和细胞质内,加入D型葡萄糖竞争抑制后,荧光信号显著减弱;流式细胞仪分析表明最初的1 min 2-NBDG被肿瘤细胞迅速摄取(MDA-MB-231细胞自发荧光强度为2.66±0.09,2-NB-DG孵育1 min后荧光强度为4.04±0.18),10 min时吸收持续增加(荧光强度为5.64±0.17),20 min吸收最明显(荧光强度为25.10±0.57);加入D型葡萄糖竞争抑制后,细胞摄取2-NBDG的荧光强度降低46%。结论:2-NBDG能迅速被高表达Glut1的MDA-MB-231乳腺癌细胞靶向吸收,有望成为葡萄糖代谢的光学标记物来检测高代谢的恶性肿瘤。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞 2-nbdg 荧光成像 流式细胞仪
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黑曲霉葡萄糖吸收定量检测的方法建立及其在MstC功能研究中的应用
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作者 高凯月 郭雨婷 +5 位作者 杜奕谋 郑小梅 马欣荣 赵伟 郑平 孙际宾 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期71-80,共10页
黑曲霉是有机酸与酶制剂重要的工业生产菌株,具有强大的水解酶系与葡萄糖转运系统,可快速响应胞外碳源变化,摄取环境中葡萄糖供给细胞生长和产物合成。作为重要的碳源底物与关键的信号分子,葡萄糖的摄取吸收直接影响黑曲霉细胞生长与发... 黑曲霉是有机酸与酶制剂重要的工业生产菌株,具有强大的水解酶系与葡萄糖转运系统,可快速响应胞外碳源变化,摄取环境中葡萄糖供给细胞生长和产物合成。作为重要的碳源底物与关键的信号分子,葡萄糖的摄取吸收直接影响黑曲霉细胞生长与发酵性能。针对目前丝状真菌缺乏简便葡萄糖吸收能力定量表征方法的问题,本文以2-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-氨基)-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)作为葡萄糖吸收探针,通过将预培养的黑曲霉孢子与2-NBDG孵育后,利用荧光显微成像与流式细胞分析,建立了丝状真菌的葡萄糖吸收的定量检测方法。结果发现,2-NBDG的最佳使用浓度为150μmol/L,最佳孵育时间为4 h。进一步利用该定量分析方法,发现低亲和力葡萄糖转运蛋白MstC的过表达使黑曲霉葡萄糖吸收提高1.44倍,同时在前期研究的基础上,利用多序列比对分析,设计了MstC的突变体R188K,通过检测发现该点突变可直接导致MstC葡萄糖转运活性的丧失,这表明Arg188是影响MstC葡萄糖转运能力的关键氨基酸位点。本文葡萄糖摄取定量检测方法的建立及其在MstC功能研究上的应用,不仅加深了丝状真菌葡萄糖吸收的定量认识,也为葡萄糖转运系统的改造优化提供了技术支撑。 展开更多
关键词 黑曲霉 葡萄糖吸收 2-nbdg 葡萄糖转运蛋白 MstC 荧光成像 流式细胞检测
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泽泻醇A对体外葡萄糖吸收的影响
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作者 林燕玲 洪铃冰 +5 位作者 丘志龙 王晨炜 蔡增宏 杨晓烨 曾敏洁 张伟云 《中国民族民间医药》 2023年第20期20-23,共4页
目的:探讨泽泻醇A对人肝癌细胞(HepG2细胞)葡萄糖吸收活性的影响。方法:使用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)测定HepG2细胞活力,利用2-NBDG(2-Deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose)法测定细胞对葡萄糖的吸收能力... 目的:探讨泽泻醇A对人肝癌细胞(HepG2细胞)葡萄糖吸收活性的影响。方法:使用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)测定HepG2细胞活力,利用2-NBDG(2-Deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose)法测定细胞对葡萄糖的吸收能力,采用不同培养基培养HepG2细胞,通过流式细胞仪检测细胞荧光强度,从而考察不同浓度的泽泻醇A对HepG2细胞葡萄糖吸收的影响。结果:CCK-8实验结果表明,在1~10μmol/L范围内,泽泻醇A对HepG2细胞活力无明显影响。糖吸收实验结果表明泽泻醇A在不同程度上具有促进HepG2细胞对葡萄糖吸收的能力。结论:泽泻醇A可在一定程度上促进HepG2细胞对葡萄糖的吸收,提示泽泻醇A可能为泽泻降血糖的活性成分之一。 展开更多
关键词 泽泻醇A HEPG2细胞 CCK-8 2-nbdg 葡萄糖吸收
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胰岛素激活PI_3K-AKT通路而促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取 被引量:9
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作者 叶林 陆凯 +1 位作者 张冬颖 覃数 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期538-542,共5页
目的探索胰岛素(Insulin)对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响及其与PI3K-AKT信号通路的关系。方法采用不同时间及不同浓度的胰岛素处理H9c2心肌细胞,确定胰岛素处理H9c2细胞的最佳浓度和最适时间。实验分空白对照组(NC组),2-NBDG组,Insulin... 目的探索胰岛素(Insulin)对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响及其与PI3K-AKT信号通路的关系。方法采用不同时间及不同浓度的胰岛素处理H9c2心肌细胞,确定胰岛素处理H9c2细胞的最佳浓度和最适时间。实验分空白对照组(NC组),2-NBDG组,Insulin组,Insulin+PI3K-AKT通路抑制剂LY294002组(LY294002组),Insulin+p38MAPK通路抑制剂BIRB796组(BIRB796组),使用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力,以流式细胞仪和荧光酶标仪检测心肌细胞对葡萄糖摄取的变化。通过间接免疫荧光法及激光共聚焦检测H9c2心肌细胞葡萄糖转运体-1(glucose tansporter-1,GLUT-1)及葡萄糖转运体-4(glucose tansporter-4,GLUT-4)的表达。结果 12-NBDG可用于检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力。2Insulin处理H9c2心肌细胞最适浓度和时间分别为200μmol/L和30 min。3Insulin组与对照组相比增加H9c2心肌细胞葡萄糖摄取(P<0.05);LY294002组与Insulin组相比降低心肌细胞葡萄糖摄取,两组间差异明显(P<0.05),BIRB796组较Insulin组无统计学差异(P>0.05),提示LY294002可抑制Insulin促进心肌细胞葡萄糖摄取,而BIRB796不能抑制上述作用。4 H9c2心肌细胞膜表达葡萄糖转运体1(GLUT1)和葡萄糖转运体4(GLUT4),Insulin处理H9c2心肌细胞30min后经激光共聚焦成像显示H9c2心肌细胞膜GLUT1和GLUT4表达增加(P<0.05)。结论胰岛素促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的作用可能与PI3K-AKT通路相关,与p38MAPK通路不相关,胰岛素激活PI3K-AKT信号通路后可能促进H9c2心肌细胞膜上GLUT-1及GLUT-4的表达,从而使H9c2心肌细胞对葡萄糖摄取增加。 展开更多
关键词 胰岛素 2-nbdg H9C2心肌细胞 葡萄糖摄取 PI3K-AKT p38MAPK GLUT1和GLUT4
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代综方对C2C12骨骼肌细胞葡萄糖摄取及GLUT4蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 赵玉雪 朱晓云 +1 位作者 袁泉 刘喜明 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1494-1497,共4页
目的:研究代综方(dai zong fang,DZF)对骨骼肌细胞葡萄糖摄取及葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,GLUT4)蛋白表达的影响。方法:采用含2%马血清(horse serum,HS)的DMEM培养液诱导C2C12骨骼肌细胞分化为肌管,荧光标记的葡萄糖类似物2-... 目的:研究代综方(dai zong fang,DZF)对骨骼肌细胞葡萄糖摄取及葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,GLUT4)蛋白表达的影响。方法:采用含2%马血清(horse serum,HS)的DMEM培养液诱导C2C12骨骼肌细胞分化为肌管,荧光标记的葡萄糖类似物2-NBDG测定葡萄糖摄取,对2-NBDG的量效时效关系进行测定;采用不同剂量DZF干预分化的C2C12细胞,检测其对细胞基础状态及胰岛素刺激状态下葡萄糖摄取的影响;Western blot检测DZF对C2C12细胞GLUT4总蛋白表达及膜转位的影响。结果:在基础状态或胰岛素刺激下,DZF低、中、高剂量均可提高骨骼肌葡萄糖摄取,差异有统计学意义(P<0.05)。基础状态下,DZF能促进GLUT4总蛋白及膜转位蛋白的表达(P<0.05);胰岛素刺激状态下,DZF对GLUT4总蛋白表达无显著影响(P>0.05),但仍可促进GLUT4膜转位蛋白的表达(P<0.05)。结论:DZF可增加骨骼肌细胞葡萄糖摄取,具有类胰岛素作用,其作用机制可能与促进GLUT4蛋白向细胞膜转位有关。 展开更多
关键词 代综方 2-nbdg C2C12细胞 葡萄糖转运体4
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泽泻三萜单体对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取活性的影响 被引量:12
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作者 李小艳 李雪君 +5 位作者 刘灿坤 许文 罗奋熔 赵万里 丘建芳 吴水生 《福建中医药大学学报》 2014年第5期31-33,共3页
目的观察泽泻三萜单体对3T3-L1细胞葡萄糖摄取活性的影响。方法用2-NBDG摄取测试法考察泽泻醇A、泽泻醇B、泽泻醇C、23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇L、16-羰基-泽泻醇A 8种泽泻单体对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄... 目的观察泽泻三萜单体对3T3-L1细胞葡萄糖摄取活性的影响。方法用2-NBDG摄取测试法考察泽泻醇A、泽泻醇B、泽泻醇C、23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇L、16-羰基-泽泻醇A 8种泽泻单体对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。结果泽泻醇A、泽泻醇C、23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇C、16-羰基-泽泻醇A表现出一定的促进3T3-L1细胞葡萄糖摄取作用。结论泽泻三萜单体具有促进葡萄糖摄取的活性,三萜类化合物是泽泻降血糖作用的药效物质基础。 展开更多
关键词 泽泻 三萜单体 2-nbdg摄取测试法 葡萄糖摄取 3T3-L1细胞
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23-乙酰泽泻醇B对2型糖尿病小鼠血糖的影响 被引量:15
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作者 张伟云 刘华欣 +1 位作者 王青 陈全成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期639-643,共5页
目的探讨23-乙酰泽泻醇B是否有治疗2型糖尿病的潜能。方法通过腹腔注射链脲佐菌素和烟酰胺建立2型糖尿病小鼠模型。灌胃罗格列酮或23-乙酰泽泻醇B 3周后,测定2型糖尿病小鼠血糖值,次日进行口服葡萄糖耐受试验(OGTT)。采用葡萄糖荧光示踪... 目的探讨23-乙酰泽泻醇B是否有治疗2型糖尿病的潜能。方法通过腹腔注射链脲佐菌素和烟酰胺建立2型糖尿病小鼠模型。灌胃罗格列酮或23-乙酰泽泻醇B 3周后,测定2型糖尿病小鼠血糖值,次日进行口服葡萄糖耐受试验(OGTT)。采用葡萄糖荧光示踪剂,测定23-乙酰泽泻醇B对葡萄糖吸收的影响。采用3T3-L1前脂肪细胞分化模型,测定其对分化的影响。结果分别每天灌胃阳性药罗格列酮10 mg·kg^(-1)、23-乙酰泽泻醇B(5、10、20 mg·kg^(-1)),连续灌胃给药3周后,降低了2型糖尿病小鼠血糖值,一定程度改善OGTT过程中胰岛素抵抗。在30 mmol·L^(-1)高糖条件下,23-乙酰泽泻醇B促进了脂肪细胞对胰岛素刺激的葡萄糖吸收;23-乙酰泽泻醇B(1、10μmol·L^(-1))促进3T3-L1前脂肪细胞的分化过程。结论 23-乙酰泽泻醇B降低2型糖尿病小鼠血糖,促进前脂肪细胞分化,促进脂肪细胞吸收葡萄糖,但作用机制仍需进一步探索。 展开更多
关键词 23-乙酰泽泻醇B 2型糖尿病 2-nbdg吸收 血糖 3T3-L1前脂肪细胞 分化
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Preferential Transport and Metabolism of Glucose in Bergmann Glia over Purkinje Cells:A Multiphoton Study of Cerebellar Slices 被引量:1
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作者 L.F.BARROS R.COURJARET +3 位作者 P.JAKOBY A.LOAIZA C.LOHR J.W.DEITMER 《神经损伤与功能重建》 2009年第3期208-216,共9页
了解不同类型的细胞如何处理葡萄糖有助于解释能量供应是如何是如何根据大脑能量需求来进行调整的。荧光追踪结合共聚焦显微镜技术已用于研究培养的脑细胞摄取葡萄糖的实时动态过程。本文采用这种技术利用多光子显微镜观察急性制备的大... 了解不同类型的细胞如何处理葡萄糖有助于解释能量供应是如何是如何根据大脑能量需求来进行调整的。荧光追踪结合共聚焦显微镜技术已用于研究培养的脑细胞摄取葡萄糖的实时动态过程。本文采用这种技术利用多光子显微镜观察急性制备的大鼠小脑脑片。带荧光的葡萄糖类似物2NBDG和6NBDG在小脑皮质的分子层中的转运速度比其在蒲肯野细胞胞体和颗粒细胞中快若干倍。洗脱游离示踪剂后,可见大部分磷酸化示踪剂都位于Bergmann胶质细胞,用胶质细胞标记物sulforhodamine 101免疫染色后进一步确认这一结果。有效回收荧光光漂白后显示,2NBDG-P可通过Bergmann胶质细胞之间的缝隙连接沿着分子层水平扩散。本文的结果表明在急性小脑切片中,Bergmann胶质细胞对葡萄糖的转运能力和糖酵解率高于蒲肯野细胞若干倍。由于小脑主要由葡萄糖提供能量,蒲肯野神经元被认为比Bergmann胶质细胞更耗能量,这些结果表明,在胶质细胞和神经元之间存在类似乳酸的能量代谢物介导的环路。 展开更多
关键词 脑片 小脑 葡萄糖 nbdg 转运 己糖激酶
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D-葡萄糖同系物作为人类肝癌细胞BEL-7402荧光探针的价值
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作者 吕良 唐焕焕 +12 位作者 阳艳丽 苑博 陈梦青 陈高建 张可锋 卢曦 钟明利 徐庆 韦京辰 罗艳 韦桂娇 蒋璐慧 段小群 《广西医学》 CAS 2016年第2期149-151,共3页
目的评价荧光D-葡萄糖同系物2-NBDG作为肝癌细胞BEL-7402荧光探针的价值。方法肝癌细胞株BEL-7402培养24 h后分为实验组及对照组,其中实验组加入5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基,对照组加入不含5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基,再将两组... 目的评价荧光D-葡萄糖同系物2-NBDG作为肝癌细胞BEL-7402荧光探针的价值。方法肝癌细胞株BEL-7402培养24 h后分为实验组及对照组,其中实验组加入5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基,对照组加入不含5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基,再将两组各分为两个亚组加入不同浓度的2-NBDG(0.3 mmol/L、1 mmol/L),即共4组:0.3 mmol/L2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组、1 mmol/L 2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组、0.3 mmol/L 2-NBDG组、1 mmol/L 2-NBDG组。比较各组细胞荧光强度,分析2-NBDG在肝癌细胞BEL-7402中的摄取及荧光成像情况,以及D-葡萄糖对2-NBDG的抑制竞争作用。结果 0.3 mmol/L 2-NBDG组的相对荧光强度为(78.72±3.78)%,低于1 mmol/L 2-NBDG组的(100.00±8.23)%(P<0.05)。0.3 mmol/L 2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组的相对荧光强度为(20.67±1.46)%,明显低于0.3 mmol/L 2-NBDG组的(78.72±3.78)%(P<0.05)。1 mmol/L 2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组的相对荧光强度为(22.23±2.01)%,明显低于1 mmol/L 2-NBDG组的(100.00±8.23)%(P<0.05)。结论 2-NBDG可被肝癌细胞BEL-7402快速摄取,并可通过荧光强度的方式量化其摄取程度,D-葡萄糖可竞争性抑制肝癌细胞BEL-7402对2-NBDG摄取。2-NBDG可以作为人源肝癌细胞株BEL-7402的检测荧光探针。 展开更多
关键词 肝癌 肝癌细胞BEL-7402 D-葡萄糖同系物 荧光探针 糖摄取 诊断
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乳腺癌细胞体外摄取2-脱氧葡萄糖荧光类似物 被引量:4
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作者 胡慧 单秀红 +3 位作者 朱伟 钱晖 许文荣 王亚非 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期507-510,共4页
目的 观察2-脱氧葡萄糖(2-DG)荧光类似物2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,34羟氨基]-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)被高表达葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的乳腺癌细胞靶向摄取的情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化法检测乳腺癌MDA... 目的 观察2-脱氧葡萄糖(2-DG)荧光类似物2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,34羟氨基]-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)被高表达葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的乳腺癌细胞靶向摄取的情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞GLUT-1 mRNA和蛋白的表达,采用Western blot法比较乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞GLUT-1的蛋白表达量.应用2-NBDG孵育人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用荧光显微镜及流式细胞仪观察、分析对2-NBDG的摄取情况,比较MDA-MB-231和MCF-7细胞吸收2-NBDG量的差异.结果 RT-PCR和免疫组化检测结果显示,MDA-MB-231细胞高表达GLUT-1 Western blot检测结果进一步显示,MDA-MB-231细胞的GLUT-1表达(0.946 4±0.007)高于MCF-7(0.833±0.010).荧光成像及流式细胞仪分析结果显示,MDA-MB-231细胞能快速摄取2-NBDG,且加入50 mmol/L D-葡萄糖后,荧光强度降低了46.0%.2-NBDG孵育乳腺癌细胞20 min后,MDA-MB-231细胞荧光强度(25.10±0.57)明显高于MCF-7细胞(10.12±0.62).结论 2-NBDG能迅速被高表达GLUT-1的乳腺癌MDA-MB-231细胞靶向吸收. 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 细胞 荧光 显像 2-脱氧葡萄糖(2-DG)类似物 2-N[7-硝基苯-2-乙二酸 3-4羟氨基]-2-脱氧葡萄糖 2-nbdg
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苯丙氨酸对C2C12细胞葡萄糖摄取能力的影响及与mTOR-p70S6K通路的关系探讨
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作者 杜蓉 杜涓 +4 位作者 田浩明 陈涛 高赟 龙洋 刘丹 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期369-373,共5页
目的观察苯丙氨酸对小鼠成肌细胞系C2C12葡萄糖摄取能力的影响,以及刺激后细胞内哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70S6K信号通路分子的变化。方法体外培养C2C12细胞,分化诱导为多核的肌管细胞后进行饥饿处理,然后分别用不同浓度苯丙氨酸(... 目的观察苯丙氨酸对小鼠成肌细胞系C2C12葡萄糖摄取能力的影响,以及刺激后细胞内哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70S6K信号通路分子的变化。方法体外培养C2C12细胞,分化诱导为多核的肌管细胞后进行饥饿处理,然后分别用不同浓度苯丙氨酸(1.25、2.5、5、10、20mmol/L)处理细胞,以KRB平衡液作为对照。通过检测2-NBDG评价细胞葡萄糖摄取能力。用Western blot方法检测细胞内mTOR、p70S6K、胰岛素受体底物(IRS)-1、蛋白激酶B(Akt)的表达情况。结果与KRB平衡液对照相比,5mmol/L亮氨酸使C2C12细胞的葡萄糖摄取能力下降了约30%(P=0.001),5mmol/L苯丙氨酸使C2C12细胞摄取葡萄糖的能力上升了约40%(P<0.01),且苯丙氨酸的这种促进作用随浓度增大有逐渐增强的趋势。苯丙氨酸对细胞内mTOR Ser2448磷酸化水平无明显影响。除1.25mmol/L外,其它浓度苯丙氨酸均能抑制p70S6K Thr389的表达。亮氨酸使IRS-1Ser636/639磷酸化水平表达增高(P<0.01),除1.25mmol/L外,其它浓度的苯丙氨酸均有抑制IRS-1Ser636/639表达的趋势,但与对照相比差异无统计学意义(P=0.381)。高浓度短时间的苯丙氨酸刺激对C2C12细胞内的Akt Ser473表达无明显影响。结论苯丙氨酸可能通过减少p70S6K的磷酸化,继而减少p70S6K对IRS-1的刺激作用而使细胞葡萄糖摄取能力增强。但苯丙氨酸对mTOR-p70S6K通路的抑制作用不通过Akt的激活。 展开更多
关键词 苯丙氨酸 胰岛素抵抗 mTOR-p70S6K 2-nbdg C2C12细胞
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柴胡疏肝汤对戊四氮慢性点燃大鼠不同脑区兴奋性的影响 被引量:8
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作者 谢炜 于云红 赵云燕 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1619-1622,共4页
目的:研究中药复方柴胡疏肝汤对戊四痰(PTZ)慢性点燃大鼠皮层、海马(不同脑区)兴奋性的影响。方法:以PTZ腹腔注射建立大鼠慢性点燃癫痫模型,选取完全点燃大鼠随机分为模型组和治疗组,分别给予生理盐水、丙戊酸钠和柴胡疏肝汤高、中、低... 目的:研究中药复方柴胡疏肝汤对戊四痰(PTZ)慢性点燃大鼠皮层、海马(不同脑区)兴奋性的影响。方法:以PTZ腹腔注射建立大鼠慢性点燃癫痫模型,选取完全点燃大鼠随机分为模型组和治疗组,分别给予生理盐水、丙戊酸钠和柴胡疏肝汤高、中、低剂量连续灌胃治疗4周。分别应用荧光成像技术及HPLC检测大鼠不同脑区6-[N-(7-硝基苯基-2-氧杂-1,3-重氮盐-4-基)氨基]-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)的含量及谷氨酸(G lu)、天门冬氨酸(Asp)的浓度。结果:柴胡疏肝汤高、中、低剂量组均等显著降低癫痫大鼠不同脑区内的2-NBDG含量及G lu,Asp浓度(P<0.01)。结论:柴胡疏肝汤能降低PTZ慢性点燃大鼠不同脑区内葡萄糖的代谢,通过降低不同脑区内兴奋性神经递质的含量,可能是其降低大鼠不同脑区兴奋性的机制之一。 展开更多
关键词 柴胡疏肝汤 戊四氮 癫痫 荧光脱氧葡萄糖 谷氨酸 天门冬氨酸
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A cell-based fluorescent glucose transporter assay for SGLT2 inhibitor discovery 被引量:1
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作者 Yi Huan Linyi Li +2 位作者 Quan Liu Shuainan Liu Zhufang Shen 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS 2013年第2期97-101,共5页
The sodium/glucose cotransporter 2(SGLT2)is responsible for the majority of glucose reabsorption in the kidney,and currently,SGLT2 inhibitors are considered as promising hypoglycemic agents for the treatment of type 2... The sodium/glucose cotransporter 2(SGLT2)is responsible for the majority of glucose reabsorption in the kidney,and currently,SGLT2 inhibitors are considered as promising hypoglycemic agents for the treatment of type 2 diabetes mellitus.By constructing CHO cell lines that stably express the human SGLT2 transmembrane protein,along with a fluorescent glucose transporter assay that uses 2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-l,3-diazol-4-yl)amino]2-deoxyglucose(2-NBDG)as a glucose analog,we have developed a nonradioactive,cell-based assay for the discovery and characterization of SGLT2 inhibitors. 展开更多
关键词 SGLT2 inhibitor nbdg Type 2 diabetes mellitus KIDNEY
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紫色悬钩子提取物对TNF-α诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的影响
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作者 刘悦 余松 +3 位作者 韩永霞 铁芳芳 童丽 杨芳 《今日药学》 CAS 2022年第4期257-263,共7页
目的利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导培养建立及鉴定3T3-L1脂肪细胞胰.岛素抵抗模型,探讨紫色悬钩子提取物对胰岛素抵抗的影响。方法采用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、地塞米松(Dex)、胰.岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂... 目的利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导培养建立及鉴定3T3-L1脂肪细胞胰.岛素抵抗模型,探讨紫色悬钩子提取物对胰岛素抵抗的影响。方法采用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、地塞米松(Dex)、胰.岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,分别与0,2,5,10,15,20 ng·mL^(-1)TNF-α共孵育24,48,72,96 h;MTT法检测紫色悬钩子提取物和TNF-α对3T3-L1脂肪细胞活力的影响;油红O染色观察细胞形态的变化;Western Blot检测Akt、p-Akt蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞对2-NBDG的摄取。结果TNF-α浓度大于等于10 ng·mL^(-1),诱导时间大于等于72 h能够显著降低胰岛素刺激后p-Akt的表达(P<0.01),产生胰岛素抵抗;胰岛素刺激后,与模型组相比,紫色悬钩子提取物都能够不同程度提高细胞中p-Akt的表达和对2-NBDG的摄取能力,其中Fr.3作用最显著(P<0.05).结论TNF-α诱导培养可以成功建立胰岛素抵抗细胞模型,紫色悬钩子提取物具有改善胰岛素抵抗的作用。 展开更多
关键词 紫色悬钩子 3T3-L1脂肪细胞 胰岛素抵抗细胞模型 肿瘤坏死因子-Α 2-nbdg
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